一种乌拉尔甘草皂苷a的含量测定方法
【专利摘要】本发明公开了一种乌拉尔甘草皂苷A的含量测定方法，包括（1）设置色谱条件；（2）对照品溶液的制备；（3）供试品溶液的制备；（4）精密吸取对照品溶液和供试品溶液各20μl，注入液相色谱仪，记录色谱图，通过高效液相色谱法测量得到乌拉尔甘草皂苷A的含量。本发明采用高效液相色谱法（HPLC）来测定乌拉尔甘草皂苷A的含量，其具有专一性，能够准确、简便，快捷地测定乌拉尔甘草皂苷的含量。且采用梯度洗脱进行分析，有较好的分离效果，还能够缩短分析时间。经过试验表明，所测成分分离度，线性关系，重现性，精密度，稳定性，回收率均较好。
【专利说明】
一种乌拉尔甘草皂苷A的含量测定方法
【技术领域】
[0001]本发明涉及一种含量测定方法，尤其是涉及一种乌拉尔甘草皂苷A的含量测定方法，属于化学成分检测【技术领域】。
【背景技术】
[0002]甘草为豆科植物乌拉尔甘草Glycyrrhiza uralensis Fisch.、胀果甘草G.1nflata Bat.、光果甘草G.glabra L.的干燥根及根莖。其味甘,性平，归心、肺、脾、胃经。具有补脾益气、清热解毒、祛痰止咳、缓急止痛、调和诸药的功效。药理研究表明，甘草具有抗氧化、抗病毒、抗抑郁、抗炎、抗肾炎以及保肝活性。甘草中三萜皂苷是其主要的活性物质基础，主要由I分子的五环三萜苷元与2分子的葡萄糖醛酸构成。相关研究表明，这些主要的皂苷类成分具有保肝、抗癌、抗炎、抗病毒以及神经保护活性等作用。对甘草中皂苷类成分进行了分离得到14个化合物,分别鉴定为uralsaponin C (I )、uralsaponin D
[2]、licorice-saponinA3 (3)、uralsaponin F (4)>22 β -acetoxyl-glycyrrizin (5)、24-hydroxyl-licorice-saponin E2 (6)、 licorice-saponin E2 (7)、 licorice-saponinG2 (8)、22β-acetoxyl- glyrrhaldehyde (9)>3 β-0-[β-D-glucuronopyranosyl-(1 — 2)-β -D-glucuronopyranosyl]-glycyrretol (10)、araboglycyrrhizin (11)、licorice-saponin J2 (12)、甘草酸(glycyrrhizin, 13)、单葡糖醒酸基甘草次酸(glycyrrhetic acid monoglucuronide, 14)。其中化合物10即为乌拉尔甘草阜苷A。
[0003]现有专利和文献资料中仅有乌拉尔甘草的鉴别和成分研究的报道，如《乌拉尔甘草中皂甙的研究》和《乌拉尔甘草皂苷类成分研究》以及申请号为201310231850.8的专利《一种乌拉尔甘草与胀果甘草种子的鉴定方法》，并无对乌拉尔甘草皂苷A的含量测定的方法。
【发明内容】
[0004]本发明所要解决的技术问题是，提供一种重现性、精密度、稳定性均有较大优势的乌拉尔甘草皂苷A的含量测定方法。
[0005]为解决上述技术问题，本发明采用的技术方案为:
一种乌拉尔甘草皂苷A的含量测定方法，其特征在于，包括以下步骤:
Cl)设置色谱条件:室温，相对湿度25?40% ;以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，以乙腈为流动相A，以浓度为1%的冰醋酸溶液为流动相B，按下表中的规定进行梯度洗脱，流速:0.8?1.2ml/min,柱温 25?40°C，检测波长 250?257nm ；
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(2)对照品溶液的制备:精密称取乌拉尔甘草皂苷A对照品，加浓度为50%-100%的乙醇溶解制成对照品溶液；
(3)供试品溶液的制备:称取乌拉尔甘草粗提物，加浓度为50%-100%的乙醇，超声溶解5?20分钟，放冷，即得；
(4)测定法:精密吸取对照品溶液和供试品溶液各20μ 1，注入液相色谱仪，记录色谱图，通过高效液相色谱法测量得到乌拉尔甘草皂苷A的含量。
[0006]进一步，步骤(I)中所述的室温为20°C，相对湿度为35%，流速为lml/min ;柱温为30°C，检测波长为252nm。
