测定复方氨基酸注射液的降解杂质蛋氨酸亚砜的含量的方法与流程

本发明的实施方式涉及药物分析
技术领域：
，更具体地，本发明的实施方式涉及一种测定复方氨基酸注射液的降解杂质蛋氨酸亚砜的含量的方法。
背景技术：
：复方氨基酸注射液为静脉营养药，广泛用于临床营养支持。处方中的蛋氨酸是含有硫醚键的氨基酸，易氧化，主要降解产物为蛋氨酸亚砜，对人体健康不利，需进行控制。由于处方中其他氨基酸种类较多，极易干扰蛋氨酸亚砜的测定，因此须建立一种准确率高，专属性强的检测方法，控制氨基酸类产品中蛋氨酸亚砜含量。目前未见相关报道。技术实现要素：本发明克服了现有技术的不足，提供一种测定复方氨基酸注射液的降解杂质蛋氨酸亚砜的含量的方法，以期望可以精密检测复方氨基酸注射液的降解杂质蛋氨酸亚砜的含量。为解决上述的技术问题，本发明的一种实施方式采用以下技术方案：一种测定复方氨基酸注射液的降解杂质蛋氨酸亚砜的含量的方法，采用如下色谱条件：色谱柱：十八烷基硅烷键合硅胶色谱柱；流动相A：以0.038mol/L磷酸二氢钾溶液和乙腈按照体积比88：12配制成流动相A，并且配制前，所述磷酸二氢钾溶液用1mol/L氢氧化钾溶液调pH至6.9；流动相B：乙腈；柱温：40℃；检测波长：334nm；进样器程序：对安捷伦自动进样器进行程序设置并进行衍生反应，洗针一次，依次抽取硼酸盐缓冲液10μl、安捷伦OPA衍生试剂4μl，供试品溶液2μl混合，混合次数为20次，等待1min，进样；所述硼酸盐缓冲液的制备方法是：取硼酸24.73g，加水800ml使其溶剂，用质量百分比浓度为40％氢氧化钠溶液调pH值至10.4，加水至1000ml定容；供试品溶液的制备方法是：将供试样品用水稀释成5μg/ml的溶液；流动相洗脱程序：上述测定复方氨基酸注射液的降解杂质蛋氨酸亚砜的含量的方法中，蛋氨酸亚砜的含量按外标法以峰面积计算，对照品进样浓度为5μg/ml，稀释剂：水。上述测定复方氨基酸注射液的降解杂质蛋氨酸亚砜的含量的方法中，对照品进样后记录色谱图，蛋氨酸亚砜与相邻色谱峰的分离度应大于1.2。上述测定复方氨基酸注射液的降解杂质蛋氨酸亚砜的含量的方法中，所述安捷伦自动进样器的样品盘温度为4℃。与现有技术相比，本发明的有益效果是：1、本发明提供的方法分离度好，专属强，解决了检测复方氨基酸中降解杂质存在干扰的难题；检测结果准确，能对产品中蛋氨酸亚砜进行有效控制，保证产品质量。2、方法简便，检测周期短，试剂均为常规试剂，易获得，符合药物分析经济学要求。附图说明图1为采用本发明所述方法进行线性范围实验时浓度为10.215μg/ml的蛋氨酸亚砜对照品溶液的色谱图。图2为采用本发明所述方法进行线性范围实验时浓度为8.172μg/ml的蛋氨酸亚砜对照品溶液的色谱图。图3为采用本发明所述方法进行线性范围实验时浓度为5.1075μg/ml的蛋氨酸亚砜对照品溶液的色谱图。图4为采用本发明所述方法进行线性范围实验时浓度为2.5538μg/ml的蛋氨酸亚砜对照品溶液的色谱图。图5为采用本发明所述方法进行线性范围实验时浓度为1.2769μg/ml的蛋氨酸亚砜对照品溶液的色谱图。图6为采用本发明所述方法进行线性范围实验时浓度为0.6385μg/ml的蛋氨酸亚砜对照品溶液的色谱图。图7为采用本发明所述方法检测空白样品所得图谱。图8为采用本发明所述方法检测浓度为5μg/ml的蛋氨酸亚砜对照品溶液所得图谱。