专利名称：生物活性载体的放射氟化方法
技术领域：
本发明涉及诊断和放射性诊断试剂，所述试剂中包括用发射正电子的核素标记的生物活性载体。本发明进一步涉及用于对载体进行[18F]氟化的方法和试剂，其中载体被定义为对特定生物靶具有亲和力的分子，并且优选为肽。所得18F标记的共轭分子可用于放射性药物，特别是用于电子发射断层扫描(PET)中。
背景技术：
用于诊断成像的放射性标记的生物活性肽在原子核医学中的应用变得日益重要。与特定细胞选择性作用的生物活性分子用于向靶组织提供放射性。例如，放射性标记的肽具有重要的潜在可能性，用于向肿瘤、梗塞和感染的组织中传送放射性核素，用于诊断显像和辐射疗法。半衰期约为110分钟的18F为多种受体成像研究特别优选的发射正电子中的核素。由于其在PET中用于定量检测和表征多种疾病的应用，因此18F标记的生物活性肽具有较高的临床应用价值。
使用18F标记肽的一个困难在于现有的18F标记试剂需要花费大量时间来制备。使用18F对肽和蛋白质的有效标记仅仅在使用合适的辅基情况下才能完成。文献中已经提到了几种这样的辅基，包括N-琥珀酰亚胺基-4-[18F]氟代苯甲酸酯、间-马来酰亚胺基-N-(对-[18F]氟代苄基)苯甲酰胺、N-(对-[18F]氟代苯基)马来酰亚胺和4-[18F]氟代苯甲酰甲基溴。现在几乎所有用18F标记肽和蛋白质的方法都利用氟标记的合成子的活性酯。由于肽和蛋白质中可能包括众多能够与活性酯反应的官能团，这些当前使用的方法不是位点特异性的。例如，含有三个赖氨酸残基的肽中具有三个对标记的合成子同样具有反应性的胺官能团。因此，当前仍然存在对允许快速、化学选择性地将18F引入，特别是在温和条件下引入肽中而以高放射化学产率和高纯度得到18F标记的产品的18F标记的辅基和方法的需要。另外需要这种方法能够适应自动化操作以在临床环境中方便放射性药物的制备。
发明详述本发明提供一种用于放射氟化的方法，其包括将式(I)化合物与式(II)化合物反应 18F-(接头)-R2 (II)或者，式(III)化合物与式(IV)化合物反应， 18F-(接头)-R4 (IV)其中R1为醛部分、酮部分、被保护的醛例如缩醛、被保护的酮例如缩酮或一种官能团例如二醇或N-末端丝氨酸残基，可以使用氧化剂将它们迅速而有效地氧化成醛或酮；R2为在例如水缓冲液的温和条件下与R1在特定位置反应而得到稳定的偶联物的官能团。R2可以是氨衍生物，例如伯胺、仲胺、羟胺、肼、酰肼、氨氧基、苯肼、氨基脲或氨基硫脲，并且R2优选为肼、酰肼或氨氧基；R3为能与R4在特定位置反应的官能团。R3可以是氨衍生物，例如伯胺、仲胺、羟胺、肼、酰肼、氨氧基、苯肼、氨基脲或氨基硫脲，并且R3优选为肼、酰肼或氨氧基；R4为醛部分、酮部分、被保护的醛例如乙缩醛、被保护的酮例如缩酮或一种官能团例如二醇或N-末端丝氨酸残基，使用氧化剂可以将它们迅速而有效地氧化成醛或酮；而分别得到式(V)和式(VI)的偶联物
其中X为-CO-NH-、-NH-、-O-、-NHCONH-或-NHCSNH-，并且X优选为-CO-NH-、-NH-或-O-；Y为H、烷基或芳基取代基；并且式(II)、(IV)、(V)和(VI)中的接头基团选自 其中n为0-20的整数；m为1-10的整数；p为整数0或1；Z为O或S。
选择式(II)、(IV)、(V)和(VI)中的接头基团以提供良好的体内药物代谢动力学，例如在所得的式(V)或(VI)偶联物中有利的排泄参数。使用具有不同亲油性和或电荷的接头基可显著地改变肽的体内药物代谢动力学，以适于诊断需要。例如，当需要式(V)或(VI)偶联物以肾代谢的形式从体内排出时，希望使用亲水性接头，当需要式(V)或(VI)偶联物以肝代谢的形式从体内排出时，希望使用亲油性接头。现已发现，含有聚乙二醇部分的接头降低了血液清除率，这在某种情况下是合乎需要的。
合适地，R1醛通过含有1，2-二醇或1，2氨基醇基团的前体官能化的载体的原位氧化而产生。例如，在使用Wahl等人在Tetrahedron Letts.37，6861(1996)中所述的氨基酸Fmoc-Dpr(Boc-Ser)-OH合成期间，可以将后者直接插入到肽序列中。同样地，式(IV)化合物中的R4醛可通过前体的氧化产生。
可用于在式(I)和(IV)化合物中分别产生R1和R4部分的合适的氧化剂包括高碘酸盐、高碘酸、仲高碘酸、偏高碘酸钠和偏高碘酸钾。
式(I)和(IV)以及本发明相关方面的化合物中的R1和R4分别优选选自-CHO、＞C＝O、-CH(-O-C1-4烷基-O-)，例如-CH(-OCH2CH2O-)和-CH(OC1-4烷基)2，例如-CH(OCH3)2，并且在一个优选的方面中，R1和R4为-CHO。
式(II)和(III)以及本发明相关方面的化合物中的R2和R3分别优选选自-NHNH2、-C(O)NHNH2和-ONH2，并优选为-ONH2。
式(V)和(VI)以及本发明相关方面的化合物中的Y优选为H、C1-6烷基(例如甲基)或苯基。
该反应可在合适的溶剂中，例如pH为2-11，合适地为3-11，更合适地为3-6的含水缓冲溶液中，在5-70℃的非极端温度，优选在环境温度下进行。
本发明提供了一种更具有化学选择性的放射性标记方法，其中在肽或载体前体的合成期间，对标记的确切引入位置预先进行选择。在载体的预先确定的位置发生的连接反应仅仅产生唯一的一种可能的产品。该方法由此具有化学选择性，并且其应用被认为对于各种肽、生物分子和低分子量药物来说是通用的。
在另一方面，本发明提供了一种放射氟化方法，包括使式(Ia)化合物与式(IIa)化合物反应
18F-(接头)-O-NH2(IIa)或者，使式(IIIa)化合物与式(IVa)化合物反应 18F-(接头)-R4 (IVa)其中R1和R4分别如上述式(I)和式(IV)化合物中所定义；式(IIa)和式(IVa)化合物中的接头分别为C1-60烃基，合适地为C1-30烃基，任选地包括1-30个杂原子，合适地包括1-10个杂原子例如氧或氮。合适的接头包括烷基、烯基、炔基链、芳香族、多芳香族和杂芳基环，以及包括乙二醇、氨基酸或糖亚基的聚合物。
以分别得到式(Va)和式(VIa)的偶联物 其中Y为H、烷基或芳基取代基；并且接头如上述式(IIa)或式(IVa)化合物中所定义。
术语“烃基”指的是由碳和氢组成的有机取代基，这些基团可包括饱和的、不饱和的或芳香族的部分。
在一个优选方面，本发明提供了一种放射氟化方法，包括使式(VII)化合物
与式(VIII)、(IX)、(X)或(XI)的化合物反应18F-(CH2CH2O)n-(CH2)m-CHO (VIII) 其中n为0-20的整数；m为1-10的整数；X为-CO-NH-、-NH-或-O-，并优选为-O-；Y为H、烷基或芳基取代基；而分别得到式(XII-XV)的偶联物 其中X如上述式(VII)化合物中所定义，m和n如上述式(VIII-XI)化合物中所定义。
