盾叶冠心宁制剂的含量检测方法
【专利摘要】本发明属中药成方制剂检测领域，具体来说是公开了盾叶冠心宁制剂的含量检测方法，该方法是以盾叶新苷为指标成分建立的含量检测方法。盾叶冠心宁制剂是以盾叶薯蓣提取物为处方的一种中药制剂，具有活血化瘀、行气止痛、养血安神功效。用于治疗胸痹、心痛属气滞血瘀证，高脂血症，以及冠心病、心绞痛见上述症候者。本发明公开的含量测定方法以蒸发光散射检测器检测，用高效液相色谱法测定盾叶新苷含量。该方法准确且稳定性好，提高了盾叶冠心宁制剂的质量可控性，更能保证药品的有效性，便于药品标准化生产。
【专利说明】
盾叶冠心宁制剂的含量检测方法
技术领域
[0001] 本发明属于药物分析技术领域，具体涉及一种防治心血管疾病中药制剂盾叶冠心 宁的含量检测方法，具体来说，是盾叶冠心宁制剂中有效成分盾叶心苷的含量测定方法。
【背景技术】
[0002] 以盾叶薯蓣提取物为处方制成的防治心血管疾病中药制剂盾叶冠心宁具有活血 化瘀、行气止痛、养血安神功效。用于治疗胸痹、心痛属气滞血瘀证，高脂血症，以及冠心病、 心绞痛见上述症候者。通过冠脉结扎致大鼠心肌缺血实验研究盾叶薯蓣心肌缺血的防治作 用，结果表明，盾叶薯蓣提取物样品（盾叶新苷含量达6.91%)低、中、高剂量组均能显著降 低冠脉结扎致心肌缺血大鼠ST段和T波的异常抬高；显著降低心肌缺血大鼠的心肌梗塞范 围和血清中CK、LDH的含量，对心肌缺血有一定的防治作用，表明盾叶新苷为抗心肌缺血活 性成分之一。另盾叶冠心宁片为江苏黄河药业股份有限公司的独家中药品种，标准收载于 卫生部药品标准中药成方制剂第17册，标准编号为WS 3-B-3282-98,标准中无含量测定项， 目前对于盾叶冠心宁制剂品种也没有含量测定相关文献报道。由于中药成分比较复杂，对 于中药制剂来说确定有效成分并以其为指标建立含测量测定方法，可提高中药产品的质量 可控性，保证药品的有效性。
【发明内容】
[0003] 本发明所要解决的技术问题是提供盾叶冠心宁制剂的含量检测方法。
[0004] 为解决上述技术问题，本发明采用的技术方案如下：
[0005] 盾叶冠心宁制剂的含量检测方法，该方法以盾叶新苷为指标成分建立的含量检测 方法。
[0006] 具体检测方法包括如下步骤：
[0007] (1)对照品溶液的制备:取盾叶新苷对照品，加甲醇水溶液配制而成；
[0008] (2)供试品溶液的制备：取盾叶冠心宁制剂，加乙醇水溶液，称定重量，超声处理， 补重，摇匀，滤过，取续滤液即得；
[0009] (3)高效液相色谱条件：以十八烷基硅烷键合硅胶为柱子的填充剂；以乙腈为流动 相A，以水为流动相B，流速0.8~lmL/min，按表1中的洗脱要求进行梯度洗脱;用蒸发光散射 检测器检测;理论板数按盾叶新苷计算应不低于3000;
[0010] 表1
[0012] 所述"4"意思为匀速变化；
[0013] (4)测定:吸取对照品溶液与供试品溶液，注入高校液相色谱仪，以外标法计算盾 叶冠心宁制剂中盾叶新苷的含量。
[0014] 步骤(1)中，所述的甲醇水溶液浓度为60%~80% (v/v)，优选70% (v/v)。
[0015]步骤（1)中，制备得到的对照品溶液中，盾叶新苷的含量为0.1~0.5mg/mL，优选 0 · 2~0 · 3mg/mL，最优选 0 · 25mg/mL。
[0016] 步骤(2)中，所述的乙醇水溶液浓度为60%~80% (v/v)，优选70% (v/v)。
[0017]步骤(2)中，制备得到的供试品溶液中，每25ml乙醇水溶液中盾叶冠心宁制剂的量 为0·lg~0·5g。
[0018] 步骤（2)中，超声处理，超声功率是200~500W，最优选300W，超声频率优选频率 40kHz，超声时间为15~60分钟，优选15~45分钟，最优选30分钟。
