一种中药组合物中苦参碱的含量测定方法
【技术领域】
[0001] 本发明属于中药领域，具体涉及中药组合物中具体成分的含量测定方法。
【背景技术】
[0002] 中药治疗疾病已经有几千年的历史了，随着科学技术的发展，中药也面临着现代 化，要走上世界市场，这就要求必须做好中药质量的控制，中药的成分含量的质量控制则是 最关键的，尤其是对于复方的中药制剂，要想全面的控制中药的质量，必须做好各成分的含 量的精确测定。
[0003] 本发明的中药组合物由人参、黄精、苍术、苦参、麦冬、地黄、何首乌、山茱萸、茯苓、 佩兰、黄连、知母、淫羊藿、丹参、葛根、荔枝核、地骨皮组成。对于该中药组合物，目前只公开 了药物成分和制备方法，并没有给出相应的药物成分的含量测定方法。该中药组合物有的 化学成分复杂，在测定各成分含量时，必须能除去干扰因素，精确的测定含量，做到效的控 制药物质量，保证药物的安全。
【发明内容】
[0004] 本发明目的是提供一种有效测定中药组合物中苦参碱的含量的方法。
[0005] 本发明所采用的技术方案是： 一种中药组合物中苦参碱的含量测定方法，该中药组合物由下列重量份数的原料药组 成：人参42-160、黄精50-200、苍术30-100、苦参20-60、麦冬50-200、地黄50-120、何首乌 35-100、山茱萸 50-200、茯苓 35-100、佩兰 30-60、黄连 20-60、知母 30-100、淫羊藿 30-60、 丹参35-120、葛根50-200、荔枝核75-150、地骨皮30-100组成；所述中药组合物的制剂剂 型为胶囊剂、片剂、颗粒剂，测定方法由以下步骤组成： a、 供试品溶液的制备：取制剂，加入甲醇，称定重量，超声处理，放冷，再称重，用甲醇补 足重量，滤过，量取续滤液，蒸干，残渣加水润湿后，再用甲醇转移至中性氧化铝柱上，用甲 醇洗脱，摇匀，过滤，即得； b、 对照品溶液的制备：取苦参碱对照品，加甲醇制成每1ml含苦参碱30 μ g的溶液，即 得； c、 测定：分别精密吸取供试品溶液、对照品溶液各10 μ L，注入高效液相色谱仪中，测 定，计算，测得苦参碱含量。
[0006] 作为优选方式，测定方法由以下步骤组成： a、 取相当于该中药组合物生药量0. 8-33. 6g的制剂，加入50-80%甲醇50ml，称定重量， 超声处理10-40分钟，放冷，再称重，用50-80%甲醇补足重量，滤过，量取续滤液25ml，蒸干， 残渣加水润湿后，再用甲醇转移至中性氧化铝柱上，用甲醇洗脱，摇匀，过滤，即得； b、 对照品溶液的制备：取苦参碱对照品，加甲醇制成每1ml含苦参碱30 μ g的溶液，即 得； c、 测定：分别精密吸取供试品溶液、对照品溶液各10 μ L，注入高效液相色谱仪中，测 定，计算，测得苦参碱含量。
[0007] 所述步骤c中高效液相色谱柱填充剂为氨基键合硅胶；检测波长为210nm ;流动相 为体积比为84:7:9的乙腈-无水乙醇-2%磷酸溶液，流速为l.Oml/min。
[0008] 颗粒剂中苦参碱的含量测定由以下步骤组成： a、 供试品溶液的制备：取该中药组合物颗粒，研细，称取0. 3-11. 8g，加入50-80%甲醇 50ml，称定重量，超声处理20分钟，超声温度30°C，放冷，再称重，用50-80%甲醇补足重量， 滤过，量取续滤液25ml，蒸干，残渣加水润湿后，再用甲醇转移至中性氧化铝柱上，用甲醇洗 脱，摇匀，过滤，即得； b、 对照品溶液的制备：取苦参碱对照品，加甲醇制成每1ml含苦参碱30 μ g的溶液，即 得； C、测定：分别精密吸取供试品溶液、对照品溶液各10 μ L，注入高效液相色谱仪中，高 效液相色谱柱填充剂为氨基键合硅胶；检测波长为210nm ;流动相为体积比为84:7:9的乙 腈-无水乙醇-2%磷酸溶液，流速为l.Oml/min，测定，计算，测得苦参碱含量。