该反应可在合适的溶剂中，例如在pH为2-11，合适的为3-11，更合适的为3-6的含水缓冲溶液中，在5-70℃的非极端温度，优选在环境温度下进行。
当在式(I)或(III)载体化合物或式(II)或(IV)合成予以及在本发明多个特定描述的方面中使用胺部分作为官能团时，还可以加入一个还原步骤以使所得席夫碱稳定。在该还原步骤中合适的还原剂是本领域技术人员所熟知的并包括硼氢化钠和氰基硼氢钠。
在一个优选方面，本发明提供了一种放射氟化方法，包括使式(XVI)化合物 其中Y为H、烷基或芳基取代基；优选与式(XVII)、(XVIII)、(XIX)或(XX)的化合物反应18F-(CH2-CH2-O)n-(CH2)m-W-NH2(XVII) 其中m和n如前述化合物中所定义并且W＝-CONH-、-NH-或-O-，而分别得到式(XXI)、(XXII)、(XXIII)或(XXIV)的化合物
其中W＝-CONH-、-NH-或-O-，m、n如式(VIII至XI)化合物中所定义，并且Y为H、烷基或芳基部分。
该反应可以在合适的溶剂中，例如在pH为2-11，合适地为3-11，更合适地为3-6的含水缓冲溶液中，在5-70℃的非极端温度，优选在环境温度下进行。
在式(I)或(III)以及本发明的其他方面，除非特别指出，用于标记的合适的载体为肽，其可包括促生长素抑制素类似物，例如奥曲肽、韩蛙皮素、血管活性肠肽、趋化性肽类似物、α-促黑素细胞激素、神经降压素、精氨酸-甘氨酸-天门冬氨酸肽及其类似物，人类胰岛素原连接肽、内皮素、血管紧张素以及甲酰基-正亮氨酰-亮氨酰-苯丙氨酰-正亮氨酰-酪氨酰-赖氨酸。用于标记的优选的肽为精氨酸-甘氨酸-天门冬氨酸肽及其类似物，例如WO01/77415和WO03/006491中所述的那些。优选的肽包括如下片段 在一个特定方面，式(I)或(III)中的肽为式(A)
其中X7为-NH2或 其中a为1-10的整数，优选a为1。
技术人员将会认识到，本发明的方法也可用于其它生物分子例如蛋白质、荷尔蒙、寡核苷酸和抗体片段以及类似药物的小分子的放射氟化，以提供形式多样的PET示踪剂。
在式(IIa)和(IVa)以及本发明的其它方面，除非特别指出，接头是C1-60的烃基，合适地为C1-30的烃基，任选地包括1到30个杂原子，合适地包括1到10个杂原子例如氧或氮，被选出以提供良好的药物代谢动力学。合适的接头基团包括烷基、烯基、炔基链、芳香族、多芳香族和杂芳基环以及包含乙二醇、氨基酸或糖亚基的聚合物。在式(IIa)和(IVa)中以及本发明的其它方面中优选的接头基团包括选自下列的那些基团
其中n为0-20的整数；m为1-10的整数；p为整数0或1；Z为O或S。
在式(IIa)和(IVa)中以及本发明的其它方面中特别优选的接头基团可以选自 -(CH2)1-6--CH2C≡C--(CH2CH2O)2-20-(CH2)1-3-
式(I)和(III)的化合物可以通过标准的肽合成方法制备，例如固相肽合成，例如，在Atherton，E.和Sheppard，R.C.所著的《固相合成》，IRL出版社牛津大学，1989中所描述的，式(I)或(III)的化合物中的R1和R3的引入可以通过肽中的N或末端C或包含在肽序列中的其它功能基团的反应来实现，对肽序列的修饰不会影响载体的结合性能。在一个优选的例子中，可以利用Novabiochem提供的氨基酸Fmoc-Ams(Boc)-OH或Fmoc-Dpr(Boc-Aoa)-OH将氨氧基NH2-O-直接引入肽序列中。功能基团R1和R3优选通过一个稳定的酰胺键的形成而被适宜地引入，该酰胺键是肽的一个氨功能基与活性的酸反应而形成的，并且是在肽合成期间或是肽合成之后被引入的。当载体前体是一种酸时，则能够用活性试剂例如2-(1H-苯并三唑)-1，1，3，3-四甲基脲六氟磷酸盐(HBTU)、N-[(二甲氨基)-1H-1，2，3-三唑-[4，5-b]吡啶-1-亚甲基]-N-甲基甲胺六氟磷酸盐N-氧化物(HATU)引入R1和R3。
在另一方面，本发明提供了新颖的18F-辅基基团，可用于标记肽和蛋白质，例如以上所述的方法。
相应地，提供了式(II)或(IV)的化合物，或式(IIa)，(IVa)，(VIII)，(IX)，(X)，(XI)，(XVII)，(XVIII)，(XIX)或(XX)的化合物；所有化合物都如上所定义并且带有附加条件(i)在式(II)的化合物中，如果接头为苯基，那么R2为氨氧基(合适地为-ONH2)；(ii)在式(IV)的化合物中，接头不是苯基；(iii)在式(IVa)的化合物中，接头不是苯基也不是被卤素、羟基或苄氧基取代的苯基；(iv)在式(X)的化合物中，n不是0。
在此描述的方法中使用的优选的并且要求其本身受到保护的式(IV)化合物包括
18F-(CH2)1-6-CHO18F-CH2C≡C-CHO18F-(CH2CH2O)2-20-(CH2)-CHO 在另一方面，本发明提供了式(I)和(III)的化合物，也提供了式(Ia)、(IIIa)、(VII)、(XVI)的化合物；所有化合物都如上所定义。优选的式(I)、(III)、(Ia)、(IIIa)、(VII)和(XVI)的化合物是其中载体为如上所述的精氨酸-甘氨酸-天门冬氨酸肽或其类似物的那些化合物，并且特别是其中载体为式(A)的载体的那些化合物 其中X7是-NH2或
其中a为1到10的整数，优选a为1。
在本发明的一个进一步方面，提供了式(V)和(VI)的放射标记的偶联物，同时提供了式(Va)、(VIa)、(XII)、(XIII)、(XIV)、(XV)、(XXI)、(XXII)、(XXIII)、(XXIV)的化合物；所有化合物如前所述。优选的式(V)、(VI)、(Va)、(VIa)、(XII)、(XIII)、(XIV)、(XV)、(XXI)、(XXII)、(XXIII)和(XXIV)的化合物是其中载体为如上所述的精氨酸—甘氨酸—天门冬氨酸肽或其类似物的那些化合物，并且特别是其中载体为式(A)的载体的那些化合物 其中X7是-NH2或 其中a是1到10的整数，优选a为1。
式(II)的化合物可以从相应的式(XXV)的前体出发 其中L为离去基团，优选为对甲苯磺酸根、三氟代甲基磺酸根或甲基磺酸根或卤离子，并且接头如先前所定义，其中X优选为-CO-NH-、-NH-或-O-，R5和R6是H或是合适的保护基，例如叔丁氧羧基，通过与回旋加速器产生的水性的[18F]氟化物反应而得到合适地通过在合适的溶剂中例如乙腈、N，N-二甲基甲酰胺或二亚甲砜，在典型的环境中或在升高的温度下，例如在最高达150℃，合适的为60到120℃下或通过微波加热，从碱(例如，从四丁基胺盐或K2CO3/Kryptofix-222)蒸发，然后通过用标准方法例如酸解处理消除任何N保护基而预先活化。
