液相色谱串联质谱法测定香精香料中香叶醇的方法

液相色谱串联质谱法测定香精香料中香叶醇的方法
【专利摘要】本发明涉及一种香精香料中香叶醇的检测方法，该方法采用液相色谱串联质谱法测定，采用外标法定量。该检测方法具有检测时间短、操作简便、灵敏度高、回收率高及重复性好等优点，该方法色谱条件使得香叶醇的色谱峰与杂质色谱峰分离较好，并且具有较好的线性范围，检测限为0.001μg/mL，回收率在90.8％～98.3％之间，相对标准偏差RSD<5％(n＝6)。
【专利说明】
【技术领域】
[0001] 本发明属于化学检测【技术领域】，涉及香叶醇的测定方法，具体地说是一种通过液 相色谱-串联质谱法快速测定香精香料中香叶醇的方法。 液相色谱串联质谱法测定香精香料中香叶醇的方法

【背景技术】
[0002] 香叶醇（Geraniol，反-3, 7-二甲基-2, 6-辛二烯-1-醇）别名栊牛儿醇、香天竺 蔡醇，是一种单萜烯醇，天然存在于玫瑰草油（含量80 %左右）、香叶油、茉莉油等250多 种植物中，具有类似玫瑰花香，是香料的常用主香剂，广泛应用于药物、烟草、食品配料等领 域。在卷烟香味中起到重要的作用，是最为常见的烟用香料，可以增加卷烟的玫瑰香气、甜 香,过多则会产生皂香和花香。
[0003] 目前，对香叶醇的检测方法主要是气质联用法（GC-MS)。但香精香料样品成分复 杂，用气质联用法（GC-MS)将目标物和干扰物基线分离需要较长的分析时间，且前处理步 骤繁琐。
[0004] 近年来，随着液相色谱串联质谱法（LC-MS/MS)技术的发展，LC-MS/MS技术在化合 物分析中得到广泛的应用。液相色谱串联质谱法（LC-MS/MS)分析技术无论在灵敏度上还 是选择性上都具有明显的优势，且分析时间较短。检测香精香料中香叶醇的LC-MS/MS方法 未见报导。


