专利名称：枸杞hplc指纹图谱的建立方法及其标准指纹图谱的制作方法
技术领域：
本发明涉及一种中药材指纹图谱的建立方法，尤其是枸杞药材高效液相色谱(HPLC) 指纹图谱的建立方法，以及由此方法所得到的枸杞HPLC标准指纹图谱。属于药物分析技 术领域。
背景技术：
中药指纹图谱特指中药样本经光谱或色谱等现代分析技术得到的中药各组分群体特 征的图谱或图象。目前指纹图谱已成为国内外公认的鉴别中药品种和评价中药质量的最有 效手段之一。美国食品药品管理局在1996年制定的《FDA关于植物制品的指南》中，要求 对植物原料、植物药中间品和植物药产品提供相应的指纹图谱。英国草药典、印度草药典 以及加拿大药用及芳香植物学会、德国药用植物学会也接受色谱指纹图谱。中国国家药品 监督管理部门于2000年发布了《中药注射剂的指纹图谱研究的技术要求(暂行)》，明确要 求对新申报的中药注射剂和己上市的中药注射剂实行指纹图谱标准。中药指纹图谱经过了数十年的研究，使用了包括紫外、红外、气相、高效液相、薄层、 核磁共振、扫描电子显微镜、计算机图像分析、电泳技术、同功酶分析法、分子生物学技 术、聚类分析技术等许多现代分析测试手段，为中药的物质鉴定和成分分析积累了大量的 数据。但从中药全面质量控制的角度看，还远未达到有效地反映和控制中药的整体质量的 目的。高效液相色谱(HPLC)指纹图谱在国际上容易获得认可，包括美国、英国、法国、 加拿大、德国、闩本和印度在内的许多国家更愿意接受HPLC指纹图谱。因此，为中药材建 立相应的HPLC指纹图谱，是现阶段控制中药内在质量的有效手段。枸杞子为茄科植物枸杞之成熟果实，别名西枸杞、白刺、山枸杞、白疙针，简称枸杞，具有补肾益精，养肝明目，补血安神，生津止渴，润肺止咳之功效，临床主要用于治疗肝 肾阴亏、腰膝酸软、头晕目眩、目昏多泪和虚劳咳嗽等疾病。枸杞中含有丰富的枸杞多糖、 脂肪、蛋白质、游离氨基酸、牛磺酸、甜菜碱、维生素Bl、 B2、 E、 C，此外，还含有大 量的矿物元素，如钾、钠、钙、镁、铁、铜、猛、锌、硒等。目前，人们对枸杞的质量控 制还只限于对其诸多组分中某个有效成分或指标性成分进行定性、定量分析，缺乏全面反 映枸杞质量的标准控制手段。发明内容本发明的目的是提供一种枸杞HPLC指纹图谱的建立方法，以及由此方法所得到的枸 杞药材标准指纹图谱。为实现此目的，本发明通过对枸杞高效液相色谱指纹图谱的研究， 提出了一种枸杞药材质量控制方法，弥补了现有质量控制技术的不足，使枸杞药材的质量 控制更加完善和科学。本发明的枸杞HPLC指纹图谱的建立方法，包括如下步骤(1) 供试品溶液的制备精密称取药材粉末10g，置于具塞容器中，加入60 80%的甲醇 100 800mL，超声震荡60min，冷却后定容，取上清液用O. 45 u m微孔滤膜过滤，滤 液作为供试品溶液。(2) 高效液相色谱分析色谱分离柱填料为5wm Kromasil-C18， 250X4. 6隱；流动相为 水-乙腈；采用梯度洗脱方式Omin—15min—30min—45min—60min，乙腈10%—22%~ —35%—45%,55%;流速0.8 1.2raL/min;检测波长254咖；柱温25 45。C。在此条 件下分析供试品溶液，得到枸杞药材的指纹图谱。(3) 标准指纹图谱的确定按照本发明提供的方法，对21批枸杞药材建立了HPLC指纹图 谱，通过分析比较，确定了13个共有特征峰，其保留时间分别为2.4min、 3. 9min、 5. 4min、 10. 8min、 14. Omin、 19. 7min、 24. lmin、 28. 5min、 29. 2min、 38. 9min、 43. 3min、 47. Omin、 59. 8min，这些共有特征峰构成了枸杞药材的指纹特征，可作为枸杞药材的标准指纹图谱。 本发明具有如下显著的优点和用途(1) 将枸杞药材作为一个整体对待，通过比较其共有峰可以找出不同药材之间的细 微差异；(2) 供试品制作简便，色谱条件容易实现；(3) 方法的稳定性和重现性都比较好；(4) 适于对枸杞药材真伪、产地和品质的鉴别和控制。
