肝细胞生长因子的特异性结合物的制作方法
【专利摘要】本发明描述与肝细胞生长因子(HGF)相互作用的特异性结合物。本发明还描述通过给予药物有效量的HGF特异性结合物治疗癌症的方法。本发明描述还描述用HGf特异性结合物检测样品中HGF的量的方法。
【专利说明】肝细胞生长因子的特异性结合物
本申请是申请日为2004年7月16日，申请号为200480026298.8 (PCT / US2004 /018936)，发明名称为“肝细胞生长因子的特异性结合物”的发明专利申请的分案申请。
[0001]本申请要求2003年7月18日提交的美国临时申请号60 / 488,681的权利，对于任何目的其通过引用结合到本文中。
发明领域
[0002]本发明涉及结合肝细胞生长因子(HGF)的特异性结合物。本发明还描述了组合物、所述组合物的生产方法以及治疗各种病症的方法，所述病症例如某些类型的癌症，包括但不限于实体瘤和血液恶性癌症(hematologic malignancies)。
发明背景
[0003]肝细胞生长因子(HGF)已被鉴定为肝细胞的有效促分裂原。HGF还被鉴定为成纤维细胞和平滑肌的分泌性蛋白，其诱导上皮细胞的运动性。HGF在文献中也称为分散因子(SF)。
[0004]HGF是主要由间充质细胞产生的多功能异源二聚体多肽，其充当Met受体酪氨酸激酶(Met)的配体。人Met受体也称为“c-met”。已显示通过Met受体酪氨酸激酶-HGF (Met-HGF)途径的信号转导导致一系列细胞应答，包括但不限于增殖(有丝分裂)、分散(运动性)、通过基质刺激细胞运动(侵袭)和分支形态发生。体内Met-HGF信号转导途径(Met-HGF)在例如神经诱生、肝再生、伤口愈合、血管生成、生长、侵袭、形态分化和正常胚胎发育中起到作用。除这些功能之外，Met-HGF对在人类癌症中也起到作用。已显示异常Met-HGF信号转 导参与肿瘤发生，特别是参与侵袭性和转移性表型的发展。已发现某些病原体如疟疾利用异常Met-HGF信号转导。参见Carrolo等，Nat Med.20039(11):1363-9 (2003年10月12日)，对于任何目的其内容通过引用结合到本文中。
[0005]此外，一些研究小组报告说，HGF在血管生成和在血管生成相关疾病(如增殖性糖尿病性视网膜病)中起到作用。参见例如Grant, D.S.等，Proc.Nat.Acad.Sc1.U.S.A.90(5) 1937-41 (1993) ；Bussolino 等，J.Cell Biol., 119(3):629-641 (1992)；Montesano 等，Cell，67:901-908(1991) ;Canon 等，Br.J.0phthalmol.84(7):732-5(2000)。HGF在凋亡或者说程序性细胞死亡中也可能起到作用。当正常调节机制未能维持增殖和凋亡之间的平衡，从而导致细胞过量积累时，即可产生肿瘤。取决于生物背景，HGF不但可实现增殖，而且可实现凋亡。
[0006]因为HGF参与许多生理过程，在某些情况下，拥有能调节其活性的分子是有益的。例如，在某些情况下，这种分子可用于治疗各种不同类型的癌症。
发明概述
[0007]在某些实施方案中，本发明提供包含至少一个选自⑶Rla、⑶R2a和⑶R3a的互补决定区(CDR)的分离多肽。
其中⑶Rla包含氨基酸序列a bcdefghijklmnop q,其中氨基酸a选自赖氨酸、精氨酸或谷氨酰胺；氨基酸b选自丝氨酸或丙氨酸；氨基酸c是丝氨酸；氨基酸d是谷氨酰胺；氨基酸e选自丝氨酸、甘氨酸或天冬氨酸；氨基酸f选自缬氨酸或异亮氨酸或者不存在；氨基酸g选自亮氨酸或苯丙氨酸或者不存在；氨基酸h选自苯丙氨酸或酪氨酸或者不存在；氨基酸i是丝氨酸或者不存在；氨基酸j是丝氨酸或者不存在；氨基酸k选自天冬酰胺、苏氨酸或者不存在；氨基酸I选自天冬酰胺、异亮氨酸或缬氨酸；氨基酸m选自赖氨酸、精氨酸、天冬酰胺或天冬氨酸；氨基酸n选自天冬酰胺或丝氨酸；氨基酸ο选自酪氨酸、天冬氨酸、色氨酸或天冬酰胺；氨基酸P是亮氨酸；氨基酸q选自丙氨酸、甘氨酸或天冬酰胺；
其中CDR2a包含氨基酸序列r s t u v w x，其中氨基酸r选自色氨酸、丙氨酸、缬氨酸、谷氨酸或甘氨酸；氨基酸s是丙氨酸；氨基酸t是丝氨酸；氨基酸u选自苏氨酸、丝氨酸或天冬氨酸；氨基酸V选自精氨酸或亮氨酸；氨基酸w选自谷氨酸、谷氨酰胺或丙氨酸；氨基酸X选自丝氨酸、天冬酰胺或苏氨酸；
其中CDR3a包含氨基酸序列y z a' h' c' d' e' f' g' h',其中氨基酸y选自谷氨酰胺或亮氨酸；氨基酸z选自谷氨酰胺、天冬酰胺或精氨酸；氨基酸a'选自酪氨酸、组氨酸、丙氨酸或丝氨酸；氨基酸V选自苯丙氨酸、酪氨酸、天冬氨酸、天冬酰胺或异亮氨酸；氨基酸c'选自丝氨酸、甘氨酸或天冬酰胺；氨基酸d'选自脯氨酸、酪氨酸、苏氨酸、苯丙氨酸、天冬氨酸、亮氨酸或色氨酸；氨基酸^是脯氨酸；氨基酸P是脯氨酸或者不存在；氨基酸^是色氨酸、亮氨酸、脯氨酸、酪氨酸或异亮氨酸；氨基酸V是苏氨酸或天冬酰胺；
其中所述多肽与抗体重链联合，能够结合肝细胞生长因子(HGF)。
[0008]在某些实施方案中，本发明提供包含至少一个选自⑶Rib、⑶R2b和⑶R3b的互补决定区(CDR)的分离多肽
其中⑶Rlb包含氨基酸序列a b c d e f g，其中氨基酸a是丝氨酸或者不存在；氨基酸b选自天冬氨酸或甘氨酸或者不存在；氨基酸c选自天冬氨酸、甘氨酸、丝氨酸、缬氨酸、苏氨酸或异亮氨酸；氨基酸d是酪氨酸；氨基酸e选自酪氨酸或甘氨酸；氨基酸f选自异亮氨酸、甲硫氨酸或色氨酸；氨基酸g选自组氨酸、天冬酰胺或丝氨酸；
其中⑶R2b包含氨基酸序列h ijklmnopqrstuvw x,其中氨基酸h选自色氨酸、酪氨酸、缬氨酸、天冬酰胺或谷氨酸；氨基酸i选自异亮氨酸、苯丙氨酸或缬氨酸；氨基酸j选自天冬酰胺、丝氨酸、色氨酸或酪氨酸；氨基酸k选自脯氨酸、丝氨酸、酪氨酸或组氨酸；氨基酸I选自天冬酰胺、丝氨酸或天冬氨酸；氨基酸m选自丝氨酸或甘氨酸；氨基酸η选自甘氨酸或丝氨酸或者不存在；氨基酸ο选自甘氨酸、苏氨酸、天冬氨酸、丝氨酸、异亮氨酸或天冬酰胺；氨基酸P选自苏氨酸、异亮氨酸或赖氨酸；氨基酸q选自天冬酰胺或酪氨酸；氨基酸r选自酪氨酸或组氨酸；氨基酸s选自丙氨酸或天冬酰胺；氨基酸t选自谷氨酰胺、天冬氨酸或脯氨酸；氨基酸u选自赖氨酸或丝氨酸；氨基酸V选自苯丙氨酸、缬氨酸或亮氨酸；氨基酸w选自谷氨酰胺或赖氨酸；氨基酸X选自甘氨酸或丝氨酸；
其中 CDR3b包含氨基酸序列y z b' c' cT e' f' g' h' P k' l m' n' ο'Pi Qi r'，其中氨基酸y选自谷氨酸、天冬氨酸、丝氨酸或甘氨酸或者不存在；氨基酸z选自亮氨酸、谷氨酸、天冬氨酸、组氨酸、脯氨酸或甘氨酸或者不存在；氨基酸Y选自谷氨酸、酪氨酸或亮氨酸或者不存在；氨基酸V选自亮氨酸、天冬酰胺、甘氨酸、组氨酸、酪氨酸或色氨酸或者不存在；氨基酸V选自精氨酸、丝氨酸、谷氨酸、酪氨酸、甘氨酸或苯丙氨酸或者不存在；氨基酸cT是甘氨酸或者不存在；氨基酸V选自色氨酸或酪氨酸或者不存在；氨基酸P是天冬氨酸或者不存在；氨基酸^选自丝氨酸或精氨酸或者不存在；氨基酸V是丝氨酸或者不存在；氨基酸P选自甘氨酸或酪氨酸或者不存在；氨基酸V选自酪氨酸、谷氨酸或天冬氨酸或者不存在；氨基酸V选自酪氨酸、苯丙氨酸或天冬氨酸或者不存在；氨基酸1’选自酪氨酸、天冬氨酸、组氨酸或色氨酸或者不存在；氨基酸V选自酪氨酸、甘氨酸、天冬氨酸、脯氨酸或丝氨酸或者不存在；氨基酸选自甘氨酸、缬氨酸、酪氨酸或天冬氨酸或者不存在；氨基酸V选自亮氨酸、丙氨酸、甘氨酸或酪氨酸或者不存在；氨基酸V选自甲硫氨酸、苯丙氨酸或酪氨酸；氨基酸V是天冬氨酸；氨基酸r'选自缬氨酸、酪氨酸、异亮氨酸或脯氨酸；
其中所述多肽与抗体轻链联合，能够结合HGF。
[0009]在某些实施方案中，本发明提供分离的特异性结合物，其中所述特异性结合物包含:
(i)包含至少一个选自⑶Rla、⑶R2a和⑶R3a的互补决定区(OTR)的第一多肽 其中CDRla包含氨基酸序列a bcdefghijklmnop q,其中氨基酸a选自赖氨酸、精氨酸或谷氨酰胺；氨基酸b选自丝氨酸或丙氨酸；氨基酸c是丝氨酸；氨基酸d是谷氨酰胺；氨基酸e选自丝氨酸、甘氨酸或天冬氨酸；氨基酸f选自缬氨酸或异亮氨酸或者不存在；氨基酸g选自亮氨酸或苯丙氨酸或者不存在；氨基酸h选自苯丙氨酸或酪氨酸或者不存在；氨基酸i是丝氨酸或者不存在；氨基酸j是丝氨酸或者不存在；氨基酸k选自天冬酰胺、苏氨酸或者不存在；氨基酸I选自天冬酰胺、异亮氨酸或缬氨酸；氨基酸m选自赖氨酸、精氨酸、天冬酰胺或天冬氨酸；氨基酸η选自天冬酰胺或丝氨酸；氨基酸ο选自酪氨酸、天冬氨酸、色氨酸或天冬酰胺；氨基酸P是亮氨酸；氨基酸q选自丙氨酸、甘氨酸或天冬酰胺；
其中⑶R2a包含氨基酸序列r s t u v w x，其中氨基酸r选自色氨酸、丙氨酸、缬氨酸、谷氨酸或甘氨酸；氨基酸s是丙氨酸；氨基酸t是丝氨酸；氨基酸u选自苏氨酸、丝氨酸或天冬氨酸；氨基酸V选自精氨酸或亮氨酸；氨基酸w选自谷氨酸、谷氨酰胺或丙氨酸；氨基酸X选自丝氨酸、天冬酰胺或苏氨酸；
其中CDR3a包含氨基酸序列y z a' h' c' d' e' f' g' h',其中氨基酸y选自谷氨酰胺或亮氨酸；氨基酸z选自谷氨酰胺、天冬酰胺或精氨酸；氨基酸a'选自酪氨酸、组氨酸、丙氨酸或丝氨酸；氨基酸W选自苯丙氨酸、酪氨酸、天冬氨酸、天冬酰胺或异亮氨酸；氨基酸c'选自丝氨酸、甘氨酸或天冬酰胺；氨基酸d'选自脯氨酸、酪氨酸、苏氨酸、苯丙氨酸、天冬氨酸、亮氨酸或色氨酸；氨基酸^是脯氨酸；氨基酸P是脯氨酸或者不存在；氨基酸^是色氨酸、亮氨酸、脯氨酸、酪氨酸或异亮氨酸；氨基酸V是苏氨酸或天冬酰胺；
其中所述第一多肽与抗体重链联合，能够结合肝细胞生长因子(HGF)；
(ii)包含至少一个选自⑶Rib、⑶R2b或⑶R3b的互补决定区(OTR)的第二多肽
其中⑶Rlb包含氨基酸序列a b c d e f g，其中氨基酸a是丝氨酸或者不存在；氨基
酸b选自天冬氨酸或甘氨酸或者不存在；氨基酸c选自天冬氨酸、甘氨酸、丝氨酸、缬氨酸、苏氨酸或异亮氨酸；氨基酸d是酪氨酸；氨基酸e选自酪氨酸或甘氨酸；氨基酸f选自异亮氨酸、甲硫氨酸或色氨酸；氨基酸g选自组氨酸、天冬酰胺或丝氨酸；其中⑶R2b包含氨基酸序列h ijklmnopqrstuvw x,其中氨基酸h选自色氨酸、酪氨酸、缬氨酸、天冬酰胺或谷氨酸；氨基酸i选自异亮氨酸、苯丙氨酸或缬氨酸；氨基酸j选自天冬酰胺、丝氨酸、色氨酸或酪氨酸；氨基酸k选自脯氨酸、丝氨酸、酪氨酸或组氨酸；氨基酸I选自天冬酰胺、丝氨酸或天冬氨酸；氨基酸m选自丝氨酸或甘氨酸；氨基酸η选自甘氨酸或丝氨酸或者不存在；氨基酸ο选自甘氨酸、苏氨酸、天冬氨酸、丝氨酸、异亮氨酸或天冬酰胺；氨基酸P选自苏氨酸、异亮氨酸或赖氨酸；氨基酸q选自天冬酰胺或酪氨酸；氨基酸r选自酪氨酸或组氨酸；氨基酸s选自丙氨酸或天冬酰胺；氨基酸t选自谷氨酰胺、天冬氨酸或脯氨酸；氨基酸u选自赖氨酸或丝氨酸；氨基酸V选自苯丙氨酸、缬氨酸或亮氨酸；氨基酸w选自谷氨酰胺或赖氨酸；氨基酸X选自甘氨酸或丝氨酸；
