专利名称：一种用于检测ngal胶体金试纸条的制作方法
技术领域：
本实用新型属于临床医学诊断领域，具体涉及一种用于检测中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白(NGAL)胶体金试纸条。
背景技术：
继发于肾小管细胞损伤(包括缺血性损伤或肾毒性损伤)的急性肾功能衰竭(AFR)，尽管在支持治疗法中取得了重大的进展，但是仍然是临床医学和肾病学中普遍而潜在破坏性的难题，该疾病具有持续的死亡率和高发病率的特点。研究表明，中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白(NGAL)作为Iipocalin家族的一个新的成员，是诊断急性肾损伤的重要标志物之一。美国专利2004/0219603描述了中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白(NGAL)作为检测肾小管细胞损伤早期发作的尿生物标记物。近年美国临床化学协会(AACC)年度会议的研究结果发表得知检测尿中中性粒细胞明胶酶相关载脂蛋白可能有助于临床医生检测心脏移植患者环孢霉素诱导的毒性，以及调节环孢霉素剂量以预防其对肾脏造成的不可逆伤害。Kim RW等表明心脏手术后尿及血中的NGAL在术后6小时达到最高水平，且尿NGAL及血NGAL水平与术后急性肾损伤AKI及不良预后相关。目前，检测NGAL的方法主要有免疫吸附剂测定法(ELISA)，中国专利CN101566633涉及胶乳增强免疫比浊法、夹心法ELISA、竞争法ELISA来测定NGAL的水平。然而，该方法对检测设备有一定要求，操作繁琐，检测时间长，不能对急性肾功能衰竭进行快速早期预测，不能用于床边快速诊断。
发明内容为了解决上述现有技术存在的问题，本实用新型提供了一种快速灵敏、定量检测NGAL胶体金试纸条。一方面，该试纸条利用待测抗原与抗体反应在检测线处形成颜色的深浅与样本中的NGAL浓度成正比，结合免疫分析仪检测颜色的深浅实现定量检测；另一方面，利用该试纸条检测NGAL快速得到检测结果，可对急性肾功能衰竭进行快速早期预测，有利于临床应用的推广。为解决该问题，本实用新型采用以下技术方案得以实现一种用于检测NGAL胶体金试纸条，包括塑料底衬、塑料底衬上面的中间部分粘有硝酸纤维素膜、连接于硝酸纤维素膜一端的金标垫、连接于硝酸纤维素膜另一端的吸水垫、连接于所述金标垫的样品垫，硝酸纤维素膜中间部位检测线包被有NGAL抗体，所述的金标垫上涂布有金标记的NGAL单克隆抗体或多克隆抗体。所述硝酸纤维素膜中间部位包被NGAL抗体的检测线与包被兔抗人IgG抗体的控制线平行。所述的检测线包被抗体的是一种针对NGAL抗原的特异性NGAL单克隆抗体。所述的胶体金标记抗体为能够与待测NGAL抗原特异性结合的另一种NGAL单克隆抗体或多克隆抗体。所述金标垫与样品垫的材料为聚酯膜或玻璃纤维膜。所述的胶体金标记抗体与检测线包被抗体具有不同的表位，通过双抗夹心法对中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白进行检测。本实用新型涉及一种用于检测NGAL胶体金试纸条，该试纸条可以解决现阶段主要运用免疫吸附剂测定法(ELISA)对NGAL进行检测，存在对检测设备要求高及检测时间长的难题。通过本试纸条利用待测抗原与抗体反应在检测线处形成颜色的深浅与样本中的NGAL浓度成正比，结合免疫分析仪检测颜色的深浅实现定量检测。利用该试纸条检测NGAL快速得到检测结果，可对急性肾功能衰竭进行快速早期预测，有利于临床应用的推广。