图9为采用本发明所述方法检测供试品溶液所得图谱。具体实施方式为了使本发明的目的、技术方案及优点更加清楚明白，以下结合附图及实施例，对本发明进行进一步详细说明。应当理解，此处所描述的具体实施例仅仅用以解释本发明，并不用于限定本发明。实施例1精密量取复方氨基酸注射液1ml，置10ml量瓶中，用水稀释至刻度，摇匀，作为供试品溶液。另取蛋氨酸亚砜对照品适量，精密称定，用水溶解并稀释制成每1ml中含5μg的溶液作为对照品溶液。照高效液相色谱法(中国药典2010年版二部附录ⅤD)试验，用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以0.038mol/L磷酸二氢钾溶液(用1mol/L氢氧化钾溶液调pH至6.9)-乙腈(88∶12)为流动相A，以乙腈为流动相B，按表1的洗脱程序进行梯度洗脱；检测波长为334nm；柱温为40℃；样品盘温度为4℃，采用安捷伦进样器程序设置并进行衍生反应，洗针一次，依次抽取硼酸盐缓冲液(pH10.4，取硼酸24.73g，加水800ml使溶解，用40％氢氧化钠溶液调pH值至10.4，加水至1000ml)10μl、OPA衍生试剂(安捷伦)4μl、对照品溶液2μl混合，混合次数为20次，等待1min，进样，记录色谱图，蛋氨酸亚砜与相邻色谱峰的分离度应大于1.2。另精密量取供试品溶液2μl，同法测定，进样，记录色谱图，按外标法以峰面积计算，复方氨基酸注射液中含蛋氨酸亚砜不得过0.005％，否则视为产品不合格。表1梯度洗脱程序空白样品色谱图如图7所示，对照品溶液(限度浓度5μg/ml)的色谱图如图8所示，供试品溶液的色谱图如图9所示。图谱显示，供试品溶液中检出蛋氨酸亚砜杂质远远低于对照品，表明该批次复方氨基酸注射液中蛋氨酸亚砜含量合格。以下通过方法验证来说明本发明所述方法的有益效果：(1)专属性试验阴性空白溶液的制备：按处方配制不含蛋氨酸的溶液。蛋氨酸亚砜对照品溶液：取蛋氨酸亚砜对照品适量，精密称定，加水溶解并稀释制成每1ml为5μg溶液。供试品批号：2015101901降解样品制备未破坏：分别精密量取阴性空白样品，供试样品各1ml于10ml量瓶中，用水稀释至刻度，即得。光照破坏：分别精密量取光照10天(光照强度为5000LX)的阴性空白样品、供试样品各1ml于10ml量瓶中，用水稀释至刻度，摇匀，即得。氧化破坏：分别精密量取阴性空白样品、供试样品2ml于20ml量瓶中，加入30％过氧化氢溶液0.1ml，室温放置10分钟，用水稀释至刻度，摇匀，即得。碱破坏：分别精密量取阴性空白样品、供试样品1ml于10ml量瓶中，加入2mol/L氢氧化钾溶液1ml，置80℃水浴中加热4小时，取出，放冷至室温，用2mol/L盐酸溶液调节pH值至近中性，加水稀释至刻度，摇匀，即得。高温破坏：取供试品溶液、阴性溶液于121℃灭菌1小时，分别精密量取此阴性空白样品、供试样品1ml于10ml量瓶中，用水稀释至刻度，摇匀，即得。酸破坏：分别精密量取阴性空白样品、供试样品1ml于10ml量瓶中，加入2mol/L盐酸溶液1ml，置80℃水浴中加热4小时，取出，放冷至室温，用2mol/L氢氧化钠溶液调节pH值至近中性，加水稀释至刻度，摇匀，即得。分别取以上样品按本发明的方法在线衍生，测定，相关结见表2。表2强制破坏后的杂质分析注：N.D.表示未检出。实验小结：Ⅰ.