其中 CDR3b包含氨基酸序列 y z a' b' c' c’ e' f' g' h' P k' l' m' n'o'P’ Q’ r'，其中氨基酸y选自谷氨酸、天冬氨酸、丝氨酸或甘氨酸或者不存在；氨基酸z选自亮氨酸、谷氨酸、天冬氨酸、组氨酸、脯氨酸或甘氨酸或者不存在；氨基酸V选自谷氨酸、酪氨酸或亮氨酸或者不存在；氨基酸V选自亮氨酸、天冬酰胺、甘氨酸、组氨酸、酪氨酸或色氨酸或者不存在；氨基酸选自精氨酸、丝氨酸、谷氨酸、酪氨酸、甘氨酸或苯丙氨酸或者不存在；氨基酸cT是甘氨酸或者不存在；氨基酸V选自色氨酸或酪氨酸或者不存在；氨基酸P是天冬氨酸或者不存在；氨基酸^选自丝氨酸或精氨酸或者不存在；氨基酸V是丝氨酸或者不存在；氨基酸P选自甘氨酸或酪氨酸或者不存在；氨基酸V选自酪氨酸、谷氨酸或天冬氨酸或者不存在；氨基酸V选自酪氨酸、苯丙氨酸或天冬氨酸或者不存在；氨基酸P选自酪氨酸、天冬氨酸、组氨酸或色氨酸或者不存在；氨基酸V选自酪氨酸、甘氨酸、天冬氨酸、脯氨酸或丝氨酸或者不存在；氨基酸V选自甘氨酸、缬氨酸、酪氨酸或天冬氨酸或者不存在；氨基酸V选自亮氨酸、丙氨酸、甘氨酸或酪氨酸或者不存在；氨基酸V选自甲硫氨酸、苯丙氨酸或酪氨酸；氨基酸V是天冬氨酸；氨基酸r'选自缬氨酸、酪氨酸、异亮氨酸或脯氨酸；
其中所述第二多肽与抗体轻链联合，能够结合HGF。
[0010]在某些实施方案中，本发明提供包含至少一种选自SEQ ID NO:24，26，28，30，32，34，36，38，40和42的氨基酸序列的分离多肽。
[0011]在某些实施方案中，本发明提供包含至少一种选自SEQ ID NO =25,27,29,31,33,35，37，39，41和43的氨基酸序列的分离多肽。
[0012]在某些实施方案中，本发明提供包含至少一种选自SEQ ID NO:1，3，5，7，9，11，13，15,17和19的核苷酸序列的分尚核酸分子。
[0013]在某些实施方案中，本发明提供包含至少一种选自SEQ ID NO:2,4,6,8,10,12,14,16,18和20的核苷酸序列的分尚核酸分子。
[0014]在某些实施方案中，本发明提供编码包含至少一个选自CDRla、CDR2a和CDR3a的互补决定区(CDR)的多肽的分离核酸分子
其中⑶Rla包含氨基酸序列a bcdefghijklmnop q,其中氨基酸a选自赖氨酸、精氨酸或谷氨酰胺；氨基酸b选自丝氨酸或丙氨酸；氨基酸c是丝氨酸；氨基酸d是谷氨酰胺；氨基酸e选自丝氨酸、甘氨酸或天冬氨酸；氨基酸f选自缬氨酸或异亮氨酸或者不存在；氨基酸g选自亮氨酸或苯丙氨酸或者不存在；氨基酸h选自苯丙氨酸或酪氨酸或者不存在；氨基酸i是丝氨酸或者不存在；氨基酸j是丝氨酸或者不存在；氨基酸k选自天冬酰胺、苏氨酸或者不存在；氨基酸I选自天冬酰胺、异亮氨酸或缬氨酸；氨基酸m选自赖氨酸、精氨酸、天冬酰胺或天冬氨酸；氨基酸η选自天冬酰胺或丝氨酸；氨基酸ο选自酪氨酸、天冬氨酸、色氨酸或天冬酰胺；氨基酸P是亮氨酸；氨基酸q选自丙氨酸、甘氨酸或天冬酰胺；
其中⑶R2a包含氨基酸序列r s t u v w x，其中氨基酸r选自色氨酸、丙氨酸、缬氨酸、谷氨酸或甘氨酸；氨基酸s是丙氨酸；氨基酸t是丝氨酸、氨基酸u选自苏氨酸、丝氨酸或天冬氨酸；氨基酸V选自精氨酸或亮氨酸；氨基酸w选自谷氨酸、谷氨酰胺或丙氨酸；氨基酸X选自丝氨酸、天冬酰胺或苏氨酸；
其中CDR3a包含氨基酸序列y z a' h' c' d' e' f' g' h',其中氨基酸y选自谷氨酰胺或亮氨酸；氨基酸z选自谷氨酰胺、天冬酰胺或精氨酸；氨基酸a'选自酪氨酸、组氨酸、丙氨酸或丝氨酸；氨基酸V选自苯丙氨酸、酪氨酸、天冬氨酸、天冬酰胺或异亮氨酸；氨基酸c'选自丝氨酸、甘氨酸或天冬酰胺；氨基酸d'选自脯氨酸、酪氨酸、苏氨酸、苯丙氨酸、天冬氨酸、亮氨酸或色氨酸；氨基酸V是脯氨酸；氨基酸P是脯氨酸或者不存在；氨基酸^是色氨酸、亮氨酸、脯氨酸、酪氨酸或异亮氨酸；氨基酸V是苏氨酸或天冬酰胺；
其中所述多肽与抗体重链联合，能够结合肝细胞生长因子(HGF)。
[0015]在某些实施方案中，本发明提供编码包含至少一个选自⑶Rib、⑶R2b和⑶R3b的互补决定区(CDR)的多肽的分离核酸分子
其中⑶Rlb包含氨基酸序列a b c d e f g，其中氨基酸a是丝氨酸或者不存在；氨基酸b选自天冬氨酸或甘氨酸或者不存在；氨基酸c选自天冬氨酸、甘氨酸、丝氨酸、缬氨酸、苏氨酸或异亮氨酸；氨基酸d是酪氨酸；氨基酸e选自酪氨酸或甘氨酸；氨基酸f选自异亮氨酸、甲硫氨酸或色氨酸；氨基酸g选自组氨酸、天冬酰胺或丝氨酸；
其中⑶R2b包含氨基酸序列h ijklmnopqrstuvw x,其中氨基酸h选自色氨酸、酪氨酸、缬氨酸、天冬酰胺或谷氨酸；氨基酸i选自异亮氨酸、苯丙氨酸或缬氨酸；氨基酸j选自天冬酰胺、丝氨酸、色氨酸或酪氨酸；氨基酸k选自脯氨酸、丝氨酸、酪氨酸或组氨酸；氨基酸I选自天冬酰胺、丝氨酸或天冬氨酸；氨基酸m选自丝氨酸或甘氨酸；氨基酸η选自甘氨酸或丝氨酸或者不存在；氨基酸ο选自甘氨酸、苏氨酸、天冬氨酸、丝氨酸、异亮氨酸或天冬酰胺；氨基酸P选自苏氨酸、异亮氨酸或赖氨酸；氨基酸q选自天冬酰胺或酪氨酸；氨基酸r选自酪氨酸或组氨酸；氨基酸s选自丙氨酸或天冬酰胺；氨基酸t选自谷氨酰胺、天冬氨酸或脯氨酸；氨基酸u选自赖氨酸或丝氨酸；氨基酸V选自苯丙氨酸、缬氨酸或亮氨酸；氨基酸w选自谷氨酰胺或赖氨酸；氨基酸X选自甘氨酸或丝氨酸；
其中 CDR3b包含氨基酸序列 y z a, b' c, d' e' f' g' h' P k' i' m' n' ο'Pi Qi r'，其中氨基酸y选自谷氨酸、天冬氨酸、丝氨酸或甘氨酸或者不存在；氨基酸z选自亮氨酸、谷氨酸、天冬氨酸、组氨酸、脯氨酸或甘氨酸或者不存在；氨基酸Y选自谷氨酸、酪氨酸或亮氨酸或者不存在；氨基酸V选自亮氨酸、天冬酰胺、甘氨酸、组氨酸、酪氨酸或色氨酸或者不存在；氨基酸V选自精氨酸、丝氨酸、谷氨酸、酪氨酸、甘氨酸或苯丙氨酸或者不存在；氨基酸cT是甘氨酸或者不存在；氨基酸V选自色氨酸或酪氨酸或者不存在；氨基酸P是天冬氨酸或者不存在；氨基酸^选自丝氨酸或精氨酸或者不存在；氨基酸V是丝氨酸或者不存在；氨基酸^选自甘氨酸或酪氨酸或者不存在；氨基酸V选自酪氨酸、谷氨酸或天冬氨酸或者不存在；氨基酸V选自酪氨酸、苯丙氨酸或天冬氨酸或者不存在；氨基酸选自酪氨酸、天冬氨酸、组氨酸或色氨酸或者不存在；氨基酸V选自酪氨酸、甘氨酸、天冬氨酸、脯氨酸或丝氨酸或者不存在；氨基酸选自甘氨酸、缬氨酸、酪氨酸或天冬氨酸或者不存在；氨基酸V选自亮氨酸、丙氨酸、甘氨酸或酪氨酸或者不存在；氨基酸V选自甲硫氨酸、苯丙氨酸或酪氨酸；氨基酸V是天冬氨酸；氨基酸r'选自缬氨酸、酪氨酸、异亮氨酸或脯氨酸；
其中所述多肽与抗体轻链联合，能够结合HGF。
[0016]在某些实施方案中，本发明提供产生选自1.24.1、1.29.1、1.60.1、1.61.3、
1.74.3、1.75.1,2.4.4,2.12.1,2.40.1 和 3.10.1 的抗体的分离细胞系。
[0017]在某些实施方案中，本发明提供抑制HGF结合Met的方法，所述方法包括给予HGF特异性结合物。
[0018]在某些实施方案中，本发明提供包含至少一种选自SEQ ID NO:164和165的氨基酸序列的多肽。
[0019]在某些实施方案中，本发明提供基本由至少一种选自SEQ ID NO:164和165的氨基酸序列组成的多肽。
[0020]在某些实施方案中，本发明提供能够结合至少一种选自SEQ ID NO:164和165的氨基酸序列的特异性结合物。
[0021]在某些实施方案中，本发明提供能够结合至少一种选自SEQ ID NO:164和165的氨基酸序列的抗体或抗原结合域。
[0022]在某些实施方案中，本发明提供获得能够结合肝细胞生长因子(HGF)的抗体的方法，所述方法包括将至少一种选自SEQ ID NO:164和165的多肽给予动物和从动物获得能够结合HGF的抗体。
[0023]在某些实施方案中，本发明提供通过给予包含至少一种选自SEQ ID NO:164和165的氨基酸序列的多肽，来降低或防止特异性结合物结合肝细胞生长因子(HGF)的方法。
[0024]在某些实施方案中，本发明提供通过给予由至少一种选自SEQ ID NO:164和165的氨基酸序列组成的多肽，来降低或防止特异性结合物结合肝细胞生长因子(HGF)的方法。
[0025]由本文提供的公开内容，本发明的其他实施方案将显而易见。
本发明还涉及以下实施方案:
1.一种分离的多肽，所述多肽包含至少一个选自⑶RlaXDR2a和⑶R3a的互补决定区(CDR)
其中⑶Rla包含氨基酸序列a bcdefghijklmnop q,其中氨基酸a选自赖氨酸、精氨酸或谷氨酰胺；氨基酸b选自丝氨酸或丙氨酸；氨基酸c是丝氨酸；氨基酸d是谷氨酰胺；氨基酸e选自丝氨酸、甘氨酸或天冬氨酸；氨基酸f选自缬氨酸或异亮氨酸或者不存在；氨基酸g选自亮氨酸或苯丙氨酸或者不存在；氨基酸h选自苯丙氨酸或酪氨酸或者不存在；氨基酸 i是丝氨酸或者不存在；氨基酸j是丝氨酸或者不存在；氨基酸k选自天冬酰胺、苏氨酸或者不存在；氨基酸I选自天冬酰胺、异亮氨酸或缬氨酸；氨基酸m选自赖氨酸、精氨酸、天冬酰胺或天冬氨酸；氨基酸η选自天冬酰胺或丝氨酸；氨基酸ο选自酪氨酸、天冬氨酸、色氨酸或天冬酰胺；氨基酸P是亮氨酸；氨基酸q选自丙氨酸、甘氨酸或天冬酰胺；
其中⑶R2a包含氨基酸序列r stuvw X，其中氨基酸r选自色氨酸、丙氨酸、缬氨酸、谷氨酸或甘氨酸；氨基酸s是丙氨酸；氨基酸t是丝氨酸；氨基酸u选自苏氨酸、丝氨酸或天冬氨酸；氨基酸V选自精氨酸或亮氨酸；氨基酸w选自谷氨酸、谷氨酰胺或丙氨酸；氨基酸X选自丝氨酸、天冬酰胺或苏氨酸；
其中CDR3a包含氨基酸序列y z a' h' c' d' e' f' g' h',其中氨基酸y选自谷氨酰胺或亮氨酸；氨基酸z选自谷氨酰胺、天冬酰胺或精氨酸；氨基酸a'选自酪氨酸、组氨酸、丙氨酸或丝氨酸；氨基酸W选自苯丙氨酸、酪氨酸、天冬氨酸、天冬酰胺或异亮氨酸；氨基酸c'选自丝氨酸、甘氨酸或天冬酰胺；氨基酸d'选自脯氨酸、酪氨酸、苏氨酸、苯丙氨酸、天冬氨酸、亮氨酸或色氨酸；氨基酸^是脯氨酸；氨基酸P是脯氨酸或者不存在；氨基酸^是色氨酸、亮氨酸、脯氨酸、酪氨酸或异亮氨酸；氨基酸V是苏氨酸或天冬酰胺；
其中所述多肽与抗体重链联合，能够结合肝细胞生长因子(HGF)。
2.实施方案I的多肽，所述多肽包含至少一种选自SEQID NO:24，26，28，30，32，34，36，38，40和42的氨基酸序列。
3.实施方案I的多肽，所述多肽包含至少一种选自SEQID NO =60,61,62,63,64,65,66,67,68和69的氨基酸序列。
4.实施方案I的多肽，所述多肽包含至少一种选自SEQID NO:70,71,72,73,74,75,76，77，78和79的氨基酸序列。
5.实施方案I的多肽，所述多肽包含至少一种选自SEQID NO =80,81,82,83,84,85,86，87，88和89的氣基酸序列。
6.实施方案1-5中任一项的多肽，其中所述多肽是特异性结合物。
7.实施方案1-5中任一项的多肽，其中所述多肽是抗体。
8.一种分离的多肽，所述多肽包含至少一个选自⑶RlbXDR2b和⑶R3b的互补决定区(CDR)
其中⑶Rlb包含氨基酸序列ab cdef g，其中氨基酸a是丝氨酸或者不存在；氨基酸b选自天冬氨酸或甘氨酸或者不存在；氨基酸c选自天冬氨酸、甘氨酸、丝氨酸、缬氨酸、苏氨酸或异亮氨酸；氨基酸d是酪氨酸；氨基酸e选自酪氨酸或甘氨酸；氨基酸f选自异亮氨酸、甲硫氨酸或色氨酸；氨基酸g选自组氨酸、天冬酰胺或丝氨酸；
其中⑶R2b包含氨基酸序列h ijklmnopqrstuvw x,其中氨基酸h选自色氨酸、酪氨酸、缬氨酸、天冬酰胺或谷氨酸；氨基酸i选自异亮氨酸、苯丙氨酸或缬氨酸；氨基酸j选自天冬酰胺、丝氨酸、色氨酸或酪氨酸；氨基酸k选自脯氨酸、丝氨酸、酪氨酸或组氨酸；氨基酸I选自天冬酰胺、丝氨酸或天冬氨酸；氨基酸m选自丝氨酸或甘氨酸；氨基酸η选自甘氨酸或丝氨酸或者不存在；氨基酸ο选自甘氨酸、苏氨酸、天冬氨酸、丝氨酸、异亮氨酸或天冬酰胺；氨基酸P选自苏氨酸、异亮氨酸或赖氨酸；氨基酸q选自天冬酰胺或酪氨酸；氨基酸r选自酪氨酸或组氨酸；氨基酸s选自丙氨酸或天冬酰胺；氨基酸t选自谷氨酰胺、天冬氨酸或脯氨酸；氨基酸u选自赖氨酸或丝氨酸；氨基酸V选自苯丙氨酸、缬氨酸或亮氨酸；氨基酸w选自谷氨酰胺或赖氨酸；氨基酸X选自甘氨酸或丝氨酸；
