专利名称：膜型酶联免疫检测装置及方法
技术领域：
本发明涉及酶联免疫检测装置及方法，特别是膜型联免疫检测装置及方法，用于检测抗原或抗体。
酶联免疫检测技术已广泛用于许多疾病的血清学诊断，特别是那些与微生物感染有关的抗原和抗体的检测，但是目前所采用的方法检测方法复杂，速度慢、时间长、还要有专业人员检测，而且由于放射性污染和检测样本和洗液的排放对环境污染，而且还会感染检测人员。
本发明的目的在于克服上述已有技术的缺点与不足，而提供一种简便、安全、快速的检测装置及方法。
本发明的目的是通过下列技术方案实现的，技术方案是根据酶联免疫测定原理结合斑点膜免疫渗滤技术，定性检测抗原或抗体，适用于全血和血清样本。当样本中含有抗原或抗体时，这些待检物分别会与反应膜包被物结合(圆点形)，当加入酶结合物时，待测抗原或抗体与包被抗体结合或抗体或抗原结合，当多余的酶结合被洗掉后，加入底物显色液即可被酶催化，使阳性样本呈色，而阴性无色，但由于质控点系由可与酶结合物结合的物质包被而成，故无论阳性或阴性均可呈色，说明检测结果有效，相反无效。
膜型酶联免疫检测装置，其特征在于它由漏斗、反应池、反应管、反应膜组成，漏斗按装在反应池内，漏斗外壁与反应池上口配合，漏斗底口装有滤纸或滤膜，并与反应池底口装有的反应膜相接，反应膜下面装有吸水纸垫，反应池下口与反应管上口配合，反应管内装有吸水性填充物，底端面有一通气孔。
膜型酶联免疫检测方法，包括检测试剂的配制，反应膜的包被和操作步骤，其特征在于a)检测试剂由酶结合物、清洗液、底物显色液，血液处理液和终止液组成，酶结合物为酶标记抗原或抗体，亦可为其它标记物如金属标记物，即试剂1；清洗液采用吐温磷酸盐缓冲液，即为试剂2；底物显色液采用二氨基联苯胺或四甲基联苯胺或邻联甲苯胺，也可是上述两种以上的联用，即试剂3；血液处理液由1—3％聚乙二醇与2％枸椽酸钠，即试剂4；终止液为0.2N硫酸，即试剂5。
b)反应膜的包被，用微机或人工或微机和人工混合方法包被，反应膜中心部位包被为可与待检物结合的抗体或抗原，以圆点形状包被，边缘包被为可与酶标记物结合的物质，以小圆点形状包被，即为质控点。
c)检测步骤1)用吸管取未稍血在吸管内与血液处理液(试剂4)混合摇匀制成样本，加入漏斗过滤后，去除漏斗进入反应池或者采集静脉血分离血清标本，直接加入反应池，在室温静置；2)然后在反应池内加入试剂1静置；3)再加入清洗液试剂2，静置；4)待试剂2渗滤完毕立即加入显色液试剂3后，观察结果；5)当质控点显色后加入终止液试剂5保留结果；6)结果阅读。
对于不需要高敏感性的纯净样本检测可不用漏斗，反应膜可以是硝纤膜或含有硝酸纤维素的混纤膜，包被稀释液为磷酸盐或碳酸盐缓冲液、糖、聚乙二醇、叠氮钠组成，抗原或抗体的浓度根据所需敏感性的高低进行调节，一般在ELISA的5—200倍，但包被蛋白的含量不能大于5mg/ml。
在检测全血样本时，血液处理液由柠檬酸三钠、聚乙二醇及磷酸盐缓冲液组成。
本发明与已有技术相比具有如下优点及效果a)检测速度快，在10分钟内可完成全部检测过程；b)简化了检测步骤，可适用于家庭、医院及身体检查；c)检测过程无废物污染，防止对环境的污染和人员感染；d)根据检测项目要求，可制成系列反应膜。
图1为检测装置示意图；图2为结果显示图。
下面结合附图及实施侧进一步说明本发明技术本发明的检测装置，由漏斗(1)、反应池(2)、反应管(4)、反应膜(7)，组成，漏斗按装在反应池内，使待检样本集中地通过反应膜的包被点，适当延缓样本通过速度以使反应有充分时间完成，同时过滤掉样本中的颗粒物质以免影响结果，由此可使试剂敏感性提高3—10倍；漏斗外壁与反应池上的配合漏斗底口装有滤纸或滤膜(图中示出)并与反应池底口装有的反应膜相接，反应膜下面装有吸水纸垫(3)，反应池下面与反应管上口配合，反应管内装有吸水性充填物(5)，底端面有一通气孔(6)。
