京尼平苷分子印迹聚合物磁性微球的制备方法
【专利摘要】本发明涉及京尼平苷分子印迹聚合物磁性微球的制备方法，步骤包括(1)制备壳聚糖磁性复合微球，(2)壳聚糖磁性复合微球表面功能化，(3)京尼平苷分子印迹磁性微球的制备。本发明制备的京尼平苷分子印迹磁性微球是在振荡中反应得到，颗粒大小均匀，直径小，可实现京尼平苷的特异性分离，分离效率高；在催化、分离、生物医药及纳米材料等领域有广泛的应用前景；制备方法简单，原料廉价易得，成本低廉；本发明选择具有超顺磁性的铁酸镍作为磁性纳米微粒，制备过程简单，不需要高温煅烧，能耗低。
【专利说明】
京尼平苷分子印迹聚合物磁性微球的制备方法
技术领域
[0001] 本发明涉及一种京尼平苷分子印迹磁性微球的制备方法，属于分子印记聚合物微 球制备的技术领域。
【背景技术】
[0002] 杜仲系杜仲科杜仲属植物，为我国名贵药材。具有消炎抑菌、补肾降压、增强免疫 功能及抗癌、抗疲劳、抗衰老等多种药理作用，其中，京尼平苷、京尼平苷酸及绿原酸为杜仲 中重要的生物活性成分。而目前对杜仲中这三种生物活性成分吸附分析报道甚少，作为杜 仲的主产地，我国具有十分丰富的杜仲资源。
[0003] 京尼平苷是一种环烯醚萜葡萄糖苷，易溶于水，是杜仲的主要药效成分，对消化系 统、心血管系统和中枢神经系统疾病均有显著疗效;此外，京尼平苷还有一定的抗炎和治疗 软组织损伤的作用。京尼平苷除了药用以外，在其它领域也得到广泛的应用，如可用作植物 增产剂、生物检测剂等。
[0004] 目前，京尼平苷的分离、富集多采用萃取提纯等方式。中国专利文件CN104152508A (申请号：201410399596.7)公开了一种直接利用生产栀子黄色素废液制备京尼平的方法。 包括以下步骤:A、将生产栀子黄色素产生的废液浓缩得到稀浸膏;B、加入乙醇使其析出大 量糖类杂质沉淀，过滤、减压浓缩成含京尼平苷浸膏；C、取富集京尼平苷的浸膏溶于柠檬 酸-柠檬酸钠缓冲液，加入酸性纤维素酶，在持续搅拌下进行水解;D、水解液在持续搅拌下 用有机溶剂进行萃取;E、用粒状活性炭脱色;F、经过结晶、重结晶、干燥，得到成品京尼平。 中国专利文件CN 103788152A(申请号：201210425767.X)公开了一种制取杜仲叶中京尼平 苷的方法，将杜仲叶粉碎、纤维素酶辅助中温水提取、常规过滤、超滤膜除杂、纳滤浓缩、大 孔树脂的分离纯化、浓缩及干燥制得京尼平苷粉。
[0005] 但是，上述方法不仅分离过程复杂，而且无法实现特异性分离，得到的产物杂质较 多，分尚效率较低。
[0006] 磁性聚合物微球作为一种新型的功能性材料，被广泛应用到细胞学、生物工程、生 物医药和磁性材料等领域。磁性分子印迹聚合物微球是将磁性与分子印迹技术相结合，得 到兼具磁性快速分离特性和分子识别特性的分离材料。磁性分子印迹聚合物核壳微球，组 合了分子印迹聚合物与磁性聚合物微球的共同优点，不仅具有超顺磁性的优点，而且可以 选择性分离富集分析物，使其成为便利而有效的识别分离工具。它的作用原理是：当把磁性 分子印迹聚合物核壳微球投放到特定环境中后，微球对目标分子或生物细胞等进行选择性 吸附，然后通过外环境强磁场实现磁性分离，最后对富集物进行分析检测。磁性分子印迹聚 合物微球材料的研究正在迅速发展，应用领域不断拓展。
[0007] 目前，京尼平苷分子印迹聚合物磁性微球的制备未见报道。
【发明内容】
[0008] 针对现有京尼平苷分离、富集的缺点和不足，本发明提供一种京尼平苷磁性分子 印迹聚合物微球的制备方法。制得的京尼平苷磁性分子印迹聚合物微球能够直接快速简单 的吸附分离杜仲中重要的生物活性成分京尼平苷，可直接应用于京尼平苷的选择分离、高 效富集。
[0009] 本发明的技术方案如下：
[0010] -种京尼平苷分子印迹磁性微球的制备方法，步骤如下：
[0011] (1)制备壳聚糖磁性复合微球
