专利名称：对虾ihhnv的fq－pcr诊断试剂盒及检测方法
技术领域：
本发明涉及对虾IHHNV的FQ-PCR诊断试剂盒及检测方法。
背景技术：
对虾IHHNV是对虾传染性皮下及造血组织坏死病毒(InfectiousHypodermal and Hematopoietic Necrosis Virus)的缩写，又称侏儒畸形综合症病毒(Runt-deformity syndrome virus)，可造成对虾幼体和仔虾高达80％的累积死亡率，感染过这一病毒的对虾能存活的也头部畸形，个体小，对对虾养殖产量造成很大影响。为有效控制该病毒的流行，各方面建立了一些对虾传染性皮下造血组织坏死病毒的定性检测方法，如电镜法、基因探针法和普通PCR法等，其中电镜法检测仪器昂贵，样品预处理复杂，灵敏度低，不适合现场测定，而基因探针法，也价格高，且操作测定时间很长，约需24小时，同样不适合养殖现场使用。PCR法，如中国专利申请01127872.2《快速检测对虾IHHNV试剂盒》公开的一种快速检测对虾IHHNV试剂盒，该试剂盒由以下试剂组成组织裂解液；DNA提取液；和组份中包含特定引物IHHNV-5’和特定引物IHHNV-3’的PCR反应液。操作较复杂，易造成污染，特异度较低，灵敏度较低，检测时间仍然较长，约4小时。
《实时定量SYBR Green PCR在检测定量WSV中的应用(Detection and Quantificationof Infectious Hypodermal and Hematopoietic Necrosis Virus and White Spot Virus in ShrimpMsing Real-Time Quantitative PCR and SYBR Green Chemistry)》(载于美国微生物学会《临床微生物学》第39卷第8期第2835-2845页)一文介绍了一种基于GeneAmp 5700序列检测系统结合SYBR Green化学染料的用于检测并定量IHHNV病毒(一种感染虾体的单链DNA病毒)及WSV(白斑病毒，一种感染虾体的双链DNA病毒)的快速高灵敏的实时荧光PCR。该方法需利用GeneAmp 9600热循环装置和GeneAmp 5700序列检测系统来完成，反应系统中有SYBR Green Master混合液，和左、右两端的引物，反应过程先是50℃2分钟和95℃10分钟，接下来是95℃10秒和60℃1分钟循环40次。可见这种方法存在如下缺陷耗时较长，仅扩增就需约1小时，而且该方法是一种基于荧光染料的非探针技术，存在非特异扩增产物或引物二聚体导致的假阳性结果，不适宜作市场应用产品。
荧光定量PCR(简称FQ-PCR，也称Real-time PCR)是美国Applied Biosystem公司1996年研制出来的一种新的核酸定量技术，该技术是在普通PCR基础上加入荧光标记Taqman探针来实现其定量功能的。FQ-PCR由于应用荧光探针技术，具有比普通PCR更高的灵敏性、特异性和重复性，可以通过光电传导系统直接探测PCR扩增过程中荧光信号的变化以获得实时定量结果，克服了普通PCR的许多缺点。此外FQ-PCR只须在加样时打开一次盖子，其后的过程完全是闭管操作，不需要PCR后电泳鉴定，避免了普通PCR操作中的诸多弊端。但FQ-PCR目前尚未应用于对虾IHHNV的诊断。
发明内容
针对上述不足，本发明所要解决的技术问题就是建立一种具有准确定量，高特异性、高灵敏度、高精密度、操作简单、实时快速诊断对虾IHHNV的反应体系，并提供利用这一反应体系的试剂盒以及以这一试剂盒进行对虾IHHNV诊断的检测方法，即提出一种对虾IHHNV的FQ-PCR诊断试剂盒及检测方法。使本发明能提供一种对对虾IHHNV进行快速定量测定的试剂盒，使可在极短时间内准确判断各种对虾苗种、幼虾、成虾及亲虾是否携带对虾IHHNV及该病毒DNA的拷贝数量。