其中CDR3b包含氨基酸序列y z a' b' c, d' e' f' g' h' P k' I' m' n' ο'Pi Qi r1，其中氨基酸y选自谷氨酸、天冬氨酸、丝氨酸或甘氨酸或者不存在；氨基酸z选自亮氨酸、谷氨酸、天冬氨酸、组氨酸、脯氨酸或甘氨酸或者不存在；氨基酸V选自谷氨酸、酪氨酸或亮氨酸或者不存在；氨基酸V选自亮氨酸、天冬酰胺、甘氨酸、组氨酸、酪氨酸或色氨酸或者不存在；氨基酸选自精氨酸、丝氨酸、谷氨酸、酪氨酸、甘氨酸或苯丙氨酸或者不存在；氨基酸cT是甘氨酸或者不存在；氨基酸V选自色氨酸或酪氨酸或者不存在；氨基酸P是天冬氨酸或者不存在；氨基酸^选自丝氨酸或精氨酸或者不存在；氨基酸V是丝氨酸或者不存在；氨基酸P选自甘氨酸或酪氨酸或者不存在；氨基酸V选自酪氨酸、谷氨酸或天冬氨酸或者不存在；氨基酸V选自酪氨酸、苯丙氨酸或天冬氨酸或者不存在；氨基酸P选自酪氨酸、天冬氨酸、组氨酸或色氨酸或者不存在；氨基酸V选自酪氨酸、甘氨酸、天冬氨酸、脯氨酸或丝氨酸或者不存在；氨基酸V选自甘氨酸、缬氨酸、酪氨酸或天冬氨酸或者不存在；氨基酸V选自亮氨酸、丙氨酸、甘氨酸或酪氨酸或者不存在；氨基酸V选自甲硫氨酸、苯丙氨酸或酪氨酸；氨基酸V是天冬氨酸；氨基酸r'选自缬氨酸、酪氨酸、异亮氨酸或脯氨酸；
其中所述多肽与抗体轻链联合，能够结合HGF。
9.实施方案8的多肽，所述多肽包含至少一种选自SEQID NO =25,27,29,31,33,35,37，39，41和43的氨基酸序列。
10.实施方案8的多肽，所述多肽包含至少一种选自SEQID NO =90,91,92,93,94,95,96，97，98和99的氨基酸序列。
11.实施方案8的多肽，所述多肽包含至少一种选自SEQID NO:100,101,102,103,104，105，106，107，108 和 109 的氨基酸序列。
12.实施方案8的多肽，所述多肽包含至少一种选自SEQID N0:110,111,112,113,114，115，116，117，118 和 119 的氨基酸序列。` 13.实施方案8-12中任一项的多肽，其中所述多肽是特异性结合物。
14.实施方案8-12中任一项的多肽，其中所述多肽是抗体。
15.一种分离的特异性结合物，其中所述特异性结合物包含:
(i)包含至少一个选自⑶Rla、⑶R2a和⑶R3a的互补决定区(OTR)的第一多肽
其中⑶Rla包含氨基酸序列a bcdefghijklmnop q,其中氨基酸a选自赖氨酸、精氨酸或谷氨酰胺；氨基酸b选自丝氨酸或丙氨酸；氨基酸c是丝氨酸、氨基酸d是谷氨酰胺；氨基酸e选自丝氨酸、甘氨酸或天冬氨酸；氨基酸f选自缬氨酸或异亮氨酸或者不存在；氨基酸g选自亮氨酸或苯丙氨酸或者不存在；氨基酸h选自苯丙氨酸或酪氨酸或者不存在；氨基酸i是丝氨酸或者不存在；氨基酸j是丝氨酸或者不存在；氨基酸k选自天冬酰胺、苏氨酸或者不存在；氨基酸I选自天冬酰胺、异亮氨酸或缬氨酸；氨基酸m选自赖氨酸、精氨酸、天冬酰胺或天冬氨酸；氨基酸η选自天冬酰胺或丝氨酸；氨基酸ο选自酪氨酸、天冬氨酸、色氨酸或天冬酰胺；氨基酸P是亮氨酸；氨基酸q选自丙氨酸、甘氨酸或天冬酰胺；
其中⑶R2a包含氨基酸序列r stuvw x，其中氨基酸r选自色氨酸、丙氨酸、缬氨酸、谷氨酸或甘氨酸；氨基酸s是丙氨酸；氨基酸t是丝氨酸；氨基酸u选自苏氨酸、丝氨酸或天冬氨酸；氨基酸V选自精氨酸或亮氨酸；氨基酸w选自谷氨酸、谷氨酰胺或丙氨酸；氨基酸X选自丝氨酸、天冬酰胺或苏氨酸；其中CDR3a包含氨基酸序列y z a' b' c' d' e1 f' g' h',其中氨基酸y选自谷氨酰胺或亮氨酸；氨基酸z选自谷氨酰胺、天冬酰胺或精氨酸；氨基酸a'选自酪氨酸、组氨酸、丙氨酸或丝氨酸；氨基酸V选自苯丙氨酸、酪氨酸、天冬氨酸、天冬酰胺或异亮氨酸；氨基酸c'选自丝氨酸、甘氨酸或天冬酰胺；氨基酸d'选自脯氨酸、酪氨酸、苏氨酸、苯丙氨酸、天冬氨酸、亮氨酸或色氨酸；氨基酸^是脯氨酸；氨基酸P是脯氨酸或者不存在；氨基酸^是色氨酸、亮氨酸、脯氨酸、酪氨酸或异亮氨酸；氨基酸V是苏氨酸或天冬酰胺；
其中所述第一多肽与抗体重链联合，能够结合肝细胞生长因子(HGF)；
(ii)包含至少一个选自⑶Rib、⑶R2b或⑶R3b的互补决定区(OTR)的第二多肽其中⑶Rlb包含氨基酸序列a b c d e f g，其中氨基酸a是丝氨酸或者不存在；氨基酸b选自天冬氨酸或甘氨酸或者不存在；氨基酸c选自天冬氨酸、甘氨酸、丝氨酸、缬氨酸、苏氨酸或异亮氨酸；氨基酸d是酪氨酸；氨基酸e选自酪氨酸或甘氨酸；氨基酸f选自异亮氨酸、甲硫氨酸或色氨酸；氨基酸g选自组氨酸、天冬酰胺或丝氨酸；
其中⑶R2b包含氨基酸序列h ijklmnopqrstuvw x,其中氨基酸h选自色氨酸、酪氨酸、缬氨酸、天冬酰胺或谷氨酸；氨基酸i选自异亮氨酸、苯丙氨酸或缬氨酸；氨基酸j选自天冬酰胺、丝氨酸、色氨酸或酪氨酸；氨基酸k选自脯氨酸、丝氨酸、酪氨酸或组氨酸；氨基酸I选自天冬酰胺、丝氨酸或天冬氨酸；氨基酸m选自丝氨酸或甘氨酸；氨基酸η选自甘氨酸或丝氨酸或者不存在；氨基酸ο选自甘氨酸、苏氨酸、天冬氨酸、丝氨酸、异亮氨酸或天冬酰胺；氨基酸P选自苏氨酸、异亮氨酸或赖氨酸；氨基酸q选自天冬酰胺或酪氨酸；氨基酸r选自酪氨酸或组氨酸；氨基酸s选自丙氨酸或天冬酰胺；氨基酸t选自谷氨酰胺、天冬氨酸或脯氨酸；氨基酸u选自赖氨酸或丝氨酸；氨基酸V选自苯丙氨酸、缬氨酸或亮氨酸；氨基酸w选自谷氨 酰胺或赖氨酸；氨基酸X选自甘氨酸或丝氨酸；
其中 CDR3b包含氨基酸序列y z b' c' cT e' f' g' h' P k' m' n' ο'Pi Qi r'，其中氨基酸y选自谷氨酸、天冬氨酸、丝氨酸或甘氨酸或者不存在；氨基酸z选自亮氨酸、谷氨酸、天冬氨酸、组氨酸、脯氨酸或甘氨酸或者不存在；氨基酸Y选自谷氨酸、酪氨酸或亮氨酸或者不存在；氨基酸V选自亮氨酸、天冬酰胺、甘氨酸、组氨酸、酪氨酸或色氨酸或者不存在；氨基酸V选自精氨酸、丝氨酸、谷氨酸、酪氨酸、甘氨酸或苯丙氨酸或者不存在；氨基酸cT是甘氨酸或者不存在；氨基酸V选自色氨酸或酪氨酸或者不存在；氨基酸P是天冬氨酸或者不存在；氨基酸^选自丝氨酸或精氨酸或者不存在；氨基酸V是丝氨酸或者不存在；氨基酸P选自甘氨酸或酪氨酸或者不存在；氨基酸V选自酪氨酸、谷氨酸或天冬氨酸或者不存在；氨基酸V选自酪氨酸、苯丙氨酸或天冬氨酸或者不存在；氨基酸选自酪氨酸、天冬氨酸、组氨酸或色氨酸或者不存在；氨基酸V选自酪氨酸、甘氨酸、天冬氨酸、脯氨酸或丝氨酸或者不存在；氨基酸V选自甘氨酸、缬氨酸、酪氨酸或天冬氨酸或者不存在；氨基酸V选自亮氨酸、丙氨酸、甘氨酸或酪氨酸或者不存在；氨基酸V选自甲硫氨酸、苯丙氨酸或酪氨酸；氨基酸V是天冬氨酸；氨基酸r'选自缬氨酸、酪氨酸、异亮氨酸或脯氨酸；
其中所述第二多肽与抗体轻链联合，能够结合HGF。
16.实施方案15的特异性结合物，所述结合物包含至少一种选自SEQ ID NO =24,26,28，30，32，34，36，38，40 和 42 的氨基酸序列。17.实施方案15的特异性结合物，所述结合物包含至少一种选自SEQID NO =25,27,29,31,33,35,37,39,41 和 43 的氨基酸序列。
18.实施方案15的特异性结合物，所述结合物包含SEQID NO:24和25的氨基酸序列。
19.实施方案15的特异性结合物，所述结合物包含SEQID NO:26和27的氨基酸序列。
20.实施方案15的特异性结合物，所述结合物包含SEQID NO:28和29的氨基酸序列。
21.实施方案15的特异性结合物，所述结合物包含SEQID NO:30和31的氨基酸序列。
22.实施方案15的特异性结合物，所述结合物包含SEQID NO:32和33的氨基酸序列。
23.实施方案15的特异性结合物，所述结合物包含SEQID NO:34和35的氨基酸序列。
24.实施方案15的特异性结合物，所述结合物包含SEQID NO:36和37的氨基酸序列。
25.实施方案15的特异性结合物，所述结合物包含SEQID NO:38和39的氨基酸序列。
26.实施方案15的特异性结合物，所述结合物包含SEQID NO:40和41的氨基酸序列。
27.实施方案15的特异性结合物，所述结合物包含SEQID NO:42和43的氨基酸序列。
28.实施方案15的特异性结合物，所述结合物包含至少一种选自SEQID NO =60,61,62,63，64，65，66，67,68 和 69 的氛基酸序列。
29.实施方案15的特异性结合物，所述结合物包含至少一种选自SEQID NO =70,71,72，73，74，75，76，77，78 和 79 的氨基酸序列。
30.实施方案15的特异性结合物，所述结合物包含至少一种选自SEQID NO =80,81,82，83，84，85，86，87，88 和 89 的氨基酸序列。
31.实施方案15的特异性结合物，所述结合物包含至少一种选自SEQID NO =90,91,92，93，94，95，96，97，98 和 99 的氨基酸序列。
32.实施方案15的特异性结合物，所述结合物包含至少一种选自SEQID NO =100,101,102，103，104，105，106，107，108 和 109 的氨基酸序列。
33.实施方案15的特异性结合物，所述结合物包含至少一种选自SEQID NO:110,111,112，113，114，115，116，117，118 和 119 的氨基酸序列。
34.实施方案15的特异性结合物，所述结合物包含
包含第一可变区的重链，所述第一可变区包含选自SEQ ID NO:25，27，29，31，33，35，37，39，41和43的氨基酸序列；
包含第二可变区的轻链，所述第二可变区包含选自SEQ ID NO:24，26，28，30，32，34，36，38，40 和42的氨基酸序列。35.实施方案34的特异性结合物，其中所述特异性结合物具有至少一种选自以下的性质:a)与至少一种选自 1.24.1,1.29.1,1.60.1,1.61.3,1.74.3,1.75.1,2.4.4,2.12.1、2.40.1和3.10.1的抗体竞争与HGF的结合；b)与至少一种选自1.24.1,1.29.1,1.60.K
1.61.3,1.74.3,1.75.1,2.4.4,2.12.1,2.40.1 和 3.10.1 的抗体结合相同的 HGF 表位；和 c)与至少一种选自 1.24.1,1.29.1,1.60.1,1.61.3,1.74.3,1.75.1,2.4.4,2.12.1、
2.40.1和3.10.1的抗体结合相同的抗原。
36.实施方案15的特异性结合物，所述结合物包含
包含第一可变区的重链，所述第一可变区包含的氨基酸序列与选自SEQ ID NO:25,27,29，31，33，35，37，39，41和43的氨基酸序列有至少90%、95%或99%的一致性；
包含第二可变区的轻链，所述第二可变区包含的氨基酸序列与选自SEQ ID NO:24,26,28，30，32，34，36，38，40和42的氨基酸序列有至少90%、95%或99%的一致性。 37.实施方案36的特异性结合物，其中所述特异性结合物具有至少一种选自以下的性质:a)与至少一种选自 1.24.1,1.29.1,1.60.1,1.61.3,1.74.3,1.75.1,2.4.4,2.12.1、
2.40.1和3.10.1的抗体竞争与HGF的结合；b)与至少一种选自1.24.1,1.29.1,1.60.1、