[0012]将NiFe2〇4纳米粒子分散在壳聚糖水溶液中，得到稳定的磁流体，作为分散相;在搅 拌的条件下，把分散相逐滴加入到由液体石蜡、Span 80和Tween 80组成的混合液中，乳化， 加入戊二醛溶液，60-80°C反应l_5h;反应结束后，经过滤，洗涤，干燥，得到壳聚糖磁性复合 微球；
[0013] (2)壳聚糖磁性复合微球表面功能化
[0014] 将壳聚糖磁性复合微球分散于醋酸水溶液中，加入KH550，于50-70°C下反应4-6h， 磁分离产物，用蒸馏水洗涤，得表面功能化的磁性复合微球；
[0015] (3)京尼平苷分子印迹磁性微球的制备
[0016]取京尼平苷与α-甲基丙烯酸溶于乙醇中，室温下振荡，使物料溶解完全，然后加入 乙二醇二甲基丙烯酸酯(EDMA)、偶氮二异丁腈(ΑΙΒΝ)和表面功能化的磁性复合微球，氮气 保护，机械搅拌于50-70°C水浴反应10_30h;反应结束后，磁分离产物，洗涤，干燥，即得京尼 平苷分子印迹磁性微球。
[0017]根据本发明，优选的，步骤（1)中NiFe2〇4纳米粒子与壳聚糖的质量比为(0.2-0.6): 1，壳聚糖溶液的质量浓度为2-6% ;
[0018] 优选的，混合液中液体石蜡、Span 80和Tween 80的质量比为（100-150) :(1-2): (1_2)；
[0019] 优选的，NiFe2〇4纳米粒子与戊二醛的质量比为(0.2-0.6): (1-2);
[0020] 优选的，洗涤所用的洗涤剂为石油醚、超纯水、无水乙醇和丙酮；
[0021] 优选的，干燥温度为55-65 °C，干燥时间为10-15h;
[0022]优选的，壳聚糖水溶液中含2wt%的醋酸。
[0023]根据本发明，优选的，步骤(1)中NiFe2〇4纳米粒子按如下方法制备得到：
[0024] 将摩尔比为2:1的硝酸铁和硝酸镍溶于200mL蒸馏水中，用25wt%的氨水调节pH为 7.5,将溶液混合均匀，然后升温至160°C，保温反应15h，反应结束后，冷却至室温，得到的沉 淀用超纯水和无水乙醇洗涤，60°C下真空干燥，即得NiFe 2〇4。所述的硝酸铁用量为20.2-40.4g，所述的硝酸镍的用量为7.27-14.54g。
[0025]根据本发明，优选的，步骤(2)中醋酸水溶液的质量浓度为8-15%。
[0026]根据本发明，优选的，步骤(3)中京尼平苷、α-甲基丙烯酸、EDMA、AIBN的摩尔比为 0.25:(1-2):(3-7):(0.1-0.3)；
[0027]优选的，水浴反应为密闭反应；
[0028]优选的，洗涤所用的洗涤剂为甲醇-乙酸混合溶液，进一步优选的，甲醇：乙酸的体 积被为9:1。此处洗涤为了除去模板分子，是在室温下振荡洗涤。
[0029] 本发明的原理：
[0030]改性过得壳聚糖磁性复合微球和京尼平苷在功能单体α-甲基丙烯酸和交联剂乙 二醇二甲基丙烯酸酯存在下，由引发剂偶氮二异丁腈引发聚合反应生成京尼平苷磁性分子 印迹聚合物，印迹材料中含有的羧基、酰胺基、氨基可以与模板分子京尼平苷上的羟基产生 氢键相互作用，在分子印迹材料共聚合过程中产生适合于京尼平苷的特定空间，洗脱材料 中京尼平苷后产生的空穴可对京尼平苷产生特异性吸附。
[0031]分子印迹聚合物之所以能够识别其模板分子是因为模板分子京尼平苷通过印迹 过程和洗脱过程在聚合物母体材料中产生了具有固定形态和大小的印迹孔穴，印迹孔穴中 又带有与模板分子京尼平苷互补的空间上固定排列的官能团当模板分子进入孔穴中时便 与其中的官能团产生对应的结合作用，而竞争分子或因大小与孔穴不匹配或因官能团位置 不对应而导致其与孔穴中的官能团结合作用较弱，因而不能产生像模板分子京尼平苷那样 的专一性结合。
[0032]本发明的有益效果是：