式(IV)的化合物可以从相应的式(XXVI)的前体或它的一个被保护的衍生物出发 其中L是离去基团，优选为对甲苯磺酸根、三氟代甲基磺酸根、或甲基磺酸根或卤离子，并且接头如先前所定义，Y优选为H、烷基或芳基取代基，通过与回旋加速器产生的水性的[18F]氟化物反应而得到，合适地通过在合适的溶剂中例如乙腈、N，N-二甲基甲酰胺或二亚甲砜，在典型的环境中或在升高的温度下，例如最高达120℃下，从碱(例如，从四丁基胺盐或K2CO3/Kryptofix-222)蒸发，而预先活化。式(XXVI)的化合物中的醛或酮功能基也可在氟化后通过简单的酸解处理而快速地从它们的保护前体例如缩醛或缩酮中产生。在一个优选的例子中，式(IV)的化合物是从式(XXVII)的化合物制备得到的 其中L是离去基团例如对甲苯磺酸根、三氟代甲基磺酸根、甲基磺酸根或卤离子，并且接头如先前所定义，并且通过一个酰胺键与一个被保护的丝氨酸衍生物相连接。在这种情况下，O-保护基团R6优选为叔丁基，R5如前所定义。与回旋加速器产生的水性的[18F]氟化物反应，合适地通过在合适的溶剂中例如乙腈、N，N-二甲基甲酰胺或二亚甲砜，在典型的环境中或在升高的温度下，例如最高达150℃，合适的为60到120℃下或通过微波加热，从碱(例如，从四丁基胺盐或K2CO3/Kryptofix-222)蒸发，然后消除O和N保护基，并且用比如高碘酸盐这样的氧化剂将其氧化为醛而预先活化。
在一个优选的方面，式(IV)的化合物可以在固体载体例如聚合物颗粒、涂料或微型设备上，例如在树脂上，使用由Brask et al在Bioorg.Med.Chem.Lett.11(2001)697-700中所描述的BAL方案制备。肽醛是从在PEG-AMPS树脂上的O-PAL醛与氨基乙醛二甲基缩醛的还原性氨基化反应开始，然后与接头组分发生酰化反应而进行合成的。在这一方面，在放射氟化反应中产生的过量的试剂和副产物可以通过洗涤从与聚合物相连的产品中分离出来。通过酸处理，直接从如下所示的固体载体得到式(IV)的化合物。
其中L和接头都如前所述。
这个方法可能特别适用于式(IV)化合物的自动化生产。
本发明也提供了放射性药物组合物，其中含有有效量(例如有效用于PET成像的量)的式(V)或(VI)的通式化合物或式(Va)、(VIa)、(XII)、(XIII)、(XIV)、(XV)、(XXI)、(XXII)、(XXIII)或(XXIV)的化合物；所有化合物都如前面所定义；以及一种或多种药学上可接受的佐剂、赋形剂或稀释剂。
本发明的一个优选方案涉及用于医疗用途，特别是用于肿瘤成像(适合用于PET)的通式(V)或(VI)的化合物，或通式(Va)、(VIa)、(XII)、(XIII)、(XIV)、(XV)、(XXI)、(XXII)、(XXIII)或(XXIV)的化合物；所有化合物都如前所定义；其中载体为精氨酸—甘氨酸—天门冬氨酸肽或者其类似物，例如在WO01/77415和WO03/006491中所述的那些，优选包含以下片段的肽 更优选式(A)的肽 其中X7是-NH2或
其中a式1到10的整数，优选a为1。
可以将本发明的放射标记的偶联物向病人给药用于PET成像，其用量为足够可以产生所希望的信号，对于体重为70kg的人，典型地0.01到100mCi，优选0.1到50mCi的放射性核用量通常就足够了。
依照本发明的放射标记偶联物也因此能够以完全在技术能力范围之内的方式，用生理学上可接受的载体和赋形剂进行配制以用于给药。例如，可以任选地将添加了药物上可接受的赋性剂的化合物悬浮或溶解在水介质中，然后将所得的溶液或悬浮液灭菌。
进一步看来，本发明提供了放射标记的偶联物在放射性药物生产中的用途，这种放射性药物用于活体内成像方法，合适地用于PET，并且优选用于肿瘤成像；包括将所述的放射性药物向人或动物机体给药，产生至少是所述机体的一部分的图像。
从更进一步看来，本发明提供了将人或动物机体成像的方法，包括将放射性药物给药到所述的机体，例如给药于血管系统并且利用PET产生至少所述机体的一部分的图像，所述的放射性药物已经分布于所述的人体或动物体，其中所述放射性药物包含根据本发明的一种放射标记偶联物。
从更进一步看来，本发明提供了一种检测使用药物治疗人或动物机体以抗击跟癌症相关的病况，尤其是血管瘤，例如细胞毒性剂的效果的方法，所述方法包括将根据本发明的放射性药物给药于所述机体，并检测细胞受体对所述偶联物，优选内皮细胞受体，特别是ανβ3受体的吸收，所述给药和检测是任选的，但优选在用所述的药物治疗前、治疗期间以及治疗后反复进行。
本发明还有一种实施方式，就是它提供了用于制备放射氟化示踪剂的试剂盒，该示踪剂包括式(II)或(IV)的辅基和式(I)或(III)的化合物。
根据本发明的一个进一步的方面，提供了用于制备放射氟化示踪剂的试剂盒，该示踪剂包括式(XXV)的辅基和式(I)的化合物。根据本发明的另一个方面，提供了用于制备放射氟化示踪剂的试剂盒，该示踪剂包括式(XXVI)或式(XXVII)的辅基和式(III)的化合物。
在使用该试剂盒中，使用以上所述的方法，式(XXV)的化合物将被转化为相应的式(II)的化合物，并且式(XXVI)或(XXVII)的化合物将分别被转化为相应的式(IV)的化合物。优选地，通过让反应混合物通过固相萃取(SPE)的柱体，可以将式(II)的化合物从反应物废液中分离出来。SPE柱子可能包含石墨垫、C18固定相或离子交换树脂。然后，将式(II)和(IV)的化合物分别加入到可以合适地溶解在水性缓冲液(pH3-11)中的式(I)和(III)的化合物中。在一个非极端的温度下反应1到70分钟后，可以将标记的肽纯化，例如通过SPE纯化，然后收集起来。
实例采用实施例来举例说明本发明，其中使用了以下缩写HPLC高效液相色谱NMR核磁共振TFA三氟乙酸hr(s)小时min(s)分钟DMAP4-(二甲基氨基)吡啶THF四氢呋喃DCM二氯甲烷DMFN，N-二甲基甲酰胺TBAF四丁基氟化胺MeOH甲醇TLC薄层色谱TIS三异丙基硅烷DMSO二甲基亚砜PyAOP7-氮杂苯并三唑-1-基氧基三(吡咯烷基)膦鎓-六氟磷酸盐BOC叔丁氧基羰基实施例1 4-三甲基铵苯甲醛三氟甲基磺酸盐(化合物1)的制备
这个化合物根据Haka et al(J.Labelled Cpds.& Radiopharms 198927(7)823)所述的方法合成。
实例2 2-(2-{2-[2-(2-氟代-乙氧基)-乙氧基]-乙氧基}-乙氧基)-1，1二甲氧基-乙烷(化合物7)的制备 a)乙酸2-(2-{2-[2-(2-，2-二甲氧基-乙氧基)-乙氧基]-乙氧基}-乙氧基)-乙酯(化合物4)向搅拌着的THF(5mL)中的氢化钠悬浮液(248mg，5.15mmol，在矿物油中)中，在室温下通过注射器加入在THF(5mL)中的2-{2-[2-(2-羟基-乙氧基)-乙氧基]-乙氧基}-乙醇(化合物2)(1.0g，5.15mmol)。当气体不再选出之后，在室温下搅拌混合物45分钟，得到一种清澈的微黄色溶液。
