每个患者必须满足以下所有的纳入标准，并 且不满足以下所有的排除标准：
[0141] 纳入标准
[0142] 18岁或以上的男性和女性；
[0143] 经受涉及血管内施用造影介质的放射造影/血管造影程序（如CT扫描或冠状动 脉介入治疗）；
[0144] 预期在造影剂施用后住院至少48小时。
[0145] 能够并愿意提供参与研究的书面同意书并遵守所有的研究程序。排除标准
[0146] 接受肾移植者；
[0147] 在造影程序前肾功能急性恶化；
[0148] 已接受透析（急性或慢性）或在招募时急需透析；
[0149] 预期经历大手术（如涉及心肺旁路）或在施用造影剂后48小时内经历造影介质 对肾有进一步伤害的重大危险的别的成像程序；
[0150] 在先前30天内参与了实验疗法的介入性临床研究；
[0151] 已知感染人类免疫缺陷病毒（HIV)或肝炎病毒。
[0152] 在临第一次施用造影剂前（且在任何前置程序水合后），收集每个患者的EDTA 抗凝血样（10mL)和尿样（10mL)。然后在指数对比程序期间最后一次施用造影介质后， 在4(±0. 5)、8(±1)、24(±2)、48(±2)和72(±2)小时收集血样和尿样。通过直接静 脉穿刺或通过其它可用的静脉通路（如现有的股鞘、中央静脉管、外周静脉管或喉癌锁 (hep-lock))收集血液。将这些研究血样在临床地点处理成血衆，冷冻并运送到Astute Medical，Inc.，SanDiego，CA。将研究尿样冷冻并运送到AstuteMedical,Inc。
[0153]在临第一次施用造影剂前（任何前置程序水合后）和最后一次施用造影剂后的 4(±0.5)、8(±1)、24(±2)和48(±2)及72(±2)小时评估血清肌酐（理想地，在获得研究 样本的同时）。此外，就其它的血清和尿肌酐测量、对透析的需求、住院状态和不利的临床结 果（包括死亡）的情况来评价每个患者通过第30天的状态。
[0154] 在施用造影剂前，根据以下评估来确定每个患者的危险性：收缩压<80mmHg= 5 个点；动脉内气囊栗=5个点；充血性心力衰竭（III-IV级或肺水肿史）=5个点；年龄>75 岁=4个点；血细胞比容水平〈39% (男），〈35% (女）=3个点；糖尿病=3个点；造影剂 体积=1个点每lOOmL;血清肌酐水平>1. 5g/dL= 4个点或估计GFR40 - 60mL/min/l. 73m2 =2 个点，20 - 40mL/min/l. 73m2= 4 个点，<20mL/min/l. 73m2= 6 个点。确定的危险性如 下：CIN和透析危险：总共5个点或更少=CIN危险-7. 5%，透析危险-0. 04% ;总共6-10 个点=CIN危险-14%，透析危险-0. 12% ;总共11-16个点=CIN危险-26. 1%，透析危 险-1.09% ;总共>16个点=CIN危险-57. 3%，透析危险-12. 8%。
[0155]实施例2 :心脏手术的样本收集
[0156] 此样本收集研究的目的是在经受心血管手术（已知对肾功能具有潜在危害性的 程序）之前和之后收集患者血浆样和尿样及临床数据。招募大约900名经受这种手术的成 人。为进入该项研究中，每个患者需满足以下所有的纳入标准，且不满足以下所有的排除标 准：
[0157] 纳入标准
[0158] 18岁或以上的男性和女性；
[0159] 经受心血管手术；
[0160] 肾替代危险分数的Toronto/Ottawa预测危险指数是至少2(Wijeysundera 等，JAMA297:1801-9,2007);和
[0161] 能够并愿意提供参与研究的书面同意书并遵守所有研究程序。
[0162] 排除标准
[0163] 已知怀孕；
[0164] 先前肾移植；
[0165] 招募前肾功能急性恶化（例如，任何类别的RIFLE标准）；
[0166] 已接受透析（急性或慢性）或招募时急需透析；
[0167]目前被招募到另一临床研究中或预期在7天的心脏手术（涉及AKI的药物输注或 治疗干预）内将招募到另一临床研究中；
