专利名称：一种快速繁殖咖啡椒草的方法
技术领域：
本发明涉及一种观赏水草的组织培养方法，更具体涉及咖啡椒草的一种快速繁殖方法，属于生物技术在水簇箱观赏水草种苗生产中的应用。
背景技术：
咖啡椒草(Cryptocoryne petchii)属天南星科隐棒花属，以其叶色可依光线的强弱而在绿色、深橄榄色至咖啡色之间变化而得名。咖啡椒草的叶子呈披针形放射状，叶缘有皱褶，在清水中似波浪状摇曳，极富魅力，是水簇箱前景、中景草中的名贵品种。咖啡椒草原产于斯里兰卡，自然繁殖系数低，常规方法(如利用匍匐茎生根的特性扦插)难以形成规模化生产。目前国内主要依靠进口，价格昂贵，且常常供不应求。
组织培养作为生物技术领域中的一种重要手段，利用植物细胞的全能性，如茎尖、嫩芽等组织，通过离体培养，产生愈伤组织、分化成苗、诱导生根，从而形成植物的无性系快速繁殖的植株。虽然组织培养是一种比较成熟的技术，其基本培养基一般采用MS，但对不同植物，从产生愈伤组织、分化成苗、诱导生根的不同生长阶段需要不同的营养配置，以及不同的生长条件。因此对咖啡椒草的组织培养，也需要特殊的培养基和培养条件。
发明内容
本发明的目的是，提供一种快速繁殖咖啡椒草的方法，该方法利用组织培养技术，将咖啡椒草培养物经消毒、诱导培养、分化与增殖及生根培养，可快速繁殖咖啡椒草，为水簇箱中前景、中景布置此水草提供大量的种苗。
为了达到上述目的，一种快速繁殖咖啡椒草的方法按下列步骤进行(1)取长度为0.5～1.0厘米的咖啡椒草茎尖作为咖啡椒草培养物；(2)将咖啡椒草培养物用流水冲冼20～30分钟，然后用0.1％的氯化汞浸泡6～8分钟，无菌水冲洗8～10分钟；(3)将经步骤(2)处理的咖啡椒草培养物接入诱导培养基中，培养22～28天；诱导培养基为每升MS基本培养基中加入0.08毫克KT(6-呋喃氨基嘌呤)、0.05毫克2，4-D(2，4-二氯苯氧乙酸)、30克蔗糖、6克琼脂；其中每升MS基本培养基含NH4NO3(硝酸铵) 1650毫克KNO3(硝酸钾) 1900毫克CaCl2·2H2O(二水氯化钙) 440毫克MgSO4.7H2O(硫酸镁) 370毫克KH2PO4(磷酸二氢钾) 170毫克KI(碘化钾) 0.83毫克
H3BO3(硼酸) 6.2毫克MnSO4·4H2O(硫酸锰) 22.3毫克ZnSO4·7H2O(硫酸锌) 8.6毫克Na2MoO4·2H2O(钼酸钠) 0.25毫克CuSO4·5H2O(硫酸铜) 0.025毫克CoCl2·6H2O(氯化钴) 0.025毫克FeSO4·7H2O(硫酸亚铁) 27.8毫克乙二胺四乙酸二钠 37.3毫克肌醇 100毫克烟酸 0.5毫克盐酸吡哆醇 0.5毫克盐酸硫胺素 0.1毫克甘氨酸 2毫克余者为水；(4)将经步骤(3)培养的咖啡椒草培养物转接于分化与增殖培养基，培养35～45天长出许多咖啡椒草芽；分化与增殖培养基为每升MS基本培养基中加入1毫克BA(6-苄基腺嘌呤)、0.2毫克IBA(吲哚丁酸)、30克蔗糖、6克琼脂；(5)若将步骤(4)的咖啡椒草芽分株，可作为新的咖啡椒草培养物，重复步骤(4)可得到大量的咖啡椒草芽；(6)若将步骤(4)的咖啡椒草芽转接于生根培养基中诱导生根，培养35～45天即得到咖啡椒草苗；生根培养基为每升MS基本培养基中加入1升蒸馏水、0.5毫克IBA(吲哚丁酸)、40克蔗糖、12克琼脂。
本发明具有如下优点本发明的诱导培养基、分化与增殖培养基及生根培养基是最适合咖啡椒草三个不同生长阶段---诱导培养、分化与增殖及生根培养的最佳培养基配方，一个咖啡椒草茎尖经反复增殖，一年可繁殖上万株种苗，为水簇箱中前景、中景布置此水草提供大量的种苗。