[0007]步骤(I)中所述的梯度洗脱按下表规定进行:
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[0008]步骤(2)中所述的对照品溶液的浓度为0.1 "0.5mg/ml,优选为0.2mg/ml。
[0009]步骤(2)中所述的乙醇的浓度优选为80%。
[0010]步骤(3)中所述的供试品溶液的浓度为0.2?2mg/ml,优选为lmg/ml。
[0011]此外，步骤(3)中所述的超声时间优选为lOmin。
[0012]本发明的有益效果为:本发明采用高效液相色谱法(HPLC)来测定乌拉尔甘草皂苷A的含量，其具有专一性，能够准确、简便，快捷地测定乌拉尔甘草皂苷的含量。且采用梯度洗脱进行分析，有较好的分离效果，还能够缩短分析时间。经过试验表明，所测成分分离度，线性关系，重现性，精密度，稳定性，回收率均较好。
【具体实施方式】
[0013]下面给出本发明的具体实施例，详细描述本发明的技术特征。
[0014]下述实施例中检测仪器:岛津高效液相色谱仪，包括LC 1ATvp plus 二元泵，SPD1Avp plus紫外检测器，LC-solut1n色谱工作站。乙腈为色谱纯,水为超纯水,其余试剂均为分析纯。乌拉尔甘草粗提物由江苏天晟药业有限公司提供，乌拉尔甘草皂苷A对照品由江苏天晟药业有限公司研发中心提供，其中，乌拉尔甘草皂苷A经1H，13C鉴定，HPLC归一化纯度为98%。
[0015]实施例1
I色谱条件与系统适应性
色谱柱:C18色谱柱(Agilent TC-C18 (2) 4.6 X 250mm, 5 μ m);以乙腈为流动相A,以1%冰醋酸溶液为流动相B，按下表中的规定进行梯度洗脱，流速:lml/min,柱温30°C，检测波长252nm，
【权利要求】
1.一种乌拉尔甘草皂苷A的含量测定方法，其特征在于，包括以下步骤: Cl)设置色谱条件:室温，相对湿度25~40% ;以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，以乙腈为流动相A，以浓度为1%的冰醋酸溶液为流动相B，按下表中的规定进行梯度洗脱，流速:0.8~1.2ml/min,柱温 25~40°C，检测波长 250~257nm，
(2)对照品溶液的制备:精密称取乌拉尔甘草皂苷A对照品，加浓度为50%-100%的乙醇溶解制成对照品溶液； (3)供试品溶液的制备:称取乌拉尔甘草粗提物，加浓度为50%-100%的乙醇，超声溶解5~20分钟，放冷，即得； (4)测定法:精密吸取对照品溶液和供试品溶液各20μ 1，注入液相色谱仪，记录色谱图，通过高效液相色谱法测量得到乌拉尔甘草皂苷A的含量。
2.根据权利要求1所述的一种乌拉尔甘草皂苷A的含量测定方法，其特征在于，步骤(I)中所述的室温为20°C，相对湿度为35%，流速为lml/min ;柱温为30°C，检测波长为252nm。
3.根据权利要求1所述的一种乌拉尔甘草皂苷A的含量测定方法，其特征在于，步骤(O中所述的梯度洗脱按下表规定进行:
4.根据权利要求1所述的一种乌拉尔甘草皂苷A的含量测定方法，其特征在于，步骤(2)中所述的对照品溶液的浓度为0.1~0.5mg/ml。
5.根据权利要求1或4所述的一种乌拉尔甘草皂苷A的含量测定方法，其特征在于，步骤(2)中所述的对照品溶液的浓度为0.2mg/ml。
6.根据权利要求1所述的一种乌拉尔甘草皂苷A的含量测定方法，其特征在于，步骤(2)中所述的乙醇的浓度为80%。
7.根据权利要求1所述的一种乌拉尔甘草皂苷A的含量测定方法，其特征在于，步骤(3)中所述的供试品溶液的浓度为0.2?2mg/ml。
8.根据权利要求1或7所述的一种乌拉尔甘草皂苷A的含量测定方法，其特征在于，步骤(3)中所述的供试品溶液的浓度为lmg/ml。
9.根据权利要求1所述的一种乌拉尔甘草皂苷A的含量测定方法，其特征在于，步骤(3)中所述的超声时间为lOmin。
【文档编号】G01N30/02GK104198612SQ201410473844
【公开日】2014年12月10日 申请日期:2014年9月17日 优先权日:2014年9月17日
【发明者】易铭, 金显友, 张宇, 季浩 申请人:江苏天晟药业有限公司