同时检测独一味中环烯醚萜苷、苯乙醇苷、黄酮、咖啡酰类成分的方法
【专利摘要】本发明提供了同时检测独一味中环烯醚萜苷、苯乙醇苷、黄酮、咖啡酰类成分的方法。本发明检测方法中，出峰数量较多，分离度良好，基线平稳，能够对独一味进行有效检测，为保障药材质量提供给了新的选择。本发明首次在同一色谱条件下检测了上述环烯醚萜苷、苯乙醇苷、黄酮及咖啡酰4类成分，共指认了7个具体化合物，可更全面更准确地用于独一味药材的质量控制。
【专利说明】同时检测独一味中环婦離瞄音、苯乙醇音、黄鋼、咖啡醜类 成分的方法
【技术领域】
[0001] 本发明涉及同时检测独一味中环帰離聰巧、苯己醇巧、黄丽、咖啡醜类成分的方 法。
【背景技术】
[0002] 独一味Lamio地IomiS rotata炬enth. ) Kudo系唇形科独一味属植物，是重要的青 藏高原药用植物和常用大宗藏药，为一级瀬危藏药品种W，《四部医典》和《晶珠本草》中记 载本品有强筋骨，干黄水，止痛之功。现代临床用于活血止血、巧风止痛，广泛治疗跌打损 伤、风湿瘍痛、外科手术后的刀口疼痛、出血等症，对癌症疼痛亦有很好的抑制作用，且无成 癒性，开发前景极为广阔。我国现有生产含独一味及其提取物的现代制剂逾20种，如独一 味胶囊、奇正消痛贴等知名品种。独一味药材来源全部依靠野生资源，近年来由于需求量剧 增，连年过度采收造成可采资源急剧下降，为了保护日益减少的独一味野生资源，2010年版 中国药典将其入药部位由全草修订为地上部分 [2]。
[0003] 现代研究表明，独一味的活性成分主要有3类成分：环帰離聰巧，具有很好的镇痛 6^、止血、促凝血作用W ;苯己醇巧和黄丽均具有镇痛活性然而，现有关于独一味药材 质量控制的报道多为采用HPLC法测定其中1?2类成分。如药典标准只测定了独一味地 上部分中山檐巧甲醋和8-0-己醜山檐巧甲醋该2种环帰離聰巧的含量;潘正W等同时 测定了独一味根中4种环帰離聰巧和2种苯己醇巧；何映霞W等同时测定了独一味地上部 分中2种苯己醇巧和2种黄丽。尚未见同时测定独一味中3类W上成分的报道。
【发明内容】
[0004] 为了进一步完善独一味的质量控制标准，本发明拟采用HPLC法建立独一味的多 指标含量测定方法，同时测定环帰離聰巧、苯己醇巧、黄丽及咖啡醜4类成分中部分化合物 的含量，希望此方法能弥补现有研究的不足，进一步完善独一味的质量控制标准，为该药材 的合理利用提供科学依据。
[0005] 本发明提供了同时检测独一味中环帰離聰巧、苯己醇巧、黄丽、咖啡醜类成分的方 法，它包括如下操作步骤：
[000引 （1)取待检药材，W甲醇或含水甲醇提取，制备供试品溶液；
[0007] (2)选择山檐巧甲醋、8-0-己醜山檐巧甲醋、绿原酸、连翅醋巧B、麦角留巧、芦了 和木犀草巧为对照品，制备对照品溶液；
[0008] (3)分别将对照品、供试品溶液注入高效液相色谱仪中，根据外标法检测独一味中 上述7种成分即可，色谱条件如下：
[0009] 色谱柱：十八焼基键合娃胶为填料
[0010] 检测波长；山檐巧甲醋、8-0-己醜山檐巧甲醋检测波长为238nm ;绿原酸、连翅醋 巧B和麦角留巧检测波长为330nm ;芦下和木犀草巧检测波长为350nm ;
[0011] 流动相：流动相为A ;己膳-B ;0. I %?0. 3 %磯酸水溶液，梯度洗脱程序；0? 15min，12%?12% A ;15 ?20min，12%?20. 5% A ;20 ?30min，20. 5%?20. 5% Ao
[0012] 本发明需要指出，由于独一味中所含的黄丽类成分和苯己醇巧类具有相似的色谱 保留行为，将该两大类成分完全分离具有较大难度，梯度条件变化时，该两类成分的多个色 谱峰相对保留时间变化较大，甚至出现色谱峰位置的互换，因此在同一色谱条件下实现独 一味中的黄丽类成分和苯己醇巧类成分全部达到基线分离，实现对单一成分的含量测定是 难点。本发明所建立的方法可同时分离测定连翅醋巧B、芦下、麦角留巧和木犀草巧该4个 较难分离的成分。目前公开的独一味色谱条件，均不能实现同时对本发明中的7种成分进 行含量测定。药典条件仅仅测定其中的两个环帰離聰巧类成分；山檐巧甲醋和8-0-己醜山 檐巧甲醋。
[0013] 进一步地，步骤（1)中，所述含水甲醇中甲醇浓度为50?80 % v/v，优选为60 % v/v。
[0014] 更进一步地，步骤（1)中，提取的方法选自回流、超声、浸溃或渗漉。
[0015] 进一步地，步骤（2)中，磯酸水溶液浓度为0. 1%。
[001引 进一步地，所述色谱柱的尺寸为4. 6mmX 250mm，5 Ji m。
[0017] 更进一步地，色谱柱柱温为30 +2°C。
[0018] 本发明检测方法中，出峰数量较多，分离度良好，基线平稳，能够对独一味进行有 效检测，为保障药材质量提供给了新的选择。本发明首次在同一色谱条件下检测了上述环 帰離聰巧、苯己醇巧、黄丽及咖啡醜4类成分，共指认了 7个具体化合物，可更全面更准确地 用于独一味药材的质量控制。
