试者是否己罹患肾功能损伤、肾功能衰弱或ARF。在这些实施方案中，将测定结果 与是否出现肾状态变化相关联，所述测定结果例如为选自以下的一种或多种生物标记物的 测定浓度：免疫球蛋白A、金属蛋白酶抑制剂4、以及血栓调节蛋白。以下是优选的诊断实施 方案。
[0039] 在优选的诊断实施方案中，这些方法包括诊断是否出现肾功能损伤，并将测定结 果与是否出现这种损伤相关联。例如，可以将每个测定浓度与阈值相比较。对于阳向标记 物，当测定浓度高于阈值时，确定受试者出现肾功能损伤的可能性增大（相对于当测定浓 度低于阈值时确定的可能性）；或者，当测定浓度低于阈值时，可确定受试者不出现肾功能 损伤的可能性增大（相对于当测定浓度高于阈值时确定的可能性）。对于阴向标记物，当测 定浓度低于阈值时，确定受试者出现肾功能损伤的可能性增大（相对于当测定浓度高于阈 值时确定的可能性）；或者，当测定浓度高于阈值时，可确定受试者不出现肾功能损伤的可 能性增大（相对于当测定浓度低于阈值时确定的可能性）。
[0040] 在其它优选的诊断实施方案中，这些方法包括诊断是否出现肾功能衰弱，并将测 定结果与是否出现损伤引起的肾功能衰弱相关联。例如，可以将每个测定浓度与阈值相比 较。对于阳向标记物，当测定浓度高于阈值时，确定受试者出现损伤引起的肾功能衰弱的可 能性增大（相对于当测定浓度低于阈值时确定的可能性）；或者，当测定浓度低于阈值时， 可确定受试者不出现损伤引起的肾功能衰弱的可能性增大（相对于当测定浓度高于阈值 时确定的可能性）。对于阴向标记物，当测定浓度低于阈值时，确定受试者出现损伤引起的 肾功能衰弱的可能性增大（相对于当测定浓度高于阈值时确定的可能性）；或者，当测定浓 度高于阈值时，可确定受试者不出现损伤引起的肾功能衰弱的可能性增大（相对于当测定 浓度低于阈值时确定的可能性）。
[0041] 又在其它优选的诊断实施方案中，这些方法包括诊断是否出现ARF，并将测定结果 与是否出现损伤引起的ARF相关联。例如，可以将每个测定浓度与阈值相比较。对于阳向 标记物，当测定浓度高于阈值时，确定受试者出现ARF的可能性增大（相对于当测定浓度低 于阈值时确定的可能性）；或者，当测定浓度低于阈值时，可确定受试者不出现ARF的可能 性增大（相对于当测定浓度高于阈值时确定的可能性）。对于阴向标记物，当测定浓度低 于阈值时，确定受试者出现ARF的可能性增大（相对于当测定浓度高于阈值时确定的可能 性）；或者，当测定浓度高于阈值时，可确定受试者不出现ARF的可能性增大（相对于当测 定浓度低于阈值时确定的可能性）。
[0042]还在其它优选的诊断实施方案中，这些方法包括诊断需进行肾替代疗法的受试 者，并将测定结果与对肾替代疗法的需求相关联。例如，可以将每个测定浓度与阈值相比 较。对于阳向标记物，当测定浓度高于阈值时，确定受试者出现由损伤引起需求肾替代疗法 的可能性增大（相对于当测定浓度低于阈值时确定的可能性）；或者，当测定浓度低于阈值 时，可确定受试者不出现由损伤引起需求肾替代疗法的可能性增大（相对于当测定浓度高 于阈值时确定的可能性）。对于阴向标记物，当测定浓度低于阈值时，确定受试者出现由损 伤引起需求肾替代疗法的可能性增大（相对于当测定浓度高于阈值时确定的可能性）；或 者，当测定浓度高于阈值时，可确定受试者不出现由损伤引起需求肾替代疗法的可能性增 大（相对于当测定浓度低于阈值时确定的可能性）。
