马蹄蕨药材中多糖含量的紫外分光光度测定法
【技术领域】
[0001] 本发明马蹄蕨药材质量控制技术领域，尤其涉及一种马蹄蕨药材中多糖含量的紫 外分光光度测定法。
【背景技术】
[0002] 马蹄蕨，观音座莲科植物福建莲座蕨(Angiopteris fokiensis Hieron.)，作为广 西的民族特色药材，既属于壮药又属于瑶药，壮药名为Maenzdaezma，瑶药名为麻蹄涯。其通 常以根茎人药，在广西主要分布于金秀、恭城、马山等地，具有消炎止痛、清热解毒、利湿、凉 血止血等功效;主治肠炎、痢疾、胃痛、胃十二指肠溃疡、肺结核咯血、肾炎水肿、功能性子宫 出血、风湿性关节炎、淋巴结结核、淋巴结炎、跌打损伤、痈疮肿毒、枪炮伤、毒蛇毒虫咬伤。 长久以来，在广西的壮族、瑶族聚集地，马蹄蕨是当地居民的常用药材之一。由于壮、瑶人民 长期生活在山区，跌打损伤和虫蛇咬伤经常发生，马蹄蕨即被作为常用药材，常备家中。近 些年来，在当地的民族特色医院中，也被医生常用于各类患者，有着较好的药用价值。
[0003] 马蹄蕨作为常用民族药材先后被收入《中国现代瑶药》和《壮药质量标准》（第三 册），然而标准中也仅有简单的理化鉴别。
【发明内容】
[0004] 本发明要解决的技术问题是提供一种灵敏度高、操作简便、结果准确的马蹄蕨药 材中多糖含量的紫外分光光度测定法，以确保药材质量，保障其临床用药的安全、有效、稳 定。
[0005] 为解决上述技术问题，本发明采用以下技术方案：马蹄蕨药材中多糖含量的紫外 分光光度测定法，以无水葡萄糖为对照，使用紫外分光光度计测定马蹄蕨多糖提取物中多 糖的含量。
[0006] 8.无水葡萄糖的浓度为5-500mg/L，马蹄蕨多糖提取物的浓度为10-200μg/ml。
[0007] 上述马蹄蕨药材中多糖含量的紫外分光光度测定法，包括以下步骤：
[0008] A、将无水葡萄糖对照品用蒸馏水配制成浓度为5-500mg/L的对照品溶液；
[0009] B、将蒽酮溶解于浓硫酸溶液中，配制成l_3g/L的蒽酮-硫酸试剂；
[0010] C、将对照品溶液与蒽酮-硫酸试剂反应，放入紫外分光光度计进行检测，检测波长 为620nm，所得吸光度绘制标准曲线，并按照标准曲线根据比尔朗伯定律得出回归曲线方 程；
[0011] D、将马蹄蕨多糖提取物样品按对照品溶液方法制备，并进行吸光度测定，根据回 归曲线方程计算样品中多糖的含量。
[0012] 步骤A按以下操作进行：精密称取无水葡萄糖对照品100mg，置于100mL容量瓶中， 加水适量使溶解，稀释至刻度，摇匀;精密吸取10mL置于100mL容量瓶中，加水稀释至刻度， 即得0. lg/L的葡萄糖对照品溶液。
[0013] 步骤B按以下操作进行：准确称取0.2g蒽酮，溶解于100mL浓硫酸溶液中，配制成 0.2 %蒽酮-硫酸试剂。
[0014] 步骤C按以下操作进行:精密量取0. lg/L的葡萄糖对照品溶液0.05、0.1、0.2、0.3、 0.4、0.6、0.8ml，分别置10ml具塞刻度试管中，各加蒸馏水至1.0ml，摇勾，分别加入0.2%蒽 酮-硫酸试剂4ml，迅速浸于冰水浴中冷却，各管加完后一起浸于沸水浴中，水浴煮沸10分 钟，取出，用自来水冷却，室温放置10分钟，以蒸馏水为空白，照紫外-可见分光光度法，在 620mn波长处测定吸光度；以吸光度值为纵坐标，葡萄糖浓度为横坐标，绘制标准曲线。
[0015] 步骤D按以下操作进行:将马蹄蕨多糖提取物加蒸馏水溶解，配置成浓度为50yg/ ml，精密吸取lml，加入0.2%蒽酮-硫酸试剂4ml，迅速浸于冰水浴中冷却，各管加完后一起 浸于沸水浴中，水浴煮沸10分钟，取出，用自来水冷却，室温放置10分钟，依法测定吸光度 值，根据标准曲线计算样品中多糖含量。