具体实施例方式一种快速繁殖咖啡椒草的方法，该方法按下列步骤进行(1)取长度为0.5～1.0厘米的咖啡椒草茎尖作为咖啡椒草培养物；(2)将咖啡椒草培养物用流水冲冼20～30分钟，然后用0.1％的氯化汞浸泡6～8分钟，无菌水冲洗8～10分钟；(3)将经步骤(2)处理的咖啡椒草培养物接入诱导培养基中，培养22～28天，咖啡椒草培养物开始萌动、生长；诱导培养基为每升MS基本培养基中加入0.08毫克KT(6-呋喃氨基嘌呤)、0.05毫克2，4-D(2，4-二氯苯氧乙酸)、30克蔗糖、6克琼脂；其中每升MS基本培养基含NH4NO3(硝酸铵) 1650毫克KNO3(硝酸钾)1900毫克CaCl2·2H2O(二水氯化钙)440毫克MgSO4.7H2O(硫酸镁) 370毫克
KH2PO4(磷酸二氢钾)170毫克KI(碘化钾) 0.83毫克H3BO3(硼酸) 6.2毫克MnSO4·4H2O(硫酸锰) 22.3毫克ZnSO4·7H2O(硫酸锌) 8.6毫克Na2MoO4·2H2O(钼酸钠)0.25毫克CuSO4·5H2O(硫酸铜) 0.025毫克CoCl2·6H2O(氯化钴) 0.025毫克FeSO4·7H2O(硫酸亚铁) 27.8毫克乙二胺四乙酸二钠 37.3毫克肌醇 100毫克烟酸 0.5毫克盐酸吡哆醇 0.5毫克盐酸硫胺素 0.1毫克甘氨酸 2毫克余者为水；(4)将经步骤(3)培养的咖啡椒草培养物转接于分化与增殖培养基，培养35～45天长出许多咖啡椒草芽；分化与增殖培养基为每升MS基本培养基中加入1毫克BA(6-苄基腺嘌呤)、0.2毫克IBA(吲哚丁酸)、30克蔗糖、6克琼脂；(5)若将步骤(4)的咖啡椒草芽分株，可作为新的咖啡椒草培养物，重复步骤(4)可得到大量的咖啡椒草芽；
(6)若将步骤(4)的咖啡椒草芽转接于生根培养基中诱导生根，培养35～45天即得到咖啡椒草苗；生根培养基为每升MS基本培养基中加入1升蒸馏水、0.5毫克IBA(吲哚丁酸)、40克蔗糖、12克琼脂。
实施本发明，可在短期内得到大量的咖啡椒草试管苗。
权利要求
1.一种快速繁殖咖啡椒草的方法，其特征在于，该方法按下列步骤进行(.1)取长度0.5～1.0厘米的咖啡椒草茎尖作为咖啡椒草培养物；(2)将咖啡椒草培养物用流水冲冼20～30分钟，然后用0.1％的氯化汞浸泡6～8分钟，无菌水冲洗8～10分钟；(3)将经步骤(2)处理的咖啡椒草培养物接入诱导培养基中，培养22～28天；诱导培养基为每升MS基本培养基中加入0.08毫克6-呋喃氨基嘌呤、0.05毫克2，4-二氯苯氧乙酸、30克蔗糖、6克琼脂；(4)将经步骤(3)培养的咖啡椒草培养物转接于分化与增殖培养基，培养35～45天长出许多咖啡椒草芽；分化与增殖培养基为每升MS基本培养基中加入1毫克6-苄基腺嘌呤、0.2毫克吲哚丁酸、30克蔗糖、6克琼脂；(5)将步骤(4)的咖啡椒草芽分株，作为新的咖啡椒草培养物，重复步骤(4)可得到大量的咖啡椒草芽；(6)将步骤(4)的咖啡椒草芽转接于生根培养基中诱导生根，培养35～45天即得到咖啡椒草苗；生根培养基为每升MS基本培养基中加入1升蒸馏水、0.5毫克吲哚丁酸、40克蔗糖、12克琼脂。
全文摘要
本发明公开了咖啡椒草的一种快速繁殖方法，即以咖啡椒草的茎尖为培养物，培养在以MS为基本培养基、附加KT和2，4－D的诱导培养基中约3－4周，茎尖萌动、生长后再转接于附加BA和NAA的分化、增殖培养基中诱导丛生苗，增殖系数可达4－5倍。而后每30天继代培养一次，一年可繁殖上万株咖啡椒草种苗，为水簇箱前景、中景布置此水草提供大量的种苗。
文档编号A01H4/00GK1586172SQ20041006062
公开日2005年3月2日 申请日期2004年7月23日 优先权日2004年7月23日
发明者刘艳玲, 徐立铭, 李洪林 申请人:中国科学院武汉植物园