本发明提供的对虾IHHNVFQ-PCR诊断试剂盒，有一盒，盒内存放试剂容器，试剂容器内所装的试剂包括特定引物IHHNV-1636F，下称前引物，其序列为5’-GACATAGAGCTACAATCCTCGCCTAT-3’特定引物IHHNV-1713R，下称后引物，其序列为5’-CAA GTA CCG TAG TCG CTT CAG CTT-3’IHHNV-Taqman探针1663T-1688，下称荧光探针，其序列为5’-TAM-TGG GAG TTA CCT TTG CTG CCA GAG CC-TAMRA-3’。
本发明提供的对虾IHHNVFQ-PCR诊断试剂盒，试剂容器所装的试剂还包括已知对虾IHHNV DNA拷贝浓度的标准参照品，下称标准参照品，用于对待测样本中的对虾IHHNVDNA浓度进行定量计算。
本发明提供的对虾IHHNV的FQ-PCR诊断试剂盒，试剂容器所装的试剂还包括DNA提取液或DNA提取液及样本稀释用的生理盐水，用于制备待检测样本中的对虾IHHNVDNA模板，所说的DNA提取液为含有0.9％(W/V，或g/100ml提取液)NaCl和0.1％(V/V，或ml/100ml提取液)二巯基乙醇的溶液。
本发明提供的对虾IHHNV的FQ-PCR诊断试剂盒，试剂容器所装的试剂还包括EX Taq酶、Mg++、dATP、dCTP、dGTP、dTTP的混合液，用于参加PCR反应。
本发明提供的对虾IHHNV的FQ-PCR诊断试剂盒，以上所说的各试剂分别装在一个试剂容器内。
本发明提供的对虾IHHNV的FQ-PCR诊断试剂盒，有一荧光定量PCR反应液试剂容器，所装荧光定量PCR反应液为一个实验量的倍数，一个实验量为18μl包括下列试剂的混合液前引物按配制成20μl计浓度为0.2μM；后引物按配制成20μl计浓度为0.2μM；荧光探针 按配制成20μl计浓度0.12pmol；1×pH8.6PCR缓冲溶液；EXTaq酶1.5U；Mg++按配制成20μl计浓度为2.0mM；dATP 按配制成20μl计浓度为0.2mM；dCTP 按配制成20μl计浓度为0.2mM；dGTP 按配制成20μl计浓度为0.2mM；dTTP 按配制成20μl计浓度为0.2mM。
本发明提供的对虾IHHNV的FQ-PCR诊断试剂盒，所称的标准参照品包装容器有4件，其中所包装的标准参照品病毒拷贝数浓度各为104/ml、105/ml、106/ml、107/ml。
本发明提供的对虾IHHNV的FQ-PCR诊断检测方法，首先制备待测样本中的对虾IHHNV DNA模板，然后将对虾IHHNV DNA模板和标准参照品同时置于各自的预加在反应管中的荧光定量PCR反应液中，最后将各反应管同时进行转速为4000rpm离心30秒后再同时置入荧光定量PCR仪进行DNA扩增，扩增完毕后荧光定量PCR仪自动计算得出检测结果，其中进入荧光定量PCR仪的待测样本中的每只对虾IHHNV DNA模板反应体系的材料及试剂为一个实验量的荧光定量PCR反应液加2μl对虾IHHNVDNA模板，即含有下列试剂的混合物18μl前引物按配制成20μl计浓度为0.2μM；后引物按配制成20μl计浓度为0.2μM；荧光探针 按配制成20μl计浓度0.12pmol；1×pH8.6PCR缓冲溶液；EXTaq酶1.5U；Mg++按配制成20μl计浓度为2.0mM；dATP按配制成20μl计浓度为0.2mM；dCTP按配制成20μl计浓度为0.2mM；dGTP按配制成20μl计浓度为0.2mM；dTTP按配制成20μl计浓度为0.2mM；对虾IHHNV DNA模板2μl。
进入荧光定量PCR仪的待测样本中的标准参照品反应体系的材料及试剂一个实验量的荧光定量PCR反应液加2μl标准参照品，即含有下列试剂的混合物18μl前引物按配制成20μl计浓度为0.2μM；后引物按配制成20μl计浓度为0.2μM；荧光探针 按配制成20μl计浓度0.12pmol；1×pH8.6PCR缓冲溶液；EXTaq酶1.5U；Mg++按配制成20μl计浓度为2.0mM；dATP 按配制成20μl计浓度为0.2mM；dCTP 按配制成20μl计浓度为0.2mM；dGTP 按配制成20μl计浓度为0.2mM；dTTP 按配制成20μl计浓度为0.2mM；标准参照品2μl。
