专利名称：一种快速测定腐竹中甲醛含量的方法
技术领域：
本发明涉及食品检测方法领域。特别涉及一种快速测定腐竹中甲醛含量的方法。
背景技术：
腐竹是黄豆豆浆熬煮后，所含的脂肪和大豆蛋白结膜捞出来晾干得到的。随着熬煮时间加长结膜越捞越少，剩下以碳水化合物为主的物质会发生“褐变反应”，甚至发黑。添加还原性极强的吊白块，可以起到“漂白”作用，既改变了色泽，也增加了产量。吊白块是一种工业原料，在印染工业、合成橡胶时用作还原催化剂，在酸性条件下分解产生甲醛，世界卫生组织将甲醛确定为致癌、致畸物质和公认的变态反应源，因此无论在国内国外，都禁止将吊白块或甲醛用于食品的加工处理。2011年4月卫生部网站上发布公告，公布了第一批可能违法添加的非食用物质名单，这份“黑名单”上共有17种非食用物质，吊白块列在第一的位置。同时公布的吊白块检测方法有GB/T 21126-2007小麦粉与大米粉及其制品中甲醛次硫酸氢钠含量的测定和卫监发〔2001〕159号文件食品中甲醛次硫酸氢钠的测定，在分析方法上属于高效液相色谱法、离子色谱法和分光光度法。其中比较常用的高效液相色谱法和分光光度法在实际应用中存在不足，一是GB/T 21126-2007方法以2，4-二硝基苯胼作为衍生试剂，衍生反应时间长，衍生产物需要有机溶剂正己烷萃取，存在实验步骤多、时间长、操作烦琐的不足；二是卫监发〔2001〕159号文件食品中甲醛次硫酸氢钠的测定，样品采取蒸馏提取甲醛的方法，对腐竹来说，蒸馏过程产生大量气泡，使流出液不澄清，有时由于样品中存在色素，使流出液带有颜色，影响吸光度的测定；三是还没有针对腐竹这一问题较为突出的样品的检测方法。
发明内容
本发明的目的在于提供一种采用高效液相色谱法对腐竹中甲醛含量快速检测的方法，本方法以Nash试剂作为衍生试剂柱前衍生对腐竹样品中甲醛含量进行测定，反应时间短，产物不需要有机溶剂萃取，适宜于腐竹样品中甲醛含量的快速测定。本发明所采用的技术方案是
采用高效液相色谱法(VWD检测器)对腐竹产品中的甲醛含量进行定性、定量分析；其中以Nash试剂作为衍生试剂进行柱前衍生，衍生产物不需要萃取直接进行色谱分析，紫外检测器检测波长是412/7 ，以乙腈和水做为流动相，体积比是50:50 ；流速是0. SmL · min 1 ；对甲醛含量的判定标准为甲醛含量线性范围是0. 00 0. mmg/L,在0. 00 0. 8Qmg/ L范围内，线性方程Y=27. 024Χ，Y为衍生反应生成物的峰面积，X为甲醛含量。本发明的优点是建立了 Nash试剂柱前衍生高效液相色谱法快速测定腐竹样品中甲醛含量的分析方法。样品经过震荡提取、过滤，采用Nash试剂柱前衍生后高效液相色谱测定，该方法与GB/T 21126-2007相比较，衍生反应时间由40 i/ 缩短到15 i/ ，产物不需要有机溶剂萃取，减少了衍生产物的损失，降低了劳动强度，节约了药品，在时间上缩短了萃取、静置步骤需要的90 。该方法的方法学实验结果符合样品的分析要求，达到了快速CN 102539565 A分析的目的。
图1 DNPH与2，4一二硝基苯腙在水和正己烷中的色谱图； 图2 DDL在水和正己烷中的色谱图； 图3峰面积与衍生反应温度关系图； 图4峰面积与衍生反应时间关系图； 图5甲醛标准工作曲线图； 图6腐竹样品测试色谱图。
具体实施例方式
