用于样品采集的装置、溶液和方法与流程

文档序号:12266967阅读:来源:国知局

技术特征:

1.用于保存在体液中的细胞的溶液,用于进一步分离细胞类型和下游表观遗传分析,其允许在体液中贮存细胞,以保留它们的抗原性和细胞结构,所述溶液包含至少一种化学固定剂和至少一种蛋白酶抑制剂,缓冲在pH约6.4至约8.4之间。

2.权利要求1的溶液,进一步包含至少一种抗微生物剂和来自人和/或其它动物物种的血清蛋白中的一种或多种。

3.权利要求1的溶液,其中所述化学固定剂选自醛类。

4.权利要求3的溶液,其中所述化学固定剂是低聚甲醛。

5.权利要求1的溶液,其中所述化学固定剂的浓度为大约1% (v/v)。

6.权利要求1的溶液,其中所述抗微生物剂选自抗细菌的和抗真菌的抗生素。

7.权利要求1的溶液,其中所述蛋白酶抑制剂选自:天冬氨酸蛋白酶抑制剂、半胱氨酸蛋白酶抑制剂、金属蛋白酶抑制剂、丝氨酸蛋白酶抑制剂、苏氨酸蛋白酶抑制剂、胰蛋白酶抑制剂、Kunitz STI蛋白酶抑制剂和以上的任意组合。

8.权利要求1的溶液,其中所述蛋白酶抑制剂选自:叠氮化钠、PMSF、抑肽酶、亮抑酶肽、胃酶抑制剂、天然的或合成的蛋白酶抑制剂、天然的和合成的蛋白酶抑制剂的混合物和以上的任意组合。

9.权利要求1的溶液,其中所述蛋白酶抑制剂是叠氮化钠。

10.权利要求1的溶液,其中所述溶液缓冲在pH约7.2至约7.6。

11.权利要求1或10的溶液,其中所述缓冲液选自:巴比妥、三羟甲基氨基甲烷磷酸盐、柠檬酸盐、甲次砷酸盐、其它非磷酸盐缓冲液和以上的任意组合。

12.权利要求1或10的溶液,其中所述缓冲液是磷酸盐缓冲液。

13.用于在天然表达的体液中保存细胞的方法,包括使体液与权利要求1-12中任一项的保存溶液接触。

14.用于从天然表达的体液中分离一类白细胞的方法,包括:

提供包含化学固定的细胞的体液样品;

离心所述体液样品以获取包含细胞的沉淀;

将所述沉淀重悬于缓冲液中;

使重悬的沉淀经过密度梯度分离,以获取一层多个白细胞类型;和

从多种白细胞中分离第一类型的白细胞。

15.权利要求14的方法,其中分离包括:

使细胞类型混合物与含有与对第一类型的白细胞上存在的表位具有特异性的抗体偶联的磁珠的溶液接触,和

从多个白细胞类型中磁力分离第一类型的白细胞。

16.权利要求14的方法,其中所述体液选自:唾液、尿及其组合。

17.权利要求14的方法,其中所述缓冲液包含叠氮化钠。

18.权利要求14的方法,其中所述缓冲液包含磷酸盐缓冲盐水和叠氮化钠。

19.权利要求14的方法,其中所述缓冲液进一步包含胎牛血清。

20.权利要求14的方法,其中所述缓冲液的pH为约7.2至约7.6。

21.权利要求14的方法,其中将所述白细胞类型混合物在缓冲液中洗涤一次或多次,然后分离。

22.权利要求14的方法,其中所述第一类型的白细胞是淋巴细胞。

23.权利要求14的方法,其中第一类型的淋巴细胞细胞是T细胞。

24.权利要求15的方法,其中所述抗体对T细胞特异性抗原具有特异性。

25.权利要求24的方法,其中所述抗原是CD4或CD3中的至少一种。

26.用于从体液中分离白细胞的方法,包括:

提供包含化学固定的细胞的体液样品;

使所述样品经历密度梯度分离以获取一层多个白细胞类型;和

从多个白细胞类型中分离第一类型的白细胞。

27.权利要求26的方法,其中分离包括:

使多个细胞类型与含有与对第一类型的白细胞上存在的表位具有特异性的抗体偶联的磁珠的溶液接触;和

从多个白细胞类型中磁力分离所述第一类型的白细胞。

28.权利要求26的方法,进一步包括离心体液样品以获取包含细胞的沉淀,并将所述沉淀重悬于缓冲液中,然后使所述样品经历密度梯度分离。

29.用于从体液中分离包括但不限于淋巴细胞在内的特定类型的白细胞的方法,包括:

提供包含化学固定的细胞的唾液样品;

使所述样品经历密度梯度分离以获取一层白细胞类型的混合物,所述白细胞类型包括淋巴细胞;和

从多种白细胞中分离第一类型的白细胞。

30.权利要求29的方法,其中分离包括:

使细胞类型混合物与含有对特定类型的白细胞上存在的表位具有特异性的结合剂的溶液接触;和

从白细胞类型混合物中分离特定类型的白细胞。

31.权利要求29的方法,进一步包括离心体液样品以获取包含细胞的沉淀,并将所述沉淀重悬于缓冲液中,然后使所述样品经历密度梯度分离。

32.用于从体液样品中分离一类白细胞的系统,包括:

用于离心体液样品以获取包含细胞的沉淀的离心机;

用于将沉淀重悬于缓冲液中的重悬工具;

用于使重悬的沉淀经历密度梯度分离以获取一层多个白细胞类型的工具;和

用于从多种白细胞中分离第一类型的白细胞的分离工具。

33.权利要求32的系统,其中分离工具包括:

用于使细胞类型混合物与含有与对第一类型的白细胞上存在的表位具有特异性的抗体偶联的磁珠的溶液接触的工具,和

用于从多个白细胞类型中磁力分离第一类型的白细胞的磁力分离工具。

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