[0033] 1、本发明制备的京尼平苷分子印迹磁性微球是在振荡中反应得到，颗粒大小均 匀，直径小，可实现京尼平苷的特异性分离，分离效率高;在催化、分离、生物医药及纳米材 料等领域有广泛的应用前景。
[0034] 2、本发明制备方法简单，原料廉价易得，成本低廉。
[0035] 3、本发明选择具有超顺磁性的铁酸镍作为磁性纳米微粒，制备过程简单，不需要 高温煅烧，能耗低。
【附图说明】
[0036] 图1为本发明实施例1制备的壳聚糖磁性复合微球的扫描电镜图像。
[0037] 图2为本发明实施例1制备的京尼平苷分子印迹磁性微球的磁回滞线。
[0038] 图3为本发明实施例1制备的京尼平苷分子印迹磁性微球和不加模板分子的印迹 磁性微球的吸附等温线。
【具体实施方式】
[0039] 下面通过具体实施例对本发明做进一步说明，但不限于此。
[0040] 实施例中所用原料均为常规试剂，市购产品，所用设备均为常规设备。
[0041 ]实施例中NiFe2〇4纳米粒子是用水热法制备得到，步骤如下：
[0042] 将摩尔比为2:1的硝酸铁20.2g和硝酸镍7.27g溶于200mL蒸馏水中，用25wt%的氨 水调节pH为7.5,将溶液强烈混合2h，保证混合均匀，然后放到聚四氟乙烯反应釜中，将反应 釜的温度缓慢升高到160°C，保持整个体系在此温度下反应15h，反应结束后，将反应釜冷却 至室温，得到的棕色沉淀用超纯水和无水乙醇洗涤，60°C下真空干燥即得NiFe 2〇4。
[0043] 实施例1
[0044] 京尼平苷分子印迹磁性微球的制备方法，步骤如下：
[0045] (1)制备壳聚糖磁性复合微球
[0046]准确称量1.0g壳聚糖粉末，溶解在25mL含有2wt%醋酸的蒸馏水中，磁力搅拌至完 全溶解，得到质量浓度为4%的壳聚糖溶液，将0.258附?62〇4纳米粒子分散在壳聚糖溶液中， 得到稳定的磁流体，超声15min，作为分散相。在搅拌的条件下，把上述的分散相逐滴加入到 由125mL液体石錯、1.5gSpan 80以及1.5gTween 80组成的混合液中，25°C乳化lh，lh后，缓 慢加入lmL戊二醛溶液，70 °C反应lh，lh后，加入相同量的戊二醛，70 °C反应2h。反应结束后， 收集N，0_羟甲基壳聚糖磁性复合微球微球经过过滤，石油醚、超纯水、无水乙醇以及丙酮洗 涤。最后，在60°C干燥12h得到壳聚糖磁性复合微球。
[0047] (2)壳聚糖磁性复合微球表面功能化
[0048] 将磁性微球分散于100mL HAc(10wt%)中，加入lmL KH550,于60°C下反应5h，磁分 离产物，用蒸馏水洗涤数次，得表面功能化的磁性复合微球。
[0049] (3)京尼平苷核壳结构磁性分子印迹聚合物的制备
[0050] 取京尼平苷0.25mmol与α-甲基丙稀酸1.25mmol溶于50mL乙醇中，室温下振荡，使 溶解完全，然后加入6.9mmol EDMA，0.15mmol AIBN及表面改性过的壳聚糖磁性复合微球， 氮气保护，机械搅拌于60°C水浴反应12h。反应结束后，磁分离产物，用甲醇-乙酸(9:1)溶液 洗涤产物至无模板分子，然后用甲醇洗去乙酸，干燥，即得京尼平苷分子印迹磁性微球。 [0051 ] 实施例2
[0052]京尼平苷分子印迹磁性微球的制备方法，步骤如下：
[0053] (1)制备壳聚糖磁性复合微球
[0054]准确称量1.0g壳聚糖粉末，溶解在50mL蒸馏水中，磁力搅拌至完全溶解，得到质量 浓度为2%的壳聚糖溶液，将0.2(^附？的〇4纳米粒子分散在壳聚糖溶液中，得到稳定的磁流 体，超声15min，作为分散相。在搅拌的条件下，把上述的分散相逐滴加入到由100mL液体石 蜡、l.OgSpan 80以及l.OgTween 80组成的混合液中，25°C乳化lh，lh后，缓慢加入lmL戊二 醛溶液，65°C反应lh，lh后，加入相同量的戊二醛，65°C反应4h。反应结束后，收集N，0-羟甲 基壳聚糖磁性复合微球微球经过过滤，石油醚、超纯水、无水乙醇以及丙酮洗涤。最后，在60 °C干燥12h得到壳聚糖磁性复合微球。