图1是本发明提供的枸杞药材的标准指纹图谱。从左到右分别标出了其13个共有特征峰。
具体实施方式
本发明的优选实施例如下(1) 仪器和药品使用岛津LC10A高效液相色谱仪；枸杞药材共21批，均购于中草药商店；其它试剂为色谱纯或分析纯。(2) 供试品溶液的制备精密称取药材粉末10g，置于容量瓶中，加入80%的甲醇500mL， 超声震荡60min，冷却定容。取上清液用0.45nm微孔滤膜过滤，滤液作为供试品溶液。(3) 高效液相色谱分析色谱分离柱填料为5"mKromasil-C18，250X4. 6腿；流动相为 水-乙腈；采用梯度洗脱方式Omin—15min—30min—45min—60min，乙腈10%—22% —35%—45%—55%;流速1.0mL/min;检测波长254nm;柱温30。C。在此条件下分析 供试品溶液，得到枸杞药材的指纹图谱。(4) 按照本发明提供的方法，对21批枸杞药材建立了HPLC指纹图谱，通过分析比较，确定了13个共有特征峰，其保留时间分别为2. 4min、 3. 9min、 5. 4min、 10. 8min、 14. 0min、 19. 7rain、 24. lmin、 28. 5min、 29.2min、 38. 9min、 43. 3min、 47.Omin、 59.8min，这些共有特征峰构成了枸杞药材的指纹特征，可作为枸杞药材的标准指纹图谱。
权利要求
1、一种枸杞药材高效液相色谱指纹图谱的建立方法，其特征包括供试品溶液的制备、指纹图谱的制作和标准指纹图谱的确定。包括以下步骤(1)供试品溶液的制备精密称取枸杞药材粉末10g，置于具塞容器中，加入60～80％的甲醇100～800mL，超声震荡60min，冷却后定容，取上清液用0.45μm微孔滤膜过滤，滤液作为供试品溶液。(2)指纹图谱的制作色谱分离柱填料为5μm Kromasil-C18，250×4.6mm；流动相为水-乙腈；采用梯度洗脱方式0min→15min→30min→45min→60min，乙腈10％→22％→35％→45％→55％；流速0.8～1.2mL/min；检测波长254nm；柱温25～45℃。在此条件下分析供试品溶液，得到枸杞药材的指纹图谱。(3)标准指纹图谱的确定按照本发明提供的方法，对21批枸杞药材建立了HPLC指纹图谱，通过分析比较，确定了13个共有特征峰，其保留时间分别为2.4min、3.9min、5.4min、10.8min、14.0min、19.7min、24.1min、28.5min、29.2min、38.9min、43.3min、47.0min、59.8min，这些共有特征峰构成了枸杞药材的指纹特征，可作为枸杞药材的标准指纹图谱。
全文摘要
本发明提供了一种枸杞药材HPLC指纹图谱的建立方法及其标准指纹图谱，包括供试品溶液的制备，对照品溶液的制备，色谱条件的选择，并用高效液相色谱仪进行测定，得到枸杞药材的指纹图谱。通过对21批次枸杞药材HPLC指纹图谱的对比，确定其共有指纹特征，得到标准指纹图谱。本发明具有方法简便、重现性好、特征峰多、准确可靠等特点。所建立的标准指纹图谱能有效地表征枸杞药材的质量。
文档编号G01N30/00GK101216466SQ200710306938
公开日2008年7月9日 申请日期2007年12月28日 优先权日2007年12月28日
发明者周考文, 李凤桐, 王树聪 申请人:北京联合大学生物化学工程学院