【发明内容】

[0005] 本发明的目的在于提供一种准确检测香精香料中香叶醇含量的方法。
[0006] 本发明的目的是通过以下技术方案来实现的：
[0007] -种香精香料中香叶醇的检测方法，该方法采用液相色谱串联质谱法测定，采用 外标法定量。
[0008] 在一个优选的实施方案中，发明所述的香精香料中香叶醇的检测方法包括以下步 骤：
[0009] (1)标准溶液的配制；称取香叶醇标准品，用甲醇配制成具有浓度梯度的香叶醇 标准工作溶液；
[0010] (2)样品溶液的制备：使用甲醇萃取香精香料样品中的香叶醇，过滤后得到样品 溶液；
[0011] (3)液相色谱-串联质谱分析：利用液相色谱-串联质谱仪分别对标准溶液和样 品溶液进行检测分析；
[0012] (4)绘制标准曲线，计算烟用香精香料中香叶醇的含量。
[0013] 在一个优选的实施方案中，发明所述的香精香料中香叶醇的检测方法，其中所述 的香精香料为烟用香精香料，优选地，所述的香精香料样品使用甲醇萃取样品中的香叶醇； 优选地，萃取用的甲醇为浓度为8?12% (v/v)甲醇水溶液，更优选地，萃取用的甲醇为浓 度为10% (v/v)甲醇水溶液。
[0014] 在一个优选的实施方案中，发明所述的香精香料中香叶醇的检测方法，其中萃取 的方式为超声萃取。
[0015] 在一个优选的实施方案中，发明所述的香精香料中香叶醇的检测方法，其中步骤 (2)所述的样品溶液的制备过程如下：称取适量待测香精香料样品，加入适量甲醇水溶液， 室温下超声萃取，过滤后，得到样品溶液。优选的过滤方式采用微孔滤膜过滤，例如〇. 22 μ m 有机滤膜或〇. 45 μ m有机滤膜。
[0016] 在一个具体的实施方案中，所述香精香料样品的制备方法具体为：称取0. lg左 右试样，置于25mL锥形瓶中；加入10% (v/v)甲醇水溶液lOmL,室温下超声30min,用 0. 22 μ m有机滤膜过滤后直接进样。
[0017] 在一个优选的实施方案中，发明所述的香精香料中香叶醇的检测方法，其中液相 色谱的分析条件为以下（i)至（vi)中的一项或多项：
[0018] ⑴采用C18色谱柱，
[0019] 优选地，所述的色谱柱的规格为50mmX 2. 1mm i. d.，2. 6 μ m粒径，
[0020] (ii)色谱柱温度为28?32°C，优选为30°C，
[0021] (iii)进样量为8?12 μ L，优选为10 μ L，
[0022] (iv)流动相：乙腈-乙酸铵-乙酸-水溶液，
[0023] 优选的流动相：A为乙腈，B为5mm〇L/L乙酸铵溶液（其中含有0. 1% (v/v)乙酸）， 采用等度洗脱程序，体积比50 :50，
[0024] (v)流速为 0· 1 ?0· 3ml/min，优选为 0· 2ml/min,
[0025] (vi)洗脱时间约 lOmin。
[0026] 在一个优选的实施方案中，发明所述的香精香料中香叶醇的检测方法，其中质谱 的分析条件为以下（i)至（iii)中的一项或多项：
[0027] (i)用电喷雾离子阱串联质谱测定香叶醇；
[0028] (ii)离子源：电喷雾电离源（ESI);
[0029] (iii)以选择离子对定性，优选的离子对为：子离子73. 1 (m/z),母离子155. 3 (m/ z)。
[0030] 在一个具体的实施方案中，发明所述的香精香料中香叶醇的检测方法，其中液 相色谱的分析条件为：色谱柱采用菲罗门C 18液相色谱柱，色谱柱的规格为50mmX2. 1mm 1. d.，2. 6 μ m粒径，色谱柱温度为30°C，进样量为10 μ L，流速为0. 2ml/min ;流动相：A为乙 腈，B为5mm〇L/L乙酸铵溶液（其中还含有0. 1% (v/v)乙酸），采用等度洗脱程序，体积比 50 :50,洗脱时间总共约lOmin。
[0031] 在一个优选的实施方案中，发明所述的香精香料中香叶醇的检测方法，其中质谱 的分析条件为：扫描方式：正离子扫描；检测方式：多反应监测（MRM);电喷雾电压：5500V ; 离子源温度：700°C ;辅助气Gasl压力：60psi ;辅助气Gas2压力：50psi ;去簇电压（DP): 40V ;碰撞能（CE) :20V。
[0032] 在一个具体的实施方案中，发明所述的香精香料中香叶醇的检测方法，其中所述 的质谱的分析条件为离子源：电喷雾电离源（ESI);扫描方式：正离子扫描；检测方式：多 反应监测（MRM);电喷雾电压：5500V ;离子源温度：700°C;辅助气Gasl压力：60psi ;辅助气 Gas2压力：50psi ;去簇电压（DP) :40V ;碰撞能（CE) :20V ;离子对选择为：定性离子对m/z 155. 3>73· 1，155. 3>127· 1，定量离子对 m/z 155. 3>73· 1。
[0033] 在一个优选的实施方案中，发明所述的香精香料中香叶醇的检测方法，其中外标 法所用的标准溶液的配制步骤如下：称取〇. lg香叶醇，精确至〇. 〇〇〇lg，用甲醇溶解后转 移至1000mL容量瓶中并定容，定为标准储备液；分别移取0. 01mL，0. 05mL，0. lmL，0. 5mL， 1. OmL的标准储备液到lOOmL容量瓶中，用浓度为10% (v/v)的甲醇水溶液定容，则香叶醇 的浓度为 〇. 01 U g/mL、0. 05 μ g/mL、0. 1 μ g/mL、0. 5 μ g/mL、1. 0 μ g/mL，得到香叶醇的系列 标准溶液。
[0034] 在一个优选的实施方案中，发明所述的香精香料中香叶醇的检测方法，其中香叶 醇含量的计算方法为：首先以标准溶液所检测出的目标物的色谱峰面积对其相应浓度进行 回归分析，得到标准曲线；然后将样品溶液检出的目标物的色谱峰面积，代入标准曲线，即 得到样品中的香叶醇浓度，由此即可计算出烟用香精香料中香叶醇的含量。
[0035] 本发明的检测方法对样品的处理方法和色谱条件进行了优化，达到了以下效果：
[0036] (1)检测时间短：采用本发明的检测方法测定烟用香精香料中香叶醇的含量，检 测周期仅需要10分钟左右。
[0037] (2)本发明的检测方法具有操作简便、灵敏度高、回收率高及重复性好的优点，本 发明的检测方法的色谱条件能够使香叶醇的色谱峰与杂质色谱峰分离较好，并且具有较好 的线性相关性，检测限为0. 001 μ g/mL，平均回收率为90. 8%?98. 3%，平均相对标准偏差 RSD〈5% (η = 6)。