在荧光定量PCR仪中放置的标准参照品反应体系为4个，其中标准参照品的病毒拷贝数浓度各为104/ml、105/ml、106/ml、107/ml。
在荧光定量PCR仪中的反应过程是第一步，升温到95℃作预变性20秒；第二步，按先作95℃变性5秒再降温到60℃作退火延伸20秒循环40次；在每个循环的退火延伸结束时进行单点荧光检测。
对结果定性分析标准待检样品Ct值＜40为阳性，说明待检样品中携带对虾IHHNV。
对结果定量分析标准设立横坐标为病毒拷贝数浓度，纵坐标为Ct值的直角坐标系；先将各标准参照品的已知起始病毒拷贝数浓度及其所测得的Ct值在坐标系上作一点，再将以4个标准参照品所得的4个点作成平滑的曲线为标准曲线，最后根据获得的待测样品的Ct值，由荧光定量PCR仪自动从标准曲线上查得该待测样本的起始病毒拷贝数浓度。
本发明提供的对虾IHHNV的FQ-PCR诊断检测方法，其中对虾IHHNV DNA的提取方法是先将待检样品1份挤压成匀浆再加上4份生理盐水混匀，在转速为1000rpm离心1分钟后取上清液50μl，再在上清液中加入50μl DNA提取液混匀后在99℃-100℃下保温10分钟，再经转速为13000rpm离心10分钟，所得上清液即为待检样品DNA模板。
本发明提供的对虾IHHNV的FQ-PCR诊断试剂盒，配备了所有无法从市场上购得的本发明提供的对虾IHHNV的FQ-PCR诊断检测方法所用的一条特定引物IHHNV-1636F、一条特定引物IHHNV-1713R和一条IHHNV-Taqman探针1663T-1688。本发明提供的对虾IHHNV的FQ-PCR诊断检测方法通过在同一实验条件下，将待检样品的对虾IHHNVDNA模板和已知对虾IHHNV DNA拷贝浓度的标准参照品分别加入到荧光定量PCR反应液中在荧光定量PCR仪中进行同时检测而获得定性定量结果。用本发明提供的对虾IHHNV的FQ-PCR诊断试剂盒及检测方法与普通PCR法作灵敏度、特异性比对试验和盲样平行检测，主要技术指标结果如下1、特异性100％(普通PCR法能检出的盲样，本法均能检出符合率一致)。
2、灵敏度检出极限为2×102拷贝数/ml，线性范围2×103-2×108拷贝数/ml(本发明方法比普通PCR法高100-1000倍)。
3、重复性(可靠性)标准差(S)0.035-0.39，变异系数(CV)0.13-1.05％(普通PCR法无定量能力，无法测知)。
4、检测时间＜1小时(普通PCR法需4小时左右)。
5、可操作性DNA提取采用一步法，PCR扩增产物鉴定采用封闭的实时检测，不易污染(普通PCR法扩增产物鉴定需开管吸取产物作电泳分析，易造成污染)。
6、结果判断本法实时、客观，用荧光定量PCR仪自动判断(普通PCR法以目测为主，客观性低)。
7、实验自动化控制程度本法高(普通PCR法低)。
上述结果证明本发明提供的对虾IHHNV的FQ-PCR诊断试剂盒及检测方法具有准确定量、高度特异、高度敏感、重复性好、操作简单、实时快速等特性。本发明所提供的对虾IHHNV的FQ-PCR诊断试剂盒及检测方法可在50分钟内准确判断各种对虾苗种、幼虾、成虾、亲虾及虾卵是否携带对虾IHHNV和所携带的该病毒的数量。本发明所提供的对虾IHHNV的FQ-PCR诊断试剂盒及检测方法，既可作定量检测也可作定性检测，既可对多份待检样品同时检测也可对一份待检样品单独检测，使用灵活。
图1为本发明所提供的对虾IHHNV的FQ-PCR诊断试剂盒一实施例打开盖后的俯视图；图2为图1中A--A剖视图。
具体实施例方式
1、可用于凡纳对虾、细角对虾、日本对虾和中国对虾幼苗、虾卵、成虾和亲虾中对虾IHHNV的FQ-PCR诊断试剂盒，有一盒体，盒内存放位置中存放有三件试剂容器，各试剂容器外贴有标明品名和浓度标签，其中分别盛装下列三种试剂特定引物IHHNV-1636F，
