效果，并进一步用于人血清中内源性肽组学分析均取得了较好的效果O
【【附图说明】】
[0018]图1是磁性金属有机骨架纳米颗粒的傅里叶红外表征图。(a，磁性纳米颗粒；b，修饰有有机骨架纳米颗粒后的磁性纳米颗粒。)
[0019]图2是磁性金属有机骨架纳米颗粒的氮气吸附表征图，孔径分布图。
[0020]图3是具有以磁性无机物四氧化三铁为核，修饰有有机骨架纳米颗粒后的磁性纳米颗粒的透射电镜表征图。(a，磁性纳米颗粒；b，修饰有有机骨架纳米颗粒后的磁性纳米颗粒。)
[0021]图4是磁性金属有机骨架纳米颗粒用于选择性富集β -酪蛋白酶解液中的磷酸肽。(a，β -酪蛋白酶解液；b，修饰有有机骨架纳米颗粒后的磁性纳米颗粒富集后的β -酪蛋白酶解液。)
【【具体实施方式】】
[0022]以下提供本发明一种核壳型磁性金属有机骨架纳米颗粒的制备及其应用的【具体实施方式】。
[0023]实施例1
[0024]取1.35g的六水合三氯化铁溶于75mL的乙二醇溶液，同时加入3.6g的柠檬酸钠搅拌混合均匀，将混合溶液转入高压反应釜中于200°C进行高温水热反应16h，得到顺磁性磁性纳米颗粒。
[0025]将400mg的顺磁性磁性纳米颗粒超声分散在80mL的无水乙醇中，逐滴加入80mL含有0.58mmol Γ1巯基乙酸的乙醇溶液，室温下机械搅拌24h。所得纳米颗粒依次用水和乙醇清洗3次，得到羧基修饰的磁性纳米颗粒。
[0026]将10mg上述羧基修饰的磁性纳米材料超声分散于5mL含1mmol L^1FeCl3.6H20的乙醇溶液，室温下静置15min，所得纳米颗粒用乙醇清洗3次除去未被吸附的FeCl3.6Η20ο随后，将纳米颗粒超声分散于5mL含1mmol Pl，3，5-苯三甲酸的乙醇溶液，在70°C下静置30min。如此循环操作30次，得到纳米颗粒在150°C下真空干燥过夜。得到核壳型磁性金属有机骨架纳米颗粒。
[0027]将核壳型磁性金属有机骨架磁性纳米颗粒与lmg/L α -酪蛋白(a -Casin)酶解液和β-酪蛋白(β-Casin)酶解液混合于体积比为体积比为1:1的水和乙腈的混合溶液中，25°C条件下震荡孵育30分钟；利用磁分离对含有磷酸化肽的溶液进行选择性富集和快速分离。
[0028]将步骤吸附有磷酸多肽或蛋白的磁性金属有机骨架纳米颗粒用10%氨水溶液进行洗脱，利用基质辅助激光解析串联飞行时间质谱仪对所富集的肽段进行定性定量分析。
[0029]以上所述仅是本发明的优选实施方式，应当指出，对于本技术领域的普通技术人员，在不脱离本发明构思的前提下，还可以做出若干改进和润饰，这些改进和润饰也应视为本发明的保护范围内。
【主权项】
1.一种核壳型磁性金属有机骨架纳米颗粒的制备方法，其特征在于，其具体步骤为: (1)I?2g的三氯化铁超声分散于70?80mL的乙二醇，搅拌20?30分钟，继而加入3?4g的柠檬酸钠进行均匀混合，在150?250°C进行水热反应，得到顺磁性磁性纳米基质，乙醇清洗2?3次； (2)取300?400mg步骤⑴制备的磁性纳米基质分散在80?10mL乙醇溶液中，逐滴加入5?10 μ L的0.3?0.6mmol L—1巯基乙酸机械搅拌20?26小时，得到稳定羧基修饰的磁性纳米颗粒，乙醇清洗2?3 ; (3)将100?200mg步骤⑵中制备的羧基修饰的磁性纳米颗粒均匀分散在5?1mL的1mmol T1FeCl3.6H20的乙醇溶液，室温下静置15?20min，所得纳米颗粒用乙醇清洗2?3次除去未被吸附的FeCl3.6H20 ;随后，把磁性纳米颗粒分散于5?1mL含1mmolPi，3，5-苯三甲酸的乙醇溶液，在70°C下静置30?60min ;如此循环操作10?40次，得到磁性纳米颗粒在150°C下真空干燥12?24小时，得到核壳型磁性金属有机骨架纳米颗粒。
2.一种核壳型磁性金属有机骨架纳米颗粒在选择性富集内源性磷酸肽中的应用，其特征在于，其具体方法为: (1)将制得的核壳型磁性金属有机骨架纳米颗粒用水和乙腈分别清洗I?3次，去除残留的反应试剂； (2)将步骤(I)清洗后的核壳型磁性金属有机骨架纳米颗粒与0.8?1.2mg/L磷酸肽溶液混合溶于体积比为1:1?3:7的水和乙腈的混合溶液中，20?30°C条件下震荡孵育30?50min ;利用磁分离对含有磷酸化蛋白或者多肽进行选择性富集和快速分离，实现对高丰度的多肽或蛋白进行的去除和低丰度的磷酸肽或蛋白的富集； (3)将步骤(2)中吸附多肽或蛋白的磁性金属有机骨架纳米颗粒用5%?10%氨水溶液进行洗脱，利用基质辅助激光解析串联飞行时间质谱仪对所富集的肽段进行定性定量分析。
3.如权利要求1所述的一种核壳型磁性金属有机骨架纳米颗粒在选择性富集内源性磷酸肽中的应用，其特征在于，磷酸肽溶液为α-酪蛋白(a-Casin)酶解液和β-酪蛋白(β -Casin)酶解液。
【专利摘要】本发明涉及一种核壳型磁性金属有机骨架纳米颗粒的制备和应用，其具体步骤为：(1)制备具有超顺磁性的纳米基质；(2)制备羧基修饰的磁性纳米颗粒；(3)将100～200 mg步骤(2)中制备的羧基修饰的磁性纳米颗粒分散在5～10ral的10 mmol L－1FeCl3.6H2O的乙醇溶液，室温下静置15～20rain，所得纳米颗粒用乙醇清洗2～3次除去未被吸附的FeCl3.6H2O；随后，把磁性纳米颗粒分散于5～10 mL含10 mmol L－11，3，5一均苯三甲酸的乙醇溶液，在70℃下静置30～60 rain；如此循环操作10～40次，得到磁性纳米颗粒在150℃下真空干燥12～24小时，得到核壳型磁性金属有机骨架纳米颗粒。本发明的孔结构以及大量的Fe3+离子大大增加的材料与磷酸肽的作用位点，提高了材料的选择性，检测限，以及富集容量。
【IPC分类】B01J20-30, B01J20-22, G01N1-40, B01J20-28
【公开号】CN104857933
【申请号】CN201510254064
【发明人】张维冰, 陈雅静, 干央央, 邵平, 戈兆松
【申请人】苏州汇通色谱分离纯化有限公司
【公开日】2015年8月26日
【申请日】2015年5月18日