聚合物链修饰的硅胶基质亲水作用色谱固定相及其制备和应用的制作方法

技术特征：

1.一种聚合物链修饰的硅胶基质亲水作用色谱固定相，其特征在于：

以硅胶颗粒为基质，第一步进行硅烷化修饰上巯基，然后通过硫醇-烯的点击共聚反应在硅胶表面接枝含有羟基的烯类功能单体和甲叉双丙烯酰胺功能单体，形成表面具有三维树枝状聚合物链且富含羟基和酰胺亲水性功能基团的亲水作用色谱固定相。

2.按照权利要求1所述的色谱固定相，其特征在于：所述亲水作用固定相含有羟基和酰胺两种亲水作用功能基团；固定相表面具有三维树枝状聚合物链。

3.按照权利要求1所述的色谱固定相，其特征在于：所述亲水作用色谱固定相为单分散的微球颗粒；固定相粒径在500nm-10μm之间。

4.按照权利要求1所述的色谱固定相，其特征在于：所述功能单体为两种，一种是含有羟基的烯类功能单体，其结构为：

其中Y代表-CONH-或者-OOC-；Z代表-CH₂OH；m的值为1-10的正整数，n的值为1-3的正整数；另一种为甲叉双丙烯酰胺。

5.按照权利要求1或2所述的色谱固定相，其特征在于：所述基质为核/壳结构或全多孔结构的硅胶颗粒；核/壳结构硅胶颗粒由700nm-3μm直径的实心硅胶核和壳层厚度为150nm-500nm的多孔硅胶外层组成，孔径为3nm-20nm；全多孔结构硅胶颗粒粒径为500nm-10μm，孔径为5nm-100nm。

6.一种权利要求1-4任一所述聚合物链修饰的硅胶基质亲水作用色谱固定相的制备方法，其特征在于：

具体步骤为：a)硅烷化修饰硅胶颗粒的过程：将硅胶颗粒分散在甲苯中，超声，通氮气5-30分钟，加入带有硫醇基团的硅烷化试剂，搅拌，加热回流；停止反应后，冷却至室温，离心，弃上清液，之后将得到的固体颗粒依次使用甲苯、甲醇和丙酮抽滤洗涤，在真空干燥箱中干燥至恒重；

b)聚合物链键合相的制备：将得到的硅烷化修饰硅胶颗粒及功能单体分散在反应溶剂中，超声，通氮气5-30分钟，加入引发剂，机械搅拌，在50-100℃下反应，停止反应，冷却至室温，离心，去除上清液，抽滤，并依次使用反应溶剂、水、甲醇洗涤聚合物修饰后的硅胶颗粒，重复洗涤，在真空干燥箱中干燥至恒重，即得聚合物修饰的硅胶液相色谱固定相。

7.按照权利要求6所述的制备方法，其特征在于：

步骤a)中搅拌回流时间为6-30h，加热温度为100-130℃，离心速度 2500～10000rad/min，离心时间3-5分钟，重复抽滤洗涤次数为2～5遍，室温下真空干燥6-30小时；

步骤b)中反应时间为4-48小时；反应过程中为均匀缓慢加热至所需温度，离心速度为3000～10000rad/min，重复洗涤次数为2～5遍，室温下真空干燥6-30小时。

8.按照权利要求6所述的制备方法，其特征在于：步骤a)中所用的硅烷化试剂具有如下结构：

其中X代表甲氧基或者乙氧基，m的值为1-4的正整数；

其中硅胶颗粒与硅烷化试剂的加入量质量比为1:0.05至1:1；

步骤b)中所述两种功能单体的摩尔比为0.1:1-1:0.1；

步骤b)中甲叉双丙烯酰胺和含有羟基的烯类功能单体在反应溶剂体系中的总摩尔数浓度为0.05-0.4mol/L；硅胶颗粒加入质量与两种单体总质量比为1:0.1至1:10；

步骤b)所用的引发剂为偶氮类引发剂，包括偶氮二异丁腈、偶氮二异庚腈、偶氮二异丁脒盐酸盐、偶氮二异丁咪唑啉盐酸盐中的一种或两种及以上组合，偶氮类引发剂的加入量占两种功能单体总质量的0.5～10％；

步骤b)所用的溶剂为甲醇、乙醇、乙腈、甲苯、丙醇、N,N-二甲基甲酰胺、水中一种或二种及以上混合溶液。

9.一种权利要求1-4任一所述聚合物链修饰的硅胶基质亲水作用色谱固定相能够应用于极性物质和亲水性物质的色谱分离或糖肽、糖蛋白的富集和分离。

10.按照权利要求9所述的应用，其特征在于：所述亲水作用固定相能够应用于核苷、碱基、氨基酸、酸性小分子、碱性小分子、肽段和蛋白质中的一种或两种以上的分离，能够应用于糖肽和糖蛋白的富集。