[0043]还在其它优选的诊断实施方案中，这些方法包括诊断需进行肾移植的受试者，并 将测定结果与对肾移植的需求相关联。例如，可以将每个测定浓度与阈值相比较。对于阳 向标记物，当测定浓度高于阈值时，确定受试者出现由损伤引起需求肾移植的可能性增大 (相对于当测定浓度低于阈值时确定的可能性）；或者，当测定浓度低于阈值时，可确定受 试者不出现由损伤引起需求肾移植的可能性增大（相对于当测定浓度高于阈值时确定的 可能性）。对于阴向标记物，当测定浓度低于阈值时，确定受试者出现由损伤引起需求肾移 植的可能性增大（相对于当测定浓度高于阈值时确定的可能性）；或者，当测定浓度高于阈 值时，可确定受试者不出现由损伤引起需求肾移植的可能性增大（相对于当测定浓度低于 阈值时确定的可能性）。
[0044] 还在其它的实施方案中，本文中所述评价肾状态的方法是监测受试者肾损伤的方 法；即，评估罹患肾功能损伤、肾功能衰弱或ARF受试者的肾功能是否改善或恶化。在这些 实施方案中，将测定结果与是否出现肾状态变化相关联，所述测定结果例如为选自以下的 一种或多种生物标记物的测定浓度：免疫球蛋白A、金属蛋白酶抑制剂4、以及血栓调节蛋 白。以下是优选的监测实施方案。
[0045] 在优选的监测实施方案中，这些方法包括监测罹患肾功能损伤的受试者的肾状 态，并将测定结果与受试者是否出现肾状态变化相关联。例如，可以将测定浓度与阈值相比 较。对于阳向标记物，当测定浓度高于阈值时，可以确定受试者肾功能恶化；或者，当测定浓 度低于阈值时，可以确定受试者肾功能改善。对于阴向标记物，当测定浓度低于阈值时，可 以确定受试者肾功能恶化；或者，当测定浓度高于阈值时，可以确定受试者肾功能改善。
[0046] 在其它优选的监测实施方案中，这些方法包括监测罹患肾功能衰弱的受试者的肾 状态，并将测定结果与受试者是否出现肾状态变化相关联。例如，可以将测定浓度与阈值相 比较。对于阳向标记物，当测定浓度高于阈值时，可以确定受试者肾功能恶化；或者，当测定 浓度低于阈值时，可以确定受试者肾功能改善。对于阴向标记物，当测定浓度低于阈值时， 可以确定受试者肾功能恶化；或者，当测定浓度高于阈值时，可以确定受试者肾功能改善。
[0047] 又在其它优选的监测实施方案中，这些方法包括监测罹患急性肾衰竭的受试者的 肾状态，并将测定结果与受试者是否出现肾状态变化相关联。例如，可以将测定浓度与阈值 相比较。对于阳向标记物，当测定浓度高于阈值时，可以确定受试者肾功能恶化；或者，当 测定浓度低于阈值时，可以确定受试者肾功能改善。对于阴向标记物，当测定浓度低于阈值 时，可以确定受试者肾功能恶化；或者，当测定浓度高于阈值时，可以确定受试者肾功能改 善。
[0048] 在其它另外优选的监测实施方案中，这些方法包括监测因预先存在肾前性、肾性 或肾后性ARF的一种或多种已知危险因素而有肾功能损伤危险的受试者的肾状态，并将测 定结果与受试者是否出现肾状态变化相关联。例如，可以将测定浓度与阈值相比较。对于 阳向标记物，当测定浓度高于阈值时，可以确定受试者肾功能恶化；或者，当测定浓度低于 阈值时，可以确定受试者肾功能改善。对于阴向标记物，当测定浓度低于阈值时，可以确定 受试者肾功能恶化；或者，当测定浓度高于阈值时，可以确定受试者肾功能改善。