其序列为5’-GAC ATA GAG CTA CAA TCC TCG CCT AT-3’特定引物IHHNV-1713R，其序列为5’-CAA GTA CCG TAG TCG CTT CAG CTT-3’IHHNV-Taqman探针1663T-1688，其序列为5’-TAM-TGG GAG TTA CCT TTG CTG CCA GAG CC-TAMRA-3’。
2、本实施例提供的对虾IHHNV的FQ-PCR诊断试剂盒，除实施例1所有内容外还有1件贴有标明品名、浓度标签的试剂容器，其中盛装对虾IHHNV的标准参照品。使用时由操作人员按要求配制出4份浓度各为104/ml、105/ml、106/ml、107/ml的标准参照品，用于对待测样本中的对虾IHHNV DNA浓度进行定量计算。
3、本实施例提供的对虾IHHNV的FQ-PCR诊断试剂盒，除实施例2所有内容外还有1件贴有标明品名、浓度标签的试剂容器，其中盛装DNA提取液，所说的DNA提取液为含有0.9％(W/V)NaCl和0.1％(V/V)二巯基乙醇的溶液，用于制备待检测样本中的对虾IHHNV DNA模板。
4、本实施例提供的对虾IHHNV的FQ-PCR诊断试剂盒，除实施例3所有内容外还有1件贴有标明品名标签的试剂容器，其中盛装生理盐水，用于样本稀释。
5、本实施例提供的对虾IHHNV的FQ-PCR诊断试剂盒，除实施例4所有内容外还有1件贴有标明品名、浓度标签的试剂容器，其中盛装EX Taq酶、Mg++、dATP、dCTP、dGTP、dTTP的混合液，用于参加PCR反应。
6、本实施例提供的对虾IHHNV的FQ-PCR诊断试剂盒，有一盒体，盒内存放位置中存放有一荧光定量PCR反应液试剂容器，所装荧光定量PCR反应液为一个实验量的10倍，一个实验量为18μl包括下列试剂的混合液前引物按配制成20μl计浓度为0.2μM；后引物按配制成20μl计浓度为0.2μM；荧光探针 按配制成20μl计浓度0.12pmol；1×pH8.6PCR缓冲溶液；EX Taq酶1.5U；Mg++按配制成20μl计浓度为2.0mM；dATP 按配制成20μl计浓度为0.2mM；dCTP 按配制成20μl计浓度为0.2mM；dGTP 按配制成20μl计浓度为0.2mM；dTTP 按配制成20μl计浓度为0.2mM。
7、本实施例提供的对虾IHHNV的FQ-PCR诊断试剂盒，除如上例所说的一件反应液试剂容器外，还有4件对虾IHHNV的标准参照品包装容器，其中所盛装的对虾IHHNV的标准参照品病毒拷贝数浓度各为104/ml、105/ml、106/ml、107/ml。
8、本发明提供的对虾IHHNV的FQ-PCR诊断试剂盒，如图1、2所示，有一纸制盒1，盒内置一纸制试管架2，即将纸折成门状，并在上平面上打上插试管的孔。试管架有7个孔，分别安置以下试剂、物品试剂A如例3所说的DNA提取液1.3ml，以一个塑料管3包装；试剂B如例6所说的实时荧光定量PCR反应液0.60ml，以一个塑料管5包装；
试剂C；如例7所说的标准参照品，分4个塑料管6包装，每管10μl。
另有5ml生理盐水，以另一塑料管4包装。该盒可用于以两次测定24个待检样品，9、本实施例所提供的对虾IHHNVFQ-PCR诊断检测方法，需要检测5份待测样本，检测盒内有4件拷贝数分别为104/ml、105/ml、106/ml、107/ml的标准参照品。
首先制备每份待测样本中的对虾IHHNV DNA模板，并在9支反应管中每管加入如例6所说的实时荧光定量PCR反应液18μl；然后将所得模板各取2μl和标准参照品各取2μl同时一一对应加入9支反应管中；最后将各反应管同时进行转速为4000rpm离心30秒后再同时置入荧光定量PCR仪进行DNA扩增反应，在荧光定量PCR仪中的反应过程是第一步先升温到95℃作预变性20秒；第二步先作95℃变性5秒再降温到60℃作退火延伸20秒，如此循环40次；在每个循环的退火延伸结束时进行单点荧光检测，由荧光定量PCR仪自动给出结果，即通过仪器电脑界面显示也可打印。