(1)试剂及标准溶液的配制甲醛标准溶液(天津市光复精细化工研究所，甲醛标准液 C=L 000 mg/mO ；无水硫酸钠、乙酸铵、冰乙酸、乙酰丙酮为分析纯试剂；样品为市售腐竹。40 mg/L甲醛标准储备液的配制精确吸取甲醛标准液(1. QQQnigM) 4. QQmL用去离子水定容至100 z容量瓶。冰箱中冷藏保存。2. 0 mg/L甲醛标准使用液的配制精确吸取甲醛标准储备液5. OOmL用去离子水定容至100 Z容量瓶。使用当天配制。Nash试剂的配制150 g乙酸铵，3. _L冰乙酸，2 .QmL乙酰丙酮，用去离子水稀释定容至1 L,棕色瓶中避光贮存12 h后使用。硫酸钠溶液称取IOOg无水硫酸钠，溶解后定容于500 Z容量瓶备用。(2)仪器及色谱分析条件仪器是美国Agilent 1200 HPLC，配有四元泵、真空在线脱气机、柱温箱和 VWD 检测器；Agilent Zorbax Eclipse XDB-C18 (4.6X250 mm, 5// )色谱柱；流动相采用色谱级乙腈和去离子水的二元体系，乙腈与水的体积比是 50 50 ；采用等度洗脱方式，流速是0. SmL - min 不控温，进样量10// Z。(3)衍生试剂的选择甲醛高效液相色谱检测方法用到的检测器是紫外检测器 (VWD)，紫外检测器适用于有机分子具有紫外或可见光吸收基团，由于甲醛在此光区没有吸收，需要在进行色谱柱的分离分析之前进行衍生反应，即柱前衍生，使得到的衍生产物在紫外或可见光区有吸收达到定性定量的目的。目前国内外使用较普遍的衍生试剂是2，4一二硝基苯胼(DNPH)，在国标方法中采用的衍生试剂也是2，4一二硝基苯胼(DNPH)，它与甲醛反应生成的2，4一二硝基苯腙，经过有机溶剂正己烷萃取后进行色谱分析。但是2，4一二硝基苯胼也会溶解在正己烷溶剂中，并且在测试波长355/7 的紫外线区也有吸收，对样品测定带来一定干扰。本发明采用Nash试剂代替2，4一二硝基苯胼做为甲醛的衍生试剂，Nash试剂是乙酰丙酮与乙酸铵配制的溶液，该反应原理是乙酰丙酮与甲醛在氨的存在下可发生反应，生成黄色络合物2，6—二甲基一3，5—二酰基一 1，4一二氢吡啶(简称DDL)，Nash试剂与甲醛的衍生具有较好的选择性，不与其他醛酮反应，形成的色谱峰峰型尖锐，对称性好，可满足甲醛的检测要求。(4)衍生产物的溶解性比较2，4一二硝基苯胼与Nash试剂与甲醛发生衍生反应的生成物在水相和有机相中的溶解情况不同。2，4一二硝基苯胼作为衍生试剂，在测试波长355·条件下，第一个峰保留时间 3. 635 i/ ，是2，4一二硝基苯胼，第二个峰保留时间4. 790 i/ ，是2，4一二硝基苯腙，2,4—二硝基苯腙在正己烷中得到了萃取富集，2，4一二硝基苯胼在正己烷中也有溶解，当2，4一二硝基苯腙含量较低时，会对测定结果造成影响。2，4一二硝基苯胼(DNPH)与2，4一二硝基苯腙在水溶液和正己烷中的色谱图见图1。Nash试剂作为衍生试剂，在测试波长412丽条件下，Nash试剂没有吸收，保留时间
2.999min出现DDL峰，分别测定Nash试剂与DDL在水相和有机相正己烷中溶解的色谱图， 可见DDL难于溶解在正己烷有机相中，这是采用Nash试剂做衍生试剂不需要有机相萃取步骤的依据。Nash试剂与甲醛反应产物(DDL)在水溶液和正己烷中的色谱图见图2。(5)衍生反应温度考虑到温度对反应速率和反应产物稳定性的影响，在25 Γ— 70Γ不同温度下进行衍生反应试验，产物进行色谱分析，以反应温度为横坐标，生成物的色谱峰面积为纵坐标，绘图选择最佳衍生反应温度是50°C。峰面积与衍生反应时间关系见图3。(6)衍生反应时间吸取甲醛标准使用液2. 0ml，加入Nash试剂2. Oml,加水定容到10 ^，50°( 水浴中加热，反应时间分别是10組'/7、2Qmin、？,Qmin AQmin、50 i/ 、60 i/ ， 用流水冷却至室温。以衍生反应时间为横坐标，以衍生反应生成物的色谱峰面积为纵坐标， 绘图选择最佳衍生反应时间。结果是在时间内反应完全，峰面积达到最大， 在后峰面积有所减少，确定最佳衍生反应时间是。峰面积与衍生反应时间关系见图4。(7)标准曲线的绘制在10支mnL具塞比色管中加入2. Qmg/L甲醛标准使用液 0. OOfflZ、0. 、0. 、1 · OOfflZ、1. 50 Ζ、2. OOaZ、2. 