一种电镜生物样品批量组织处理装置及应用的制作方法
【专利摘要】本发明提供一种电镜生物样品批量处理装置，由样品提篮、提手、溶液槽、槽盖、细胞滤网、压环组成，样品提篮设有矩阵排列的编号小格，底部为筛网结构，样品提篮置于溶液槽内，细胞滤网置于小格内，其大小与编号小格相适，压环置于细胞滤网底部。本发明设计合理，制作简单，制作成本低廉，使用时大大节省了实验操作时间，可批量化制备各类生物电镜样品，包括块状组织样品及分散的细胞样品，降低使用成本，实现平行实验，可行性极高，从根本上解决了生物样品批量化处理问题。
【专利说明】一种电镜生物样品批量组织处理装置及应用 【技术领域】
[〇〇〇1] 本发明属于生物电子显微科学领域，涉及一种电子显微镜生物样品批量处理装 置，也适用于具有复杂换液步骤的样品的其他处理。 【背景技术】
[0002] 生物电子显微镜是生物学中研究细胞、组织超微结构最重要、常用的工具。它在生 物学的发展过程中占据重要的地位，目前各种细胞、组织的超微结构知识几乎都是由它提 供的。
[0003] 在生物电子显微科学领域中，生物样品的制备是极其关键的步骤，为现代生物学 和医学的基本技术之一。生物电镜样品的制备技术直接决定了样品质量，其步骤复杂且周 期长，包括取材、固定、脱水、渗透，透射电镜还包括包埋、聚合等计20步左右的操作。当需 要处理的样品量达到一定数量时，需要实验人员花费大量的时间和体力，而且量大后容易 增加出错率（电镜样品往往极小，容易丢失；脱水换液不及时造成干燥或吸收空气中的水份 而影响电镜下的观察结果)。
[0004] 针对复杂且耗时的生物电镜样品制作的问题，国内外很多实验室和专业厂商不断 推出各种创新或改良方法。最有代表性的是德国LeicaEMTP组织处理仪，样品处理可实现 全过程自动化，但由于售价很高（几十万元），且无法处理分散的细胞样品，国内少有实验 室购置使用。
[0005] 现多家开展对外服务的电镜工作室每批次需处理的样品量已达几十甚至上百，而 经济且易于操作的，适合常规实验室采用的样品批量制备装置却未见报道。
【发明内容】
[0006] 针对上述状况，本发明的目的是提供一种电镜生物样品批量处理装置，用于电镜 生物样品批量处理，既适用于组织块样品，也适用于细胞样品，从根本上解决了生物样品批 量化处理问题。
[0007] 本发明一种电镜生物样品批量处理装置，由样品提篮、提手、溶液槽、槽盖、细胞滤 网、压环组成.样品提篮设有矩阵排列的小格，小格具有编号；样品提篮底部为筛网结构， 筛网孔径小于常规电镜组织样品直径，即可使溶液顺畅流动，又使电镜组织样品不会掉出； 样品提篮两边设有提手，样品提篮置于溶液槽内，溶液槽尺寸略大于样品提篮，带有槽盖， 可防止样品吸收水分、试剂挥发等；细胞滤网的大小与样品提篮带编号的小格相适，为带孔 的亲水材质，使常规细胞无法通透而溶液可自由通透，专用于放置处理分散的细胞样品；压 环外径与样品提篮小格内径切合，压环置于细胞滤网底部，用于将细胞滤网压紧于样品提 篮小格中。
[0008] 样品提篮、提手，溶液槽，溶液槽盖，压环所用材质选用不与所用溶液发生反应的 聚丙烯PP ;细胞滤网所用材质选用聚丙烯PP所制的亲水无纺布。
[0009] 本发明的另一个目的是提供所述的装置在电镜生物样品批量处理中的应用，包括 组织块样品和细胞样品的批量处理。
[〇〇1〇] 使用时，计算好细胞样品份数，在相应的样品提篮小格中放置细胞滤网，以压环压 紧，（如无细胞样品则可省略）；在溶液槽中倒入第一步骤所需试剂，将样品提篮置于溶液槽 中，调整溶液量使之高于提篮底部并液面高于样品一定距离；将样品置于批量化样品提篮 中，其中分散的细胞样品置于细胞专用组件中，做好标记(注意保持样品置于相应溶液中， 不要干燥）；盖好溶液槽盖，置于所需温度条件下；待时间到，将溶液槽中溶液换成下一步骤 所需溶液，至纯包埋剂渗透之前步骤；将样品取出，纯包埋剂浸洗后置于装有包埋剂的包埋 管中室温渗透，聚合；本发明装置细胞滤网为一次性使用，其余部件洗涤后可重复使用。 [〇〇11] 本发明设计合理，制作简单，制作成本低廉，使用时大大节省了实验操作时间，可 批量化制备各类生物电镜样品，包括块状组织样品及分散的细胞样品，实现平行实验，可行 性极高。本发明装置用于电镜生物样品批量处理，降低使用成本，既适用于组织块样品，也 适用于细胞样品，从根本上解决了生物样品批量化处理问题。 【专利附图】
【附图说明】
[0012] 图1为装置的结构示意图。 图2为样品提篮的结构示意图。
[0013] 图3为样品提篮的背面结构示意图。
[0014] 图4为溶液槽的结构示意图。
[0015] 图5为细胞滤网与压环的结构示意图。