1.61.3,1.74.3,1.75.1,2.4.4,2.12.1,2.40.1 和 3.10.1 的抗体结合相同的 HGF 表位；和 c)与至少一种选自 1.24.1,1.29.1,1.60.1、1.61.3、1.74.3、1.75.1,2.4.4,2.12.1、
2.40.1和3.10.1的抗体结合相同的抗原。
38.实施方案15-37中任一项的特异性结合物，其中所述特异性结合物是抗体。
39.实施方案38的抗体，其中重链和轻链通过连接基团连接。
40.实施方案38的抗体,所述抗体为单Fv抗体。
41.实施方案38的抗体，所述抗体为免疫功能性免疫球蛋白片段。
42.实施方案38的抗体，所述抗体为Fab抗体。
43.实施方案38的抗体，所述抗体为Fab’抗体。
44.实施方案38的抗体，所述抗体为(Fab’)2抗体。
45.实施方案38的抗体，所述抗体为完全人抗体。
46.实施方案38的抗体，所述抗体为人源化抗体。
47.实施方案38的抗体，所述抗体为嵌合抗体。
48.实施方案38的抗体，其中所述抗体抑制HGF与c-Met受体的结合。
49.一种分离的多肽，所述多肽包含至少一种选自SEQ ID NO:24, 26，28，30，32，34，36，38，40和42的氨基酸序列。
50.一种分离的多肽，所述多肽包含至少一种选自SEQ ID NO:25，27，29，31，33，35，37，39，41和43的氨基酸序列。
51.一种分离的核酸分子，所述核酸分子包含至少一种选自SEQ ID ΝΟ:1，3，5，7，9，11，13，15，17和19的核苷酸序列。
52.—种分离的核酸分子,所述核酸分子包含至少一种选自SEQ ID NO:2,4,6,8,10,12，14，16，18和20的核苷酸序列。
53.一种分离的核酸分子，所述核酸分子编码包含至少一个选自⑶
的互补决定区(CDR)的多肽
其中⑶Rla包含氨基酸序列a bcdefghijklmnop q,其中氨基酸a选自赖氨酸、精氨酸或谷氨酰胺；氨基酸b选自丝氨酸或丙氨酸；氨基酸c是丝氨酸；氨基酸d是谷氨酰胺；氨基酸e选自丝氨酸、甘氨酸或天冬氨酸；氨基酸f选自缬氨酸或异亮氨酸或者不存在；氨基酸g选自亮氨酸或苯丙氨酸或者不存在；氨基酸h选自苯丙氨酸或酪氨酸或者不存在；氨基酸i是丝氨酸或者不存在；氨基酸j是丝氨酸或者不存在；氨基酸k选自天冬酰胺，苏氨酸或者不存在；氨基酸I选自天冬酰胺，异亮氨酸或缬氨酸；氨基酸m选自赖氨酸、精氨酸、天冬酰胺或天冬氨酸；氨基酸η选自天冬酰胺或丝氨酸；氨基酸ο选自酪氨酸、天冬氨酸、色氨酸或天冬酰胺；氨基酸P是亮氨酸；氨基酸q选自丙氨酸、甘氨酸或天冬酰胺；
其中⑶R2a包含氨基酸序列r stuvw x，其中氨基酸r选自色氨酸、丙氨酸、缬氨酸、谷氨酸或甘氨酸；氨基酸s是丙氨酸；氨基酸t是丝氨酸、氨基酸u选自苏氨酸、丝氨酸或天冬氨酸；氨基酸V选自精氨酸或亮氨酸；氨基酸w选自谷氨酸、谷氨酰胺或丙氨酸；氨基酸X选自丝氨酸、天冬酰胺或苏氨酸；
其中CDR3a包含氨基酸序列y z a' h' c' d' e' f' g' h',其中氨基酸y选自谷氨酰胺或亮氨酸；氨基酸z选自谷氨酰胺、天冬酰胺或精氨酸；氨基酸a'选自酪氨酸、组氨酸、丙氨酸或丝氨酸；氨基酸V选自苯丙氨酸、酪氨酸、天冬氨酸、天冬酰胺或异亮氨酸；氨基酸c'选自丝氨酸、甘氨酸或天冬酰胺；氨基酸d'选自脯氨酸、酪氨酸、苏氨酸、苯丙氨酸、天冬氨酸、亮氨酸或色氨酸；氨基酸V是脯氨酸；氨基酸P是脯氨酸或者不存在；氨基酸^是色氨酸、亮氨酸、脯氨酸、酪氨酸或异亮氨酸；氨基酸V是苏氨酸或天冬酰胺； 其中所述多肽与抗体重链联合，能够结合肝细胞生长因子(HGF)。
54.实施方案53的核酸分子，所述核酸分子包含选自SEQID NO: 1，3，5，7，9，11，13，15，17和19的核苷酸序列。
55.一种分离的核酸分子，所述核酸分子编码包含至少一个选自⑶RlbXDR2b和⑶R3b的互补决定区(CDR)的多肽
其中⑶Rlb包含氨基酸序列ab cdef g，其中氨基酸a是丝氨酸或者不存在；氨基酸b选自天冬氨酸或甘氨酸或者不存在；氨基酸c选自天冬氨酸、甘氨酸、丝氨酸、缬氨酸、苏氨酸或异亮氨酸；氨基酸d是酪氨酸；氨基酸e选自酪氨酸或甘氨酸；氨基酸f选自异亮氨酸、甲硫氨酸或色氨酸；氨基酸g选自组氨酸、天冬酰胺或丝氨酸；
其中⑶R2b包含氨基酸序列h ijklmnopqrstuvw x,其中氨基酸h选自色氨酸、酪氨酸、缬氨酸、天冬酰胺或谷氨酸；氨基酸i选自异亮氨酸、苯丙氨酸或缬氨酸；氨基酸j选自天冬酰胺、丝氨酸、色氨酸或酪氨酸；氨基酸k选自脯氨酸、丝氨酸、酪氨酸或组氨酸；氨基酸I选自天冬酰胺，丝氨酸或天冬氨酸；氨基酸m选自丝氨酸或甘氨酸；氨基酸η选自甘氨酸或丝氨酸或者不存在；氨基酸ο选自甘氨酸、苏氨酸、天冬氨酸、丝氨酸、异亮氨酸或天冬酰胺；氨基酸P选自苏氨酸、异亮氨酸或赖氨酸；氨基酸q选自天冬酰胺或酪氨酸；氨基酸r选自酪氨酸或组氨酸；氨基酸s选自丙氨酸或天冬酰胺；氨基酸t选自谷氨酰胺、天冬氨酸或脯氨酸；氨基酸u选自赖氨酸或丝氨酸；氨基酸V选自苯丙氨酸、缬氨酸或亮氨酸；氨基酸w选自谷氨酰胺或赖氨酸；氨基酸X选自甘氨酸或丝氨酸；
其中 CDR3b包含氨基酸序列 y z a, b' c' cT e' f' g' h'k' 1' m' n' ο
'Pi Qi r'，其中氨基酸y选自谷氨酸、天冬氨酸、丝氨酸或甘氨酸或者不存在；氨基酸Z选自亮氨酸、谷氨酸、天冬氨酸、组氨酸、脯氨酸或甘氨酸或者不存在；氨基酸V选自谷氨酸、酪氨酸或亮氨酸或者不存在；氨基酸V选自亮氨酸、天冬酰胺，甘氨酸、组氨酸、酪氨酸或色氨酸或者不存在；氨基酸选自精氨酸、丝氨酸、谷氨酸、酪氨酸、甘氨酸或苯丙氨酸或者不存在；氨基酸CT是甘氨酸或者不存在；氨基酸V选自色氨酸或酪氨酸或者不存在；氨基酸P是天冬氨酸或者不存在；氨基酸g'选自丝氨酸或精氨酸或者不存在；氨基酸V是丝氨酸或者不存在；氨基酸P选自甘氨酸或酪氨酸或者不存在；氨基酸V选自酪氨酸、谷氨酸或天冬氨酸或者不存在；氨基酸V选自酪氨酸、苯丙氨酸或天冬氨酸或者不存在；氨基酸1'选自酪氨酸、天冬氨酸、组氨酸或色氨酸或者不存在；氨基酸选自酪氨酸、甘氨酸、天冬氨酸、脯氨酸或丝氨酸或者不存在；氨基酸选自甘氨酸、缬氨酸、酪氨酸或天冬氨酸或者不存在；氨基酸V选自亮氨酸、丙氨酸、甘氨酸或酪氨酸或者不存在；氨基酸V选自甲硫氨酸、苯丙氨酸或酪氨酸；氨基酸V是天冬氨酸；氨基酸r'选自缬氨酸、酪氨酸、异亮氨酸或脯氨酸；
其中所述多肽与抗体轻链联合，能够结合HGF。
56.实施方案55的核酸分子，所述核酸分子包含选自SEQ ID NO:2，4，6，8，10，12，14，.16，18和20的核苷酸序列。
57.一种宿主细胞，所述细胞包含实施方案53的核酸分子。
58.一种宿主细胞，所述细胞包含实施方案55的核酸分子。
59.一种分离的细胞系，所述细胞系产生实施方案34或36的特异性结合物。
60.实施方案59的分离的细胞系，其中所述特异性结合物是抗体。
61.一种分离的细胞系，所述细胞系产生选自1.24.1,1.29.1,1.60.1、1.61.3、.1.74.3、1.75.1,2.4.4,2.12.1,2.40.1 和 3.10.1 的抗体。
62.—种组合物，所述组合物包含实施方案34或36的特异性结合物及药物可接受载体。
63.实施方案62的组合物，其中所述特异性结合物是抗体。
64.一种组合物，所述组合物包含实施方案34或36的特异性结合物及至少一种选自以下的药物:安莎霉素抗生素的格尔德霉素家族的成员；Grb2 Src同源物2的拮抗剂；Gabl调节剂；显性负性Src ；von-Hippel-Landau抑制剂；非类固醇抗炎药物(NSAID) ;COX_2抑制剂；Celebrex?(塞来考昔)；Vi0XX?(罗非考昔)；血管内皮生长因子(VEGF) ;VEGF调节剂；成纤维细胞生长因子(FGF)调节剂；表皮生长因子(EGF)调节剂；角质形成细胞生长因子(KGF) ;KGF相关分子；KGF调节剂；基质金属蛋白质酶(MMP)调节剂；IL_2 ；Proleukin ；Herceptin ；Rituxan ；Zevalin ；Erbitux ;依帕珠单抗；抗 OPGL 抗体;Ang_2 抑制剂；抗VEGF-2抗体；Avast in ;抗肿瘤剂；抗有丝分裂剂；抗代谢物和磺酸烷基酯。
65.实施方案64的组合物，其中所述特异性结合物是抗体。
66.一种治疗患者的癌症的方法，所述方法包括给予实施方案62的组合物。
67.一种治疗患者的癌症的方法，所述方法包括给予实施方案63的组合物。
68.一种治疗患者的癌症的方法，所述方法包括给予实施方案64的组合物。
69.一种治疗患者的癌症的方法，所述方法包括给予实施方案65的组合物。
70.一种治疗患者的实体瘤的方法，所述方法包括给予实施方案62的组合物。
71.一种治疗患者的实体瘤的方法，所述方法包括给予实施方案63的组合物。72.—种治疗患者的实体瘤的方法，所述方法包括给予实施方案64的组合物。
73.一种治疗患者的实体瘤的方法，所述方法包括给予实施方案65的组合物。
74.一种治疗患者的癌症的方法，所述方法包括给予实施方案34或36的特异性结合物及至少一种化疗治疗。
75.实施方案74的方法，其中所述特异性结合物在给予化疗治疗之前给予。
76.实施方案74的方法，其中所述特异性结合物在给予化疗治疗的同时给予。
77.实施方案74的方法，其中所述特异性结合物在给予化疗治疗之后给予。
78.一种治疗患者的癌症的方法，所述方法包括给予实施方案34或36的特异性结合物及放疗。
79.实施方案78的方法，其中所述特异性结合物在给予放疗之前给予。
80.实施方案78的方法，其中所述特异性结合物在给予放疗的同时给予。
81.实施方案78的方法，其中所述特异性结合物在给予放疗之后给予。
82.—种检测样品中肝细胞生长因子(HGF)水平的方法，所述方法包括将样品与实施方案34或36的特异性结合物接触。
83.实施方案82的方法，其中 所述特异性结合物是抗体。
84.—种抑制HGF与Met结合的方法，所述方法包括给予HGF特异性结合物。
85.实施方案84的方法，其中所述特异性结合物是抗体。
86.实施方案84的方法，其中所述特异性结合物包含至少一种选自SEQID NO =25,27,29,31,33,35,37,39,41 和 43 的氨基酸序列。
87.实施方案84的方法，其中所述特异性结合物包含至少一种选自SEQID NO =24,26,28，30，32，34，36，38，40 和 42 的氨基酸序列。
88.一种多肽，所述多肽包含至少一种选自SEQ ID NO:164和165的氨基酸序列。
89.一种多肽，所述多肽基本由至少一种选自SEQ ID NO:164和165的氨基酸序列组成。
90.一种特异性结合物，所述结合物能够结合至少一种选自SEQ ID NO:164和165的
氨基酸序列。
91.一种抗体或抗原结合域，其能够结合至少一种选自SEQ ID NO:164和165的氨基酸序列。
92.一种获得能够结合肝细胞生长因子(HGF)的抗体的方法，所述方法包括给予动物至少一种选自SEQ ID NO:164和165的多肽，并从该动物获得能够结合HGF的抗体。
93.一种降低或防止任何一种实施方案18-27的特异性结合物与肝细胞生长因子(HGF)结合的方法，所述方法通过给予包含至少一种选自SEQ ID NO:164和165的氨基酸序列的多肽来进行。
94.一种降低或防止任何一种实施方案18-27的多肽与肝细胞生长因子(HGF)结合的方法,所述方法通过给予由至少一种选自SEQ ID NO:164和165的氨基酸序列组成的多肽来进行。