[0019]步骤(2)中，优选的方式是，取盾叶冠心宁片剂10片，除去糖衣，精密称定，研细，取 约0.2g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入70% (v/v)乙醇25ml，密塞，称定重量，超声处 理30分钟，放冷，再称定重量，用70 % (v/v)乙醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即 得。
[0020] 步骤(3)中，柱温为20~30°C，优选23°C。
[0021]步骤（3)中，蒸发光散射检测器漂移管温度为55~75°C，优选65°C。气体流速 2·0mL/min〇
[0022] 步骤(4)中，优选的方式是分别精密吸取对照品溶液10μ1与20μ1，供试品溶液10μ 1，注入液相色谱仪，测定，用外标两点法对数方程计算，即得。
[0023] 其中，所述的制剂，其剂型为丸剂、片剂、胶囊剂或颗粒剂。
[0024] 有益效果:盾叶冠心宁制剂是以盾叶薯蓣提取物为处方的一种中药制剂，具有活 血化瘀、行气止痛、养血安神功效。用于治疗胸痹、心痛属气滞血瘀证，高脂血症，以及冠心 病、心绞痛见上述症候者。本发明公开的含量测定方法以蒸发光散射检测器检测，用高效液 相色谱法测定盾叶新苷含量。该方法准确且稳定性好，提高了盾叶冠心宁制剂的质量可控 性，更能保证药品的有效性，便于药品标准化生产。
【附图说明】
[0025] 图1为对照品(Α)、供试品(Β)、阴性对照品(C)的高效液相色谱图。
【具体实施方式】
[0026]根据下述实施例，可以更好地理解本发明。然而，本领域的技术人员容易理解，实 施例所描述的内容仅用于说明本发明，而不应当也不会限制权利要求书中所详细描述的本 发明。
[0027] 实施例：
[0028] 1、仪器与试药
[0029] 仪器:高效液相色谱仪:Agilent 1200;奥泰3300蒸发光散射检测器;XS205电子天 平(瑞士Mettler Toledo公司）;KH-500DE型超声波清洗器(昆山禾创超声仪器有限公司）。
[0030] 试剂：甲醇、乙腈为色谱纯、水位超纯水，其他化学试剂均为分析纯。
[0031] 对照品：盾叶新苷，纯度98.0%，宝鸡市辰光生物科技有限公司提供。
[0032]供试品：盾叶冠心宁片，江苏黄河药业股份有限公司提供。
[0033]盾叶冠心宁片阴性样品：处方中缺盾叶冠心宁，其余辅料按盾叶冠心宁片制备方 法所制样品，江苏黄河药业股份有限公司提供。
[0034] 2、色谱条件
[0035] 色谱柱：Agilent Cis柱4.6X250mm
[0036] 流动相：以乙腈为流动相A，以水为流动相B，具体色谱条件见表1。
[0037] 柱温23°C ;流速0 · 8mL/min;漂移管温度:65°C ;气体流速:2 · OmL/min。
[0038] 对照品溶液的制备取盾叶新苷对照品适量，精密称定，加 70 % (v/v)甲醇制成每 lml含0.25mg的溶液，即得。
[0039] 供试品溶液的制备取本品10片，除去糖衣，精密称定，研细，取约0.2g，精密称定， 置具塞锥形瓶中，精密加入70 % (v/v)乙醇25ml，密塞，称定重量，超声处理30分钟，放冷，再 称定重量，用70 %乙醇(v/v)补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。
[0040] 3、供试品提取完全性考察
[0041]超声处理时间对提取完全性的影响取同一批样品，约〇.2g，共4份，精密称定，置 具塞锥形瓶中，精密加入70%乙醇25ml，密塞，称定重量，分别按15、30、45、60分钟超声（功 率300w，频率40kHz)处理，放冷，再称定重量，用70% (v/v)乙醇补足减失的重量，摇匀，滤 过，取续滤液，即得。按上述色谱条件，依法测定，试验结果见表2。