通过注射器加入溴代乙醛(8.71g，51.5mmol)，将所得的混合物搅拌24小时。然后加入乙酸乙酯(3mL)，在室温下再搅拌混合物2小时。将混合物倒入醚(100mL)中，用10％的K2CO3水溶液(30mL)和盐水(30mL)各萃取一次。将有机相干燥(Na2SO4)，然后过滤、蒸发，将残留的油蒸馏以除去过量的溴代乙醛，用快速层析法提纯残留的粗产品，使用100％的乙酸乙酯洗脱得到产品(355mg，21％)，为无色的油状物。
b)2-(2-{2-[2-(2，2-二甲氧基)-乙氧基]-乙氧基}-乙氧基)-乙醇(化合物5)在室温下，将1N NaOH/甲醇(1mL)加入搅拌着的乙酸2-(2-{2-[2-(2，2-二甲氧基-乙氧基)-乙氧基]-乙氧基}-乙氧基)-乙酯(化合物4)(110mg，0.34mmol)在甲醇(3mL)中的溶液中。通过TLC(CHCl3/MeOH，9∶1)监测反应，反应在30分钟内完成。将溶剂蒸发后，用快速层析法(CHCl3/MeOH，9∶1)纯化残留物，得到无色的油状的产品(73mg，76％)。
c)甲磺酸2-(2-{2-[2-(2，2-二甲氧基-乙氧基)-乙氧基]-乙氧基}-乙氧基)-乙酯(化合物6)向搅拌着的醇(化合物5)(60mg，0.21mmol)和三乙胺(59μL，0.42mmol)在THF(1mL)中的溶液中，加入甲磺酰氯(24∶1，0.30mmol)。通过TLC(CHCl3/MeOH，9∶1)监测反应。2小时后，将沉淀出的三乙胺盐酸盐过滤出来。将溶剂蒸发，用氯仿/甲醇(9∶1)进行快速层析后得到油状产品(75mg，99％)。
d)2-(2-{2-[2-(2-氟代-乙氧基)-乙氧基]-乙氧基}-乙氧基)-1，1-二甲氧基乙烷(化合物7)将磺酸盐(化合物6)(75mg，0.21mmol)和TBAF(1.1M在THF中，573μL，0.63mmol)在乙腈(8mL)中的混合物在90℃加热30分钟。TLC(乙酸乙酯)监测显示反应已经完成。冷却到室温并且蒸发掉溶剂后，将残留物快速层析(乙酸乙酯)而得到无色的油状产品(56mg，93％)。
实例3 4-(3-氟丙氧其)苯甲醛(化合物10)的制备
a)4-(3-羟基乙氧基)苯甲醛(化合物8)把4-羟基苯甲醛(Fluka，4.9g，0.040mol)，碳酸钠(4.7g，0.044mol)和3-溴-1-丙醇(6.1g，0.044mol)在DMF(30mL)中的溶液在140℃加热8小时。将反应混合物冷却、浓缩，将残留物倒入乙醚中，用水洗涤并干燥(Na2SO4)。过滤和浓缩后得到4.6g(64％)黄色浆液，不需要进一步纯化即可用于下一步骤。通过NMR分析确定了其结构。
b)甲基磺酸3-(4-甲酰基苯氧基)乙酯(化合物9)向醇12(1.4g，8.0mmol)在二氯甲烷(10mL)中的溶液中加入三乙胺(1.2mL，8.5mmol)和甲磺酰氯(0.62mL，8.0mmol)。在室温下搅拌1.5小时后，将反应混合物用水洗涤、干燥(Na2SO4)，得到1.8g粗产品(黄色的油状物)。通过反相色谱(Phenomenex Luna C18(2)柱，5μm 21.2×250mm，溶剂A＝水/0.1％TFA和B＝乙腈/0.1％TFA；梯度20-40％B，60min；流量10.0ml/min，UV检测波长为254nm)将一份290mg产品纯化，冻干后得到244mg白色固体物质。通过NMR分析确定了其结构。
c)4-(3-氟丙氧基)苯甲醛(化合物10)将氟化钾(Fluka，7.2mg，0.124mmol)和kryptofix 222(Fluka，46.7mg，0.124mmol)溶解在无水乙腈(2.5mL)中。10分钟后将该混合物加入搅拌着的溶于无水乙腈(1.5mL)的甲磺酸3-(4-甲酰基苯氧基)丙酯13(16.0mg，0.062mmol)中。让反应混合物在60℃反应30分钟。经分析性的HPLC(柱子Phenomenex Luna C18(2)，3μm4.6×50mm，溶剂A＝水/0.1％TFA和B＝乙腈/0.1％TFA；梯度10-80％B，10min；流量2.0ml/min，UV检测波长为214nm和254nm)用商业标准(含氟化合物)进行共同洗脱，确定了产品在5.0分钟处。
实例4 1，1二甲氧基-4-氟化甲基环己烷(化合物14)的制备 a)4-羟甲基-4-环己酮(化合物11)这个化合物根据Borden et.al(J.Org.Chem.，1985，50，531-534)所述的方法合成。利用1H和13CNMR表征了该产品。
b)1，1-二甲氧基-4-羟甲基环己烷(化合物12)将在无水甲醇中的酮11(2.54g，19.8mmol)、原甲酸三甲酯(30mL)和对甲苯磺酸(150mg，0.79mmol)的溶液，在室温下在氮气气氛下搅拌24小时。用固体碳酸钾(4g)中和反应混合物，过滤，蒸发溶剂。将得到的粗产品溶于DCM(30mL)中并用水(40mL)洗涤。将有机相干燥(Na2SO4)、过滤并且蒸发。将黄色油状的粗产品(3.0g)在85℃蒸馏(0.2mmHg)得到无色的油状产品(1.69g，49％)。利用1H和13CNMR表征了该产品。
c)甲磺酸4，4-二甲氧基-环己基甲酯(化合物13)在氮气气氛下，向在无水DCM中的冷却的(0℃)醇12(275mg，1.58mmol)和三乙胺(3.3mL，23.7mmol)的溶液中逐滴加入甲磺酰氯(246μL，3.16mmol)。在室温下搅拌反应混合物2小时。将沉淀出来的三乙胺盐酸盐过滤出来，蒸发掉溶剂。将粗产品溶于DCM(30ml)中，用水洗涤(2×20mL)，干燥(NaSO4)，过滤并蒸发。通过快速层析法(乙酸乙酯∶石油溶剂油∶NH3(50∶50∶4))纯化残留物，得到浅黄色油状产物(214mg，54％)。利用1H和13C NMR表征了该产品。
实例5-肽前体的制备(化合物15)使用标准的肽合成方法合成肽，即化合物14，。将在DMF中的化合物14加入到在DMF中的Boc-氨氧基乙酸(34.4mg，0.18mmol)、PyAOP(93.9mg，0.18mmol)和NMM(40μL，0.36mmol)的溶液中。12小时后，在减压下将DMF蒸发掉，并且通过反相制备色谱(Phenomenex LunaC18柱，00G-4253-V0；溶剂A＝水/0.1％TFA和B＝乙腈/0.1％TFA；梯度10-50％B，60min；流量50mL/minute；检测波长254nm)纯化粗产物，得到97.1mg(57％)的纯化合物(分析性的HPLCPhenomenex LunaC18柱，00G-4252-E0；溶剂A＝水+0.1％TFA/B＝乙腈+0.1％TFA；梯度10-50％B，20min；流量1.0mL/minute；保留时间19.4分钟，检测波长214nm和254nm)。使用质谱进一步作表征，给出m/z值为1431.2[M-H+]。