95.一种降低或防止特异性结合物与肝细胞生长因子(HGF)结合的方法，所述方法通过给予包含至少一种选自SEQ ID NO:164和165的氨基酸序列的多肽来进行。
96.一种降低或防止特异性结合物与肝细胞生长因子(HGF)结合的方法，所述方法通过给予由至少一种选自SEQ ID NO:164和165的氨基酸序列组成的多肽来进行。
附图简述
[0026]图1A显示某些抗HGF抗体的κ轻链的进化系统树，说明它们的种系关系。种系基因标识标在抗体名称的右边。图1B显示某些抗HGF抗体的K轻链可变区的氨基酸序列比对。种系基因标识标在左边。比对序列上的粗线表不⑶R区。
[0027]图2Α显示某些抗HGF抗体的Y重链的进化系统树，说明它们的种系关系。种系基因标识标在抗体名称的右边。图2Β显示某些抗HGF抗体的Y重链可变区的氨基酸序列比对。种系基因标识标在左边。比对序列上的粗线表不⑶R区。
[0028]图3显示编码某些抗HGF抗体的轻链和重链的可变区的DNA序列。对于每个序列，均标出抗体名称、种系标识和序列ID。下划线为天然信号肽序列。还显示人K、IgGl和IgG2恒定区的DNA序列。[0029]图4显示某些抗HGF抗体的轻链和重链的可变区的氨基酸序列。对于每个序列，均标出抗体名称、种系标识和序列ID。下划线为天然信号肽序列。还显示人K、IgGl和IgG2恒定区的氨基酸序列。
[0030]图5显示某些抗HGF抗体的轻链和重链的互补决定区(CDR)的氨基酸序列。对于每个序列，均标出抗体名称和序列ID。图5A显示某些抗HGF抗体的轻链CDR的氨基酸序列，其中在图5A中:
轻链 CDRl 共有序列(CDRla) (SEQ ID NO:166):ab c d e fg h i j k I m η o pq，其
中氨基酸a选自赖氨酸、精氨酸或谷氨酰胺；氨基酸b选自丝氨酸或丙氨酸；氨基酸c是丝氨酸；氨基酸d是谷氨酰胺；氨基酸e选自丝氨酸、甘氨酸或天冬氨酸；氨基酸f选自缬氨酸或异亮氨酸或者不存在；氨基酸g选自亮氨酸或苯丙氨酸或者不存在；氨基酸h选自苯丙氨酸或酪氨酸或者不存在；氨基酸i是丝氨酸或者不存在；氨基酸j是丝氨酸或者不存在；氨基酸k选自天冬酰胺、苏氨酸或者不存在；氨基酸I选自天冬酰胺、异亮氨酸或缬氨酸；氨基酸m选自赖氨酸、精氨酸、天冬酰胺或天冬氨酸；氨基酸η选自天冬酰胺或丝氨酸；氨基酸ο选自酪氨酸、天冬氨酸、色氨酸或天冬酰胺；氨基酸P是亮氨酸；氨基酸q选自丙氨酸、甘氨酸或天冬酰胺
轻链CDR2共有序列(CDR2a) (SEQ ID NO:167):r s t u v w x，其中氨基酸r选自色氨酸、丙氨酸、缬氨酸、谷氨酸或甘氨酸；氨基酸s是丙氨酸；氨基酸t是丝氨酸；氨基酸u选自苏氨酸、丝氨酸或天冬氨酸；氨基酸V选自精氨酸或亮氨酸；氨基酸W选自谷氨酸、谷氨酰胺或丙氨酸；氨基酸X选自丝氨酸、天冬酰胺或苏氨酸
轻链 CDR3 共有序列(CDR3a) (SEQ ID NO:168):yza/ b' c' d' e' f' g' h'，其中氨基酸y选自谷氨酰胺或亮氨酸；氨基酸z选自谷氨酰胺、天冬酰胺或精氨酸；氨基酸a'选自酪氨酸、组氨酸、丙氨酸或丝氨酸；氨基酸b'选自苯丙氨酸、酪氨酸、天冬氨酸、天冬酰胺或异亮氨酸；氨基酸V选自丝氨酸、甘氨酸或天冬酰胺；氨基酸cT选自脯氨酸、酪氨酸、苏氨酸、苯丙氨酸、天冬氨酸、亮氨酸或色氨酸；氨基酸^是脯氨酸；氨基酸P是脯氨酸或者不存在；氨基酸^是色氨酸、亮氨酸、脯氨酸、酪氨酸或异亮氨酸；氨基酸V是苏氨酸或天冬酰胺。
图5B显示某些抗HGF抗体的重链⑶R的氨基酸序列，其中在图5B中:
重链cDRl共有序列(cDRlb) (SEQ ID NO:169):a b c d e f g，其中氨基酸a是丝氨酸或者不存在；氨基酸b选自天冬氨酸或甘氨酸或者不存在；氨基酸c选自天冬氨酸、甘氨酸、丝氨酸、缬氨酸、苏氨酸或异亮氨酸；氨基酸d是酪氨酸；氨基酸e选自酪氨酸或甘氨酸；氨基酸f选自异亮氨酸、甲硫氨酸或色氨酸；氨基酸g选自组氨酸、天冬酰胺或丝氨酸重链 cDR2 共有序列(cDR2b) (SEQ ID No:170):hi j k Im n o p qr st u y w x、其中氨基酸h选自色氨酸、酪氨酸、缬氨酸、天冬酰胺或谷氨酸；氨基酸i选自异亮氨酸、苯丙氨酸或缬氨酸；氨基酸j选自天冬酰胺、丝氨酸、色氨酸或酪氨酸；氨基酸k选自脯氨酸、丝氨酸、酪氨酸或组氨酸；氨基酸1选自天冬酰胺、丝氨酸或天冬氨酸；氨基酸m选自丝氨酸或甘氨酸；氨基酸n选自甘氨酸或丝氨酸或者不存在；氨基酸ο选自甘氨酸、苏氨酸、天冬氨酸、丝氨酸、异亮氨酸或天冬酰胺；氨基酸P选自苏氨酸、异亮氨酸或赖氨酸；氨基酸q选自天冬酰胺或酪氨酸；氨基酸r选自酪氨酸或组氨酸；氨基酸s选自丙氨酸或天冬酰胺；氨基酸t选自谷氨酰胺、天冬氨酸或脯氨酸；氨基酸u选自赖氨酸或丝氨酸；氨基酸V选自苯丙氨酸、缬氨酸或亮氨酸；氨基酸w选自谷氨酰胺或赖氨酸；氨基酸X选自甘氨酸或丝氨酸重链cDR3共有序列(cDR3b) (SEQ ID NO:171):y z a' b' c' d' e' f' g' h' i' j'k'i' m'n'o'p'q'r'，其中氨基酸y选自谷氨酸、天冬氨酸、丝氨酸或甘氨酸或者不存在；氨基酸z选自亮氨酸、谷氨酸、天冬氨酸、组氨酸、脯氨酸或甘氨酸或者不存在；氨基酸a'选自谷氨酸、酪氨酸或亮氨酸或者不存在；氨基酸b'选自亮氨酸、天冬酰胺、甘氨酸，组氨酸，酪氨酸或色氨酸或者不存在；氨基酸c'选自精氨酸，丝氨酸、谷氨酸、酪氨酸、甘氨酸或苯丙氨酸或者不存在；氨基酸d'是甘氨酸或者不存在；氨基酸V选自色氨酸或酪氨酸或者不存在；氨基酸f'是天冬氨酸或者不存在；氨基酸g'选自丝氨酸或精氨酸或者不存在；氨基酸h'是丝氨酸或者不存在；氨基酸P选自甘氨酸或酪氨酸或者不存在；氨基酸j'选自酪氨酸、谷氨酸或天冬氨酸或者不存在；氨基酸k'选自酪氨酸、苯丙氨酸或天冬氨酸或者不存在；氨基酸l'选自酪氨酸、天冬氨酸、组氨酸或色氨酸或者不存在；氨基酸m'选自酪氨酸、甘氨酸、天冬氨酸、脯氨酸或丝氨酸或者不存在；氨基酸Y选自甘氨酸、缬氨酸、酪氨酸或天冬氨酸或者不存在；氨基酸V选自亮氨酸、丙氨酸、甘氨酸或酪氨酸或者不存在；氨基酸p'选自甲硫氨酸、苯丙氨酸或酪氨酸；氨基酸q'是天冬氨酸；氨基酸r'选自缬氨酸、酪氨酸、异亮氨酸或脯氨酸。
[0031]图6显示实施例8中讨论的某些抗HGF抗体的Kd测定结果。图6A显示动力学法所得数据。图6B显示平衡/溶液(equilibrium / solution)法所得数据。
[0032]图7显示实施例8中讨论的蛋白质印迹的放射自显影图，所述蛋白质印迹测试某些抗体结合人HGF和结合小鼠HGF的能力。左边的图片(1-4道)显示在非还原条件下进行实验所得的放射自显影图。右边的图片(5-8道)显示在还原条件下进行实验所得的放射自显影图。
[0033]图8显示实施例8中讨论的实验所得的荧光激活细胞分选仪(FACS)数据，所述实验评估某些抗体与某些靶标的结合。图8的上部显示无特异性结合物的对照样品FACS数据。图片I和2(左起)显示分别与FITC和PE孵育的无靶标的对照样品的数据。图片3和4显示分别包含FITC和PE标记的d5HGF、但无特异性结合物的对照样品的数据。实线下面的图片显示测试五种抗HGF抗体的实验的FACS数据。对于每种抗体，第一个图片(左起)显示无靶标的对照样品的数据，第二至第四个图片显示其中靶标分别为人HGF、小鼠HGF和人d5HGF的实验的数据。[0034]图9A显示编码邻近多克隆位点的亲和素的质粒的示意图，如在实施例8中讨论，所述质粒用以产生包含亲和素和靶蛋白的融合蛋白。图9B显示鸡亲和素的序列。
[0035]图1OA和IOB显示某些融合蛋白的示意图及实施例8C和8D讨论的使用这些融合蛋白的结合测定的结果。图1OC显示某些含点突变、插入或缺失的融合蛋白的示意图。图1OD显示人和小鼠HGF在氨基酸451-731区域中的氨基酸序列(分别为SEQ ID N0.120和121)，同时标出相应的共有序列(SEQ ID N0.122)。
[0036]图1lA和IlB显示实施例8E中讨论的人HGF的蛋白酶保护实验的HPLC分析结果。图1lC显示该实验中通过结合抗体2.12.1而被保护免受蛋白酶解消化的肽的氨基酸序列。
[0037]图12A-12D显示实施例8中讨论的竞争性结合测定的结果。
[0038]图13显示实施例9中讨论的中和测定的IC50数据。
[0039]图14显示实施例10中讨论的PC3细胞中和测定的数据。
[0040]图15显示实施例10中讨论的U-87细胞抑制测定的数据。
[0041]图16显示实施例11中讨论的实验的结果，所述实验评估某些抗HGF抗体对小鼠中U-87MG异种移植肿瘤的作用。图16A显示微量残留疾病(minimal residual disease)模型中抗体2.4.4对U-87MG异种移植肿瘤生长的剂量反应数据。图16B显示确立的疾病模型中抗体2.4.4对U-87异种移植肿瘤生长的剂量反应数据。图16C、16D、16E和16F显示U-87微量残留疾病模型(16C和16D)中或U-87确立的疾病模型(16E和16F)中检测抗HGF抗体的直接比较( head-to-head)实验的数据。
某些示例性实施方案详述
[0042]应当理解，以上概述和以下详述只是示例性和说明性的，并不是对要求保护的本发明进行限制。在本申请中，除非另有具体规定，使用单数形式包含复数含义。在本申请中，除非另有规定，使用“或(或者)”表示“和/或”。此外，使用术语“包括”及其其他形式如“包括的”并不表示限制意义。还有，除非另有具体规定，术语如“元件”或“组分”不但涵括包含一个单位的元件和组分，而且涵括包含不只一个亚单位的元件和组分。同样，使用术语“部分(portion) ”可包括部分(moiety)的一部分(part)或者整个部分(moiety)。
[0043]本文使用的段落标题只是为了组织目的，不能解释为限制所描述的主题。本申请中引用的所有文件或文件部分，包括但不限于专利、专利申请、文章、书籍和论文，对于任何目的通过引用整体清楚地结合到本文中。
定义
[0044]重组DNA、寡核苷酸合成和组织培养和转化(例如电穿孔、脂质转染)可使用标准技术。酶反应和纯化技术可按照厂商说明书，或者按照本领域的常规，或者按照本文的描述来进行。前述技术和方法通常可按照本领域公知的常规方法，或者按照本说明书中引用和讨论的各种一般的和更具体参考文献的描述来进行。参见例如Sambrook等，MolecularCloning:A Laboratory Manual (第 2 版，Cold Spring Harbor Laboratory Press, ColdSpring Harbor7N.Y.(1989)),对于任何目的其通过引用结合到本文中。除非提供了具体的定义，本文描述的涉及分析化学、合成有机化学及医学和药物化学的所用术语以及实验室方法和技术是本领域公知和常用的。化学合成、化学分析、药物制备、制剂和传递以及患者治疗可使用标准技术。[0045]按照本发明公开内容进行使用的以下术语，除非另有指明，应理解为具有以下含乂:
[0046]术语“肝细胞生长因子”或“HGF”指Nakamura 等，Nature342:440-443 (1989)中提出的多肽或其片断以及相关多肽，包括但不限于等位变体、剪接变体、衍生变体、置换变体、缺失变体和/或插入变体、融合多肽和种间同源物。在某些实施方案中，HGF多肽包括末端残基，例如但不限于前导序列残基、靶向残基、氨基末端甲硫氨酸残基、赖氨酸残基、tag残基和/或融合蛋白残基。
[0047]术语“特异性结合物”指特异性结合靶标的天然或非天然分子。特异性结合物的实例包括但不限于蛋白质、肽、核酸、碳水化合物、脂质和小分子化合物。在某些实施方案中，特异性结合物是抗体。在某些实施方案中，特异性结合物是抗原结合区。