[0016] 图6是实施例2应用电镜生物样品批量组织处理装置所制备的肾组织样本。
[〇〇17] 图7是染色制备的肾脏电镜超薄切片样本比较，其中图A应用本发明结果，图B是 应用传统方法结果。 【具体实施方式】
[0018] 下面结合附图和实施例对本发明作进一步的说明。
[0019] 实施例一 参见图1-5, 一种电镜生物样品批量组织处理装置，由样品提篮1、提手2、溶液槽3、槽 盖4,细胞滤网5和压环6组成。样品提篮1设有矩阵排列的带编号小格，本实施例样品提 篮1设置6*10个正方形小格，方格边长6mm;样品提篮高10mm;样品提篮1底部为筛网结 构，筛网孔径小于常规电镜组织样品直径，本实施例选择筛网孔径0.3mm，使溶液顺畅流动， 而电镜组织样品不会掉出；样品提篮1两边设有提手2,便于拎取换液；样品提篮1置于溶 液槽3内，溶液槽3长70mm，宽45mm，高20mm，带有槽盖4,可防止样品吸收水分、试剂挥发 等。细胞专用滤网5用于放置细胞样品，按需要数量置于样品提篮1的小格中，压环6外径 与样品提篮小格内径切合，压环置于细胞滤网5底部，用于将细胞滤网5压紧于样品提篮小 格中，本实例压环6外径为5. 2mm。
[0020] 样品提篮1、提手2,溶液槽3,溶液槽盖4,压环6所用材质选用不与所用溶液发生 反应的聚丙烯PP，细胞专用滤网5所用材质选用聚丙烯pp所制亲水无纺布。
[0021] 使用时步骤如下： (1)计算好细胞样品份数，将细胞专用滤网5按细胞样品份数放置于相应的样品提篮 小格中，以压环6压紧，如样品均为组织块，则省去此步骤； (2) 在溶液槽3中倒入第一步骤所需试剂； (3) 将样品提篮1置于溶液槽3中，调整溶液量使之高于样品提篮1底部，并高于样品 3-4mm左右； (4) 将样品置于样品提篮1中的小格中，分散的细胞样品用移液器吸取置于细胞专用 组件中，做好标记(注意保持样品置于相应溶液中，不要干燥）； (5) 盖好溶液槽盖4,置于所需温度条件下； (6) 待时间到，将溶液槽3中溶液换成下一步骤所需溶液； (7) 重复第4、5步操作，至丙酮/包埋剂渗透步骤； (8) 将样品取出，纯包埋剂浸洗后置于装有包埋剂的包埋管中室温渗透，聚合。
[0022] 本发明装置洗涤后可重复使用。本发明装置用于电镜生物样品批量处理。
[0023] 实施例二 使用本电镜生物样品批量处理装置及传统电镜生物样品处理装置处理批量样品，步骤 如下： (1) 使用本电镜生物样品批量组织处理装置，以实施例1步骤处理60个电镜生物样本 肾脏组织块，作为批量装置组； (2) 使用传统处理装置印pendorf管或包埋管处理60个电镜生物样本肾脏组织块，作 为对照组； (3) 电子显微镜检测比较两组方法制作样品效果，批量装置组和对照组均结构清晰，分 辨率高。参见图6是应用电镜生物样品批量组织处理装置所制备的肾组织样本，电镜下其 淀粉样变的特征性丝状结构清晰可见。
[0024] 图7是分别应用批量组织处理装置（A)、传统方法（B)所染色制备的肾脏电镜超薄 切片样本，电镜下基底膜电子致密物结构均清晰可见。
[0025] (4)比较两组方法制作样品各个步骤中人工操作时间，批量装置组相对对照组而 言每一步骤均节省大量人工操作时间，利于大批量操作。 表1
【权利要求】
1. 一种电镜生物样品批量处理装置，其特征在于，由样品提篮（1)、提手（2)、溶液槽 (3)、槽盖（4)，细胞滤网（5)和压环（6)组成，样品提篮（1)设有矩阵排列的带编号小格，样 品提篮（1)底部为筛网结构，筛网孔径小于常规电镜组织样品直径，样品提篮（1)两边设有 提手（2)，样品提篮（1)置于溶液槽（3)内，溶液槽3带有槽盖（4)，细胞滤网（5)置于小格 内，其大小与样品提篮（1)设有矩阵排列的带编号小格相适，压环（6)置于细胞滤网（5)底 部。
2. 根据权利要求1所述的一种电镜生物样品批量处理装置，其特征在于，压环（6)外径 与样品提篮小格内径切合。
3. 根据权利要求1所述的一种电镜生物样品批量处理装置，其特征在于，样品提篮 (1)、提手（2)，溶液槽（3)，溶液槽盖（4)，压环（6)所用材质选用不与所用溶液发生反应的 聚丙烯PP ;细胞滤网（5)所用材质选用聚丙烯pp所制的亲水无纺布。
4. 根据权利要求1所述的一种电镜生物样品批量处理装置在电镜生物样品批量处理 中应用，所述生物样品为组织块样品或细胞样品。
【文档编号】G01N1/28GK104062160SQ201410297642
【公开日】2014年9月24日 申请日期:2014年6月29日 优先权日:2014年6月29日
【发明者】王贝贝, 平泽鹏, 洪健 申请人:浙江大学