实例6 将化合物1选择性地连接到化合物15上而得到化合物16 通过向10mg肽中加入含5％水的TFA来进行肽15的去保护，将在1mL水中的Boc-去保护的肽(5.9mg，0.0044mmol)加入1mL乙腈中的4-氟苯甲醛(化合物1)(1.1mg，0.94μL，0.0089mmol)中。混合物的pH值为3.5。在70℃下放置45分钟后，用反相制备色谱(Phenomenex LunaC18柱，00G-4253-N0；溶剂A＝水/0.1％TFA和B＝乙腈/0.1％TFA；梯度10-40％B，30min；流量5.0mL/分钟；检测波长214nm)将该混合物纯化两次，得到2.0mg(32％)的纯化合物(HPLC分析Phenomenex LunaC18柱，00G-4252-E0；溶剂A＝水+0.1％TFA/B＝乙腈+0.1％TFA；梯度10-50％B，20min；流量1.0mL/分钟；保留时间16.3分钟，检测波长214nm和254nm)。使用质谱作了进一步的表征，给出m/z值为1437.2[M-H+]。
实例7 将化合物7选择性地连接左化合物15上而得到化合物17 使用在乙腈中的HCl(浓)(1∶1)(0.5mL)消除2-(2-{2-[2-(2-氟代-乙氧基)-乙氧基]-乙氧基}-乙氧基)-1，1-二甲氧基乙烷6(3.9mg，0.016mmol)上的保护基。将混合物放置15分钟，然后加入到用含5％水的TFA处理的Boc-去保护的肽(化合物9)(10mg，0.007mmol)中，20分钟后减压蒸发掉TFA。用氨水将混合物的pH值调节到4，然后加热到70℃保持20分钟。用HPLC和LC-MS监测反应，并用反相制备性的色谱(Phenomenex LunaC18柱，00G-4252-N0；溶剂A＝水+0.1％TFA/B＝乙腈+0.1％TFA；梯度10-50％B，30min；流量5.0mL/分钟；检测波长214nm)纯化，得到5.5mg(51％)的纯化合物(HPLC分析Phenomenex LunaC18柱，00G-4252-E0；溶剂A＝水+0.1％TFA/B＝乙腈+0.1％TFA；梯度10-50％B，20min；流量1.0mL/分钟；保留时间14.3和14.7分钟，检测波长为214nm和254nm)。用质谱进一步作了表征，给出m/z值为1551.1[M-H+]。
实例818F-化合物16的放射合成
a)18F-化合物1的放射合成将18F-氟化物(最高达370MBq)在Kryptofix-222(12-14mg，在0.5mLMeCN中)和K2CO3(100μL 0.1M水溶液)的存在下，在N2气氛中在125℃下加热15分钟进行共沸蒸馏干燥。在这段时间内，加入了2×1mL乙腈并将其蒸发掉。在冷却到＜40℃后，加入三甲基铵苯甲醛三氟甲基磺酸盐(3-7mg，在0.7mLDMSO中)。将反应容器密封并加热到120℃维持15分钟以进行标记。将粗产品冷却到室温，并加入10mL水来稀释。使混合物依次通过一个Sep-pak CM+柱(用10ml水湿润过)和一个SepPakC18+柱(用20mL乙醇和20mL水调节)。将柱子用水(10mL)冲洗，并且用甲醇(1mL)将产品18F-氟化苯甲醛从SepPakC18+柱中洗脱出来。
b)化合物15和4-18F-氟化苯甲醛的偶联在室温下用含5％水的TFA处理化合物15(4-5mg)5分钟。在真空下通过蒸发除去溶剂。将肽重新溶解在0.5M pH值为4的NH4OAc缓冲液中(0.5mL)，并且在反应器中与4-18F-氟化苯甲醛混合。将反应容器密封并加热到70℃维持15分钟进行偶联反应。冷却到室温后，通过制备性的放射HPLC(柱子Phenomenex Prodigy ODS-Prep；250×10mm，10μ，4mL/min，溶剂A水(0.5％TFA)，溶剂B乙腈(0.5％TFA)，梯度10％B 30min)得到产品。
实例918F-化合物17的放射合成a)18F-化合物7的放射合成向装有Kryptofix 222(10mg)、K2CO3(1mg 50μL水溶液)和乙腈(0.8mL)的Wheaton小瓶内，加入含水(10mCi，1mL)的氟-18。在氮气流保护下在110℃加热30分钟去除溶剂。如同以前一样加入无水乙腈(0.5mL)，然后蒸发掉。重复这个步骤两次。加入溶于无水DMSO(0.2mL)中的化合物6(1mg)的溶液。通过微波(5分钟，160℃，150→50W)加热后，将反应混合物冷却到室温，施加到已经用乙腈(5mL)和水(20mL)调节过的SepPaktC18+柱上。用水(10mL)冲洗柱子，并将产品用乙腈(20mL)洗脱。在氮气气氛在80℃下蒸发掉溶剂。加入盐酸(34μL，12M)和乙腈(34μL)的混合物，将小瓶在室温放置5分钟。
b)化合物15和18F化合物7的偶联使化合物15(3mg)与5％的TFA水溶液(0.2mL)反应。在室温下放置1分钟后，在氮气流中除去溶剂。将氢氧化铵(38μL，28％)加入含有去保护的18F化合物7的小瓶中。将中和后的混合物转移到含有在乙酸胺缓冲液中(50μL，pH4.0，0.5M)的去保护的18F化合物15的小瓶中。在70℃下温育小瓶7分钟。冷却至室温后，加入HPLC流动相(100μL，20％乙腈，80％水，0.5％TFA)，通过制备性的放射HPLC(柱子LunaC18(2)，Phenomenex，100×10mm，5μ，4mL/min，溶剂A水(含0.5％TFA)，溶剂B乙腈(含0.5％TFA)，梯度10-50％B 20min)得到产物。
实例10 4-(氟甲基)苯甲酰肼-化合物23 制备2-[4-(羟甲基)苯基]肼-1，1，2-三羧酸三叔丁基酯，用于与醛或酮改性的肽偶联。
a)2-[4-(羟甲基)苯甲酰基]肼基-1-羧酸叔丁基酯-化合物18 将4-羟甲基苯甲酸五氟苯基酯(Milligen，0.60g，1.9mmol)、羟基苯并三唑(0.29g，1.9mmol)、肼基甲酸叔丁基酯(Fluka，0.29g，2.2mmol)和二异丙基乙胺在二氯甲烷(20mL)中的(0.68mL，4.0mmol)溶液回流3小时。在真空下浓缩反应混合物并通过柱色谱(二氧化硅，乙酸乙酯/乙烷9∶1)将产品纯化，产量为0.50g(90％)。分析性的HPLCPhenomenex Luna C18柱，3μm 4.6×50mm；溶剂A＝水/0.1％TFA和B＝乙腈/0.1％TFA；梯度10-80％B，10min；流量2.0mL/min；保留时间2.38分钟，检测波长214nm和254nm。NMR分析与产品的结构一致。
b)2-[4-(叔丁基二苯基甲硅烷氧基甲基)苯甲酰基]肼-1-羧酸叔丁基酯-化合物19的合成 将叔丁基二苯基氯硅烷(0.57mL，2.2mmol)、2-[4-(羟甲基)苯基]-肼-1-羧酸叔丁基酯(0.48g，1.8mmol)和咪唑(0.37g，5.4mmol)在二氯甲烷(60ml)中的溶液在室温下搅拌1小时15分钟。用水性的硫酸氢钾(pH 3，3×20mL)萃取溶液并干燥(Na2SO4)。用HPLC分析产品(Phenomenex Luna C18柱，3μm 4.6×50mm；溶剂A＝水/0.1％TFA和B＝乙腈/0.1％TFA；梯度60-100％B，10min；流量2.0mL/min；保留时间为3.37分钟，检测波长为214nm和254nm)。将溶液浓缩后不需要进一步纯化即可用于下一个步骤。