[0055] (2)壳聚糖磁性复合微球表面功能化
[0056] 将磁性微球分散于100mL HAc(10wt%)中，加入lmL KH550,于50°C下反应6h，磁分 离产物，用蒸馏水洗涤数次，得表面功能化的磁性复合微球。
[0057] (3)京尼平苷核壳结构磁性分子印迹聚合物的制备
[0058] 取京尼平苷0.25mmol与α-甲基丙稀酸1 .Ornmol溶于50mL乙醇中，室温下振荡，使溶 解完全，然后加入6.9mmol EDMA，0.15mmol AIBN及表面改性过的壳聚糖磁性复合微球，氮 气保护，机械搅拌于60 °C水浴反应24h。反应结束后，磁分离产物，用甲醇-乙酸(9:1)溶液洗 涤产物至无模板分子，然后用甲醇洗去乙酸，干燥，即得京尼平苷分子印迹磁性微球。
[0059] 实施例3
[0060]京尼平苷分子印迹磁性微球的制备方法，步骤如下：
[00611 (1)制备壳聚糖磁性复合微球
[0062]准确称量1.0g壳聚糖粉末，溶解在16mL蒸馏水中，磁力搅拌至完全溶解，得到质量 浓度为5.8%的壳聚糖溶液，将0.20g NiFe2〇4纳米粒子分散在壳聚糖溶液中，得到稳定的磁 流体，超声15min，作为分散相。在搅拌的条件下，把上述的分散相逐滴加入到由150mL液体 石錯、2. OgSpan 80以及2. OgTween 80组成的混合液中，25 °C乳化lh，lh后，缓慢加入lmL戊 二醛溶液，80°C反应lh，lh后，加入相同量的戊二醛，80°C反应lh。反应结束后，收集N，0-羟 甲基壳聚糖磁性复合微球微球经过过滤，石油醚、超纯水、无水乙醇以及丙酮洗涤。最后，在 60 °C干燥12h得到壳聚糖磁性复合微球。
[0063] (2)壳聚糖磁性复合微球表面功能化
[0064] 将磁性微球分散于100mL HAc(10wt%)中，加入lmL KH550,于70°C下反应4h，磁分 离产物，用蒸馏水洗涤数次，得表面功能化的磁性复合微球。
[0065] (3)京尼平苷核壳结构磁性分子印迹聚合物的制备
[0066] 取京尼平苷0.25mmol与α-甲基丙烯酸2.0mmol溶于50mL乙醇中，室温下振荡，使溶 解完全，然后加入6.9mmol EDMA，0.3mm〇l AIBN及表面改性过的壳聚糖磁性复合微球，氮气 保护，机械搅拌于70°C水浴反应15h。反应结束后，磁分离产物，用甲醇-乙酸(9:1)溶液洗涤 产物至无模板分子，然后用甲醇洗去乙酸，干燥，即得京尼平苷分子印迹磁性微球。
[0067] 实施例4
[0068] 京尼平苷分子印迹磁性微球的制备方法，步骤如下：
[0069] (1)制备壳聚糖磁性复合微球
[0070]准确称量1 .〇g壳聚糖粉末，溶解在30mL蒸馏水中，磁力搅拌至完全溶解，得到质量 浓度为3.2%的壳聚糖溶液，将0.2(^附?的〇4纳米粒子分散在壳聚糖溶液中，得到稳定的磁 流体，超声15min，作为分散相。在搅拌的条件下，把上述的分散相逐滴加入到由120mL液体 石錯、2.0gSpan 80以及1 .OgTween 80组成的混合液中，25°C乳化lh，lh后，缓慢加入lmL戊 二醛溶液，70°C反应lh，lh后，加入相同量的戊二醛，75°C反应2h。反应结束后，收集N，0-羟 甲基壳聚糖磁性复合微球微球经过过滤，石油醚、超纯水、无水乙醇以及丙酮洗涤。最后，在 60 °C干燥12h得到壳聚糖磁性复合微球。
[0071 ] (2)壳聚糖磁性复合微球表面功能化
[0072] 将磁性微球分散于100mL HAc(10wt%)中，加入lmL KH550,于65°C下反应5h，磁分 离产物，用蒸馏水洗涤数次，得表面功能化的磁性复合微球。