[0168] 已知感染人类免疫缺陷病毒（HIV)或肝炎病毒。在第一次切割前3小时内（且在 任何前置程序水合后），收集每个患者的H)TA抗凝血样（10mL)、全血（3mL)和尿样（35mL)。 然后在该程序后的3 (±0.5)、6 (±0.5)、12 (±1)、24 (±2)和48 (±2)小时收集血样和尿 样，若患者仍住院，则然后在第3到7天每天收集。通过直接静脉穿刺或通过其它可利用的 静脉通路（如现有的股鞘、中央静脉管、外周静脉管或喉癌锁）收集血液。将这些研究血 样冷冻并运送到AstuteMedical,Inc.，SanDiego,CA。将研究尿样冷冻并运送到Astute Medical，Inc〇
[0169] 实施例3:急件患病患者的样本收集
[0170] 此项研究的目的是收集急性患病患者的样本。将招募大约900名预期在I⑶中至 少48小时的成人。为进入该项研究中，每个患者需满足以下所有的纳入标准，且不满足以 下所有的排除标准：
[0171] 纳入标准
[0172] 18岁或以上的男性和女性；
[0173] 研究群体1 :具有以下至少一种的大约300名患者：
[0174] 休克（SBP〈90mmHg和/或需血管加压支持以维持MAP>60mmHg和/或文献记载的 SBP下降至少40mmHg);和
[0175] 败血病；
[0176] 研究群体2 :具有以下至少一种的大约300名患者：
[0177] 在招募的24小时内，按计算机化医嘱录入（CP0E)服用IV抗生素；
[0178] 在招募的24小时内接触造影剂；
[0179] 腹内压增加，伴急性失偿性心力衰竭；和
[0180] 严重创伤是I⑶住院的主要原因且可能在招募后入住I⑶48小时；
[0181] 研究群体3 :大约300名患者
[0182]预期住院期间配备急性护理设备（ICU或ED)，具有已知的急性肾损伤的危险因 素（例如，败血症、低血压/休克（休克=收缩BP〈90mmHg和/或需血管加压支持以维持 MAP>60mmHg和/或文献记载的SBP下降MOmmHg)、大创伤、出血或大手术）；和/或预期招 券后入住到I⑶至少24小时。
[0183] 排除标准
[0184] 已知怀孕；
[0185] 入收容院的个体；
[0186] 先前肾移植；
[0187] 招募前已知肾功能急性恶化（例如，任何类别的RIFLE标准）；
[0188] 招募前5天内接受透析（急性或慢性）或招募时急需透析；
[0189] 已知感染人类免疫缺陷病毒（HIV)或肝炎病毒；
[0190] 仅满足上述的SBP〈90mmHg纳入标准，按主治医师或首席研究者的意见不具有休 克。
[0191] 提供同意书后，收集每个患者的EDTA抗凝血样（10mL)和尿样（25-30mL)。然后在 施用造影剂（如适用）后4(±0.5)和8(±1)小时；在招募后12(±1)、24(±2)和48(±2) 小时收集血样和尿样，此后在患者住院期间，每天进行收集，收集到第7天至第14天。通过 直接静脉穿刺或通过其它可利用的静脉通路（例如现有的股鞘、中央静脉管、外周静脉管 或喉癌锁（hep-lock))收集血液。将这些研究血样在临床地点加工成血浆、冷冻并运送到 AstuteMedical，Inc.，SanDiego，CA。将研究尿样冷冻并运送到AstuteMedical,Inc。
[0192] 实施例4 :免痔测宙形式
[0193] 利用标准夹心酶免疫测定技术来测量分析物。将结合分析物的第一抗体固定在96 孔聚苯乙烯微孔板的孔中。将分析物标准物和测试样本移液至合适的孔中，且通过固定的 抗体结合存在的任何分析物。洗掉任何未结合物质后，将结合分析物的辣根过氧化物酶配 合的第二抗体添加到孔中，从而与分析物（如果存在）和第一抗体形成夹心复合物。在洗涤 以移除任何未结合的抗体-酶试剂后，将包含四甲基联苯胺和过氧化氢的底物溶液添加到 孔中。按与样本中所存在的分析物的量成比例地产生颜色。停止发色并在540nm或570nm 下测量颜色强度。通过与由分析物标准物确定的标准曲线进行比较来确定测试样本的分析 物浓度。