[0048]术语“HGF特异性结合物”指特异性结合HGF的任何部分的特异性结合物。在某些实施方案中，HGF特异性结合物是抗HGF抗体。在某些实施方案中，特异性结合物是抗原结合区。
[0049]术语“多克隆抗体”指结合同一抗原的不同表位的抗体的异质混合物。
[0050]术语“单克隆抗体”指由同一核酸分子编码的一组抗体。在某些实施方案中，单克隆抗体由单一杂交瘤或其他细胞系产生，或者由转基因哺乳动物产生。单克隆抗体通常识别同一表位。术语“单克隆”不限于任何具体的抗体产生方法。
[0051]术语“嵌合抗体”指这样的抗体，其中抗体的一部分与具体物种或具体抗体类别的序列同源，但抗体的另一部分与不同物种或抗体类别的序列同源。参见例如美国专利第4，816，567 号和 Morrison 等，Proc Natl Acad Sci (USA)，81:6851-6855 (1985)。
[0052]术语“CDR移植抗体”指其中来自一种抗体的CDR插入到另一种抗体的构架中的抗体。在某些实施方案中，CDR的来源抗体和构架的来源抗体属不同的种。在某些实施方案中，CDR的来源抗体和构架的来源抗体属不同的同种型。
[0053]术语“多特异性抗体”指其中两个或更多个可变区结合不同表位的抗体。表位可以在相同或不同的靶标上。在某些实施方案中，多特异性抗体是识别相同或不同抗原上的两种不同表位的“双特异性抗体”。
[0054]术语“催化抗体”指其中连接有一个或多个催化部分的抗体。在某些实施方案中，催化抗体是包含细胞毒部分的细胞毒抗体。
[0055]术语“人源化抗体”指这样的抗体，其中抗体构架区的全部或部分来源于人，但一个或多个CDR区的全部或部分来源于另一物种，如小鼠。
[0056]术语“完全人抗体”指其中⑶R和构架均基本包含人序列的抗体。在某些实施方案中，完全人抗体在非人哺乳动物中产生，包括但不限于小鼠、大鼠和兔形目动物。在某些实施方案中，完全人抗体在杂交瘤细胞中产生。在某些实施方案中，完全人抗体重组产生。
[0057]术语“抗独特型抗体”指特异性结合另一种抗体的抗体。
[0058]术语“特异性结合”指特异性结合物以比其结合非靶标更大的亲和力结合靶标的能力。在某些实施方案中，特异性结合指结合靶标的亲和力是对非靶标的亲和力的至少10、
50、100、250、500或1000倍大。在某些实施方案中，亲和力通过亲和ELISA测定来检测。在某些实施方案中，亲和力通过BIAcore测定来检测。在某些实施方案中，亲和力通过动力学法来检测。在某些实施方案中，亲和力通过平衡/溶液法来检测。[0059]术语“表位”指能够被特异性结合物结合的分子部分。在某些实施方案中，表位通常包含分子的化学活性表面基团，例如氨基酸或碳水化合物侧链，且具有特异性三维结构特征以及特异性电荷特征。表位可以是连续的或者非连续的。在某些实施方案中，表位可以是模拟的，因为它们包含与用以产生抗体的表位相似的三维结构，但不包含或者只包含一些见于用以产生抗体的表位的氨基酸残基。
[0060]术语“抑制和/或中和表位”指这样的表位，其当被特异性结合物结合时，导致体内、体外和/或原位生物活性下降。在某些实施方案中，中和表位位于或者涉及靶标的生物活性区域。
[0061]术语“激活表位”指这样的表位，其当被特异性结合物结合时，导致体内、体外和/或原位生物活性激活或维持。在某些实施方案中,激活表位位于或者涉及祀标的生物活性区域。
[0062]本文所用的术语“分离多核苷酸”意指基因组、cDNA的多核苷酸，或者合成起源的多核苷酸，或者它们的某些组合，由于其来源，“分离多核苷酸”(I)与其中天然发现该分离多核苷酸的多核苷酸的全部或一部分无关，(2)与其天然不相连的多核苷酸相连，或者(3)没有作为更大序列的一部分天然出现。
[0063]本文所指的术语“分离蛋白”意指由cDNA、重组RNA编码或者合成来源的蛋白质，或者它们的某些组合，其(I)没有至少某些其通常发现与其伴随的蛋白质，(2)基本没有相同来源(例如相同物种)的其他蛋白质，(3)由不同物种的细胞表达，(4)在自然界中不出现。
[0064]术语“多肽”在本文中用作普通术`语，指天然蛋白质或这种蛋白质缺失、插入和/或置换天然序列的一个或多个氨基酸的修饰。在某些实施方案中，多肽缺失、插入和/或置换至少一个但不超过50、30、20、15、10、8、5或3个天然序列的氨基酸。
[0065]本文所用的应用于某个对象的术语“天然”指该对象可在自然界中找到。例如，存在于可从自然界来源分离到的生物体(包括病毒)、且未被人们在实验室中或者以其他方式有意修饰的多肽或多核苷酸序列是天然的。
[0066]本文所用的术语“有效连接”指组分处于允许它们以其预定方式发挥功能的关系之中。例如，与编码序列“有效连接”的控制序列如此连接，使得在与控制序列相容的条件下，编码序列的表达得以实现。
[0067]本文所用的术语“控制序列”指可实现它们所连接的编码序列的表达和加工的多核苷酸序列。取决于宿主生物体，这种控制序列的种类可能不同。根据某些实施方案,原核生物的控制序列可包括启动子、核糖体结合位点和转录终止序列。根据某些实施方案，真核生物的控制序列可包括启动子、一种或多种增强子和转录终止序列。在某些实施方案中，“控制序列”可包括前导序列和/或融合伴侣序列(fusion partner sequence)。
[0068]本文所指的术语“多核苷酸”意指长度为至少10个碱基的聚合形式的核苷酸。在某些实施方案中，碱基可为核糖核酸或脱氧核糖核酸或任何一类型的核苷酸的修饰形式。该术语包括单链和双链形式的DNA。
[0069]本文所指术语“寡核苷酸”包括通过天然和/或非天然寡核苷酸键连接在一起的天然的和修饰的核苷酸。寡核苷酸是多核苷酸的子集，通常包含200个碱基或更少碱基的长度。在某些实施方案中，寡核苷酸的长度为10-60个碱基。在某些实施方案中，寡核苷酸的长度为12、13、14、15、16、17、18、19或20-40个碱基。寡核苷酸可以是单链或双链，例如
用于构建基因突变体。寡核苷酸可以是有义或反义寡核苷酸。
[0070]术语“天然核苷酸”包括脱氧核糖核酸和核糖核酸。术语“修饰核苷酸”包括带有修饰或取代糖基等的核苷酸。术语“寡核苷酸键”包括寡核苷酸键如硫代磷酸酯、二硫代磷酸酯、硒代磷酸酯、二硒代磷酸酯、苯胺基硫代磷酸酯(phosphoroani1thioate)、苯胺基磷酸酯(phoshoraniIadate)、氨基憐酸酯等。参见例如 LaPlanche 等,Nucl.Acids Res.，14:9081 (1986) ；Stec 等，J.Am.Chem.Soc.，106:6077 (1984) ；Stein 等，Nucl.Acids Res.，16:3209(1988) ;Zon 等，Ant1-Cancer Drug Design, 6:539 (1991) ;Zon 等，Oligonucleotidesand Analogs:A Practical Approach,第 87-108 页(F.Eckstein 编辑,Oxford UniversityPress, Oxford England(1991)) ；Stec 等，美国专利第 5, 151, 510 号；UhImann 和 Peyman,Chemical Reviews, 90:543 (1990)，对于任何目的这些文献的公开内容通过引用结合到本文中。在某些实施方案中，寡核苷酸可包括用于检测的标记。
[0071]可通过公知的方法容易地计算相关多肽的一致性和相似性。这种方法包括但不限于以下文献中描述的方法:Computational Molecular Biology, Lesk, A.Μ.(编辑),Oxford University Press, New York(1988) ；Biocomputing:Informatics andGenome Projects, Smith, D.W.(编辑)，Academic Press, New York (1993) ；ComputerAnalysis of sequence Data, Part I, Griffin, A.M.和 Griffin, H.G.(编辑)，HumanaPress, New Jersey (1994) ；Sequence Analysis in Molecular Biology, von Heinje, G.,Academic Press (1987) ；Sequence Analysis Primer, Gribskov, M.^PDevereux, J.(编辑)，M.Stockton Press, New York(1991)；及 Carillo 等，SIAM J.Applied Math.,48:1073(1988)。
[0072]某些一致性测定方法被设计成在受试序列之间产生最大配对。一致性测定方法在可公开获得的计 算机程序中有描述。测定两个序列之间一致性的计算机程序方法包括但不限于 GCG 程序包，包括 GAP (Devereux 等，Nucl.Acid.Res.，12:387 (1984)；Genetics Computer Group, University of Wisconsin, Madison, WI> BLASTP> BLASTN 和FASTA (Altschul 等，J.Mol.Biol.,215:403-410 (1990))。BLASTX 程序可从美国国家生物技术信息中心(National Center for Biotechnology Information, NCBI)和其他来源(BLAST 手册，Altschul 等 NCB / NLM / NIH Bethesda, MD20894 ；Altschul 等，出处同上(1990))公开获得。也可用著名的Smith Waterman算法测定一致性。
[0073]某些用以比对两个氨基酸序列的比对方案可能导致两个序列中只有较短一段区域配对，而这个小的比对区域可具有非常高的序列一致性，尽管两个全长序列之间并没有显著的关系。因此，在某些实施方案中，选定的比对方法(GAP程序)将导致跨越靶多肽的至少50个连续氨基酸的比对。
[0074]例如，使用GAP 计算机算法(Genetics Computer Group, University ofWisconsin, Madison, WI)，比对两个待测定序列一致性百分率的多肽，以对它们各自的氨基酸进行最佳配对(“配对范围”，由算法确定)。在某些实施方案中，空位开放罚分(计算为3乘以平均对角线；“平均对角线”是所用的比较矩阵的对角线的平均值；“对角线”是由具体比较矩阵分配给各个完全氨基酸配对的分数或数值)和空位拓展罚分(其通常为空位开放罚分的十分之一)，以及比较矩阵如PAM250或BL0SUM62与算法一起使用。在某些实施方案中，算法中也使用标准的比较矩阵(PAM 250比较矩阵参见Dayhoff等,Atlas of ProteinSequence and Structure, 5 (3) (1978) ;BL0SUM62 比较矩阵参见 Henikoff 等，Proc.Natl.Acad.Sci 美国，89:10915-10919 (1992))。
[0075]在某些实施方案中，用于多肽序列比较的参数包括以下:
算法:Needleman 等，J.Mol.Biol.，48:443-453 (1970)；
比较矩阵:Henikoff等，出处同上(1992)的BLOSUM 62 ；
空位罚分:12 空位长度罚分:4 相似性阈值:0