对结果定性分析标准待检样品Ct值＜40为阳性，说明待检样品中携带对虾IHHNV。
对结果定量分析标准设立横坐标为病毒拷贝数浓度，纵坐标为Ct值的直角坐标系；先将各标准参照品的已知起始病毒拷贝数浓度及其所测得的Ct值在坐标系上作一点，再将以4个标准参照品所得的4个点作成平滑的曲线为标准曲线，最后根据获得的待测样品的Ct值，由荧光定量PCR仪自动从标准曲线上查得该待测样本的起始病毒拷贝数浓度。
对判别待检样品中是否带有对虾IHHNV可分为实时监测即在PCR每个循环中延伸结束时通过仪器的电脑界面每个彩色方柱的增高或每条彩色扩增曲线上升幅度中发现阳性标本，也可在PCR反应结束时通过仪器电脑界面的Ct值来获知阳性标本及其病毒含量。
10、本实施例提供的对虾IHHNV的FQ-PCR诊断检测方法，其中对虾IHHNV DNA模板的提取方法是先将待检样品1份在软塑管中以手指挤压成匀浆，再加入4份生理盐水混匀，在转速为1000rpm离心1分钟后取上清液50μl，其中加入50μl DNA提取液混匀后在99℃-100℃下保温10分钟，再经转速为13000rpm离心10分钟，所得上清液即为待检样品DNA模板。
权利要求
1.一种对虾IHHNVFQ-PCR诊断试剂盒，有一盒，盒内存放试剂容器，其特征是试剂容器内所装的试剂包括特定引物IHHNV-1636F，下称前引物，其序列为5’-GAC ATA GAG CTA CAA TCC TCG CCT AT-3’特定引物IHHN-1713R，下称后引物，其序列为5’-CAA GTA CCG TAG TCG CTT CAG CTT-3’IHHNV-Taqman探针1663T-1688，下称荧光探针，其序列为5’-TAM-TGG GAG TTA CCT TTG CTG CCA GAG CC-TAMRA-3’。
2.如权利要求1所述的对虾IHHNVFQ-PCR诊断试剂盒，其特征是试剂容器所装的试剂还包括已知对虾IHHNV DNA拷贝浓度的标准参照品，下称标准参照品，用于对待测样本中的对虾IHHNV DNA浓度进行定量计算。
3.如权利要求2所述的对虾IHHNVFQ-PCR诊断试剂盒，其特征是试剂容器所装的试剂还包括DNA提取液或DNA提取液及样本稀释用的生理盐水，用于制备待检测样本中的对虾IHHNV DNA模板，所说的DNA提取液为含有0.9％(W/V)NaCl和0.1％(V/V)二巯基乙醇的溶液。
4.如权利要求3所述的对虾IHHNVFQ-PCR诊断试剂盒，其特征是试剂容器所装的试剂还包括EX Taq酶、Mg++、dATP、dCTP、dGTP、dTTP的混合液，用于参加PCR反应。
5.如权利要求1或2或3或4所述的对虾IHHNVFQ-PCR诊断试剂盒，其特征是所说的各试剂分别装在一个试剂容器内。
6.如权利要求1或2或3或4所述的对虾IHHNVFQ-PCR诊断试剂盒，其特征是有一荧光定量PCR反应液试剂容器，所装荧光定量PCR反应液为一个实验量的倍数，一个实验量为18μl包括下列试剂的混合液前引物 按配制成20μl计浓度为0.2μM；后引物 按配制成20μl计浓度为0.2μM；荧光探针按配制成20μl计浓度0.12pmol；1×pH8.6PCR缓冲溶液；EXTaq酶1.5U；Mg++按配制成20μl计浓度为2.0mM；dATP按配制成20μl计浓度为0.2mM；dCTP按配制成20μl计浓度为0.2mM；dGTP按配制成20μl计浓度为0.2mM；dTTP按配制成20μl计浓度为0.2mM。
7.如权利要求2所述的对虾IHHNVFQ-PCR诊断试剂盒，其特征是所称的标准参照品包装容器有4件，其中所包装的标准参照品病毒拷贝数浓度各为104/ml、105/ml、106/ml、107/ml。