[0073] (3)京尼平苷核壳结构磁性分子印迹聚合物的制备
[0074] 取京尼平苷0.25mmol与α-甲基丙稀酸1.5mmol溶于50mL乙醇中，室温下振荡，使溶 解完全，然后加入6.9mmol EDMA，0.25mmol AIBN及表面改性过的壳聚糖磁性复合微球，氮 气保护，机械搅拌于55°C水浴反应30h。反应结束后，磁分离产物，用甲醇-乙酸(9:1)溶液洗 涤产物至无模板分子，然后用甲醇洗去乙酸，干燥，即得京尼平苷分子印迹磁性微球。
[0075] 实施例5
[0076]京尼平苷分子印迹磁性微球的制备方法，步骤如下：
[0077] (1)制备壳聚糖磁性复合微球
[0078]准确称量l.Og壳聚糖粉末，溶解在40mL蒸馏水中，磁力搅拌至完全溶解，得到质量 浓度为2.4%的壳聚糖溶液，将0.20g NiFe2〇4纳米粒子分散在壳聚糖溶液中，得到稳定的磁 流体，超声15min，作为分散相。在搅拌的条件下，把上述的分散相逐滴加入到由130mL液体 石錯、2.0gSpan 80以及1 .OgTween 80组成的混合液中，25°C乳化lh，lh后，缓慢加入lmL戊 二醛溶液，70°C反应lh，lh后，加入相同量的戊二醛，65°C反应3h。反应结束后，收集N，0-羟 甲基壳聚糖磁性复合微球微球经过过滤，石油醚、超纯水、无水乙醇以及丙酮洗涤。最后，在 60 °C干燥12h得到壳聚糖磁性复合微球。
[0079] (2)壳聚糖磁性复合微球表面功能化
[0080] 将磁性微球分散于100mL HAc(10wt%)中，加入lmL KH550,于65°C下反应5h，磁分 离产物，用蒸馏水洗涤数次，得表面功能化的磁性复合微球。
[0081 ] (3)京尼平苷核壳结构磁性分子印迹聚合物的制备
[0082] 取京尼平苷0.25mmol与α-甲基丙烯酸1.5mmol溶于50mL乙醇中，室温下振荡，使溶 解完全，然后加入6.9mmol EDMA，0.25mmol AIBN及表面改性过的壳聚糖磁性复合微球，氮 气保护，机械搅拌于65°C水浴反应25h。反应结束后，磁分离产物，用甲醇-乙酸(9:1)溶液洗 涤产物至无模板分子，然后用甲醇洗去乙酸，干燥，即得京尼平苷分子印迹磁性微球。
[0083] 实施例6
[0084] 京尼平苷分子印迹磁性微球的制备方法，步骤如下：
[0085] (1)制备壳聚糖磁性复合微球
[0086]准确称量1.0g壳聚糖粉末，溶解在20mL蒸馏水中，磁力搅拌至完全溶解，得到质量 浓度为4.7%的壳聚糖溶液，将0.2(^附?的〇4纳米粒子分散在壳聚糖溶液中，得到稳定的磁 流体，超声15min，作为分散相。在搅拌的条件下，把上述的分散相逐滴加入到由140mL液体 石錯、2.0gSpan 80以及1 .OgTween 80组成的混合液中，25°C乳化lh，lh后，缓慢加入lmL戊 二醛溶液，60°C反应lh，lh后，加入相同量的戊二醛，65°C反应3h。反应结束后，收集N，0-羟 甲基壳聚糖磁性复合微球微球经过过滤，石油醚、超纯水、无水乙醇以及丙酮洗涤。最后，在 60 °C干燥12h得到壳聚糖磁性复合微球。
[0087] (2)壳聚糖磁性复合微球表面功能化
[0088] 将磁性微球分散于100mL HAc(10wt%)中，加入lmL KH550,于65°C下反应4h，磁分 离产物，用蒸馏水洗涤数次，得表面功能化的磁性复合微球。
[0089] (3)京尼平苷核壳结构磁性分子印迹聚合物的制备
[0090] 取京尼平苷0.25mmol与α-甲基丙烯酸1.5mmol溶于50mL乙醇中，室温下振荡，使溶 解完全，然后加入6.9mmol EDMA，0.25mmol AIBN及表面改性过的壳聚糖磁性复合微球，氮 气保护，机械搅拌于65°C水浴反应25h。反应结束后，磁分离产物，用甲醇-乙酸(9:1)溶液洗 涤产物至无模板分子，然后用甲醇洗去乙酸，干燥，即得京尼平苷分子印迹磁性微球。