阴性空白样品中的其它氨基酸在未破坏和经过酸、碱、氧化、高温、光照等破坏条件下，均不干扰蛋氨酸亚砜峰检出。Ⅱ.在高温、光照以及酸加高温等强制破坏条件下，蛋氨酸亚砜峰未见增加，说明蛋氨酸在酸加高温、光照较为稳定，在氧化、碱加高温条件下不稳定。实验结果表明，本方法专属性良好，符合含量测定要求。(2)线性范围精密量取L-蛋氨酸亚砜对照品贮备液(0.2043mg/ml),用水分次逐级稀释制成含L-蛋氨酸亚砜为10.215μg/ml、8.172μg/ml、5.1075μg/ml、2.5538μg/ml、1.2769μg/ml、0.6385μg/ml的对照品溶液。按本发明的方法，取样衍生，进样分析，结果见表3和图1～6。表3线性关系考察结果试验结果表明，在1.2769～10.215μg/ml浓度范围内线性方程y＝5.693x+0.5008，相关系数为0.998，线性关系符合规定。(3)定量限重复性按定量限浓度平行配制6份供试品溶液，按本发明的色谱条件进样分析，以L-蛋氨酸亚砜峰面积来考察重复性，结果见表4。表4定量限重复性试验结果实验结果表明，本发明的方法定量限重复性良好。(4)准确度按限度浓度0.005％的50％～150％进行回收试验。按处方配制不含蛋氨酸的阴性空白溶液。精密量取阴性空白溶液1ml(n＝9),置10ml量瓶中，分别精密加入浓度为50μg/ml的对照品贮备液0.5ml(n＝3)、1.0ml(n＝3)、1.5ml(n＝3)，加水稀释至刻度，摇匀，即得回收供试溶液，编号1#～9#。按本发明的方法进行测定，结果见表5。表5准确度试验结果实验结果表明，在限度浓度的50～150％范围内，方法的准确度良好。(5)精密度试验因样品中未检出蛋氨酸亚砜杂质，故采用样品加对照品进行试验。重复性试验：精密量取2015101901批样品1.0ml、蛋氨酸亚砜对照品贮备液(51.075μg/ml)1.0ml，同置10ml量瓶中，重复制备6份样品，依法测定，结果见表。中间精密度试验：不同的人，不同日期，取2015101901批样品，同重复性试验项下重复制备6份样品，采用本发明的方法测定，结果见表6。表6精密度试验结果(6)溶液稳定性试验取重复性试验项下方法制备供试品溶液，分别在表7中的时间点进行测试，以三个杂质的峰面积变化情况来考察溶液稳定性，试验结果见表7。表7供试品溶液稳定性试验结果表明，供试品溶液于室温条件下放置25小时稳定。(7)三批样品测定取三批氨基酸注射液样品，按发明方法进行测定，结果见表8。相关代表性图谱详见图6～图9。表8三批样品测定结果样品批号峰面积测得结果μg/mlH15120102S3.000850.63H15120103S2.141180.45H15120104S2.485210.52试验结果表明，供试品溶液中蛋氨酸亚砜的量均小于限度浓度(5μg/ml)，三批样品均符合规定。上述试验的验证结果归纳见表9。表9方法验证结果尽管这里参照本发明的解释性实施例对本发明进行了描述，但是，应该理解，本领域技术人员可以设计出很多其他的修改和实施方式，这些修改和实施方式将落在本申请公开的原则范围和精神之内。更具体地说，在本申请公开的范围内，可以对主题组合布局的组成部件和/或布局进行多种变型和改进。除了对组成部件和/或布局进行的变型和改进外，对于本领域技术人员来说，其他的用途也将是明显的。当前第1页1 2 3