胡芦巴提取物黄酮类成分指纹图谱的测定方法
【技术领域】
[0001] 本发明涉及胡芦巴提取物的质量控制方法，具体地指一种胡芦巴提取物黄酮类成 分指纹图谱的测定方法。
【背景技术】
[0002] 胡芦巴为豆科植物胡芦巴Trigonella foenum-graecum L.的干燥成熟种子。国内 主要分布于河南、安徽、四川等省份。味苦，性温，归肾经，具有温肾助阳，祛寒止痛等功效。 胡芦巴种子中主要含有黄酮、生物碱、皂苷和油脂等化学成分。
[0003] 胡芦巴提取物是从胡芦巴的成熟种子中提取出来的棕黄色粉末，其中主要药效物 质为黄酮类化合物。已有研宄表明，胡芦巴中黄酮类物质对心血管系统疾病、糖尿病及其并 发症有较好的治疗作用，牡荆素还具有显著地抗肿瘤、抗炎、解痉、降压等作用。
[0004] 目前国内外只针对胡芦巴药材中做了 HPLC指纹图谱初步研宄，且并未标定共有 峰的指标成分。
【发明内容】
[0005] 本发明为了控制胡芦巴提取物的质量，提供一种胡芦巴提取物黄酮类成分指纹图 谱的测定方法。
[0006] 为实现上述目的，本发明所提供的胡芦巴提取物黄酮类成分指纹图谱的测定方 法，它包括以下步骤：
[0007] (a)对照品溶液的制备：精密称取牡荆素对照品，加入甲醇溶解，制成每ImL含牡 荆素150 μ g的溶液，即得；
[0008] (b)供试品溶液的制备：精密称取胡芦巴提取物0.5~5. 0g，加入甲醇25~ 250mL，超声提取40~60min，过滤，取续滤液，即得；
[0009] (c)设定色谱条件：用十八烷基硅烷键合硅胶为填料，流动相A为甲醇，流动相B 为质量百分数为〇. 4%磷酸缓冲盐溶液；采用梯度洗脱方式，其洗脱程序为：
[0010] Omin~12min，流动相A为25%、流动相B为75%，
[0011] 12min ~17min，流动相 A 为 25 % - 30 %、流动相 B 为 75 % - 70 %，
[0012] 17min~70min，流动相A为30%、流动相B为70% ;
[0013] 检测波长339nm，流速为0. 8mL/min，柱温30°C ;理论塔板数按牡荆素峰计，不低于 3000 ；
[0014] (d)标准指纹图谱的获得：精密吸取对照品溶液和供试品溶液10 μ L，按照设定的 色谱条件，注入高效液相色谱仪，通过对照品牡荆素的色谱峰，确定供试品溶液色谱图中的 牡荆素峰，按照色谱图方法学考察的方法得到胡芦巴提取物黄酮类成分的标准指纹图谱；
[0015] (e)色谱分析：将每批次所得的供试品溶液的指纹图谱与胡芦巴提取物黄酮类成 分标准指纹图谱经中药色谱指纹图谱相似度评价系统比较，来确定胡芦巴提取物黄酮类成 分的质量。
[0016] 本发明所得到的胡芦巴提取物黄酮类成分的标准指纹图谱检测出11个特征指纹 峰，11号峰为牡荆素，
[0017] 1 号峰：保留时间：7· 65±0· 2min，
[0018] 2 号峰：保留时间：10. 64±0· 2min，
[0019] 3 号峰：保留时间：IL 87±0· 2min，
[0020] 4 号峰：保留时间：14. 62±0· 2min，
[0021] 5 号峰：保留时间：18. 64±0· 2min，
[0022] 6 号峰：保留时间：19. 92±0· 2min，
[0023] 7 号峰：保留时间：21. 66±0· 2min，
[0024] 8 号峰：保留时间：23. 33±0· 2min，
[0025] 9 号峰：保留时间：24. 82±0· 2min，
[0026] 10 号峰：保留时间：26. 28±0· 2min，
[0027] 11 号峰：保留时间：32. 45±0. 2min。
[0028] 本发明的有益效果：本发明首次对胡芦巴提取物黄酮类成分进行指纹图谱研宄， 并以牡荆素峰为参照峰，采用高效液相色谱法，建立了胡芦巴提取物黄酮类成分的指纹图 谱，以期控制胡芦巴提取物的质量提供科学依据。将所得的供试品溶液的指纹图谱与胡芦 巴提取物黄酮类成分的标准指纹图谱经中药色谱指纹图谱相似度评价系统试验。
[0029] 本发明具有以下优点：
[0030] ①本发明建立的色谱方法具有精密度高、稳定性好、重复性好的优点，符合指纹图 谱的要求，可作为胡芦巴提取物黄酮类成分的质量检测方法；②本发明能将胡芦巴提取物 活性成分进行有效分离，构建了胡芦巴提取物黄酮类成分的指纹图谱，填补了胡芦巴黄酮 类成分的分离和指纹图谱中研宄的空白；③对胡芦巴提取物黄酮类成分的质量评价不再局 限于对单一化学成分的研宄，而是从整体评价，应用指纹图谱特征对胡芦巴提取物黄酮类 成分进行全面的质量控制，确保胡芦巴提取物药用和保健功效与安全，提供了一种有效的 产品质量检测方法。
