专利名称：冠心宁注射液的指纹图谱的检测方法
冠心宁注射液的指纹图谱的检测方法发明领域
本发明涉及一种中药注射液制剂的检测方法，特别是一种冠心宁注射液的指纹图谱的检测方法。
背景技术：
中药特征指纹图谱，是指中药材经过适当处理后，采用一定的分析手段和仪器检测得到，能够识别其中各个组分群体特征的共有峰的图谱。它是一种综合的，可量化的手段，可用于鉴别中药材的真伪，评价中药质量的均一性和稳定性。中药指纹图谱可教全面的反映中药所含化学成分的种类与数量，进而反映中药的质量和中医所用药所体现的整体疗效，有效的表征中药质量；尤其在现阶段中药的有效成分大多尚未明确，中药指纹图的整体性和模糊性正好符合中药质控的要求，较之单一成分或指标成分的质控方法，更具有科学 性和全面性，更加客观地从整体上评价中药的内在质量。目前已有一些药剂使用这种方法作为质量检测的手段，例如现有专利技术中200710098981. 8 一种双黄连注射液的制备方法及其成分检测方法；申请号200610065282. 9，一种黄芪皂苷注射液指纹图谱的质量检测方法；200910186698. X 一种醒脑静注射液的检测方法；200910244324. 9 一种复方苦参注射液的检测方法等等。冠心宁注射液记载于卫生部药品标准中药成方制剂第十七册。冠心宁注射液由丹参、川芎加工制成，具有活血化瘀，通脉养心的功效，用于治疗冠心病心绞痛。临川效果显著，近年销售不断提高。现有技术中，公开了一些丹参、j 11芎的鉴别方法，但这些方法对于检测冠心宁注射液的质量专属性、特征性不够强，尤其是注射液，更应该有严格的检测方法控制产品质量，故待完善药品质量标准，提高质量可控性，确保用药安全。
发明内容
本发明目的在于解决冠心宁注射液的质量标准的检测，公开一种冠心宁注射液的指纹图谱的检测方法。本发明是通过如下技术方案实现的一种冠心宁注射液的指纹图谱的检测方法，对照指纹图谱有10个特征峰，以6号峰位参照；相对保留时间I号峰10. 536±0. 04 ；2号峰11. 145±0. 02 ；3 号峰15. 678±0. 02 ；4 号峰17. 071±0· 5 ;5 号峰23. 019±0· 04 ；6号峰 34. 2826±0. 02 ；7 号峰46. 426±0. 08 ；8 号峰50. 879+0. 06 ；9 号峰 53. 936±0. 03 ；10号峰57. 239±0. 04 ;且供试品指纹图谱与质量标准所附的对照指纹图谱的相似度不低于O. 9 ;剔除溶剂峰，校正色谱峰后，相似度不低于O. 90。如图I所示意，为冠心宁注射液的对照指纹图谱。本发明冠心宁注射液的指纹图谱检测方法包括如下步骤
照高效液相色谱法(《中国药典》2010版一部附录)，结合指纹图谱要求测定，参照物溶液的制备取经五氧化二磷真空干燥24h的阿魏酸对照品适量，精密称定，加10%甲醇溶液制成每ml含O. 25mg的溶液，即得。供试品溶液的制备精密量取冠心宁注射液O. 8 I. Iml.置于5ml量瓶中，10%的甲醇(O. 2%冰乙酸)稀释至刻度，摇匀，用O. 45 μ m的微孔滤膜过滤，取续滤液，即得；
测定方法分别精密量取参照物溶液和供试品溶液各5 μ 1，注入液相色谱仪，记录85min图谱即得。如图2、3、4、5所示意,分别为不同流动相下冠心宁注射液指纹图谱；如图6所示意，为不同流速下冠心宁注射液指纹图谱，如图7所示意，为不同柱温冠心宁注射液指纹图谱，如图8所示意，不同批号冠心宁注射液指纹图谱。根据上述结果分析可以得知，色谱条件与系统适应性试验用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；线性梯度洗脱，乙腈为流动相A，0. 04%磷酸水溶液为流动相B，Omin—A: B=4:96; 60min—A: B=33:67; 68min—A: B=33:67; 72min—A: B=2:98 ；检测波长 276nm ；柱 温25°C 30°C ;流速0. 7ml/min O. 8ml/min。 本发明采用高效液相色谱方法建立冠心宁注射液的指纹图谱，应用关于冠心宁注射液生产质量检测；采用药典会发布的相似度软件，将冠心宁注射液指纹图谱相似度阈值定为不低于O. 9.，经实验证明方法准确，可靠，可以最大限度的体现各主要成分的特征峰。