[0091] 实施例7
[0092] 京尼平苷分子印迹磁性微球的制备方法，步骤如下：
[0093] (1)制备壳聚糖磁性复合微球
[0094]准确称量1.0g壳聚糖粉末，溶解在20mL蒸馏水中，磁力搅拌至完全溶解，得到质量 浓度为4.7%的壳聚糖溶液，将0.2(^附?的〇4纳米粒子分散在壳聚糖溶液中，得到稳定的磁 流体，超声15min，作为分散相。在搅拌的条件下，把上述的分散相逐滴加入到由140mL液体 石錯、2.0gSpan 80以及1 .OgTween 80组成的混合液中，25°C乳化lh，lh后，缓慢加入lmL戊 二醛溶液，60°C反应lh，lh后，加入相同量的戊二醛，65°C反应3h。反应结束后，收集N，0-羟 甲基壳聚糖磁性复合微球微球经过过滤，石油醚、超纯水、无水乙醇以及丙酮洗涤。最后，在 60 °C干燥12h得到壳聚糖磁性复合微球。
[0095] (2)壳聚糖磁性复合微球表面功能化
[0096] 将磁性微球分散于100mL HAc(10wt%)中，加入lmL KH550,于70°C下反应4h，磁分 离产物，用蒸馏水洗涤数次，得表面功能化的磁性复合微球。
[0097] (3)京尼平苷核壳结构磁性分子印迹聚合物的制备
[0098] 取京尼平苷0.25mmol与α-甲基丙烯酸1.5mmol溶于50mL乙醇中，室温下振荡，使溶 解完全，然后加入6.0mmol EDMA，0.2mm〇l AIBN及表面改性过的壳聚糖磁性复合微球，氮气 保护，机械搅拌于65°C水浴反应25h。反应结束后，磁分离产物，用甲醇-乙酸(9:1)溶液洗涤 产物至无模板分子，然后用甲醇洗去乙酸，干燥，即得京尼平苷分子印迹磁性微球。
[0099] 实施例8
[0100] 京尼平苷分子印迹磁性微球的制备方法，步骤如下：
[0101] (1)制备壳聚糖磁性复合微球
[0102]准确称量1 .〇g壳聚糖粉末，溶解在20mL蒸馏水中，磁力搅拌至完全溶解，得到质量 浓度为4.7%的壳聚糖溶液，将0.2(^附?的〇4纳米粒子分散在壳聚糖溶液中，得到稳定的磁 流体，超声15min，作为分散相。在搅拌的条件下，把上述的分散相逐滴加入到由110mL液体 石錯、2.0gSpan 80以及1 .OgTween 80组成的混合液中，25°C乳化lh，lh后，缓慢加入lmL戊 二醛溶液，75°C反应lh，lh后，加入相同量的戊二醛，75°C反应3h。反应结束后，收集N，0-羟 甲基壳聚糖磁性复合微球微球经过过滤，石油醚、超纯水、无水乙醇以及丙酮洗涤。最后，在 60 °C干燥12h得到壳聚糖磁性复合微球。
[0103] (2)壳聚糖磁性复合微球表面功能化
[0104] 将磁性微球分散于100mL HAc(10wt%)中，加入lmL KH550,于70°C下反应4h，磁分 离产物，用蒸馏水洗涤数次，得表面功能化的磁性复合微球。
[0105] (3)京尼平苷核壳结构磁性分子印迹聚合物的制备
[0106] 取京尼平苷0.25mmol与α-甲基丙烯酸1.5mmol溶于50mL乙醇中，室温下振荡，使溶 解完全，然后加入5.0mmol EDMA，0.2mm〇l AIBN及表面改性过的壳聚糖磁性复合微球，氮气 保护，机械搅拌于60 °C水浴反应20h。反应结束后，磁分离产物，用甲醇-乙酸(9:1)溶液洗涤 产物至无模板分子，然后用甲醇洗去乙酸，干燥，即得京尼平苷分子印迹磁性微球。
[0107] 实施例9
[0108] 京尼平苷分子印迹磁性微球的制备方法，步骤如下：
[0109] (1)制备壳聚糖磁性复合微球
