前列腺素E₂酶联免疫测定试剂盒的制作方法

专利名称：前列腺素E₂酶联免疫测定试剂盒的制作方法
技术领域：
本发明属于酶联免疫测定试剂盒，具体的涉及一种前列腺素氏酶联免疫测定试剂盒。
背景技术：
前列腺素E2 (以下简称PGE2)是机体很多组织与器官(如神经、胃肠道、呼吸道与泌尿、生殖系统)花生四烯酸的主要产物。测定血液、胃液、脑脊液、尿液、精液或各种组织的前列腺素E2含量反映出有关的器官或组织的功能。

发明内容
本发明的目的在于提供一种前列腺素氏酶联免疫测定试剂盒。为实现上述技术目的，达到上述技术效果，本发明通过以下技术方案实现 本发明的前列腺素氏酶联免疫测定试剂盒，包括
1)已包被PGE2-牛血清白蛋白连接物酶标板，-20°c保存；
2)明胶；
3)卩6氏标准品，4°C保存；
4)抗体PGE2-IgG, 4°C保存；
5)羊抗兔IgG-辣根过氧化物酶结合物，-20°C保存；
6)邻苯二胺；
7)稀释液，用前用蒸馏水作1:20稀释；
8)底物液，用前用蒸馏水作1:5稀释。本发明的检测原理如下
抗原(PGE2-BSA)包被固相载体，与游离抗原(标准品或待测样品)竞争性地与一定量得抗体结合，洗涤后加过量酶标抗体，再加底物显色。根据显色程度(0D值)即可从标准曲线上推算出待测样品PG&含量。与现有技术相比，本发明具有以下有益效果
1、本发明的前列腺素&酶联免疫测定试剂盒合具有良好的特异性，可有效测定血液、 胃液、脑脊液、尿液、精液或各种组织中的PGE2的浓度；2、本发明的前列腺素氏酶联免疫测定试剂盒合在神经系统疾病、哮喘、消化性溃疡、泌尿系统疾病、不育症与肿瘤等疾病中的鉴别诊断灵敏度高，可保证良好的线性关系；
3、本发明的前列腺素氏酶联免疫测定试剂盒合在-20°C条件下可可保存6个月。上述说明仅是本发明技术方案的概述，为了能够更清楚了解本发明的技术技术方案，并可依照说明书的内容予以实施，以下以本发明的较佳实施例。
具体实施例方式一种前列腺素E2酶联免疫测定试剂盒，其包括
1)已包被PGE2-牛血清白蛋白连接物酶标板，-20°c保存；
2)明胶，Ig/瓶；
3)PGE2 标准品，1600pg/ml，4°C保存；
4)抗体PGE2-IgG, lml，滴度为 1:2000，4°C保存；
5)羊抗兔IgG-辣根过氧化物酶结合物(GARIgG-HRP)，100ug/ml,_20°C保存；
6)邻苯二胺(0PD)，15mg/瓶;
7)稀释液(PBS)，0.2M，用前用蒸馏水作1:20稀释；
8)底物液化吐作『2)，0.1M，用前用蒸馏水作1:5稀释。利用本发明的前列腺素氏酶联免疫测定试剂盒的检测步骤如下 1、一次反应
将卩6氏标准品用0. 1%明胶倍比稀释成8个浓度:1. 25、2. 5、5、10、20、40、80和160 pg/0. 1ml，用 0. 1% 明胶(PBS 配制)将抗 PGE2-IgG 作 1:10 稀释。零标准(BO)孔加稀释液IOOul，标准(ST)孔加PGE2标准品IOOul，样品(SMP)孔加待测样品IOOul。各孔均加抗体PGE2-IgGlOOul (TA孔除外)。37 0C 2hr 或室温下 4hr。tween-PBS稀释液洗板5次。2、二次反应
用0. 1%明胶(稀释液配制)12ml将GARIgG-HRP稀释，各孔均加200ul (ΤΑ孔除外)。 37 °C 2hr或室温下4hr。tween-PBS 洗板 5 次。3、反应测定
用底物液新鲜配制OPD-H2A基质(OPD浓度lmg/ml，每毫升底物液中加入0. 5微升30% H2O2),每孔注入200ul。37°C放置20min或至显色较好时，用3M硫酸50ul终止反应。置室温lOmin，在酶标检测仪上测定OD49tl,以TA孔调零。4、计算
(jD谈
以PGE2标准品含量为横坐标，相应的B/^%值为纵坐标，在半对数纸上作标准曲线，以样品孔B/^%值从标准曲线上推算其PGE2浓度。标本采集与保存用2%EDTA_Na2(含0. 7%NaCl) 1:9抗凝，采血过程需顺利无气泡，防止血小板活化，尿液标本留取需放防腐剂，标本均需立即3000rpm/min，离心15min 后，取血浆及待测标本，冻-20°C，可保存3个月。试剂适用范围及有效期测定人和动物的血浆、血细胞、体液或组织中的PGE2的浓度，本药盒有效期可保存6个月(_20°C)。
以上所述仅为本发明的优选实施案例而已，并不用于限制本发明，对于本领域的技术人员来说，本发明可以有各种更改和变化。凡在本发明的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。
权利要求
1.前列腺素氏酶联免疫测定试剂盒，其特征在于，包括1)已包被PGE2-牛血清白蛋白连接物酶标板；2)明胶；3)PGE2标准品；4)抗体PGE2-IgG;5)羊抗兔IgG-辣根过氧化物酶结合物；6)邻苯二胺；7)稀释液;8)底物液。
2.根据权利要求1所述的前列腺素氏酶联免疫测定试剂盒，其特征在于所述明胶为 Ig/瓶。
3.根据权利要求1所述的前列腺素氏酶联免疫测定试剂盒，其特征在于所述准品为 1600pg/ml。
4.根据权利要求1所述的前列腺素氏酶联免疫测定试剂盒，其特征在于所述抗体 PGE2-IgG 为 1ml，滴度为 1:2000。
5.根据权利要求1所述的前列腺素氏酶联免疫测定试剂盒，其特征在于羊抗兔 IgG-辣根过氧化物酶结合物为100ug/ml。
6.根据权利要求1所述的前列腺素氏酶联免疫测定试剂盒，其特征在于所述邻苯二胺为15mg/瓶。
7.根据权利要求1所述的前列腺素氏酶联免疫测定试剂盒，其特征在于稀释液为 0. 2M。
8.根据权利要求1至7中任意一项前列腺素E2酶联免疫测定试剂盒，其特征在于底物液为0. IM0
全文摘要
本发明公开了一种前列腺素E2酶联免疫测定试剂盒，其包括已包被PGE2-牛血清白蛋白连接物酶标；明胶；PGE2标准品；抗体PGE2-IgG；羊抗兔IgG-辣根过氧化物酶结合物；邻苯二胺；稀释液和底物液。本发明的前列腺素E2酶联免疫测定试剂盒合具有良好的特异性，可有效测定人和动物的血浆、血细胞、体液或组织中的PGE2的浓度。
文档编号G01N33/88GK102495219SQ20111042007
公开日2012年6月13日 申请日期2011年12月15日 优先权日2011年12月15日
发明者何杨, 王兆钺, 阮长耿, 陈德春 申请人:苏州博赛生物医药有限公司, 苏州大学, 苏州苏大赛尔免疫生物技术有限公司