50 Ζ、3. OOaZ、3. 50 Ζ、4. OOaZ (含甲醛分别是 0· 0"^、0. 5//^、1· 0μ g、2. 0//^、3. Q^gA. 0//^,5. 0//《、6· 0//《、7· 0//《、8· Qu g)， 各分别依次加入2. 00 mL Nash试剂，补加水至10 Ζ，摇勻，置于50 Γ水浴中进行衍生反应， 每间隔tMin摇勻1次，反应mnin后用流水冷却至室温。过0. 45// 滤膜过滤器后放入样品管中进行色谱分析，以甲醛含量(Ag)为横坐标，以衍生反应生成物的峰面积为纵坐标， 绘制标准曲线见图5。(8)线性关系、检出限
甲醛含量在0. 00 0. mmg/L范围内，线性方程Y=27. 024Χ，相关系数是0. 9998，线性关系良好。根据检出限的计算方法，分别以3倍信噪比(TPsn =3)计算，得到该方法的检出限是 0. QUmg/Kg。(9)精密性与准确度
用分析天平称取腐竹样品粉10. 000(k和量筒精确量取100 Z硫酸钠溶液，放入2mmL 具塞三角瓶内，振荡提取40 i/ ；过滤得清液；量取2. OOmL清液于具塞比色管中(10mL)，加入甲醛标准使用液(2. Qmg/L) 0. QQmL,Q. 50 Ζ、1. 50 Ζ、2. 50 Z (即添加后样品中甲醛含量是 5.0 mg/Kg ,15.0 mg/Kg、25.Q ^穿/餘)，加 2. OOmL Nash 试剂，补加水至 10 Z，摇勻；置于 50 Γ水浴中加热，每？min摇勻1次，I^min后用流水冷却至室温。过0. 45// 滤膜后放入样品管中进行色谱分析。每个浓度水平平行做5次，平均添加回收率和精密度结果见表1。表1腐竹中甲醛的添加回收率和精密度(η =5)
权利要求
1.一种快速测定腐竹中甲醛含量的方法，其特征是采用高效液相色谱法对腐竹产品中的甲醛含量进行定性、定量分析；其中以Nash试剂作为衍生试剂进行柱前衍生，对衍生产物直接进行色谱分析，紫外检测器检测波长是412/7 ，色谱分析中以乙腈、水的二元体系为流动相进行等度洗脱，流速0. SmL -min 1 ；对甲醛含量的判定标准为甲醛含量线性范围是0.00 0. 80/^/Z，在0. 00 0.8(^^/1范围内，线性方程Y=27.024X，Y为衍生反应生成物的峰面积，X为甲醛含量。
2.根据权利要求1所述的快速测定腐竹中甲醛含量的方法，其特征是所述Nash试剂柱前衍生的衍生反应温度是50°C。
3.根据权利要求1所述的快速测定腐竹中甲醛含量的方法，其特征是所述Nash试剂柱前衍生的衍生反应时间是Wmin。
4.根据权利要求1所述的快速测定腐竹中甲醛含量的方法，其特征是所述流动相乙腈与水之间的体积比=50 50。
全文摘要
本发明涉及一种快速测定腐竹中甲醛含量的方法，其特征是采用高效液相色谱法与紫外检测器(VWD)联用的方法对腐竹产品中的甲醛含量进行定性、定量分析；其中以Nash试剂进行柱前衍生，对衍生产物进行色谱分析，紫外检测器检测波长是412nm，以乙腈、水的二元体系为流动相进行等度洗脱，流速0.8mL·min-1；对甲醛含量的判定标准为甲醛含量线性范围是0.00～0.80mg/L，在0.00～0.80mg/L范围内，线性方程Y=27.024X，Y为衍生反应生成物的峰面积，X为甲醛含量。其优点是该方法与GB/T21126-2007相比较，衍生反应时间由40min缩短到15min，产物不需要有机溶剂萃取，减少了衍生产物的损失，降低了劳动强度，节约了药品，该方法的方法学实验结果符合样品的分析要求，达到了快速分析的目的。
文档编号G01N30/02GK102539565SQ20111044735
公开日2012年7月4日 申请日期2011年12月28日 优先权日2011年12月28日
发明者佟琦, 宋建争, 王志斌 申请人:燕山大学