[0110]准确称量1 .〇g壳聚糖粉末，溶解在20mL蒸馏水中，磁力搅拌至完全溶解，得到质量 浓度为4.7%的壳聚糖溶液，将0.2(^附?的〇4纳米粒子分散在壳聚糖溶液中，得到稳定的磁 流体，超声15min，作为分散相。在搅拌的条件下，把上述的分散相逐滴加入到由110mL液体 石錯、2.0gSpan 80以及1 .OgTween 80组成的混合液中，25°C乳化lh，lh后，缓慢加入lmL戊 二醛溶液，75°C反应lh，lh后，加入相同量的戊二醛，75°C反应3h。反应结束后，收集N，0-羟 甲基壳聚糖磁性复合微球微球经过过滤，石油醚、超纯水、无水乙醇以及丙酮洗涤。最后，在 60 °C干燥12h得到壳聚糖磁性复合微球。
[0111] (2)壳聚糖磁性复合微球表面功能化
[0112] 将磁性微球分散于100mL HAc(10wt%)中，加入lmL KH550,于70°C下反应4h，磁分 离产物，用蒸馏水洗涤数次，得表面功能化的磁性复合微球。
[0113] (3)京尼平苷核壳结构磁性分子印迹聚合物的制备
[0114] 取京尼平苷0.25mmol与α-甲基丙烯酸1.5mmol溶于50mL乙醇中，室温下振荡，使溶 解完全，然后加入4.5mmol EDMA，0.2mm〇l AIBN及表面改性过的壳聚糖磁性复合微球，氮气 保护，机械搅拌于65°C水浴反应24h。反应结束后，磁分离产物，用甲醇-乙酸(9:1)溶液洗涤 产物至无模板分子，然后用甲醇洗去乙酸，干燥，即得京尼平苷分子印迹磁性微球。
[0115] 实施例1〇
[0116]京尼平苷分子印迹磁性微球的制备方法，步骤如下：
[0117] (1)制备壳聚糖磁性复合微球
[0118]准确称量1 .〇g壳聚糖粉末，溶解在20mL蒸馏水中，磁力搅拌至完全溶解，得到质量 浓度为4.7%的壳聚糖溶液，将0.2(^附?的〇4纳米粒子分散在壳聚糖溶液中，得到稳定的磁 流体，超声15min，作为分散相。在搅拌的条件下，把上述的分散相逐滴加入到由135mL液体 石錯、1 .OgSpan 80以及2.0gTween 80组成的混合液中，25°C乳化lh，lh后，缓慢加入lmL戊 二醛溶液，70°C反应lh，lh后，加入相同量的戊二醛，70°C反应3h。反应结束后，收集N，0-羟 甲基壳聚糖磁性复合微球微球经过过滤，石油醚、超纯水、无水乙醇以及丙酮洗涤。最后，在 60 °C干燥12h得到壳聚糖磁性复合微球。
[0119] (2)壳聚糖磁性复合微球表面功能化
[0120] 将磁性微球分散于100mL HAc(10wt%)中，加入lmL KH550,于70°C下反应4h，磁分 离产物，用蒸馏水洗涤数次，得表面功能化的磁性复合微球。
[0121] (3)京尼平苷核壳结构磁性分子印迹聚合物的制备
[0122] 取京尼平苷0.25mmol与α-甲基丙烯酸1.5mmol溶于50mL乙醇中，室温下振荡，使溶 解完全，然后加入4.0mmol EDMA，0.2mm〇l AIBN及表面改性过的壳聚糖磁性复合微球，氮气 保护，机械搅拌于70°C水浴反应18h。反应结束后，磁分离产物，用甲醇-乙酸(9:1)溶液洗涤 产物至无模板分子，然后用甲醇洗去乙酸，干燥，即得京尼平苷分子印迹磁性微球。
[0123] 对比例
[0124] 如实施例1所述，不同的是步骤(3)中不加入京尼平苷，制备得到空白分子印迹磁 性微球。
[0125] 试验例1
[0126] 将实施例1和对比例制得的磁性分子印迹聚合物微球进行吸附京尼平苷试验，具 体步骤如下：
[0127] 分别准确称取8份20mg的磁性分子印迹聚合物微球和磁性非印迹聚合物微球于 25mL的锥形瓶中，加入浓度依次为10，20，30，40，50，60，70，100mg/L的京尼平苷甲醇溶液， 封紧瓶口，室温下将其置于恒温振荡器中震荡吸附12h，磁铁吸沉，取上清液用HPLC测定残 液中京尼平苷的浓度，结果如表1所示。
[0128] 表1