[0049] 还在其它的实施方案中，本文中所述评价肾状态的方法是对受试者的肾损伤进行 分类的方法；即，确定受试者的肾损伤是肾前性、肾性还是肾后性的；和/或将这些类别进 一步细分成子类，如急性肾小管损伤、急性肾小球肾炎、急性肾小管间质肾炎、急性血管性 肾病或浸润性疾病；和/或确定受试者发展到特定RIFLE阶段的可能性。在这些实施方案 中，将测定结果与具体类别和/或子类相关联，所述测定结果例如为选自以下的一种或多 种生物标记物的测定浓度：免疫球蛋白A、金属蛋白酶抑制剂4、以及血栓调节蛋白。以下是 优选的分类实施方案。
[0050]在优选的分类实施方案中，这些方法包括确定受试者的肾损伤是肾前性、肾性还 是肾后性的；和/或将这些类别进一步细分成子类，如急性肾小管损伤、急性肾小球肾炎、 急性肾小管间质肾炎、急性血管性肾病或浸润性疾病；和/或确定受试者发展到特定RIFLE 阶段的可能性，并将测定结果与受试者的损伤分类相关联。例如，可以将测定浓度与阈值相 比较，当测定浓度高于阈值时，确定具体的分类；或者，当测定浓度低于阈值时，可以对受试 者确定不同的分类。
[0051]技术人员可采用多种方法得出用于这些方法所需的阈值。例如，可以由正常受试 者群通过选择代表在这种正常受试者中测得的肾损伤标记物的第75、第85、第90、第95或 第99百分位的浓度确定所述阈值。或者，阈值可从"患病"的受试者群中确定，如罹患损伤 或易感损伤（例如，发展成ARF或某些其它临床结果，如死亡、透析、肾移植等）的受试者群 体，方式是选择代表在这种受试者中测得的肾损伤标记物的第75、第85、第90、第95或第 99百分位的浓度。在另一替代方案中，阈值可以由同一受试者先前测量的肾损伤标记物确 定；即，可以用受试者肾损伤标记物水平的时间变化确定受试者的危险。
[0052] 然而，上述讨论并不意味着暗示必须将本发明的肾损伤标记物与相应的单个阈值 相比较。组合测定结果的方法可包括采用多变量逻辑回归、对数线性建模、神经网络分析、 n-of-m分析、决策树分析、计算标记物比例等。这份清单并不意味着有限制性。在这些方法 中，可以处理通过组合单个标记物确定的复合结果，如同其本身为标记物；即，可以如本文 中为单个标记物所述的那样为复合结果确定阈值，并将单个患者的复合结果与这一阈值相 比较。
[0053] 利用R0C分析可以使特定的测试能够区分两个群。例如，由"第一"亚群和"第二" 亚群建立的R0C曲线可用于计算一R0C曲线，该曲线下方的面积用于衡量测试质量，所述 "第一"亚群的日后肾状态易发生一种或多种变化，所述"第二"亚群则不那么易发生。优选 地，本文中所述的测试提供的R0C曲线面积大于0. 5,优选为至少0. 6,更优选为0. 7,还更优 选为至少0. 8,甚至更优选为至少0. 9,最优选为至少0. 95。
[0054] 在某些方面，可将一种或多种肾损伤标记物或这种标记物的复合物的测定浓度作 为连续变量处理。例如，可将任何具体的浓度转换成受试者日后出现肾功能衰弱、出现损 伤、分类等的相应概率。又在另一替代方案中，阈值可提供在将受试者群分为"多个群体 (bins) "时可接受的特异性与敏感性水平，如分为"第一"亚群（例如，易于发生日后肾状态 的一种或多种变化、发生损伤、分类等的亚群）和不那么易于发生上述情况的"第二"亚群。 通过一种或多种以下测试精确度的测量选择阈值，以将第一群与第二群分离：
[0055] 比值比大于1，优选为至少约2或更大，或约0. 5或更小，更优选为至少约3或更 大，或约0. 33或更小，还更优选为至少约4或更大，或约0. 25或更小，甚至更优选为至少约 5或更大，或约0. 2或更小，最优选为至少约10或更大，或约0. 1或更小；