[0016] 针对目前马蹄蕨药材质量控制中缺乏含量测定的问题，发明人在前期对该药材化 学成分的研究中发现，马蹄蕨中含有大量多糖类成分，并对其多糖含量进行定量研究，据此 建立了一种马蹄蕨药材中多糖含量的紫外分光光度测定法，以无水葡萄糖为对照，使用紫 外分光光度计测定马蹄蕨多糖提取物中多糖的含量。本发明完善了马蹄蕨药材的质量检测 标准，为马蹄蕨药材质量标准的建立奠定了基础；而且，该法灵敏度高、操作简便、结果准 确;推广和应用本发明，可以确保马蹄蕨药材质量，保障其临床用药的安全、有效、稳定。
【附图说明】
[0017] 图1是无水葡萄糖标准品的紫外吸收曲线图。
[0018] 图2是应用本发明根据吸光度绘制的葡萄糖标准曲线图。
【具体实施方式】
[0019] 马蹄蕨药材中多糖含量的紫外分光光度测定法的研究
[0020] 1.测定原理
[0021] 采用蒽酮-硫酸法进行马蹄蕨多糖含量的测定。因为糖类遇浓硫酸脱水生成糖醛 或其衍生物，可与蒽酮试剂缩合产生颜色物质，反应后溶液呈蓝绿色，并于620nm处有最大 吸收，显色与多糖含量呈线性关系。
[0022] 2.研究过程
[0023] 2.1马蹄蕨多糖提取物的制备
[0024] A将lkg马蹄蕨药材粉碎成粗粉，加60 %乙醇8L加热回流2次，每次2小时，过滤，弃 滤液，收集药渣，除去脂溶性成分。
[0025] B药渣加0.3mol/L稀盐酸8L加热回流提取2次，每次2小时，过滤，弃药渣，收集滤液 并浓缩，得膏150g。
[0026] C浓缩液加乙醇使乙醇浓度达到80 %，静置过夜，过滤，收集沉淀，加水溶解沉淀， 过滤，滤液浓缩成膏，经真空冷冻干燥即得马蹄蕨多糖提取物。
[0027] 2.2马蹄蕨多糖提取物中多糖含量测定
[0028]将马蹄蕨多糖提取物做为待测样品进行分析，使用紫外分光光度计（岛津UV-2550 型可见-紫外分光光度计）用400-800nm的波长范围对葡萄糖标准品溶液进行扫描（图1)，得 出紫外吸收曲线，其最大吸收波长为Xm ax = 620nm，因此选用波长为620nm进行测定。按照《中 国药典》2015四部通则0401紫外-可见分光光度法进行：
[0029] A对照品溶液的制备
[0030] 精密称取无水葡萄糖对照品（105°C干燥至恒重）100mg，置于100mL容量瓶中，加水 适量使溶解，稀释至刻度，摇匀；精密吸取10mL置于100mL容量瓶中，加水稀释至刻度，即得 〇. lg/L的葡萄糖对照品溶液。
[0031] B蒽酮-硫酸试剂的制备
[0032] 准确称取0.2g蒽酮，溶解于1 OOmL浓硫酸溶液中，配制成0.2% (2g/L)蒽酮-硫酸试 剂，当日配制使用。
[0033] C标准曲线的制备
[0034] 精密量取0 · 1 g/L的葡萄糖对照品溶液0.05、0.1、0.2、0.3、0.4、0.6、0.8ml，分别置 i〇ml具塞刻度试管中，各加蒸馏水至丨.〇ml，摇匀，分别加入〇. 2%蒽酮-硫酸试剂4ml，迅速 浸于冰水浴中冷却，各管加完后一起浸于沸水浴中，水浴煮沸10分钟，取出，用自来水冷却， 室温放置10分钟，以蒸馏水为空白，照紫外-可见分光光度法(2015版中国药典），在620mn波 长处测定吸光度；以吸光度值(A)为纵坐标，葡萄糖浓度(C)为横坐标，绘制标准曲线（图2)。 所得回归方程为￥ = 0.0532乂+0.0193(1? = 0.99906)。结果表明，标准品在0-16.0(^/1111范围 内成良好的线性关系。
[0035]表1葡萄糖标准曲线
[0036]
[0037] D测定法
[0038]将马蹄蕨多糖提取物加蒸馏水溶解，配制成浓度为50μg/ml左右，精密吸取lml，加 入0.2%蒽酮-硫酸试剂4ml，迅速浸于冰水浴中冷却，各管加完后一起浸于沸水浴中，水浴 煮沸10分钟，取出，用自来水冷却，室温放置10分钟，依法测定吸光度值，根据标准曲线计算 样品中多糖含量。结果见表2。