[0194]实施例5表而h健康的捐赠者和慢件疾病患者的样本
[0195] 不患有已知的慢性或急性疾病的捐赠者（"表面上健康的捐赠者"）的人尿样购自 两个供应商（GoldenWestBiologicals,Inc.，27625CommerceCenterDr. ,Temecula,CA 92590和VirginiaMedicalResearch,Inc.,915FirstColonialRd.,VirginiaBeach,VA 23454)。在低于-20°C下运送尿样并冷冻储藏。供应商提供每个捐赠者的个人资料，包括性 另IJ、种族（黑人/白人）、吸烟状况和年龄。
[0196] 患有多种慢性疾病的捐赠者（"慢性疾病患者"）的人尿样购自VirginiaMedical Research,Inc.，915FirstColonialRd.，VirginiaBeach,VA23454,慢性疾病包括充血性 心力衰竭、冠状动脉疾病、慢性肾病、慢性阻塞性肺疾病、糖尿病和高血压。在低于-20°C下 运送尿样并冷冻储藏。供应商提供每个个体捐赠者的病例报告，包括年龄、性别、种族（黑 人/白人）、吸烟状况和酒精饮用、身高、体重、慢性疾病诊断、目前药物治疗和先前的手术。
[0197]实施例6肾损伤标iP,物用于评价患者肾状杰的用涂
[0198] 以下研究招募重症监护病房（I⑶）患者。每个患者根据招募7天内达到按RIFLE 标准确定的最大阶段而分为无损伤（0)、有损伤危险（R)、损伤（I)和衰竭（F)。在以下时 刻对每个患者收集EDTA抗凝血样（10mL)和尿样（25-30mL):招募时，在施用造影剂（如适 用）后4 (±0. 5)和8 (± 1)小时，在招募后12 (± 1)、24 (±2)、和48 (±2)小时，以及此后在 患者住院期间，每天进行收集，收集到第7天至第14天。利用市售分析试剂，通过标准免疫 测定法分别测量所收集尿样和血样中血浆成分的免疫球蛋白A、金属蛋白酶抑制剂A、以及 血栓调节蛋白。浓度以如下方式报导：选自免疫球蛋白A-ng/mL、金属蛋白酶抑制剂4-pg/ mL、和血栓调节蛋白-pg/mL的一或多种生物标记物。
[0199] 根据以下每个表格的介绍来确定两队列。在下表中，时间"最大阶段前"表示收集 样本的时间（相对于特定患者达到按该组所定义的最低疾病阶段的时间），分成+/-12小时 的三个组。例如，两队列使用0对R、I、F的"前24小时"意指达到阶段R(或I，如果无样 本处于R，或F，如果无样本处于R或I)前24小时（+/-12小时）。
[0200] 产生每种所测定的生物标记物的接收器操作特征（R0C)曲线，并确定每个R0C曲 线下的面积（AUC)。队列2中的患者还根据定为队列2的原因而分开，如根据血清肌酐测量 值（sCr)、根据排尿量（U0)或根据血清肌酐测量值或排尿量。采用上述相同实例（0对R、 I、F)，对于仅根据血清肌酐测量值定为阶段R、I或F的那些患者，阶段0队列可包括根据 排尿量定为阶段R、I或F的患者；对于仅根据排尿量定为阶段R、I或F的那些患者，阶段0 队列可包括根据血清肌酐测量值定为阶段R、I或F的患者；对于根据血清肌酐测量值或排 尿量定为阶段R、I或F的那些患者，阶段0队列仅含有血清肌酐测量值和排尿量为阶段0 的患者。此外，在数据中，对于根据血清肌酐测量值或排尿量判定的患者，采用产生最严重 RIFLE阶段的判定方法。
[0201] 利用R0C分析来确定区别队列1与队列2的能力。SE是AUC的标准误差，n是样本 或个体患者的数量（示出为"pts"）。标准误差计算如Hanley，J.A.，和McNeil，B.J.，The meaninganduseoftheareaunderareceiveroperatingcharacteristic(ROC)curve 中所述。Radiology(1982) 143:29-36;p值是利用双尾Z测试计算并且在表1-6中以p〈0. 05 以及在表7-14中以p〈0. 10报导。AUC〈0. 5表示用于比较的阴向标记物，AUC>0. 5表示用于 比较的阳向标记物。