[0056] 特异性大于0.5,优选为至少约0.6,更优选为至少约0.7,还更优选为至少约0.8， 甚至更优选为至少约〇. 9,最优选为至少约0. 95,相应的敏感性大于0. 2,优选为大于约 〇. 3,更优选为大于约0. 4,还更优选为至少约0. 5,甚至更优选为约0. 6,又更优选为大于约 0. 7,还更优选为大于约0. 8,更优选为大于约0. 9,最优选为大于约0. 95 ;
[0057] 敏感性大于0.5,优选为至少约0.6,更优选为至少约0.7,还更优选为至少约0.8， 甚至更优选为至少约〇. 9,最优选为至少约0. 95,相应的特异性大于0. 2,优选为大于约 〇. 3,更优选为大于约0. 4,还更优选为至少约0. 5,甚至更优选为约0. 6,又更优选为大于约 0. 7,还更优选为大于约0. 8,更优选为大于约0. 9,最优选为大于约0. 95 ;
[0058] 至少约75%敏感性与至少约75%特异性的组合；
[0059] 阳性概率比（计算为敏感性八1_特异性））大于1，至少约2,更优选为至少约3， 还更优选为至少约5,最优选为至少约10 ;或
[0060] 阴性概率比（计算为（1-敏感性）/特异性）小于1，小于或等于约〇? 5,更优选为 小于或等于约〇. 3,最优选为小于或等于约0. 1。
[0061] 在任何上述测量情况下的术语"约"指给定测量值+/_5 %。
[0062] 多阈值也可用于评估受试者的肾状态。例如，可将"第一"亚群（易于发生日后肾 状态的一种或多种变化、出现损伤、分类等）与"第二"亚群（不那么易于发生上述情况） 合并成单组。然后将这一组细分成三个或更多个等份（称为三分位数、四分位数、五分位数 等，取决于细分的次数）。对受试者根据归属的细分组确定比值比。如果考虑三分位，则最 低或最高三分位可用作比较其它细分的参考。指定这一参考细分的比值比为1。相对于该 第一个三分位来确定第二个三分位的比值比。即，与第一个三分位中的某人相比，第二个三 分位中的某人日后罹患肾状态的一或种多种变化的可能性大三倍。还相对于该第一个三分 位来确定第三个三分位的比值比。
[0063] 在某些实施方案中，测定方法是免疫测定法。用于这种测定的抗体特异性地结合 所关注的全长肾损伤标记物，并且也可结合一种或多种其"相关"的多肽，该术语将于下文 中定义。许多免疫测定形式是本领域技术人员已知的。优选的体液样本选自尿、血液、血清、 唾液、眼泪和血浆。
[0064] 不应将上述方法步骤解释成意指将肾损伤标记物测定结果孤立地用于本文所述 的方法中。而是，本文所述的方法中可以包括别的变量或其它临床标识物。例如，危险分 级、诊断、分类、监测等方法可将测定结果与对受试者测定的一个或多个变量组合，所述变 量选自人口统计信息（例如，体重、性别、年龄、种族）、病史（例如，家族病史、手术类型、 预先存在的疾病，如动脉瘤、充血性心力衰竭、子痫前期、子痫、糖尿病、高血压、冠状动脉疾 病、蛋白尿、肾功能不全或败血症；毒素接触类型，如接触NSAID、环孢菌素、他克莫司、氨基 糖甙类、膦甲酸、乙二醇、血红蛋白、肌红蛋白、异环磷酰胺、重金属、甲氨蝶呤、不透射线的 造影剂或链脲佐菌素）、临床变量（例如，血压、体温、呼吸率）、危险评分（APACHE评分、 PREDICT评分、UA/NSTEMI的HMI危险评分、Framingham危险评分）、肾小球滤过率、估计 