c)2-[4-(叔丁基二苯基甲硅烷氧基甲基)苯甲酰基]肼基-1，1，2-三羧酸三叔丁基酯-化合物20 向溶于二氯甲烷(15mL)中的2-[4-(叔丁基二苯基甲硅烷氧基甲基)苯甲酰基]肼基-1-羧酸叔丁基酯(69mg，0.14mmol)的溶液中，加入DMAP(20mg，0.16mmol)、三乙胺(0.13mL，0.96mmol)和重碳酸二叔丁基酯(90mg，0.41mmol)。2小时后在减压下将溶剂蒸发，并通过柱色谱(二氧化硅，乙烷/乙酸乙酯4∶1)纯化(HPLC分析Phenomenex Luna C18柱，3μm 4.6×50mm；溶剂A＝水/0.1％TFA和B＝乙腈/0.1％TFA；梯度60-100％B，10min；流量为2.0mL/min；保留时间为7.85分钟，检测波长为214nm和254nm)将粗产品纯化。利用NMR分析确定了产品的结构。
d)2-[4-(羟甲基)苯基]肼-1，1，2-三羧酸三叔丁基酯-化合物21 向溶于THF(25mL)中的2-[4-(叔丁基二苯基基硅烷氧基甲基)苯甲酰基]肼-1，1，2-三羧酸三叔丁基酯(0.37g，0.52mmol)的溶液中，加入四丁基铵氟化物(1.1M在THF中，0.50ml，0.55mmol)。50分钟后加入氯化铵水溶液(10％，10mL)。10分钟后用二氯甲烷(3×15mL)萃取混合物，并将有机相干燥(Na2SO4)。将溶液浓缩并用柱色谱(二氧化硅，乙烷/乙酸乙酯1∶1)将残留物纯化，得到0.21g(84％)的产品(分析性的HPLCPhenomenex Luna C18柱，3μm 4.6×50mm；溶剂A＝水/0.1％TFA和B＝乙腈/0.1％TFA；梯度60-100％B，10min；流量为2.0mL/min；保留时间为1.38分钟，检测波长为214nm和254nm)。利用NMR分析确定了产品的结构。
e)2-[4-(甲磺酸基甲基)苯甲酰基]肼基-1，1，2-三羧酸三叔丁基酯-化合物21 向溶于二氯甲烷(40mL)中的搅拌着的2-[4-(羟甲基)苯甲酰基]肼基-1，1，2-三羧酸三叔丁基酯(0.22g，0.48mmol)和三乙胺(0.080mL，0.57mmol)的溶液中，加入甲磺酰氯(0.040ml，0.52mmol)。2小时后，加入第二部分甲磺酰氯和三乙胺(相同的用量)。12小时后，分析性的HPLC(Phenomenex Luna C18柱，3μm 4.6×50mm；溶剂A＝水/0.1％TFA和B＝乙腈/0.1％TFA；梯度10-80％B，10min；流量2.0mL/min；保留时间8.25分钟，检测波长214nm和254nm)表明反应已经完成。将混合物通过二氧化硅过滤，在真空下浓缩。通过柱色谱(二氧化硅，乙烷/乙酸乙酯1∶1)将产品纯化，得到0.21g(81％)的产品。利用NMR分析了产品的结构。
f)2-[4-(氟代甲基)苯甲酰基]肼基-1，1，2-三羧酸三叔丁基酯-化合物22 将氟化钾(3.0mg，0.052mmol)和Kryptofix 222(Fluka，20mg，0.053mmol)溶于无水乙腈(0.6ml)中。15分钟后，将混合物加入溶于无水乙腈(0.4ml)中的搅拌着的2-[4-(甲磺酸基甲基)苯甲酰基]肼基-1，1，2-三羧酸三叔丁基酯(14mg，0.026mmol)中。在60℃加热反应混合物15分钟。用制备性的HPLC(Phenomenex Luna C18(2)柱，3μm 21.2×250mm；溶剂A＝水/0.1％TFA和B＝乙腈/0.1％TFA；梯度60-100％B，60min；流量10.0mL/min；保留时间33分钟，检测波长214nm)纯化产品。得到3.2mg(26％)的产品。分析性的HPLCPhenomenex LunaC18(2)柱，3μm 4.6×50mm；溶剂A＝水/0.1％TFA和B＝乙腈/0.1％TFA；梯度10-80％B，10min；流量2.0mL/min；保留时间8.78分钟，检测波长214nm和254nm。表明反应已经完成。将混合物通过二氧化硅过滤，在真空下浓缩。利用NMR确定了产品的结构。将化合物22去保护以得到化合物23是在50％的TFA/DCM中进行15分钟而完成的。
实例11 制备2-[2-(2-氟代甲基-苯硫基)-乙基]-[1，3]二氧杂环戊烷，用于与氨氧基修饰的肽、肼或酰肼偶联-化合物27
a)[2-(2-[1，3]二氧杂环戊烷-2-基-乙基硫基)苯基]甲醇化合物24的合成 将2-(2-溴代乙基)-1，3-二氧杂环戊烷(223μL，1.86mmol)加入溶于DMF中的2-巯基苯甲醇(52.3mg，0.37mmol)和碳酸钾(102.3，0.74mmol)中。将混合物在室温下搅拌过夜，然后在减压下蒸发DMF，并且用反相制备色谱(Vydac 218TP1022柱，溶剂A＝水/0.1％TFA和B＝乙腈/0.1％TFA；梯度10-50％B，40min；流量10mL/min；检测波长214nm)纯化产品。得到了65.1mg的纯物质产量(分析性的HPLCVydac 218TP54柱，溶剂A＝水/0.1％TFA和B＝乙腈/0.1％TFA；梯度10-50％B，20min；流量1.0mL/min；保留时间15.017分钟，检测波长214nm和254nm)。
b)2-[2-(2-氯甲基-苯硫基)-乙基]-[1，3]二氧杂环戊烷-化合物25的合成 将甲磺酰氯(65μL，0.83mmol)加入溶于THF中的[2-(2-[1，3]二氧杂环戊烷-2-基-乙基硫基)苯基]甲醇(40mg，0.17mmol)和三乙胺(116μL，0.83mmol)的溶液中。5天以后过滤出沉淀，减压蒸发掉THF，将粗产品通过反相制备性的色谱(Vydac 218TP1022柱；溶剂A＝水/0.1％TFA和B＝乙腈/0.1％TFA；梯度40-80％B，40min；流量10ml/分钟；检测波长254nm)纯化。将馏分置于冰箱内过夜，向乙腈相中加入二乙醚，干燥(Na2SO4)，并减压蒸发。得到24.5mg纯物质产量。(分析性的HPLCVydac 218TP54柱，溶剂A＝水/0.1％TFA和B＝乙腈/0.1％TFA；梯度40-80％B，20min；流量1.0mL/min；保留时间10.4分钟，检测波长214nm和254nm)。利用NMR验证了产品的结构。
c)2-[2-(2-氟甲基-苯硫基)-乙基]-[1，3]二氧杂环戊烷的合成化合物26 将氟化钾(3.5mg，0.060mmol)和kryptofix 222(22.5mg，0.060mmol)溶于乙腈(1ml)中，并且加入溶于乙腈(1ml)中的2-[2-(2-氯甲基-苯硫基)-乙基]-[1，3]二氧杂环戊烷(7.7mg，0.030mmol)中。在70℃加热反应混合物30分钟。通过反相制备性的色谱(Vydac 218TP1022柱；溶剂A＝水/0.1％TFA和B＝乙腈/0.1％TF A；梯度40-80％B超过40min；流量10ml/分钟；检测波长254nm)将粗产品纯化。将馏分置于冰箱内过夜，向乙腈相中加入二乙醚，干燥(Na2SO4)，并减压蒸发。(分析性的HPLCVydac 218TP54柱，溶剂A＝水/0.1％TFA和B＝乙腈/0.1％TFA；梯度40-80％B，20min；流量1.0mL/min；保留时间9.200分钟，检测波长214nm和254nm)。利用NMR验证了产品的结构。