8.本发明提供的对虾IHHNV的FQ-PCR诊断检测方法，其特征是首先制备待测样本中的对虾IHHNV DNA模板，然后将对虾IHHNV DNA模板和标准参照品同时置于各自的预加在反应管中的荧光定量PCR反应液中，最后将各反应管同时进行转速为4000rpm离心30秒后再同时置入荧光定量PCR仪进行DNA扩增，扩增完毕后荧光定量PCR仪自动计算得出检测结果，其中进入荧光定量PCR仪的待测样本中的每只对虾IHHNV DNA模板反应体系的材料及试剂为一个实验量的荧光定量PCR反应液加2μl对虾IHHNV DNA模板，即含有下列试剂的混合物18μl前引物 按配制成20μl计浓度为0.2μM；后引物 按配制成20μl计浓度为0.2μM；荧光探针按配制成20μl计浓度0.12pmol；1×pH8.6PCR缓冲溶液；EXTaq酶1.5U；Mg++按配制成20μl计浓度为2.0mM；dATP按配制成20μl计浓度为0.2mM；dCTP按配制成20μl计浓度为0.2mM；dGTP按配制成20μl计浓度为0.2mM；dTTP按配制成20μl计浓度为0.2mM；对虾IHHNV DNA模板2μl；进入荧光定量PCR仪的待测样本中的标准参照品反应体系的材料及试剂一个实验量的荧光定量PCR反应液加2μl标准参照品，即含有下列试剂的混合物18μl前引物 按配制成20μ1计浓度为0.2μM；后引物 按配制成20μl计浓度为0.2μM；荧光探针按配制成20μl计浓度0.12pmol；1×pH8.6PCR缓冲溶液；EX Taq酶1.5U；Mg++按配制成20μl计浓度为2.0mM；dATP按配制成20μl计浓度为0.2mM；dCTP按配制成20μl计浓度为0.2mM；dGTP按配制成20μl计浓度为0.2mM；dTTP按配制成20μl计浓度为0.2mM；标准参照品2μl；在荧光定量PCR仪中放置的标准参照品反应体系为4个，其中标准参照品的病毒拷贝数浓度各为104/ml、105/ml、106/ml、107/ml；在荧光定量PCR仪中的反应过程是第一步，升温到95℃作预变性20秒；第二步，按先作95℃变性5秒再降温到60℃作退火延伸20秒循环40次；在每个循环的退火延伸结束时进行单点荧光检测；对结果定性分析标准待检样品Ct值＜40为阳性，说明待检样品中携带对虾IHHNV；对结果定量分析标准设立横坐标为病毒拷贝数浓度，纵坐标为Ct值的直角坐标系；先将各标准参照品的已知起始病毒拷贝数浓度及其所测得的Ct值在坐标系上作一点，再将以4个标准参照品所得的4个点作成平滑的曲线为标准曲线，最后根据获得的待测样品的Ct值，由荧光定量PCR仪自动从标准曲线上查得该待测样本的起始病毒拷贝数浓度。
9.如权利要求8所述的对虾IHHNV的FQ-PCR诊断检测方法，其特征是其中对虾IHHNV DNA的提取方法是先将待检样品1份挤压成匀浆再加上4份生理盐水混匀，在转速为1000rpm离心1分钟后取上清液50μl，再在上清液中加入50μl DNA提取液混匀后在99℃-100℃下保温10分钟，再经转速为13000rpm离心10分钟，所得上清液即为待检样品DNA模板。
全文摘要
本发明提供的对虾IHHNV的FQ－PCR诊断试剂盒，配备了本发明提供的对虾IHHNV的FQ－PCR诊断检测方法所用的一条前引物、一条后引物和一条荧光探针。本发明提供的对虾IHHNV的FQ－PCR诊断检测方法，通过在同一实验条件下，将待检样品的对虾IHHNVDNA模板和已知对虾IHHNV DNA拷贝浓度的标准参照品分别加入到荧光定量PCR反应液中在荧光定量PCR仪中进行同时检测而获得定性、定量结果。本发明提供的对虾IHHNV的FQ－PCR诊断试剂盒及检测方法具有准确定量、高度特异、高度敏感、重复性好、操作简单、实时快速等特性；可在50分钟内对对虾IHHNV作准确的定性和定量判断。
文档编号G01N35/00GK1786711SQ20051006127
公开日2006年6月14日 申请日期2005年10月23日 优先权日2005年10月23日
发明者王学海, 王忠发, 卢亦愚 申请人:王学海, 王忠发, 卢亦愚