[0042] 表2超声处理时间考察结果
[0044] 试验结果表明，超声处理30分钟足以提取完全，故选择30分钟为最优超声处理时 间。
[0045] 4、方法学考察
[0046] 4.1专属性
[0047] 取对照品溶液，供试品溶液，阴性对照溶液（制备方法同供试品溶液制备)分别进 样分析，色谱图见图1。图谱结果表明，该色谱条件下专属性良好，无阴性干扰。
[0048] 4.2线性
[0049] 精密称取盾叶新苷对照品适量，加70%甲醇配制成0.9820mg/ml的贮备液，精密吸 取贮备液0 · 5ml、lml、2ml、3ml、4ml、5ml、6ml、7ml分别以70 % (v/v)甲醇定容至10ml容量瓶 中，摇勾，配置成浓度为0 · 〇491mg/ml、0 · 0982mg/ml、0 · 1964mg/ml、0 · 2946mg/ml、0 · 3928mg/ ml、0 · 4910mg/ml、0 · 5892mg/ml、0 · 6874mg/ml的对照品溶液，精密吸取各浓度溶液10μ1注入 液相色谱仪，按2.4项下色谱条件测定峰面积，以峰面积的对数值为纵坐标、浓度的对数值 为横坐标、绘制标准曲线，计算回归方程，得回归方程为l〇gA= 1.46431ogC+3.8186，R2 = 0.9992，在0.491yg~6.874yg线性范围内线性关系良好。
[0050] 4.3稳定性
[00511 取同一盾叶冠心宁片样品溶液，分别于Oh、2h、4h、8h、12h、24h测定，对所得到的图 谱分别计算指标成分盾叶新苷的保留时间、峰面积的RSD考察稳定性。相关数据见表3。 [0052]表3稳定性考察结果
[0054] 结果表明，在24h内，盾叶新苷相对保留时间的RSD为1.86%，峰面积RSD为2.77%， 均在3%以下，符合要求，说明盾叶冠心宁片样品在24h内测定稳定。
[0055] 4.4精密度
[0056]取盾叶冠心宁片按照供试品制备方法处理，按确定的色谱方法平行进样6次，对所 得到的图谱分别计算指标成分盾叶新苷的保留时间、峰面积的RSD。相关数据见表4。
[0057] 表4精密度考察结果
[0059]结果表明，同一样品连续进样六次，盾叶新苷相对保留时间的RSD为0.60%，峰面 积RSD为1.94%，均在3%以下，符合要求，说明精密度良好。
[0060] 4.5重复性
[0061]取盾叶冠心宁片按照供试品处理方法平行处理六份，按确定的色谱方法进样分 析，对所得到的图谱计算指标成分盾叶新苷含量的RSD。相关数据见表5。
[0062]表5重复性考察结果
[0064]结果表明，同一样品平行处理6份，盾叶新苷含量的RSD为1.07%，在3%以下，符合 要求，说明方法重复性良好。
[0065] 4.6加样回收率
[0066] 取已测定盾叶新苷含量的盾叶冠心宁片粉末约0.1g(盾叶冠心宁片，批号： 1509016,含量14.85mg/片)9份，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入50%，100%，150%倍 量的盾叶新苷对照品各3份，按供试品溶液的制备方法制备并测定，按公式：回收率％ =(实 测盾叶新苷量-供试品中所含盾叶新苷量)/对照品加入量X 100%计算加样回收率。结果见 表6〇
[0067]表6加样回收率考察结果
[0070] 结果表明，平均回收率为102.42%，9份加样样品的回收率均在95%~105%的范 围内，RSD为1.04%，在3%以下，符合相关要求。说明方法准确度良好。
[0071] 4.7耐用性
[0072] 不同厂家色谱柱考察