反应膜的中心部位包被为可与待检物结合的抗原或抗体，如检测乙肝表面抗原时，包被点为乙肝表面抗体，用圆点形状(8)表示，边缘包被为可与酶标记物结合的物质，以小圆点形状(9)表示，即为质控点。
检测乙肝表面抗体时，反应膜包被为乙肝抗原液。
用吸管取末稍血在吸管内与试剂4混合摇匀一分钟静止，其目的是抗凝和加速免疫反应，使抗原和抗体结合更牢，提高反应敏感性，然后加入反应池内，再加试剂1四滴，使酶结合物与待测物结合，静置4分钟，加试剂2四清静置，以清洗未结合物，渗干后加1—2滴试剂3酶催化底物显色，当质控点呈色后加入试剂5，保存结果，反应膜中心圆点(B)呈色，边缘小圆点呈色，即为阳性，反应膜无反应点，为无效结果，只有边缘有呈色点，中心无显色点，即为阴性。
同样，也可检测乙肝抗原。
权利要求
1.膜型酶联免疫检测装置，其特征在于它由漏斗、反应池、反应管、反应膜组成，漏斗按装在反应池内，漏斗外壁与反应池上口配合，漏斗底口装有滤纸或滤膜，并与反应池底口装有的反应膜相接，反应膜下面装有吸水纸垫，反应池下口与反应管上口配合，反应管内装有吸水性填充物，底端面有一通气孔。
2.根据权利要求1所述的检测装置，其特征在于对于不需高敏感性的纯净样本检测可不用漏斗。
3.膜型酶联免疫检测方法，包括检测试剂的配制，反应膜的包被和操作步骤，其特征在于a)检测试剂由酶结合物、清洗液、底物显色液，血液处理液和终止液组成，酶结合物为酶标记抗原或抗体，亦可为其它标记物如金属标记物，即试剂1；清洗液采用吐温磷酸盐缓冲液，即为试剂2；底物显色液采用二氨基联苯胺或四甲基联苯胺或邻联甲苯胺，也可是上述两种以上的联用，即试剂3；血液处理液由1—3％聚乙二醇与2％枸椽酸钠，即试剂4；终止液为0.2N硫酸，即试剂5。b)反应膜的包被，用微机或人工或微机和人工混合方法包被，反应膜中心部位包被为可与待检物结合的抗体或抗原，以圆点形状包被，边缘包被为可与酶标记物结合的物质，以小圆点形状包被，即为质控点。c)检测步骤1)用吸管取未稍血在吸管内与血液处理液(试剂4)混合摇匀制成样本，加入漏斗过滤后，去除漏斗进入反应池或者采集静脉血分离血清标本，直接加入反应池，在室温静置；2)然后在反应池内加入试剂1，静置；3)再加入清洗液试剂2，静置；4)待试剂2渗滤完毕立即加入显色液试剂3后，观察结果；5)当质控点显色后加入终止液试剂5保留结果；6)结果阅读。
4.根据权利要求3所述的检测方法，其特征在于反应膜可以是硝纤膜或含有硝酸纤维素的混纤膜。
5.根据权利要求3所述的检测方法，其特征在于包被稀释液为磷酸盐或碳酸盐缓冲液、糖，聚乙二醇，叠氮钠组成；
6.根据权利要求3所述的检测方法，其特征在于抗原和抗体的浓度根据所需敏感性的高低进行调节，一般在ELISA的5—200倍，但包被蛋白的含量不能大于5mg/ml；
7.根据权利要求3所述的检测方法，其特征在于检测全血样本时血液处理液由柠檬酸三钠，聚乙二醇及磷酸盐缓冲液组成。
全文摘要
本发明涉及一种膜型酶联免疫检测装置及方法，用于全血和血清抗体或抗原的检测，其特征在于该装置的反应膜上包被有可与被检测物结合的物质，血液经过处理后，再加入酶标物，经过清洗和显色处理，使包被点显色或质控点显色，该装置结构简单，检测方法简便快速、安全敏感性高，适用于家庭医院临床和身体检查。
文档编号G01N33/53GK1117587SQ9411501
公开日1996年2月28日 申请日期1994年8月24日 优先权日1994年8月24日
发明者张永新 申请人:张永新