[0202] 选择各种阈值（或"截止值"）浓度，并确定用于区别队列1与队列2的相关敏感 性和特异性。0R是对特定截止值浓度计算的比值比，95 %CI是比值比的置信区间。
[0203] 表1 :从队列1 (患者进展未超越RIFLE阶段0)所收集尿样以及队列2在达到阶 段R、I或F前的0、24小时及48小时自受试者所收集的尿样中的标记物浓度的比较。
[0204] 血栓调节蛋白
[0205]
[0208]
[0210] 免疫球蛋白A
[0211]
[0215]
[0218]
[0222]
[0223] 表2:从队列1 (患者进展未超越RIFLE阶段0或R)所收集尿样以及队列2在达 到阶段I或F前的0、24小时及48小时自受试者所收集的尿样中的标记物浓度的比较。
[0224] 血栓调节蛋白
[0225]
[0236]
[0237] 金属蛋白酶抑制剂4
[0238]
[0242]
[0243] t frtVA_ W ? _ 1 i rr-*' ^rt、，- 丄. ? it +rflt'^rr?/_ > _ 1
[0244] 表3:队列1(患者到达但进展未超越RIFLE阶段R)到达阶段R的12小时内所收 集尿样以及从队列2(患者到达RIFLE阶段I或F)所收集尿样中的标记物浓度的比较。
[0245] 免疫球蛋白A
[0246]
[0247]
[0253]
[0254] 表4:从队列1 (患者进展未超越RIFLE阶段0)所收集尿样中最大标记物浓度与 队列2自招募至达到阶段F前0、24小时、以及48小时期间从受试者所收集尿样中最大值 的比较。
[0255] 血栓调节蛋白
[0256]
[0258]
[0265]
[0267] CN105004864A 说明书 48/88 页
[0268]
[0272]
[0274]
[0275] 表5 :从队列1 (患者进展未超越RIFLE阶段0)所收集的EDTA样品与队列2在达 到阶段R、I或F前0、24小时、以及48小时自受试者所收集的EDTA样品中标记物浓度的比 较。
[0276] 血栓调节蛋白
[0277]
[0279]
[0286]
[0287]
[0293]
[0294] 表6 :从队列1 (患者进展未超越RIFLE阶段0或R)所收集的EDTA样品与队列2 在达到阶段I或F前0、24小时、以及48小时自受试者所收集的EDTA样品中的标记物浓度 的比较。
[0295] 血栓调节蛋白
[0296]
[0299]
[0302]
[0304]
[0309]
[0310] 表7:队列1 (患者达到，但进展未超越RIFLE阶段R)在达到阶段R的12小时内 所收集的H)TA样品中与从队列2 (患者达到RIFLE阶段I或F)所收集的EDTA样品中的标 记物浓度的比较。
[0311] 金属蛋白酶抑制剂4
[0312]
[0314]
[0315] 表8 :从队列1 (患者进展未超越RIFLE阶段0)所收集的EDTA样品中最大标记物 浓度与队列2自招募至达到阶段F前0、24小时、以及48小时从受试者所收集的EDTA样品 中最大值的比较。
[0316] 血栓调节蛋白
[0317]
[0319]
[0320] 金属蛋白酶抑制剂4
[0321]
[0324]
[0325] 表9 :从队列1 (患者进展未超越RIFLE阶段0、R或I)所收集的尿样中与受试者 达到RIFLE阶段I前0、24小时、以及48小时自队列2 (患者进展至RIFLE阶段F)所收集 的尿样中的标记物浓度的比较。
[0326] 血栓调节蛋白
[0327]
[0328]
[0330]
[0334]
[0336]
[0337]
[0342]
[0343]
[0344]
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