[0073] 考察了不同厂家的三根色谱柱(Agilent Ci8柱，Alltima Ci8柱，Thermo Ci8柱，均 为4.6 X 250mm)测定同一样品情况，考察结果见表7。
[0074]表7色谱柱耐用性考察结果
[0076]结果表明，三根不同色谱柱所测同一样品盾叶新苷含量的RSD小于2%，说明该方 法对不同色谱柱耐用性良好。
[0077]不同漂移管温度考察
[0078] 考察了三种不同漂移管温度(60°(：、65°(：、70°(：)测定同一样品情况，考察结果见表 8〇
[0079]表8漂移管温度考察结果
[0081]结果表明，三种不同漂移管温度所测同一样品盾叶新苷含量的RSD小于2%，说明 该方法在60 °C~70 °C的漂移管温度范围内耐用性良好。
[0082] 4.8盾叶冠心宁片中盾叶新苷的含量测定
[0083]取盾叶冠心宁片，按含量测定方法制备样品并测定，测定结果见表9。
[0084]表9盾叶冠心宁片含量测定结果
[0086]结果表明，测定的几批盾叶冠心宁片的含量范围在llmg/片~16mg/片范围内，平 均含量为14.39mg/片。考虑到盾叶冠心宁片的原料盾叶薯蓣药材目前并无法定标准收载含 测项，市场上的盾叶薯蓣药材中盾叶新苷含量会因产地等因素导致较大的差异，后续需通 过不断累积药材、提取物和成品的数据来固定盾叶薯蓣药材的主要来源，以达到提高标准 的同时也提升产品的质量稳定性，目前暂定盾叶冠心宁片含盾叶薯蓣以盾叶新苷计，每片 不得少于6mg。
【主权项】
1. 盾叶冠心宁制剂的含量检测方法，其特征在于，该方法以盾叶新苷为指标成分建立 的含量检测方法。2. 根据权利要求1所述的盾叶冠心宁制剂的含量检测方法，其特征在于，它包括： (1) 对照品溶液的制备:取盾叶新苷对照品，加甲醇水溶液配制而成； (2) 供试品溶液的制备:取盾叶冠心宁制剂，加乙醇水溶液，称定重量，超声处理，补重， 摇匀，滤过，取续滤液即得； (3) 高效液相色谱条件：以十八烷基硅烷键合硅胶为柱子的填充剂；以乙腈为流动相A， 以水为流动相B，按表1中的洗脱要求进行梯度洗脱；用蒸发光散射检测器检测;理论板数按 盾叶新苷计算应不低于3000; 表1(4) 测定：吸取对照品溶液与供试品溶液，注入高校液相色谱仪，以外标法计算盾叶冠 心宁制剂中盾叶新苷的含量。3. 根据权利要求2所述的盾叶冠心宁制剂的含量检测方法，其特征在于，步骤（1)中，所 述的甲醇水溶液浓度为60 %~80 % (v/v)。4. 根据权利要求2所述的盾叶冠心宁制剂的含量检测方法，其特征在于，步骤（1)中，制 备得到的对照品溶液中，盾叶新苷的含量为0.1~〇.5mg/mL。5. 根据权利要求2所述的盾叶冠心宁制剂的含量检测方法，其特征在于，步骤(2)中，所 述的乙醇水溶液浓度为60%~80% (v/v)。6. 根据权利要求2所述的盾叶冠心宁制剂的含量检测方法，其特征在于，步骤(2)中，制 备得到的供试品溶液中，每25ml乙醇水溶液中盾叶冠心宁制剂的量为O.lg~0.5g。7. 根据权利要求2所述的盾叶冠心宁制剂的含量检测方法，其特征在于，步骤(2)中，超 声处理时间为15~60分钟。8. 根据权利要求2所述的盾叶冠心宁制剂的含量检测方法，其特征在于，步骤(3)中，柱 温为20~30 °C。9. 根据权利要求2所述的盾叶冠心宁制剂的含量检测方法，其特征在于，步骤(3)中，蒸 发光散射检测器漂移管温度为55~75 °C。10. 根据权利要求2~9中任意一项所述的盾叶冠心宁制剂的含量检测方法，其特征在 于，所述的制剂，其剂型为丸剂、片剂、胶囊剂或颗粒剂。
【文档编号】G01N30/02GK105866286SQ201610272567
【公开日】2016年8月17日
【申请日】2016年4月28日
【发明人】何枢衡, 唐俊, 朱正标, 陶元明, 马博, 张汉华
【申请人】江苏黄河药业股份有限公司