[0019] W下通过实施例形式的【具体实施方式】，对本发明的上述内容再作进一步的详细说 明。但不应将此理解为本发明上述主题的范围仅限于W下的实例。凡基于本发明上述内容 所实现的技术均属于本发明的范围。
【专利附图】
【附图说明】
[0020] 图1对照品（A)及独一味地上部分样品做色谱图，其中，1.山檐巧甲醋；2.绿 原酸；3. 8-0-己醜山檐巧甲醋；4.连翅醋巧B点芦下；6.麦角留巧；7.木犀草巧
[00引]图2对比例条件下的独一味HPLC色谱图，其中，3.胡麻属巧、4.山檐巧甲醋、 5.绿原酸、8.马钱巧、9. 8-0-己醜山檐巧甲醋、10.连翅醋巧B、ll.木犀草巧、12.麦角留巧
【具体实施方式】
[0022] 实施例1本发明检测方法
[002引 （1)取待检独一味药材，W 60% v/v甲醇提取，制备供试品溶液；
[0024] 似选择山檐巧甲醋、8-0-己醜山檐巧甲醋、绿原酸、连翅醋巧B、麦角留巧、芦下 和木犀草巧为对照品，制备对照品溶液；
[0025] (3)分别将对照品、供试品溶液注入高效液相色谱仪中，根据外标法检测独一味中 上述7种成分即可，色谱条件如下：
[0026] 色谱柱：十八焼基键合娃胶为填料
[0027] 检测波长；山檐巧甲醋、8-0-己醜山檐巧甲醋检测波长为238nm ;绿原酸、连翅醋 巧B和麦角留巧检测波长为330nm ;芦下和木犀草巧检测波长为350nm ;
[002引流动相：流动相为A ;己膳-B ;0. 1 %磯酸水溶液，梯度洗脱程序；0?15min， 12%?12% A ;15 ?20min，12%?20. 5% A ;20 ?30min，20. 5%?20. 5% Ao
[0029] 本实施例所用独一味药材是指符合2010版药典的独一味地上部分。
[0030] 实施例2方法学考察
[0031] 1 材料
[0032] Utimate 3000高效液相色谱仪（包括四元梯度粟，在线脱气机，自动进样器，柱温 箱，VWD3400紫外检测器，C虹omeleon色谱工作站，德国戴安），Sartorius BS224S电子分 析天平（德国赛多利斯），M比LIQ超纯水机（美国Millipore)
[0033] 山檐巧甲醋、绿原酸、8-0-己醜山檐巧甲醋、连翅醋巧B、芦下、麦角留巧、木犀草 巧对照品均购自成都曼思特生物科技有限公司（供含量测定用，纯度>98%)。己膳（色 谱纯，Fisher)，水为超纯水，其余试剂为分析纯。
[0034] 独一味自采对口药材24批，购买5批，共计29批（见表1)，由成都中医药大学古 锐副研究员鉴定为独一味131]1；[0地101]118 1'〇1313炬6]11：11.)1(11(1〇。
[0035] 表1独一味样品来源
[0036]
【权利要求】
1. 同时检测独一味中环烯醚萜苷、苯乙醇苷、黄酮、咖啡酰类成分的方法，其特征在于： 它包括如下操作步骤： (1)取待检独一味药材，以甲醇或含水甲醇提取，制备供试品溶液； ⑵选择山桅苷甲酯、8-0-乙酰山桅苷甲酯、绿原酸、连翘酯苷B、麦角甾苷、芦丁和木 犀草苷为对照品，制备对照品溶液； (3)分别将对照品、供试品溶液注入高效液相色谱仪中，根据外标法检测独一味中上述 7种成分即可，色谱条件如下： 色谱柱：十八烷基键合硅胶为填料 检测波长：山桅苷甲酯、8-0-乙酰山桅苷甲酯检测波长为238nm;绿原酸、连翘酯苷B 和麦角留苷检测波长为330nm ;芦丁和木犀草苷检测波长为350nm ; 流动相：流动相为A :乙腈-B :0. 1%?0. 3%磷酸水溶液，梯度洗脱程序：0?15min， 12%?12% A ;15 ?20min, 12%?20. 5% A ;20 ?30min,20. 5%?20. 5% A。
2. 根据权利要求1所述的HPLC检测方法，其特征在于：步骤（1)中，所述含水甲醇中 甲醇浓度为50?80% v/v，优选为60% v/v。
3. 根据权利要求1或2所述的HPLC检测方法，其特征在于：步骤（1)中，提取的方法 选自回流、超声、浸渍或渗漉。
4. 根据权利要求1所述的HPLC检测方法，其特征在于：步骤（2)中，磷酸水溶液浓度 为 0· 1%。
5. 根据权利要求1所述的HPLC检测方法，其特征在于：所述色谱柱的尺寸为 4.6mmX 250mm,5 μ m〇
6. 根据权利要求1或5所述的HPLC检测方法，其特征在于：色谱柱柱温为30±2°C。
【文档编号】G01N30/88GK104237441SQ201410528757
【公开日】2014年12月24日 申请日期:2014年10月9日 优先权日:2014年10月9日
【发明者】古锐, 钟世红 申请人:成都中医药大学