图I为冠心宁注射液的对照指纹图谱
图2为甲醇-O. 1%TFA流动相下冠心宁注射液指纹图谱 图3为甲醇-O. 5%H3P04流动相下冠心宁注射液指纹图谱 图4为乙腈-O. 5%H3P04流动相下冠心宁注射液指纹图谱 图5为乙腈-O. 04%H3P04流动相下冠心宁注射液指纹图谱 图6为不同流速下冠心宁注射液指纹图谱 图7为不同柱温冠心宁注射液指纹图谱 图8为不同批号冠心宁注射液指纹图谱。
具体实施例方式实施例1，取丹参IOOOg川芎1200g
冠心宁注射液的制备方法包括如下步骤
将两味原料药加水煎煮三次，第一次I. 5小时，第二次、三次各2小时，合并煎液，滤过，滤液浓缩至相对密度I. 12 I. 28的浸膏，加乙醇至含醇量71%，冷藏，滤过，滤液回收乙醇，再加乙醇至含醇量82%，冷藏，滤过，滤液用39%的氢氧化钠调节PH值至7. I 7. 4，冷藏，滤过，滤液回收乙醇至无醇味，稀释至1000ml,冷藏,滤过,滤液浓缩至350 400ml。用9%的盐酸溶液调节PH值至2. 3 2. 8，冷藏，滤过，滤液以36% 39%的氢氧化钠调PH值至6. 3 6. 8，加热煮沸40分钟，加O. 2%的活性炭，稍冷，滤过，冷藏，加注射用水250ml，加硫酸氢钠O. 3 O. 6g,滤过，滤液加注射用水至1000ml，滤过，灌封，灭菌，即得。实施例2，取丹参1200g川芎IOOOg 冠心宁注射液的制备方法包括如下步骤
将两味原料药加水煎煮三次，第一次2小时，第二次、三次各I小时，合并煎液，滤过，滤液浓缩至相对密度I. 12 I. 28的浸膏，加乙醇至含醇量76%，冷藏，滤过，滤液回收乙醇，在加乙醇至含醇量88%，冷藏，滤过，滤液用36%的氢氧化钠调节PH值至7. I 7. 4，冷藏，滤过，滤液回收乙醇至无醇味，稀释至IOOOml,冷藏,滤过,滤液浓缩至350 400ml。用8. 5%的盐酸溶液调节PH值至2. 3，冷藏，滤过，滤液以39%的氢氧化钠调PH值至6. 8，加热煮沸40分钟，加O. 1%的活性炭，稍冷，滤过，冷藏,加注射用水250ml，加硫酸氢钠O. 3g,滤过，滤液加注射用水至IOOOml，滤过，灌封，灭菌，即得。实施例3，取丹参IlOOg川弯IlOOg 冠心宁注射液的制备方法包括如下步骤
将两味原料药加水煎煮三次，第一次I. 8小时，第二次、三次各I. 5小时，合并煎液，滤过，滤液浓缩至相对密度I. 12 I. 28的浸膏，加乙醇至含醇量73%，冷藏，滤过，滤液回收乙醇，在加乙醇至含醇量84%，冷藏，滤过，滤液用37%的氢氧化钠调节PH值至7. I 7. 4，冷藏，滤过，滤液回收乙醇至无醇味，稀释至1000ml,冷藏,滤过,滤液浓缩至350 400ml。 用8. 7%的盐酸溶液调节PH值至2. 3 2. 8，冷藏，滤过，滤液以38%的氢氧化钠调PH值至
6.3 6. 8，加热煮沸30分钟，加O. 15%的活性炭，稍冷，滤过，冷藏，加注射液水250ml，加硫酸氢钠O. 5g,滤过，滤液加注射用水至IOOOml，滤过，灌封，灭菌，即得。取0812191、0802171、0805251、0807021、0807031、0807201 不同批号冠心宁注射液，依照供试品制备方法，分别精密量取冠心宁注射液O. 8 I. Iml.置于5ml量瓶中，10%的甲醇(O. 2%冰乙酸)稀释至刻度，摇匀，用O. 45 μ m的微孔滤膜过滤，取续滤液，即得，注入高效液相色谱仪，记录图谱。色谱条件与系统适应性试验用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；线性梯度洗脱，乙腈为流动相A，0. 04%磷酸水溶液为流动相B，0min—A:B=4:96;60min—A:B=33:67; 68min—A:B=33:67; 72min—A:B=2:98 ;检测波长 276nm ;柱温25°C 30°C ;流速0. 7ml/min O. 8ml/min。如图8所示意,为不同批号冠心宁注射液的指纹图谱。