实例12 4-氟甲基苯甲醛-化合物29的合成 a)甲磺酸(4-甲酰基苯基)甲基酯化合物28的合成
将甲磺酰氯(12.8μL，0.16mmol)加入溶于THF中的4-(羟甲基)苯甲醛二甲基缩醛(30mg，0.16mmol)和三乙胺(22.9μL，0.16mmol)的溶液中。1小时后又加入等量的甲磺酰氯和三乙胺。1小时后过滤出沉淀，减压蒸发掉THF，用二氧化硅短柱和DCM纯化粗产品，得到42.0mg(98％)纯物质。(分析性的HPLCPhenomenex Luna C18柱，00B-4251-E0，溶剂A＝水/0.1％TFA和B＝乙腈/0.1％TFA；梯度5-50％B，10min；流量2.0mL/min；保留时间4.900分钟，检测波长214nm和254nm)。利用NMR验证了产品的结构。
b)4-氟甲基苯甲醛-化合物29的合成 将氟化钾(2.7mg，0.047mmol)和kryptofix 222(17.6mg，0.047mmol)溶于乙腈(1ml)中，并且加入溶于乙腈(1ml)中的甲磺酸(4-甲酰基苯基)甲基酯(10mg，0.047mmol)中。将反应混合物加热到65℃维持10分钟。使用二氧化硅短柱和二乙醚纯化粗产物。(分析性的HPLCPhenomenex Luna C18柱，00B-4251-E0，溶剂A＝水/0.1％TFA和B＝乙腈/0.1％TFA；梯度5-50％B，10min；流量2.0mL/min；保留时间5.1分钟，检测波长214nm和254nm)。
实例13 官能化的催产素(Cys1-6的二硫化物)类似物；[BocNHOCH2CO-Ahx-Cys-Tyr-Ile-Gln-Asn-Cys-Pro-Leu-Gly-NH2]-化合物30的合成
受保护的Ahx-Cys-Tyr-Ile-Gln-Asn-Cys-Pro-Leu-Gly-NH2氨基酸序列的组装是全自动合成的(ABI 433A)。将树脂放在手动的扩散器装置中，并用含有5％水和5％TIS的TFA切割。1小时后将TFA减压蒸发。将得到的沉淀用乙醚洗涤并在空气中干燥。将TFA和DMSO(95∶5)加入肽中。2小时后在减压下蒸发TFA，并将二乙醚加入残留物中。将得到的沉淀用乙醚洗涤并在空气中干燥。将溶于DMF(5ml)中的肽(70.6mg，0.063mmol)加入溶于DMF(5ml)中的Boc-氨氧基乙酸(23.9mg，0.13mmol)、PyAOP(65.2mg，0.13mmol)和NMM(27.5l，0.25mmol)。12小时后将DMF在减压下蒸发。用反相制备性的色谱(Vydac 218TP1022柱；溶剂A＝水/0.1％TFA和B＝乙腈/0.1％TFA；梯度10-60％B，40min；流量10ml/分钟；检测波长230nm)将粗产品纯化。用质谱进行进一步的表征，得到m/z值为1293.0[MH+]。
实例14 4-氟化甲基-苯甲醛与催产素(二硫化物Cys1-6)；[NH2OCH2CO-Ahx-Cys-Ile-Gln-Asn-Cys-Pro-Leu-Gly-NH2]-化合物31的偶联 用TFA和5％的水把Boc保护基从催产素(二硫化物Cys1-6)；[Boc-NH2OCH2CO-Ahx-Cys-Tyr-Ile-Gln-Asn-Cys-Pro-Leu-Gly-NH2](3.0mg，0.0023mmol)上脱除下来。30分钟以后，将TFA在减压下蒸发，加入溶于水(0.5ml)中的4-氟代甲基苯甲醛(1.5mg，0.011mmol)，再以稀氨水把pH值调节到4。将混合溶液加热到70℃并保持50分钟。(分析性的HPLCPhenomenex Luna00B-4251-E0柱，溶剂A＝水/0.1％TFA和B＝乙腈/0.1％TFA；梯度10-60％B，10min；流量2.0ml/min；保留时间6.3min，检测波长214和254nm)。用质谱作进一步的表征，给出m/z值为1313.1[MH+]。
实例14 3-(2-氟化甲基-苯硫基-丙醛与催产素(二硫化物Cys1-6)；[NH2OCH2CO-Ahx-Cys-Tyr-Ile-Gln-Asn-Cys-Pro-Leu-Gly-NH2]-化合物32的偶联 在偶联之前，如实例6中所述将Boc从肽部分中移除。用0.1ml溶于乙腈(1∶1)中的1N HCl溶液除去3-(2-氟代甲基-苯硫基)-丙醛(0.81mg，0.0034mmol)上的保护基。将混合物静置30min，然后加入溶于0.4ml水中的肽(2.0mg，0.0017mmol)中，用稀氨水将pH值调节到4。将混合物加热到70℃，保持50min。(分析性的HPLCVydac 218TP54柱，溶剂A＝水/0.1％TFA和B＝乙腈/0.1％TFA；梯度10-50％B，20min；流量2.0ml/min；保留时间19.8min；检测波长214和254nm)。用质谱进行进一步的表征，给出m/z值为1373.5[MH+]。
实例15 化合物7与催产素(二硫化物Cys1-6)；[NH2OCH2CO-Ahx-Cys-Tyr-Ile-Gln-Asn-Cys-Pro-Leu-Gly-NH2]的-化合物33的偶联
用TFA和5％的水把Boc保护基从催产素(二硫化物Cys1-6)；[Boc-NHOCH2CO-Ahx-Cys-Tyr-Ile-Gln-Asn-Cys-Pro-Leu-Gly-NH2](2.5mg，0.0019mmol)上切割下来。30min以后，在减压下蒸发TFA。用0.5ml 1N HCl的乙腈溶液(1∶1)把化合物7(1.0mg，0.0041mmol)上的保护基消除。将混合物放置30min，然后加入到肽中，用稀氨水将pH值调节到4。将混合物加热到70℃，保持15min。(分析性的HPLCVydac 218TP54柱，溶剂A＝水/0.1％TFA和B＝乙腈/0.1％TFA；梯度10-50％B，20min；流量1.0ml/min；保留时间15.1和15.4min；检测波长214和254nm)。用质谱作进一步的表征，给出m/z值为1413.5[MH+]。
由于这些实施方案是从本发明的几个方面进行举例说明的，所述的本发明以及要求保护的范围并不局限于本文的这些具体的实施方案的范围。目的是任一等价的实施方案都在本发明的范围内。事实上，从前述的描述出发，除了本文所显示和描述的内容之外的对本发明的各种改进形式对于本领域技术人员来说将变得显而易见。目的是那些改进形式也落入所附的权利要求书的范围之内。
权利要求