图I为一种用于检测NGAL胶体金试纸条结构示意图。图2为一种用于检测NGAL胶体金试纸条检测阴性模式图。图3为一种用于检测NGAL胶体金试纸条检测阳性模式图。其中，I.塑料底衬；2.硝酸纤维素膜；3.金标垫；4.样品垫；5.吸水垫；6.控制线；7.检测线；8.样品槽；A.层析方向。
具体实施方式
下面具体结合附图和具体实施方式
对本实用新型做详细的说明。如图I所示，一种用于检测NGAL胶体金试纸条，包括塑料底衬I、塑料底衬I上面的中间部分粘有硝酸纤维素膜2、连接于硝酸纤维素膜2 —端的金标垫3、连接于硝酸纤维素膜2另一端的吸水垫5、连接于所述金标垫3的样品垫4。所述的硝酸纤维素膜2中间部位检测线7包被有NGAL抗体，所述的金标垫3上涂布有金标记的NGAL单克隆抗体或多克隆抗体。所述的硝酸纤维素膜2上有一条检测线7和一条控制线6。所述检测线7是将NGAL单克隆抗体使用20mM的PBS (PH7. 2)稀释到2mg/ml的浓度，O. 8ul/cm在硝酸纤维素膜上划线，然后在干燥箱内20°C干燥12小时得到。所述控制线6是将兔抗鼠IgG抗体按4mg/ml的浓度，O. 8ul/cm在硝酸纤维素膜上划线，该线与检测线平行，然后在干燥箱内20°C干燥12小时得到。所述金标垫3的制备将制作金标垫的材料聚酯膜放入缓冲液(50mmol/L的PBS、O. 5% 的酪蛋白、O. 5% 的 PVP、1% 的蔗糖、O. 02% 的 Triton、50mmol/L 的 NaCl)中浸泡 2 4小时，取出后，25°C干燥8h，然后将胶体金一NGAL抗体复合物用喷金仪均匀的铺在经过预处理的金标垫上，喷量最好控制在I. 0ul/cm*3道，25°C干燥4h，密封干燥保存。所述的样品垫4是将样品垫用PBS缓冲液(100mmol/L的PBS、1%的酪蛋白、1%的PVP,1%的蔗糖、O. 1%的Triton、IOOmmoI/L的NaCl)浸泡2 4h，取出后25°C干燥8h备用。将上述样品垫4、吸水纸5、硝酸纤维素膜2、金标垫3粘贴在塑料底衬I上，再用斩切机切成一定宽度的试纸条。使用方法采集样本(尿液、全血、血清、血浆)放入干净的样杯中，将样品点在试纸条样品垫处，显色区位两条红色线，则检测结果为阳性(如图3所示);仅控制区出现红色带时，结果为阴性(如图2所示)；控制区未出现红色线，表明试纸无效。 采集样本(尿液、全血、血清、血浆)放入干净的样杯中，将样品点在试纸条样品垫处，反应5 10分钟后将试纸条放入FIA8000免疫定量分析仪，读取颜色信号，进行定量测定。
权利要求1.一种用于检测NGAL胶体金试纸条，包括塑料底衬(I)、塑料底衬(I)上面的中间部分粘有硝酸纤维素膜(2)、连接于硝酸纤维素膜(2)—端的金标垫(3)、连接于硝酸纤维素膜(2)另一端的吸水垫(5)、连接于所述金标垫(3)的样品垫(4)，其特征在于所述的硝酸纤维素膜(2 )中间部位检测线(7 )包被有NGAL抗体，所述的金标垫(3 )上涂布有金标记的NGAL单克隆抗体或多克隆抗体。
2.根据权利要求I所述一种用于检测NGAL胶体金试纸条，其特征在于所述硝酸纤维素膜(2)中间部位包被NGAL抗体的检测线(7)与包被兔抗人IgG抗体的控制线(6)平行。
专利摘要本实用新型公开了一种用于检测NGAL胶体金试纸条，包括塑料底衬、塑料底衬上面的中间部分粘有硝酸纤维素膜、连接于硝酸纤维素膜一端的金标垫、连接于硝酸纤维素膜另一端的吸水垫、连接于所述金标垫的样品垫，所述的硝酸纤维素膜中间部位检测线包被有NGAL抗体，所述的金标垫上涂布有金标记的NGAL单克隆抗体或多克隆抗体。本实用新型可对急性肾功能衰竭进行早期预测，快速，操作简单，适合床边快速诊断。
文档编号G01N33/577GK202676704SQ20122032358
公开日2013年1月16日 申请日期2012年7月6日 优先权日2012年7月6日
发明者苏恩本, 王勇, 黄力, 陈伟 申请人:南京基蛋生物科技有限公司