权利要求
1.一种冠心宁注射液的指纹图谱检测方法，其特征在于该方法中指纹图谱为供试品指纹图谱与对照指纹图谱的相似度不低于O. 9 ;剔除溶剂峰，校正色谱峰后，相似度不低于O.90 ;指纹图谱应有10个特征峰，以6号峰位参照，相对保留时间I号峰10. 536±0. 04 ；2号峰11. 145±0. 02 ；3 号峰15. 678±0. 02 ；4 号峰17. 071±0· 5 ；5 号峰23. 019±0· 04 ；6号峰 34. 2826±0. 02 ;7 号峰46. 426±0. 08 ;8 号峰50. 879+0. 06 ;9 号峰 53. 936±0. 03 ；10号峰 57. 239±0. 04 如权利要求I所述的冠心宁注射液的指纹图谱检测方法，其特征在于该方法包括如下步骤 用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；线性梯度洗脱，乙腈为流动相A，0. 04%，磷酸水溶液为流动相 B, Omin一A:B=4:96; 60min一A:B=33:67; 68min—A:B=33:67; 72min一A:B=2:98 ；检测波长276nm ;柱温30。。;流速0. 8ml/min, 参照物溶液的制备取经五氧化二磷真空干燥24h的阿魏酸对照品适量，精密称定，力口10%甲醇溶液制成每ml含O. 25mg的溶液，即得， 供试品溶液的制备精密量取冠心宁注射液O. 8 I. Iml.置于5ml量瓶中，10%的甲醇稀释至刻度，摇匀，用O. 45 μ m的微孔滤膜过滤，取续滤液，即得； 测定方法分别精密量取参照物溶液饿供试品溶液各5 μ 1，注入液相色谱仪，记录85min图谱即得。
2.如权利要求I或2所述的冠心宁注射液的指纹图谱检测方法，其特征在于该方法中的冠心宁注射液的原料药为丹参1000 1200g 、川芎1000 1200g。
3.如权利要求2所述的冠心宁注射液的指纹图谱检测方法，其特征在于该方法中冠心宁注射液的制备方法包括如下步骤 将两味原料药加水煎煮三次，第一次I. 5 2小时，第二次、三次各I 2小时，合并煎液，率够，滤液浓缩至相对密度I. 12 I. 28的浸膏，加乙醇至含醇量71% 76%，冷藏，滤过，滤液回收乙醇，再加乙醇至含醇量82% 88%,冷藏，滤过，滤液用36% 39%的氢氧化钠调节PH值至7. I 7. 4,冷藏,滤过,滤液回收乙醇至无醇味,稀释至1000ml,冷藏,滤过，滤液浓缩至350 400ml，用8. 5 9%的盐酸溶液调节PH值至2. 3 2. 8，冷藏，滤过，滤液以36% 39%的氢氧化钠调PH值至6. 3 6. 8，加热煮沸25 40分钟，加O. 1% O. 2%的活性炭，稍冷，滤过，冷藏，加注射用水250ml，加硫酸氢钠O. 3 O. 6g,滤过，滤液加注射用水至IOOOml，滤过，灌封，灭菌，即得。
全文摘要
本发明涉及一种中药注射液制剂的检测方法，特别是一种冠心宁注射液的指纹图谱的检测方法，用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；线性梯度洗脱，乙腈为流动相A，0.04%磷酸水溶液为流动相B，0min—A:B=4:96;60min—A:B=33:67;68min—A:B=33:67;72min—A:B=2:98；检测波长276nm；柱温25℃～30℃；流速0.7ml/min～0.8ml/min。且供试品指纹图谱与质量标准所附的对照指纹图谱的相似度不低于0.9；剔除溶剂峰，校正色谱峰后，相似度不低于0.90。
文档编号G01N30/02GK102866211SQ20121032510
公开日2013年1月9日 申请日期2012年9月5日 优先权日2011年12月31日
发明者刘近荣, 高治华, 赵东洋 申请人:山西振东泰盛制药有限公司