【附图说明】
[0031] 图1为对照品牡荆素的色谱图。
[0032] 图2为胡芦巴提取物黄酮类成分的标准指纹图谱。
[0033] 图3为十批胡芦巴提取物黄酮类成分的指纹图谱叠加图。
【具体实施方式】
[0034] 以下结合附图和具体实施例对本发明作进一步的详细描述。
[0035] 下述实施例中，牡荆素购买于中国药品生物制品检定所，批号111687-200602 ;甲 醇为色谱纯，购买于美国天地公司；10批胡芦巴提取物样品均为湖北省药用植物研发中心 制备。
[0036] 实施例
[0037] (a)对照品溶液的制备：精密称取牡荆素，加甲醇溶解，制成每ImL含牡荆素 150 μ g的溶液，制得对照品溶液。
[0038] (b)供试品溶液的制备：取10个不同批次胡芦巴提取物样品各0. 5g，精密称定，置 于具塞锥形瓶中，加入甲醇25mL，超声提取40min，过滤，取续滤液，制得供试品溶液。
[0039] (c)设定色谱条件：使用十八烷基硅烷键合硅胶为填料的ZORBAX SB-C18 (250mmX4. 6mm，5 μ m)色谱柱；采用梯度洗脱方式，流动相A为甲醇，流动相B为质量 百分数为〇. 4%磷酸缓冲盐溶液，梯度洗脱的程序如下表1所示：
[0040] 表1梯度洗脱程序
[0041]
【主权项】
1. 一种胡芦巴提取物黄酮类成分指纹图谱的测定方法，其特征在于，它包括以下步 骤： (a) 对照品溶液的制备：精密称取牡荆素对照品，加入甲醇溶解，制成每ImL含牡荆素 150 y g的溶液，即得； (b) 供试品溶液的制备：精密称取胡芦巴提取物0. 5~5. 0g，加入甲醇25~250mL，超 声提取40~60min，过滤，取续滤液，即得； (c) 设定色谱条件：用十八烷基硅烷键合硅胶为填料，流动相A为甲醇，流动相B为质 量百分数为〇. 4%磷酸缓冲盐溶液；采用梯度洗脱方式，其洗脱程序为： Omin~12min，流动相A为25%、流动相B为75%， 12min ~17min，流动相 A 为 25% - 30%、流动相 B 为 75% - 70%， 17min~70min，流动相A为30%、流动相B为70% ; 检测波长339nm，流速为0. 8mL/min，柱温30°C ;理论塔板数按牡荆素峰计，不低于 3000 ； (d) 标准指纹图谱的获得：精密吸取对照品溶液和供试品溶液l〇y L，按照设定的色谱 条件，注入高效液相色谱仪，通过对照品牡荆素的色谱峰，确定供试品溶液色谱图中的牡荆 素峰，按照色谱图方法学考察的方法得到胡芦巴提取物黄酮类成分的标准指纹图谱； (e) 色谱分析：将每批次所得的供试品溶液的指纹图谱与胡芦巴提取物黄酮类成分标 准指纹图谱经中药色谱指纹图谱相似度评价系统比较，来确定胡芦巴提取物黄酮类成分的 质量。
2. 根据权利要求1所述胡芦巴提取物黄酮类成分指纹图谱的测定方法，其特征在于： 所得到的胡芦巴提取物黄酮类成分的标准指纹图谱检测出11个特征指纹峰，11号峰为牡 荆素， 1号峰：保留时间：7. 65±0. 2min， 2号峰：保留时间：10. 64±0. 2min， 3号峰：保留时间：11. 87±0. 2min， 4号峰：保留时间：14. 62±0. 2min， 5号峰：保留时间：18. 64±0. 2min， 6号峰：保留时间：19. 92±0. 2min， 7号峰：保留时间：21. 66±0. 2min， 8号峰：保留时间：23. 33±0. 2min， 9号峰：保留时间：24. 82±0. 2min， 10号峰：保留时间：26. 28±0. 2min， 11号峰：保留时间：32. 45±0. 2min。
【专利摘要】本发明公开了一种胡芦巴提取物黄酮类成分指纹图谱的测定方法。该测定方法以胡芦巴提取物为原料，采用高效液相色谱法进行分析，以甲醇-0.4％磷酸缓冲盐溶液为流动相进行梯度洗脱，通过高效液相色谱仪所得的供试品溶液的指纹图谱与胡芦巴提取物黄酮类成分的标准指纹图谱经中药色谱指纹图谱相似度评价系统试验，应用指纹图谱特征对胡芦巴提取物的质量进行控制，确保胡芦巴提取物的质量。本发明具有精密度高、稳定性好、重复性好的特点，能对胡芦巴提取物中活性成分进行有效分离并监控其质量。
【IPC分类】G01N30-88, G01N30-06
【公开号】CN104807932
【申请号】CN201510206657
【发明人】朱颖, 郑翊, 李丹
【申请人】湖北中烟工业有限责任公司, 黄鹤楼科技园（集团）有限公司
【公开日】2015年7月29日
【申请日】2015年4月28日