【专利附图】

【附图说明】
[0038] 图1为本发明的检测方法的流程图；
[0039] 图2为实施例1中浓度为1 μ g/mL的标准溶液中香叶醇的色谱图；
[0040] 图3为实施例1中样品溶液的色谱图；
[0041] 图4为香叶醇的质谱图；
[0042] 图5为实施例1获得的标准曲线。

【具体实施方式】
[0043] 下面将结合实施例对本发明的实施方案进行详细描述，但是本领域技术人员将会 理解，下列实施例仅用于说明本发明，而不应视为限定本发明的范围。实施例中未注明具体 条件者，按照常规条件或制造商建议的条件进行。所用试剂或仪器未注明生产厂商者，均为 可以通过市购获得的常规产品。
[0044] 实施例1
[0045] 本实施例对烟用香精香料中香叶醇含量进行检测，检测方法如下所述，所述检测 方法的流程图如图1所示。
[0046] (1)称取〇· lg香叶醇（分析纯），精确至〇· 〇〇〇lg，用甲醇溶解后转移至l〇〇〇mL 容量瓶中并定容，定为标准储备液；分别移取〇. 01mL，0. 05mL，0. lmL，0. 5mL，1. OmL的标准 储备液到l〇〇mL容量瓶中，用10% (v/v)甲醇水溶液定容，则香叶醇的浓度为0.01 μ g/mL、 0. 05 μ g/mL、0. 1 μ g/mL、0. 5 μ g/mL、1. 0 μ g/mL，得到香叶醇的系列标准溶液。标准溶液避 光4°C保存，取用时放置于常温下，达到常温后方可使用。每周做一次标线；
[0047] (2)样品溶液的制备：称取0. lg左右的待测烟用香精香料样品，置于25mL维形 瓶中；准确加入10% (v/v)甲醇水溶液10mL，室温下超声30min,用0. 22μηι有机滤膜过 滤后，得到样品溶液，于4°C保存待分析；
[0048] (3)色谱分析条件为采用菲罗门C18液相色谱柱，色谱柱的规格为50mmX2. 1mm i. d.，2. 6 μ m粒径。色谱柱温度为30°C，进样量为10 μ L，流速为0. 2ml/min ;流动相：A为 乙腈，B为5mm〇L/L乙酸铵溶液（该乙酸铵溶液中还含有0. 1% (v/v)的乙酸），采用等度 洗脱程序，体积比50 :50。洗脱时间总共lOmin。浓度为1 μ g/mL的标准溶液的色谱分析结 果见图2 ;样品溶液的色谱分析结果见图3 ;
[0049] (4)质谱分析条件为离子源：电喷雾电离源（ESI);扫描方式：正离子扫描；检 测方式：多反应监测（MRM);电喷雾电压：5500V;离子源温度：700°C ;辅助气Gasl压力： 60psi ;辅助气Gas2压力：50psi ;去簇电压（DP) :40V ;碰撞能（CE) :20V。香叶醇的质谱 图见图4。依据碎片丰度高、选择性高的原则顺序，确定离子对选择为：定性离子对m/z 155. 3>73· 1，155. 3>127· 1，定量离子对 m/z 155. 3>73· 1。
[0050] (4)烟用香精香料中香叶醇含量的计算：首先以标准溶液所检测出的目标物的色 谱峰面积对其相应浓度进行回归分析，得到标准曲线（见图5);与标准曲线相对应的回归 方程、相关系数等数据如表1所示。
[0051] 表1香叶醇的标准曲线和检测限
[0052]