[0039]表 2
[0041 ] 实施例1
[0042] 参照上述测定法，但使用0.1%的蒽酮-硫酸试剂进行反应并测定，得到马蹄蕨多 糖提取物中多糖的含量，结果见表3。
[0043] 表 3
[0045] 实施例2
[0046] 参照上述测定法，但使用0.3%的蒽酮-硫酸试剂进行反应并测定，得到马蹄蕨多 糖提取物中多糖的含量，结果见表4。
[0047] 表 4
【主权项】
1. 一种马蹄蕨药材中多糖含量的紫外分光光度测定法，其特征在于以无水葡萄糖为对 照，使用紫外分光光度计测定马蹄蕨多糖提取物中多糖的含量。2. 根据权利要求1所述的马蹄蕨药材中多糖含量的紫外分光光度测定法，其特征在于： 所述无水葡萄糖的浓度为5_500mg/L，所述马蹄蕨多糖提取物的浓度为10-200μg/ml。3. 根据权利要求1所述的马蹄蕨药材中多糖含量的紫外分光光度测定法，其特征在于 包括以下步骤： A、 将无水葡萄糖对照品用蒸馏水配制成浓度为5-500mg/L的对照品溶液； B、 将蒽酮溶解于浓硫酸溶液中，配制成l_3g/L的蒽酮-硫酸试剂； C、 将对照品溶液与蒽酮-硫酸试剂反应，放入紫外分光光度计进行检测，检测波长为 620nm，所得吸光度绘制标准曲线，并按照标准曲线根据比尔朗伯定律得出回归曲线方程； D、 将马蹄蕨多糖提取物样品按对照品溶液方法制备，并进行吸光度测定，根据回归曲 线方程计算样品中多糖的含量。4. 根据权利要求1所述的马蹄蕨药材中多糖含量的紫外分光光度测定法，其特征在于 步骤A按以下操作进行:精密称取无水葡萄糖对照品lOOmg，置于lOOmL容量瓶中，加水适量 使溶解，稀释至刻度，摇匀;精密吸取l〇mL置于100mL容量瓶中，加水稀释至刻度，即得O.lg/ L的葡萄糖对照品溶液。5. 根据权利要求1所述的马蹄蕨药材中多糖含量的紫外分光光度测定法，其特征在于 步骤B按以下操作进行:准确称取0.2g蒽酮，溶解于lOOmL浓硫酸溶液中，配制成0.2%蒽酮-硫酸试剂。6. 根据权利要求1所述的马蹄蕨药材中多糖含量的紫外分光光度测定法，其特征在于 步骤C按以下操作进行:精密量取0. lg/L的葡萄糖对照品溶液0.05、0.1、0.2、0.3、0.4、0.6、 0.8ml，分别置10ml具塞刻度试管中，各加蒸馏水至1.0ml，摇匀，分别加入0.2 %蒽酮-硫酸 试剂4ml，迅速浸于冰水浴中冷却，各管加完后一起浸于沸水浴中，水浴煮沸10分钟，取出， 用自来水冷却，室温放置10分钟，以蒸馏水为空白，照紫外-可见分光光度法，在620mn波长 处测定吸光度；以吸光度值为纵坐标，葡萄糖浓度为横坐标，绘制标准曲线。7. 根据权利要求1所述的马蹄蕨药材中多糖含量的紫外分光光度测定法，其特征在于 步骤D按以下操作进行:精密吸取浓度为50μg/ml的马蹄蕨多糖提取物lml，加入0.2%蒽酮-硫酸试剂4ml，迅速浸于冰水浴中冷却，各管加完后一起浸于沸水浴中，水浴煮沸10分钟，取 出，用自来水冷却，室温放置10分钟，依法测定吸光度值，根据标准曲线计算样品中多糖含 量。
【专利摘要】本发明公开了一种马蹄蕨药材中多糖含量的紫外分光光度测定法，以无水葡萄糖为对照，使用紫外分光光度计测定马蹄蕨多糖提取物中多糖的含量。本发明完善了马蹄蕨药材的质量检测标准，为马蹄蕨药材质量标准的建立奠定了基础；而且，该法灵敏度高、操作简便、结果准确；推广和应用本发明，可以确保马蹄蕨药材质量，保障其临床用药的安全、有效、稳定。
【IPC分类】G01N21/33
【公开号】CN105606556
【申请号】CN201610058138
【发明人】张赟赟, 杨海船, 李燕婧, 李嘉, 姜平川
【申请人】广西壮族自治区中医药研究院
【公开日】2016年5月25日
【申请日】2016年1月28日