本发明涉及三聚氰胺的测定方法，特别是利用结晶紫采用共振散射技术测定三聚氰胺的方法。
背景技术：
三聚氰胺(melamine，mel)是重要的氮杂环有机化工原料，主要用于制作三聚氰胺-甲醛树脂，也广泛应用于纺织助剂、皮革柔润剂、上光剂、抗水剂、黏合剂等的生产中。在鲜奶及乳制品中添加三聚氰胺，可显著提高含氮量，用以冒充高蛋白食品，从而大幅度降低成本。自2008年爆发毒奶粉事件后，食品中三聚氰胺的快速检测成为了人们亟需解决的问题。三聚氰胺的含量测定多采用色谱法，虽然检测精度高，但分析成本高昂，耗时较长；此外还有化学发光法、电化学法、分光光度法、荧光法和共振散射光谱法等。其中共振散射光谱法是一种高灵敏度、快速、简便的分析方法，可用于痕量无机物和有机物的分析。结晶紫(crystalviolet，cv)是一种三苯甲烷系碱性染料，常用于金属离子的测定，但利用结晶紫与三聚氰胺反应，采用共振散射光谱法检测三聚氰胺的含量尚未见文献报道。
技术实现要素：
本发明的目的是提供一种结晶紫共振散射法测定三聚氰胺的方法。
具体步骤为：
(1)于8支10ml比色管中依次加入0.1、0.5、1.0、2.0、3.0、4.0、5.0、6.0ml1000μg/l的三聚氰胺溶液，再在每支管中分别加入1.0mlph2.4的伯瑞坦-罗宾森(britton-robinson)缓冲溶液、1.0ml浓度为4.0×10-5mol/l的结晶紫溶液，以不加三聚氰胺的溶液为试剂空白，然后用超纯水将8支比色管定容至刻度，在25℃的水浴中反应10分钟后，于荧光光度计上，用1cm比色皿，设置
λem＝λex＝394nm，狭缝5nm，电压600v，分别测定含三聚氰胺溶液的散射光强度i和试剂空白的散射光强度i0，计算散射光强度差值δi＝i-i0，其散射光强度差值δi与三聚氰胺质量浓度ρ在10～600μg/l范围内成线性关系，线性回归方程为：δi＝0.5751ρ-3.936(ρ的单位为μg/l)，相关系数0.9989，检出限为1.33μg/l。
(2)取市售纯牛奶10.0ml，加入5.0ml质量百分比浓度为1％的三氯乙酸和5.0ml质量百分比浓度为2％的乙酸铅溶液，超声20分钟。然后取部分溶液于离心管中，离心10分钟，取上清液作为待测液。
(3)取步骤(2)处理后的牛奶待测液0.1ml，依步骤(1)的方法测定散射光强度值，计算出牛奶中三聚氰胺的含量。
本发明方法灵敏度高、操作简便快捷。
附图说明
附图为本发明实施例空白与400μg/l三聚氰胺的共振散射光谱图。
图中标记：a：空白；b：空白-400μg/lmel。
具体实施方式
实施例：
(1)于8支10ml比色管中依次加入0.1、0.5、1.0、2.0、3.0、4.0、5.0、6.0ml浓度为1000μg/l的三聚氰胺溶液，再在每支比色管中分别加入1.0mlph2.4的伯瑞坦-罗宾森(britton-robinson，b-r)缓冲溶液、1.0ml浓度为4.0×10-5mol/l的结晶紫溶液，以不加三聚氰胺的溶液为试剂空白，然后用超纯水将8支比色管定容至刻度，在25℃的水浴中反应10分钟后，于荧光光度计上，用1cm比色皿，设置λem＝λex＝394nm，狭缝5nm，电压600v，分别测定含三聚氰胺溶液的散射光强度i和试剂空白的散射光强度i0，计算散射光强度差值δi＝i-i0，其散射光强度差值δi与三聚氰胺质量浓度ρ在10～600μg/l范围内成线性关系，线性回归方程为：δi＝0.5751ρ-3.936(ρ的单位为μg/l)，相关系数0.9989，检出限为1.33μg/l。
(2)取10.0ml市售蒙牛纯牛奶，加入5.0ml质量百分比浓度为1％的三氯乙酸和5.0ml质量百分比浓度为2％的乙酸铅溶液，超声20分钟。然后取部分溶液于离心管中，离心10分钟，取上清液作为待测液。
(3)取0.1ml步骤(2)处理后的牛奶待测液，依步骤(1)的方法测定散射光强度值，计算出牛奶中三聚氰胺的含量。同时做了加标回收实验，结果见表1。
表1：蒙牛纯牛奶三聚氰胺测定结果(n＝5)