【权利要求】
1. 一种香精香料中香叶醇的检测方法，该方法采用液相色谱串联质谱法测定，采用外 标法定量。
2. 权利要求1的检测方法，包括以下步骤： (1) 标准溶液的配制；称取香叶醇标准品，用甲醇配制成具有浓度梯度的香叶醇标准 工作溶液； (2) 样品溶液的制备：使用甲醇萃取香精香料样品中的香叶醇，过滤后得到样品溶液； (3) 液相色谱-串联质谱分析：利用液相色谱-串联质谱仪分别对标准溶液和样品溶 液进行检测分析； (4) 绘制标准曲线，计算烟用香精香料中香叶醇的含量。
3. 权利要求2的检测方法，其中所述的香精香料为烟用香精香料， 优选地，所述的香精香料样品使用甲醇萃取样品中的香叶醇； 优选地，萃取用的甲醇为浓度为8?12% (v/v)甲醇水溶液，更优选地，萃取用的甲醇 为浓度为10% (v/v)甲醇水溶液。
4. 权利要求2的检测方法，其中萃取的方式为超声萃取。
5. 权利要求2的检测方法，其中所述的香精香料样品的制备过程如下：称取适量待测 香精香料样品，加入适量甲醇水溶液，室温下超声萃取，过滤后，得到样品溶液。
6. 权利要求2的检测方法，其中液相色谱的分析条件为以下（i)至（vi)中的一项或多 项： ⑴采用C18色谱柱， 优选地，所述的色谱柱的规格为50mmX 2. 1mm i. d.，2. 6 μ m粒径， (ii) 色谱柱温度为28?32°C，优选为30°C， (iii) 进样量为8?12 μ L，优选为10 μ L， (iv) 流动相：乙腈-乙酸铵-乙酸-水溶液， 优选的流动相：A为乙腈，B为5mm〇L/L乙酸铵溶液（含0. 1% (v/v)乙酸），采用等度 洗脱程序，体积比50 :50， (v) 流速为 〇· 1 ?〇· 3ml/min，优选为 0· 2ml/min， (vi) 洗脱时间约l〇min。
7. 权利要求2的检测方法，其中质谱的分析条件为以下（i)至（iii)中的一项或多项： (i) 用电喷雾离子阱串联质谱测定香叶醇， (ii) 离子源：电喷雾电离源（ESI); (iii) 以选择离子对定性，优选的离子对为：定性离子对m/z 155. 3>73. 1， 155. 3>127· 1，定量离子对 m/z 155. 3>73· 1。
8. 权利要求7的检测方法，其中质谱的分析条件为：扫描方式：正离子扫描；检测方 式：多反应监测（MRM);电喷雾电压：5500V ;离子源温度：700°C ;辅助气Gasl压力：60psi ; 辅助气Gas2压力：50psi ;去簇电压（DP) :40V ;碰撞能（CE) :20V。
9. 权利要求2或6的检测方法，其中色谱分析条件为：色谱柱采用菲罗门C18液相色谱 柱，色谱柱温度为30°C，进样量为10 μ L，流速为0. 2ml/min ;流动相：A为乙腈，B为5mmoL/ L乙酸铵溶液（含0. 1%乙酸），采用等度洗脱程序，体积比50 :50,洗脱时间总共约lOmin。
10. 权利要求2的检测方法，其中外标法所用的标准溶液的配制步骤如下：称取0. lg 香叶醇，精确至o. OOOlg，用甲醇溶解后转移至lOOOmL容量瓶中并定容，定为标准储备液； 分别移取〇. 01mL，0. 05mL，0. lmL，0. 5mL，1. OmL的标准储备液到100mL容量瓶中，用浓度 为10% (v/v)甲醇水溶液定容，则香叶醇的浓度为0. 01yg/mL、0. 05yg/mL、0. lyg/mL、 0. 5 μ g/mL、1. 0 μ g/mL，得到香叶醇的系列标准溶液。
【文档编号】G01N30/88GK104101677SQ201410383802
【公开日】2014年10月15日 申请日期:2014年8月7日 优先权日:2014年8月7日
【发明者】邓其馨, 黄朝章, 张建平, 苏明亮, 刘江生, 谢卫 申请人:福建中烟工业有限责任公司