肾小球滤过率、尿产率、血清或血浆肌酐浓度、尿肌酐浓度、钠排泄分数、尿钠浓度、尿肌酐 与血清或血浆肌酐之比、尿比重、尿渗透压、尿液尿素氮与血浆尿素氮之比、血浆BUN与肌 酐之比、以尿钠八尿肌酐/血浆肌酐）计算的肾衰竭指数、血清或血浆中性粒细胞明胶 酶（NGAL)浓度、尿NGAL浓度、血清或血浆胱抑素C浓度、血清或血浆肌钙蛋白浓度、血清 或血浆BNP浓度、血清或血浆NTproBNP浓度和血清或血浆proBNP浓度。可与一种或多种 肾损伤标记物测定结果组合的其它肾功能的测量描述于下文和Harrison'sPrinciples ofInternalMedicine(第 17 版，McGrawHill,NewYork,第 1741-1830 页）及Current MedicalDiagnosis&Treatment2008 (第 47 版，McGrawHill,NewYork,第 785-815 页） 中，上述每个文献据此以引用的方式全文并入。
[0065] 当测量一种以上标记物时，单个标记物可在同时获得的样本中进行测量，或者可 以由不同时间（例如，较早或较晚）获得的样本进行测定。也可以对相同或不同的体液样 本测量单个标记物。例如，可以在血清或血浆样本中测量一种肾损伤标记物，并在尿样中测 量另一种肾损伤标记物。此外，确定可能性可以将单个肾损伤标记物测定结果与一个或多 个别的变量中的时间变化相组合。
[0066] 在各相关方面中，本发明还涉及进行本文中所述方法的装置和试剂盒。合适的试 剂盒包含足以进行所述肾损伤标记物的至少之一的测定的试剂连同进行所述阈值比较的 说明书。
[0067]在某些实施方案中，进行这种测定的试剂提供在测定装置中，并且这种测定装置 可包括在这种试剂盒中。优选的试剂可包括一种或多种固相抗体，固相抗体包括检测与固 体载体结合的预期生物标记物靶的抗体。在夹心免疫测定的情况下，这种试剂还可以包括 一种或多种以可检测方式标记的抗体，以可检测方式标记的抗体包括检测预期生物标记物 靶的抗体，所述预期生物标记物靶与可检测的标记物结合。可作为测定装置的一部分提供 的其它可选元件在下文描述。
[0068]可检测的标记物可包含自身可检测的分子（例如，荧光部分、电化学标记物、 eel(电化学发光）标记物、金属螯合物、胶体金属颗粒等）以及可通过产生可检测的反应产 物（例如，酶，如辣根过氧化物酶、碱性磷酸酶等）或通过使用自身可被检测的特异性结合 分子（例如，与第二抗体结合的标记抗体、生物素、地高辛、麦芽糖、寡聚组氨酸、2, 4-二硝 基苯、苯基砷酸盐、ssDNA、dsDNA等）而被间接检测的分子。
[0069]可利用本领域中熟知的各种光学、声学和电化学方法来进行由信号发生元件产生 信号。检测模式的实例包括荧光、放射化学检测、反射、吸收、电流分析法、电导、阻抗、干涉 法、椭圆光度法等。在这些方法的某些中，使固相抗体连接于转换器（例如，衍射光栅、电化 学传感器等）以产生信号，而在其它方法中，由在空间上与固相抗体分开的转换器（例如， 使用激发光源和光检测器的荧光计）产生信号。这份清单并不意味着是限制性的。也可使 用基于抗体的生物传感器来确定分析物的存在或数量，其任选可不再需要标记的分子。
【具体实施方式】
[0070] 本发明涉及通过测量一种或多种肾损伤标记物对罹患肾功能损伤、肾功能衰弱和 /或急性肾衰竭或具有罹患上述疾病危险的受试者进