[0009] 该中药组合物的活性成分制备过程如下： a、 按照原料药重量比例称取中药材，净选、碎断； b、 佩兰、苍术加5-9倍量水提取挥发油，提取3-6小时，挥发油另器收集，水溶液过滤后 备用； c、 山茱萸用5-9倍量50-90%乙醇做溶剂，浸渍12-48小时后，进行渗漉，收集渗漉液， 回收乙醇,并浓缩成60°C测定相对密度为1. 30-1. 35的稠膏，烘干，备用； d、 人参、麦冬、淫羊藿、知母、葛根，加6-10倍量50-90%乙醇，回流提取1-3次，每次1-3 小时，提取液过滤，回收乙醇，浓缩成稠膏，烘干，备用； e、 黄精、苦参、地黄、何首乌、茯苓、黄连、丹参、荔枝核、地骨皮，加7-11倍量水，煎煮 1-2次，每次1-3小时，提取液过滤，与步骤b中佩兰、苍术提油后的水溶液合并，浓缩成清 膏，加乙醇调节醇浓度为50-80%，冷藏放置，过滤，滤液回收乙醇，浓缩至稠膏，烘干，备用； 步骤c所得山茱萸干膏、步骤d所得醇提干膏、步骤e所得水提醇沉干膏与步骤b所得 挥发油共同构成该中药组合物的活性成分。
[0010] 该中药组合物颗粒剂的制备由以下步骤构成： a、 按照原料药重量比例称取中药材，净选、碎断； b、 佩兰、苍术合并，加5-9倍量水，水蒸汽法提取挥发油，提取3-6小时，挥发油另器收 集，水溶液过滤后备用； c、 山茱萸用5-9倍量50-90%乙醇做溶剂，浸渍12-48小时后，进行渗漉，收集渗漉液， 回收乙醇,并浓缩成60°C测定相对密度为1. 30-1. 35的稠膏，烘干，备用； d、 人参、麦冬、淫羊藿、知母、葛根，加6-10倍量50-90%乙醇，回流提取1-3次，每次1-3 小时，提取液过滤，回收乙醇，浓缩成稠膏，烘干，备用； e、 黄精、苦参、地黄、何首乌、茯苓、黄连、丹参、荔枝核、地骨皮，加7-11倍量水，煎煮 1-2次，每次1-3小时，提取液过滤，与步骤b中佩兰、苍术提油后的水溶液合并，浓缩成清 膏，加乙醇调节醇浓度为50-80%，冷藏放置，过滤，滤液回收乙醇，浓缩至稠膏，烘干，备用； f、 将步骤c所得山茱萸干膏、步骤d所得醇提干膏、步骤e所得水提醇沉干膏混合均 匀，粉碎，加入辅料制粒； g、步骤b所得挥发油加入乙醇溶解，喷入步骤f所得的颗粒，混匀，密闭，分装，即得。 [0011] 作为优选方式，所述中药组合物由下列重量份数的原料药组成：人参102、黄精 136、苍术68、苦参56、茯苓83、麦冬136、何首乌83、地黄102、山茱萸136、黄连56、佩兰56、 荔枝核136、淫羊藿56、知母68、丹参89、葛根136、地骨皮83。
[0012] 或 人参42、黄精200、苍术30、苦参60、茯苓35、麦冬200、何首乌35、地黄120、山茱萸50、 黄连60、佩兰30、荔枝核150、淫羊藿30、知母100、丹参35、葛根200、地骨皮30。
[0013] 或 人参160、黄精50、苍术100、苦参20、茯苓100、麦冬50、何首乌100、地黄50、山茱萸 200、黄连20、佩兰60、荔枝核75、淫羊藿60、知母30、丹参120、葛根50、地骨皮100。
[0014] 作为优选方式，所述苍术为麸炒苍术，何首乌为制何首乌，淫羊藿为炙淫羊藿。
[0015] 本发明的葛根包括葛根和粉葛，2005年的药典没有区分这两个，2010年的药典进 行了区分，葛根来源于豆科植物野葛，粉葛来源于豆科植物甘葛藤，本发明优选为粉葛。
[0016] 由于采用了上述技术方案，本发明取得的技术进步是： 本发明的方法能准确的测定出该中药组合物中苦参碱的含量，有助于药物的质量控 制，提高药物的安全性和可靠性。
[0017] 本发明的测定方法的精密度、准确度、回收率等的检验 一、苦参碱的含量测定 对苦参中苦参碱的含量多采用薄层色谱扫描进行测定，考虑薄层扫描法测定苦参碱需 采用稀碘化铋钾溶液显色，测定误差较大，本实验采用高效液相色谱法对方中苦参碱和氧 化苦参碱进行了含量测定，由于本处方中丹参含有原儿茶醛等强氧化性物质，导致成品中 未能检测到氧化苦参碱(见图1)，因此本实验只对苦参碱进行了方法学考察，如下： 1、材料、仪器与试药 苦参碱对照品：购自中国药品生物制品检定所，批号：110805- 200306 氧化苦参碱对照品：购自中国药品生物制品检定所，批号：0780- 200004 本发明组合物颗粒剂：石家庄以岭药业股份有限公司提供，批号：111001 Agilent 1100型高效液相色谱仪 VWD紫外检测器 乙腈、无水乙醇为色谱纯，其余试剂、试药均为分析纯，水为超纯水。
[0018] 2、检测波长的选择：对苦参碱和氧化苦参碱对照品分别进行光谱检测(见图2、 3)，光谱图上可见，苦参碱和氧化苦参碱在210nm处均有吸收，因此选择210nm为本样品的 检测波长。