1.一种放射氟化方法，包括使式(I)的化合物与式(II)的化合物反应 18F-(接头)-R2(II)或者，使式(III)化合物与式(IV)化合物反应， 18F-(接头)-R4(IV)其中R1为醛部分、酮部分、被保护的醛例如缩醛、被保护的酮例如缩酮或一种官能团例如二醇或N-末端丝氨酸残基，可以使用氧化剂将它们迅速而有效地氧化成醛或酮；R2为选自伯胺、仲胺、羟胺、肼、酰肼、氨氧基、苯肼、氨基脲或氨基硫脲的基团，并且R2优选为肼、酰肼或氨氧基基团；R3可选自伯胺、仲胺、羟胺、肼、酰肼、氨氧基、苯肼、氨基脲或氨基硫脲的基团，并且R3优选为肼、酰肼或氨氧基；R4为醛部分、酮部分被保护的醛例如缩醛部分保护的酮例如缩酮或一种例如二醇或N-末端丝氨酸残基的官能团，可以使用氧化剂将它们迅速而有效地氧化成醛或酮；而分别得到式(V)和式(VI)的偶联物 其中X为-CO-NH-、-NH-、-O-、-NHCONH-或-NHCSNH-，并且X优选为-CO-NH-、-NH-或-O-；Y为H、烷基或芳基取代基；并且式(II)、(IV)、(V)和(VI)中的接头基团选自-(CH2CH2O)n-(CH2)m 其中n为0-20的整数；m为1-10的整数；p为整数0或1；Z为O或S。
2.一种放射氟化方法，包括使式(Ia)化合物与式(IIa)化合物反应 18F-(接头)-O-NH2(IIa)或者，使式(IIIa)化合物与式(IVa)化合物反应 18F-(接头)-R4 (IVa)其中R1和R4如权利要求1中所定义；式(IIa)和式(IVa)化合物中的接头分别为C1-60烃基，合适地为C1-30烃基，任选地包括1-30个杂原子，合适地包括1-10个杂原子，例如氧或氮；而分别得到式(Va)和式(VIa)的偶联物 其中Y为H、烷基或芳基取代基；并且接头如上述式(IIa)或式(IVa)化合物中所定义。
3.一种放射氟化方法，包括使式(VII)化合物 与式(VIII)、(IX)、(X)或(XI)化合物反应18F-(CH2CH2O)n-(CH2)m-CHO (VIII) 其中n为0-20的整数；m为1-10的整数；X为-CO-NH-、-NH-或-O-，并优选为-O-；Y为H、烷基或芳基取代基；而分别得到式(XII-XV)的偶联物 其中X如上述式(VII)化合物中所定义，m和n如上述式(VIII-XI)化合物中所定义。
4.一种放射氟化方法，包括使式(XVI)化合物 其中Y为H、烷基或芳基取代基；优选地与式(XVII)、(XVIII)、(XIX)或(XX)化合物反应18F-(CH2-CH2-O)n-(CH2)m-W-NH2(XVII) 其中m是1-10的整数，n是0-20的整数，并且W＝-CONH-、-NH-或-O-，而分别得到式(XXI)、(XXII)、(XXIII)式(XIV)的化合物 其中W＝-CONH-、-NH-或-O-，m和n如式(VIII-XI)化合物中所定义，并且Y为H、烷基或芳基部分。
5.根据权利要求1到4中任一项的方法，其中所述的载体为精氨酸-甘氨酸-天门冬氨酸肽或其类似物，
6.根据权利要求5的方法，其中所述的载体包括片段
7.根据权利要求5或6的方法，其中所述的载体为式(A)的载体 其中X7是-NH2或 其中a是1到10的整数，优选a为1。
8.如权利要求1中所定义的式(II)的化合物或如权利要求2中所定义的式(IIa)的化合物，其附加条件为在式(II)的化合物中，如果接头为苯基，那么R2为氨氧基(合适地为-ONH2)。
9.一种式(XVII)、(XVIII)、(XIV)或(XX)的化合物18F-(CH2-CH2-O)n-(CH2)m-W-NH2(XVII) 其中m为1-10的整数，n为1-20的整数，并且W＝-CONH-、-NH-或-O-。
10.如权利要求1中所定义的式(IV)的化合物或者如权利要求2中所定义的式(IVa)的化合物；其附加条件为(i)在式(IV)的化合物中，接头不是苯基(ii)在式(IVa)的化合物中，接头不是苯基，也不是被卤素、羟基或卞氧基取代的苯基；
11.式(VIII)，(IX)，(X)或(XI)的化合物18F-(CH2CH2O)n-(CH2)m-CHO (VIII) 其中n为1-20的整数；m为1-10的整数；X为-CONH-、-NH-或-O-，优选为-O-Y为H、烷基或芳基取代基附加条件为在式(X)的化合物中，n不是0。
12.如权利要求1中所定义的式(I)或(III)的化合物或如权利要求2中所定义的式(Ia)或(IIIa)的化合物
13.根据权利要求12的化合物，其中所述的载体为精氨酸-甘氨酸-天门冬氨酸肽或其类似物。
14.根据权利要求12或13的化合物，其中所述的载体为式(A) 其中X7是-NH2或 其中a是1到10的整数，优选a为1。
15.一种如权利要求1中所定义的式(V)或(VI)的化合物。
16.一种如权利要求2中所定义的式(Va)或(VIa)的化合物。
17.一种如权利要求3中所定义的式(XII)、(XIII)、(XIV)、(XV)的化合物。
18.一种权利要求4中定义的式(XXI)、(XXII)、(XXIII)、(XXIV)的化合物。
19.根据权利要求15到18中任一项的化合物，其中所述的载体为精氨酸-甘氨酸-天门冬氨酸肽或其类似物。
20.根据权利要求19的化合物，其中所述的载体包括以下片段
21.根据权利要求19的化合物，其中所述的载体为式(A)的载体 其中X7是-NH2或 其中a是1到10的整数，优选a为1。
22.下式的化合物
23.一种放射性药物组合物，包含有效量的根据权利要求15到22中任意一项的化合物；以及一种或多种药学上可接受的佐剂、赋性剂或稀释剂。
24.用于医疗用途的根据权利要求15到22中任一项的化合物。
25.根据权利要求15到22中任一项的化合物在生产用于体内成像法的放射性药物中的用途。
26.一种在人或动物机体内成像的方法，包括将根据权利要求15到22中任一项的化合物给药到所述的机体内，并且利用PET使其中分布了所述化合物的所述机体的至少一部分成像。
27.一种检测使用药物治疗人体或动物体以抗击与癌症，优选血管瘤有关的病症的效果的方法，所述方法包括权利要求19-22中任意一项的化合物根据本发明给药于所述人体或动物体，并检测细胞受体对所述偶联物的吸收，所述给药和检测任选地但是优选地在使用所述药物治疗之前、治疗期间以及治疗之后进行。
全文摘要
本发明涉及式(V)或(VI)化合物的偶联物其中X为－CONH－、－NH－、－O－、－NHCONH－或－NHCSNH－；其作为放射性药物的用途、其制备方法以及在制备方法中所用的合成中间体。
文档编号G01N33/58GK1758925SQ200480006725
公开日2006年4月12日 申请日期2004年3月12日 优先权日2003年3月13日
发明者A·库思伯特森, M·索尔巴肯, J·M·阿鲁克维, H·卡尔森, M·E·格拉泽尔 申请人:安盛药业有限公司, 哈默史密斯网上成像有限公司