[0076]GAP程序可使用以上参数。在某些实施方案中，上述参数是使用GAP算法进行多肽比较的默认参数(末端空位无罚分)。[0077]在某些实施方案中，特异性结合物包含这样的重链，其包含的可变区包含与选自SEQ ID NO:25，27，29，31，33，35，37，39，41和43的氨基酸序列有至少90% —致性的氨基酸序列。在某些实施方案中，特异性结合物包含这样的重链，其包含的可变区包含与选自SEQID NO:25,27,29,31,33,35,37,39,41和43的氨基酸序列有至少95%—致性的氨基酸序列。在某些实施方案中，特异性结合物包含这样的重链，其包含的可变区包含与选自SEQ IDNO:25，27，29，31，33，35，37，39，41和43的氨基酸序列有至少99%—致性的氨基酸序列。
[0078]在某些实施方案中，特异性结合物包含这样的轻链，其包含的可变区包含与选自SEQ ID NO: 24，26，28，30，32，34，36，38，40和42的氨基酸序列有至少90% —致性的氨基酸序列。在某些实施方案中，特异性结合物包含这样的轻链，其包含的可变区包含与选自SEQID NO:24，26，28，30，32，34，36，38，40和42的氨基酸序列有至少95% —致性的氨基酸序列。在某些实施方案中，特异性结合物包含这样的轻链，其包含的可变区包含与选自SEQ IDNO: 24，26，28，30，32，34，36，38，40和42的氨基酸序列有至少99%—致性的氨基酸序列。
[0079]本文所用的二十种常见氨基酸及其缩写遵循常规用法。参见Immunology--ASynthesis,(第 2 版，E.S.Golub 和 D.R.Gren (编辑)，Sinauer Associates, Sunderland,Mass, (1991))，对于任何目的其通过引用结合到本文中。二十种常见氨基酸的立体异构体(例如D-氨基酸)、非天然氨基酸如α _，α - 二取代氨基酸、N-烷基氨基酸、乳酸及其他非常见氨基酸也可以作为本发明多肽的合适组分。非常见氨基酸的实例包括:4_羟脯氨酸、
Y-羧基谷氨酸、a-N, N, N-三甲基赖氨酸、g-N-乙酰赖氨酸、O-磷酸丝氨酸、N-乙酰丝氨酸、N-甲酰甲硫氨酸、3-甲基组氨酸、5-羟赖氨酸、σ -N-甲基精氨酸及其他类似的氨基酸和亚氨基酸(例如4-羟脯氨酸)。依据标准用法和惯例，在本文所用的多肽符号中，左手方向是氨基末端方向，右手方向是羧基末端方向。
[0080]类似地，除非另有指定，单链多核苷酸序列的左手末端是5'末端；双链多核苷酸序列的左手方向称为Y方向。新生RNA转录物的Y至:V添加方向称为转录方向；DNA链上具有与RNA相同的序列且位于RNA转录物的5'末端的5'的序列区域称为“上游序列”;DNA链上具有与RNA相同的序列且位于RNA转录物的:V末端的Y的序列区域称为“下游序列”。
[0081]保守氨基酸置换可包括非天然氨基酸残基，其通过化学肽合成而不是通过在生物体系中合成而掺入。这些保守氨基酸置换包括肽模拟物和氨基酸部分的其他颠倒或反向形式。
[0082]根据共同的侧链性质，可将天然残基分类如下:
1)疏水性残基:正亮氨酸，Met,Ala, Val, Leu, He ；
2)中性亲水性残基:Cys，Ser，Thr，Asn，Gln；
3)酸性残基:Asp,Glu ；
4)碱性残基:His,Lys, Arg ；
5)影响链方向的残基:Gly,Pro ；
6)芳族残基:Trp,Tyr, Phe。
[0083]例如，非保守置换可包括这些类别中的某一类别的成员与另一类别的成员互换。这种置换残基可被引入到人抗体中与非人抗体同源的区域，或者被引入到分子中的非同源区域。
[0084]根据某些实施方案，在造成这种变化时，可考虑氨基酸的亲水性指数。根据每种氨基酸的疏水性和电荷特征，给予其亲水性指数。它们为:异亮氨酸(+4.5);缴氨酸(+4.2)；亮氨酸(+3.8);苯丙氨酸(+2.8);半胱氨酸/胱氨酸(+2.5);甲硫氨酸(+1.9);丙氨酸(+1.8);甘氨酸(-0.4);苏氨酸(-0.7);丝氨酸(-0.8);色氨酸(-0.9);酪氨酸(-1.3);脯氨酸(-1.6);组氨酸(-3.2);谷氨酸(-3.5);谷氨酰胺(-3.5);天冬氨酸(-3.5);天冬酰胺(-3.5);赖氨酸(-3.9);及精氨酸(-4.5) ο
[0085]亲水性氨基酸指数在赋予蛋白质活性生物功能方面的重要性为本领域所认识。Kyte等，J.Mol.Biol.，157 =105-`131 (1982)。已知可用某些氨基酸置换具有类似亲水性指数或分数的其他氨基酸，且仍保持类似的生物活性。在根据亲水性指数造成这种变化时，在某些实施方案中，包括其亲水性指数在±2之内的氨基酸置换。在某些实施方案中，包括其亲水性指数在± I之内的氨基酸置换，还在某些实施方案中，包括其亲水性指数在±0.5之内的氨基酸置换。
[0086]本领域还认识到，可根据亲水性有效地造成相似氨基酸的置换，特别是在所创建的生物功能性蛋白质或肽意在用于免疫学实施方案中的情况下，犹如本发明的情况。在某些实施方案中，蛋白质的由其邻近氨基酸的亲水性所决定的最大局部平均亲水性与其免疫原性和抗原性相关，即与该蛋白质的生物性质相关。
[0087]已给这些氨基酸残基分配以下亲水性值:精氨酸(+3.0);赖氨酸(+3.0);天冬氨酸(+3.0±1);谷氨酸(+3.0±1);丝氨酸(+0.3);天冬酰胺(+0.2);谷氨酰胺(+0.2)；甘氨酸(O);苏氨酸(-0.4);脯氨酸(_0.5±1);丙氨酸(-0.5);组氨酸(-0.5);半胱氨酸(-1.0);甲硫氨酸(-1.3) -M氨酸(-1.5);亮氨酸(-1.8);异亮氨酸(-1.8);酪氨酸(-2.3);苯丙氨酸(-2.5)和色氨酸(-3.4)。在根据类似的亲水性值造成变化时，在某些实施方案中，包括其亲水性值在± 2之内的氨基酸置换，在某些实施方案中，包括其亲水性值在±1之内的氨基酸置换，还在某些实施方案中，包括其亲水性值在±0.5之内的氨基酸置换。还可根据亲水性从一级氨基酸序列鉴别表位。这些区域也称为“表位核心区”。
[0088]示例性的氨基酸置换在表1中显示。
氨基酸置换
【权利要求】
1.一种分离的多肽，所述多肽包含至少一个选自⑶RlaXDR2a和⑶R3a的互补决定区(CDR) 其中⑶Rla包含氨基酸序列a bcdefghijklmnop q,其中氨基酸a选自赖氨酸、精氨酸或谷氨酰胺；氨基酸b选自丝氨酸或丙氨酸；氨基酸c是丝氨酸；氨基酸d是谷氨酰胺；氨基酸e选自丝氨酸、甘氨酸或天冬氨酸；氨基酸f选自缬氨酸或异亮氨酸或者不存在；氨基酸g选自亮氨酸或苯丙氨酸或者不存在；氨基酸h选自苯丙氨酸或酪氨酸或者不存在；氨基酸i是丝氨酸或者不存在；氨基酸j是丝氨酸或者不存在；氨基酸k选自天冬酰胺、苏氨酸或者不存在；氨基酸I选自天冬酰胺、异亮氨酸或缬氨酸；氨基酸m选自赖氨酸、精氨酸、天冬酰胺或天冬氨酸；氨基酸η选自天冬酰胺或丝氨酸；氨基酸ο选自酪氨酸、天冬氨酸、色氨酸或天冬酰胺；氨基酸P是亮氨酸；氨基酸q选自丙氨酸、甘氨酸或天冬酰胺； 其中⑶R2a包含氨基酸序列r s t u v w x，其中氨基酸r选自色氨酸、丙氨酸、缬氨酸、谷氨酸或甘氨酸；氨基酸s是丙氨酸；氨基酸t是丝氨酸；氨基酸u选自苏氨酸、丝氨酸或天冬氨酸；氨基酸V选自精氨酸或亮氨酸；氨基酸w选自谷氨酸、谷氨酰胺或丙氨酸；氨基酸X选自丝氨酸、天冬酰胺或苏氨酸； 其中⑶R3a包含氨基酸序列y z a’ b’ c’ d’ e’ f g’ h’，其中氨基酸y选自谷氨酰胺或亮氨酸；氨基酸z选自谷氨酰胺、天冬酰胺或精氨酸；氨基酸a’选自酪氨酸、组氨酸、丙氨酸或丝氨酸；氨基酸b’选自苯丙氨酸、酪氨酸、天冬氨酸、天冬酰胺或异亮氨酸；氨基酸c’选自丝氨酸、甘氨酸或天冬酰胺；氨基酸d’选自脯氨酸、酪氨酸、苏氨酸、苯丙氨酸、天冬氨酸、亮氨酸或色氨酸；氨基酸e’是脯氨酸；氨基酸f是脯氨酸或者不存在；氨基酸g’是色氨酸、亮氨酸、脯氨酸、酪氨酸或异亮氨酸；氨基酸h’是苏氨酸或天冬酰胺；和其中所述多肽与抗体重链联合，能够结合肝细胞生长因子(HGF)。
2.一种分离的多肽，所 述多肽包含至少一个选自⑶RlbXDR2b和⑶R3b的互补决定区(CDR) 其中⑶Rlb包含氨基酸序列a b c d e f g，其中氨基酸a是丝氨酸或者不存在；氨基酸b选自天冬氨酸或甘氨酸或者不存在；氨基酸c选自天冬氨酸、甘氨酸、丝氨酸、缬氨酸、苏氨酸或异亮氨酸；氨基酸d是酪氨酸；氨基酸e选自酪氨酸或甘氨酸；氨基酸f选自异亮氨酸、甲硫氨酸或色氨酸；氨基酸g选自组氨酸、天冬酰胺或丝氨酸； 其中⑶R2b包含氨基酸序列h ijklmnopqrstuvw x,其中氨基酸h选自色氨酸、酪氨酸、缬氨酸、天冬酰胺或谷氨酸；氨基酸i选自异亮氨酸、苯丙氨酸或缬氨酸；氨基酸j选自天冬酰胺、丝氨酸、色氨酸或酪氨酸；氨基酸k选自脯氨酸、丝氨酸、酪氨酸或组氨酸；氨基酸I选自天冬酰胺、丝氨酸或天冬氨酸；氨基酸m选自丝氨酸或甘氨酸；氨基酸η选自甘氨酸或丝氨酸或者不存在；氨基酸ο选自甘氨酸、苏氨酸、天冬氨酸、丝氨酸、异亮氨酸或天冬酰胺；氨基酸P选自苏氨酸、异亮氨酸或赖氨酸；氨基酸q选自天冬酰胺或酪氨酸；氨基酸r选自酪氨酸或组氨酸；氨基酸s选自丙氨酸或天冬酰胺；氨基酸t选自谷氨酰胺、天冬氨酸或脯氨酸；氨基酸u选自赖氨酸或丝氨酸；氨基酸V选自苯丙氨酸、缬氨酸或亮氨酸；氨基酸w选自谷氨酰胺或赖氨酸；氨基酸X选自甘氨酸或丝氨酸； 其中 CDR3b 包含氨基酸序列 y z a，b’ c’ d’ e’ f' g’ h’ i’ j’ k’ I’ m’ n’ o’p’ q’ r’，其中氨基酸y选自谷氨酸、天冬氨酸、丝氨酸或甘氨酸或者不存在；氨基酸z选自亮氨酸、谷氨酸、天冬氨酸、组氨酸、脯氨酸或甘氨酸或者不存在；氨基酸a’选自谷氨酸、酪氨酸或亮氨酸或者不存在；氨基酸b’选自亮氨酸、天冬酰胺、甘氨酸、组氨酸、酪氨酸或色氨酸或者不存在；氨基酸c’选自精氨酸、丝氨酸、谷氨酸、酪氨酸、甘氨酸或苯丙氨酸或者不存在；氨基酸d’是甘氨酸或者不存在；氨基酸e’选自色氨酸或酪氨酸或者不存在；氨基酸f’是天冬氨酸或者不存在；氨基酸g’选自丝氨酸或精氨酸或者不存在；氨基酸h’是丝氨酸或者不存在；氨基酸i’选自甘氨酸或酪氨酸或者不存在；氨基酸j’选自酪氨酸、谷氨酸或天冬氨酸或者不存在；氨基酸k’选自酪氨酸、苯丙氨酸或天冬氨酸或者不存在；氨基酸I’选自酪氨酸、天冬氨酸、组氨酸或色氨酸或者不存在；氨基酸m’选自酪氨酸、甘氨酸、天冬氨酸、脯氨酸或丝氨酸或者不存在；氨基酸η’选自甘氨酸、缬氨酸、酪氨酸或天冬氨酸或者不存在；氨基酸o’选自亮氨酸、丙氨酸、甘氨酸或酪氨酸或者不存在；氨基酸P’选自甲硫氨酸、苯丙氨酸或酪氨酸；氨基酸q’是天冬氨酸；氨基酸r’选自缬氨酸、酪氨酸、异亮氨酸或脯氨酸；和 其中所述多肽与抗体轻链联合，能够结合HGF。