[0130]由表1可知从吸附等温线上可见，低浓度时印迹粒子的吸附容量随京尼平苷浓度 的增大而增加。在70mg/L时达到饱和吸附，饱和吸附容量为5.93mg/g，而在相同条件下空白 印迹磁性微球的饱和吸附量仅为1.6975mg/g，印迹粒子饱和吸附量是非印迹粒子的3倍。两 组数据间存在显著性差异。结果表明，在京尼平苷分子印迹磁性微球表面存在与京尼平苷 分子匹配的空穴和可产生氢键相互作用的识别位点，因此能够选择性吸附溶液中京尼平苷 分子。
[0131] 试验例2
[0132] 将试验例1吸附后的磁性分子印迹聚合物微球用甲醇：乙酸=9:1的混合溶液进行 洗脱，然后再重复试验例1的步骤再次吸附，结果如表2所示。
[0133] 表2
[0135]由表2可知，经5次重复利用，分子印迹磁性微球的吸附量仍然保持稳定，吸附量由 最初的5.93mg/g下降至5.71mg/g，再生率达96.29%。这说明在重复利用的过程中，京尼平 苷分子印迹聚合物磁性微球本身具有一定的硬度和刚性可以使其结构保持相对的稳定性， 不易变形。
【主权项】
1. 一种京尼平苷分子印迹磁性微球的制备方法，步骤如下： (1) 制备壳聚糖磁性复合微球 将NiFe2〇4纳米粒子分散在壳聚糖水溶液中，得到稳定的磁流体，作为分散相;在搅拌的 条件下，把分散相逐滴加入到由液体石蜡、Span 80和Tween 80组成的混合液中，乳化，加入 戊二醛溶液，60-8(TC反应l_5h;反应结束后，经过滤，洗涤，干燥，得到壳聚糖磁性复合微 球； (2) 壳聚糖磁性复合微球表面功能化 将壳聚糖磁性复合微球分散于醋酸水溶液中，加入KH550，于50-70°C下反应4-6h，磁分 离产物，用蒸馏水洗涤，得表面功能化的磁性复合微球； (3) 京尼平苷分子印迹磁性微球的制备 取京尼平苷与甲基丙烯酸溶于乙醇中，室温下振荡，使物料溶解完全，然后加入乙二 醇二甲基丙烯酸酯(EDMA)、偶氮二异丁腈(ΑΙΒΝ)和表面功能化的磁性复合微球，氮气保护， 机械搅拌于50-70°C水浴反应10_30h;反应结束后，磁分离产物，洗涤，干燥，即得京尼平苷 分子印迹磁性微球。2. 根据权利要求1所述的京尼平苷分子印迹磁性微球的制备方法，其特征在于，步骤 (1)中NiFe2〇4纳米粒子与壳聚糖的质量比为(0.2-0.6): 1，壳聚糖溶液的质量浓度为2-6%。3. 根据权利要求1所述的京尼平苷分子印迹磁性微球的制备方法，其特征在于，步骤 (1)混合液中液体石蜡、Span 80和Tween 80的质量比为（100-150): (1 -2): (1 -2)。4. 根据权利要求1所述的京尼平苷分子印迹磁性微球的制备方法，其特征在于，步骤 (1)中NiFe2〇4纳米粒子与戊二醛的质量比为(0.2-0.6): (1-2)。5. 根据权利要求1所述的京尼平苷分子印迹磁性微球的制备方法，其特征在于，步骤 (1)中洗涤所用的洗涤剂为石油醚、超纯水、无水乙醇和丙酮。6. 根据权利要求1所述的京尼平苷分子印迹磁性微球的制备方法，其特征在于，步骤 (1)中干燥温度为55-65°C，干燥时间为10_15h。7. 根据权利要求1所述的京尼平苷分子印迹磁性微球的制备方法，其特征在于，步骤 (1) 中壳聚糖水溶液中含2wt %的醋酸。8. 根据权利要求1所述的京尼平苷分子印迹磁性微球的制备方法，其特征在于，步骤 (2) 中醋酸水溶液的质量浓度为8-15%。9. 根据权利要求1所述的京尼平苷分子印迹磁性微球的制备方法，其特征在于，步骤 (3) 中京尼平苷、α-甲基丙烯酸、EDMA、AIBN的摩尔比为0.25: (1-2): (3-7): (0.1-0.3)。10. 根据权利要求1所述的京尼平苷分子印迹磁性微球的制备方法，其特征在于，步骤 (3)中水浴反应为密闭反应。
【文档编号】C08F222/14GK106046256SQ201610363697
【公开日】2016年10月26日
【申请日】2016年5月27日
【发明人】马烽, 卢金芝, 董玉欢
【申请人】齐鲁工业大学