3.一种分离的特异性结合物，其中所述特异性结合物包含: (i)包含至少一个选自⑶Rla、⑶R2a和⑶R3a的互补决定区(OTR)的第一多肽 其中⑶Rla包含氨基酸序列a bcdefghijklmnop q,其中氨基酸a选自赖氨酸、精氨酸或谷氨酰胺；氨基酸b选自丝氨酸或丙氨酸；氨基酸c是丝氨酸、氨基酸d是谷氨酰胺；氨基酸e选自丝氨酸、甘氨酸或天冬氨酸；氨基酸f选自缬氨酸或异亮氨酸或者不存在；氨基酸g选自亮氨酸或苯丙氨酸或者不存在；氨基酸h选自苯丙氨酸或酪氨酸或者不存在；氨基酸i是丝氨酸或者不存在；氨基酸j是丝氨酸或者不存在；氨基酸k选自天冬酰胺、苏氨酸或者不存在；氨基酸I选自天冬酰胺、异亮氨酸或缬氨酸；氨基酸m选自赖氨酸、精氨酸、天冬酰胺或天冬氨酸；氨基酸η选自天冬酰胺或丝氨酸；氨基酸ο选自酪氨酸、天冬氨酸、色氨酸或天冬酰胺；`氨基酸P是亮氨酸；氨基酸q选自丙氨酸、甘氨酸或天冬酰胺； 其中⑶R2a包含氨基酸序列r s t u v w x，其中氨基酸r选自色氨酸、丙氨酸、缬氨酸、谷氨酸或甘氨酸；氨基酸s是丙氨酸；氨基酸t是丝氨酸；氨基酸u选自苏氨酸、丝氨酸或天冬氨酸；氨基酸V选自精氨酸或亮氨酸；氨基酸w选自谷氨酸、谷氨酰胺或丙氨酸；氨基酸X选自丝氨酸、天冬酰胺或苏氨酸； 其中⑶R3a包含氨基酸序列y z a’ b’ c’ d’ e’ f g’ h’，其中氨基酸y选自谷氨酰胺或亮氨酸；氨基酸z选自谷氨酰胺、天冬酰胺或精氨酸；氨基酸a’选自酪氨酸、组氨酸、丙氨酸或丝氨酸；氨基酸b’选自苯丙氨酸、酪氨酸、天冬氨酸、天冬酰胺或异亮氨酸；氨基酸c’选自丝氨酸、甘氨酸或天冬酰胺；氨基酸d’选自脯氨酸、酪氨酸、苏氨酸、苯丙氨酸、天冬氨酸、亮氨酸或色氨酸；氨基酸e’是脯氨酸；氨基酸f是脯氨酸或者不存在；氨基酸g’是色氨酸、亮氨酸、脯氨酸、酪氨酸或异亮氨酸；氨基酸h’是苏氨酸或天冬酰胺；和其中所述第一多肽与抗体重链联合，能够结合肝细胞生长因子(HGF)； (ii)包含至少一个选自⑶Rib、⑶R2b或⑶R3b的互补决定区(OTR)的第二多肽 其中⑶Rlb包含氨基酸序列a b c d e f g，其中氨基酸a是丝氨酸或者不存在；氨基酸b选自天冬氨酸或甘氨酸或者不存在；氨基酸c选自天冬氨酸、甘氨酸、丝氨酸、缬氨酸、苏氨酸或异亮氨酸；氨基酸d是酪氨酸；氨基酸e选自酪氨酸或甘氨酸；氨基酸f选自异亮氨酸、甲硫氨酸或色氨酸；氨基酸g选自组氨酸、天冬酰胺或丝氨酸； 其中⑶R2b包含氨基酸序列h ijklmnopqrstuvw x,其中氨基酸h选自色氨酸、酪氨酸、缬氨酸、天冬酰胺或谷氨酸；氨基酸i选自异亮氨酸、苯丙氨酸或缬氨酸；氨基酸j选自天冬酰胺、丝氨酸、色氨酸或酪氨酸；氨基酸k选自脯氨酸、丝氨酸、酪氨酸或组氨酸；氨基酸I选自天冬酰胺、丝氨酸或天冬氨酸；氨基酸m选自丝氨酸或甘氨酸；氨基酸η选自甘氨酸或丝氨酸或者不存在；氨基酸ο选自甘氨酸、苏氨酸、天冬氨酸、丝氨酸、异亮氨酸或天冬酰胺；氨基酸P选自苏氨酸、异亮氨酸或赖氨酸；氨基酸q选自天冬酰胺或酪氨酸；氨基酸r选自酪氨酸或组氨酸；氨基酸s选自丙氨酸或天冬酰胺；氨基酸t选自谷氨酰胺、天冬氨酸或脯氨酸；氨基酸u选自赖氨酸或丝氨酸；氨基酸V选自苯丙氨酸、缬氨酸或亮氨酸；氨基酸w选自谷氨酰胺或赖氨酸；氨基酸X选自甘氨酸或丝氨酸； 其中 CDR3b 包含氨基酸序列 y z a’ b’ c’ d’ e’ f' g’ h’ i’ j’ k’ I’ m’ n’ o’p’ q’ r’，其中氨基酸y选自谷氨酸、天冬氨酸、丝氨酸或甘氨酸或者不存在；氨基酸z选自亮氨酸、谷氨酸、天冬氨酸、组氨酸、脯氨酸或甘氨酸或者不存在；氨基酸a’选自谷氨酸、酪氨酸或亮氨酸或者不存在；氨基酸b’选自亮氨酸、天冬酰胺、甘氨酸、组氨酸、酪氨酸或色氨酸或者不存在；氨基酸c’选自精氨酸、丝氨酸、谷氨酸、酪氨酸、甘氨酸或苯丙氨酸或者不存在；氨基酸d’是甘氨酸或者不存在；氨基酸e’选自色氨酸或酪氨酸或者不存在；氨基酸f’是天冬氨酸或者不存在；氨基酸g’选自丝氨酸或精氨酸或者不存在；氨基酸h’是丝氨酸或者不存在；氨基酸i’选自甘氨酸或酪氨酸或者不存在；氨基酸j’选自酪氨酸、谷氨酸或天冬氨酸或者不存在；氨基酸k’选自酪氨酸、苯丙氨酸或天冬氨酸或者不存在；氨基酸I’选自酪氨酸、天冬氨酸、组氨酸或色氨酸或者不存在；氨基酸m’选自酪氨酸、甘氨酸、天冬氨酸、脯氨酸或丝氨酸或者不存在；氨基酸η’选自甘氨酸、缬氨酸、酪氨酸或天冬氨酸或者不存在；氨基酸o’选自亮氨酸、丙氨酸、甘氨酸或酪氨酸或者不存在；氨基酸P’选自甲硫氨酸、苯丙氨酸或酪氨酸；氨基酸q’是天冬氨酸；氨基酸r’选自缬氨酸、酪氨酸、异亮氨酸或脯氨酸；和 其中所述第二多肽与抗体轻链联合，`能够结合HGF。
4.能够结合至少一种由选自SEQID NO: 123、164和165的氨基酸序列组成的多肽的抗体，其中所述抗体能够中和HGF与Met的结合。
5.能够结合HGF的β亚单位的抗体，其中所述抗体能够中和HGF与Met的结合。
6.能够结合人/小鼠嵌合HGF多肽的抗体，其中所述嵌合多肽包含具有代替同源小鼠序列的人HGF氨基酸507-585的小鼠HGF分子，其中所述抗体不显著结合小鼠HGF，并且其中所述抗体能够中和HGF与Met的结合。
7.能够中和HGF与c-Met结合的分离的抗体，所述抗体与至少一种选自以下的抗体竞争结合HGF: a.包含轻链和重链的抗体，所述轻链包含SEQID NO: 24的残基23-残基129的氨基酸序列和所述重链包含SEQ ID NO: 25的残基20-残基141的氨基酸序列； b.包含轻链和重链的抗体，所述轻链包含SEQID NO: 26的残基21-残基133的氨基酸序列和所述重链包含SEQ ID NO: 27的残基20-残基137的氨基酸序列； c.包含轻链和重链的抗体，所述轻链包含SEQID NO: 28的残基23-残基129的氨基酸序列和所述重链包含SEQ ID NO: 29的残基20-残基139的氨基酸序列；d.包含轻链和重链的抗体，所述轻链包含SEQID NO: 30的残基23-残基129的氨基酸序列和所述重链包含SEQ ID NO: 31的残基20-残基148的氨基酸序列； e.包含轻链和重链的抗体，所述轻链包含SEQID NO: 32的残基23-残基129的氨基酸序列和所述重链包含SEQ ID NO: 33的残基20-残基139的氨基酸序列； f.包含轻链和重链的抗体，所述轻链包含SEQID NO: 34的残基23-残基129的氨基酸序列和所述重链包含SEQ ID NO: 35的残基20-残基144的氨基酸序列； g.包含轻链和重链的抗体，所述轻链包含SEQID NO: 36的残基21-残基133的氨基酸序列和所述重链包含SEQ ID NO: 37的残基20-残基142的氨基酸序列； h.包含轻链和重链的抗体，所述轻链包含SEQID NO: 38的残基21-残基128的氨基酸序列和所述重链包含SEQ ID NO: 39的残基20-残基139的氨基酸序列；i.包含轻链和重链的抗体，所述轻链包含SEQID NO: 40的残基23-残基129的氨基酸序列和所述重链包含SEQ ID NO: 41的残基20-残基140的氨基酸序列；和 j.包含轻链和重链的抗体，所述轻链包含SEQ ID NO: 42的残基21-残基128的氨基酸序列和所述重链包含SEQ ID NO: 43的残基20-残基139的氨基酸序列。
8.一种分离的核酸分子，所述核酸分子编码包含至少一个选自⑶Rla、⑶R2a和⑶R3a的互补决定区(CDR)的多肽 其中⑶Rla包含氨基酸序列a bcdefghijklmnop q,其中氨基酸a选自赖氨酸、精氨酸或谷氨酰胺；氨基酸b选自丝氨酸或丙氨酸；氨基酸c是丝氨酸；氨基酸d是谷氨酰胺；氨基酸e选自丝 氨酸、甘氨酸或天冬氨酸；氨基酸f选自缬氨酸或异亮氨酸或者不存在；氨基酸g选自亮氨酸或苯丙氨酸或者不存在；氨基酸h选自苯丙氨酸或酪氨酸或者不存在；氨基酸i是丝氨酸或者不存在；氨基酸j是丝氨酸或者不存在；氨基酸k选自天冬酰胺，苏氨酸或者不存在；氨基酸I选自天冬酰胺，异亮氨酸或缬氨酸；氨基酸m选自赖氨酸、精氨酸、天冬酰胺或天冬氨酸；氨基酸η选自天冬酰胺或丝氨酸；氨基酸ο选自酪氨酸、天冬氨酸、色氨酸或天 冬酰胺；氨基酸P是亮氨酸；氨基酸q选自丙氨酸、甘氨酸或天冬酰胺； 其中⑶R2a包含氨基酸序列r s t u v w x，其中氨基酸r选自色氨酸、丙氨酸、缬氨酸、谷氨酸或甘氨酸；氨基酸s是丙氨酸；氨基酸t是丝氨酸、氨基酸u选自苏氨酸、丝氨酸或天冬氨酸；氨基酸V选自精氨酸或亮氨酸；氨基酸w选自谷氨酸、谷氨酰胺或丙氨酸；氨基酸X选自丝氨酸、天冬酰胺或苏氨酸； 其中⑶R3a包含氨基酸序列y z a’ b’ c’ d’ e’ f g’ h’，其中氨基酸y选自谷氨酰胺或亮氨酸；氨基酸z选自谷氨酰胺、天冬酰胺或精氨酸；氨基酸a’选自酪氨酸、组氨酸、丙氨酸或丝氨酸；氨基酸b’选自苯丙氨酸、酪氨酸、天冬氨酸、天冬酰胺或异亮氨酸；氨基酸c’选自丝氨酸、甘氨酸或天冬酰胺；氨基酸d’选自脯氨酸、酪氨酸、苏氨酸、苯丙氨酸、天冬氨酸、亮氨酸或色氨酸；氨基酸e’是脯氨酸；氨基酸f是脯氨酸或者不存在；氨基酸g’是色氨酸、亮氨酸、脯氨酸、酪氨酸或异亮氨酸；氨基酸h’是苏氨酸或天冬酰胺；和 其中所述多肽与抗体重链联合，能够结合肝细胞生长因子(HGF)。
9.一种分离的核酸分子，所述核酸分子编码包含至少一个选自⑶Rib、⑶R2b和⑶R3b的互补决定区(CDR)的多肽 其中⑶Rlb包含氨基酸序列a b c d e f g，其中氨基酸a是丝氨酸或者不存在；氨基酸b选自天冬氨酸或甘氨酸或者不存在；氨基酸c选自天冬氨酸、甘氨酸、丝氨酸、缬氨酸、苏氨酸或异亮氨酸；氨基酸d是酪氨酸；氨基酸e选自酪氨酸或甘氨酸；氨基酸f选自异亮氨酸、甲硫氨酸或色氨酸；氨基酸g选自组氨酸、天冬酰胺或丝氨酸； 其中⑶R2b包含氨基酸序列h ijklmnopqrstuvw x,其中氨基酸h选自色氨酸、酪氨酸、缬氨酸、天冬酰胺或谷氨酸；氨基酸i选自异亮氨酸、苯丙氨酸或缬氨酸；氨基酸j选自天冬酰胺、丝氨酸、色氨酸或酪氨酸；氨基酸k选自脯氨酸、丝氨酸、酪氨酸或组氨酸；氨基酸I选自天冬酰胺，丝氨酸或天冬氨酸；氨基酸m选自丝氨酸或甘氨酸；氨基酸η选自甘氨酸或丝氨酸或者不存在；氨基酸ο选自甘氨酸、苏氨酸、天冬氨酸、丝氨酸、异亮氨酸或天冬酰胺；氨基酸P选自苏氨酸、异亮氨酸或赖氨酸；氨基酸q选自天冬酰胺或酪氨酸；氨基酸r选自酪氨酸或组氨酸；氨基酸s选自丙氨酸或天冬酰胺；氨基酸t选自谷氨酰胺、天冬氨酸或脯氨酸；氨基酸u选自赖氨酸或丝氨酸；氨基酸V选自苯丙氨酸、缬氨酸或亮氨酸；氨基酸w选自谷氨酰胺或赖氨酸；氨基酸X选自甘氨酸或丝氨酸； 其中 CDR3b 包含氨基酸序列 y z a，b’ c’ d’ e’ f' g’ h’ i’ j’ k’ I’ m’ n’ o’p’ q’ r’，其中氨基酸y选自谷氨酸、天冬氨酸、丝氨酸或甘氨酸或者不存在；氨基酸z选自亮氨酸、谷氨酸、天冬氨酸、组氨酸、脯氨酸或甘氨酸或者不存在；氨基酸a’选自谷氨酸、酪氨酸或亮氨酸或者不存在；氨基酸b’选自亮氨酸、天冬酰胺，甘氨酸、组氨酸、酪氨酸或色氨酸或者不存在；氨基酸C，选自精氨酸、丝氨酸、谷氨酸、酪氨酸、甘氨酸或苯丙氨酸或者不存在；氨基酸d’是甘氨酸或者不存在；氨基酸e’选自色氨酸或酪氨酸或者不存在；氨基酸f’是天冬氨酸或者不存在；氨基酸g’选自丝氨酸或精氨酸或者不存在；氨基酸h’是丝氨酸或者不存在；氨基酸i’选自甘氨酸或酪氨酸或者不存在；氨基酸j’选自酪氨酸、谷氨酸或天冬氨酸或者不存在；氨基酸k’选自酪氨酸、苯丙氨酸或天冬氨酸或者不存在；氨基酸I’选自酪氨酸、天冬氨酸、组氨酸或色氨酸或者不存在；氨基酸m’选自酪氨酸、甘氨酸、天冬氨酸、脯氨酸或丝氨酸或者不存在；氨基酸η’选自甘氨酸、缬氨酸、酪氨酸或天冬氨酸或者不存在；氨基酸o’选自亮氨酸、丙氨酸、甘氨酸或酪氨酸或者不存在；氨基酸P’选自甲硫氨酸、苯丙氨酸或酪氨酸；氨`基酸q’是天冬氨酸；氨基酸r’选自缬氨酸、酪氨酸、异亮氨酸或脯氨酸；和 其中所述多肽与抗体轻链联合，能够结合HGF。
10.一种组合物，所述组合物包含权利要求1或2的分离的多肽、权利要求3的分离的特异性结合物或权利要求4-7中任一项的抗体，以及药物可接受载体。
【文档编号】G01N33/53GK103880955SQ201310572240
【公开日】2014年6月25日 申请日期:2004年7月16日 优先权日:2003年7月18日
【发明者】T.L.伯吉斯, A.考克森, L.L.格林, K.张 申请人:安姆根有限公司, 安姆根弗里蒙特公司