专利名称：一种快速繁殖王莲的方法
技术领域：
本发明涉及一种植物的组织培养方法，更具体涉及王莲的一种快速繁殖方法，属于生物技术在植物种苗生产中的应用。
背景技术：
王莲(Victoria cruziana D.orbigny)属睡莲科王莲属大型名贵观赏植物，原产于南美洲的亚马逊河流域，为热带典型的多年生水生浮叶植物。王莲以其叶形奇特、硕大，花朵香味浓郁，且在绽放过程中有白、红、紫三种颜色变化，蔚为奇观，而被誉为“水中花王”，观赏价值极高。但其对生长条件，尤其是对气温、水温要求苛刻。只有当气温、水温稳定在25℃以上时，王莲才能在露天水池中安全生长，开花结籽。这一条件限制了王莲在我国长江以北地区的生长与繁殖，即王莲在这些地区只能作为一年生植物栽培，且种子结实率低、成熟度不高，无法完成自繁自育，满足市场需求。
组织培养作为生物技术领域中的一种重要手段，利用植物细胞的全能性，如茎尖、嫩芽等组织，通过离体培养，产生愈伤组织、分化成苗、诱导生根，从而形成植物的无性系快速繁殖的植株。虽然组织培养是一种比较成熟的技术，其基本培养基一般采用MS，但对不同植物，从产生愈伤组织、分化成苗、诱导生根的不同生长阶段需要不同的营养配置，以及不同的生长条件。因此对王莲的组织培养，也需要特殊的培养基和培养条件。
发明内容
本发明的目的是，提供一种快速繁殖王莲的方法，该方法利用组织培养技术，将王莲培养物经消毒、诱导培养、分化与增殖及生根培养，可快速繁殖王莲种苗，为我国长江以北地区栽植、观赏、布置园林水景等提供大量的种苗。
为了达到上述目的，一种王莲快速繁殖的方法按下列步骤进行(1)取长度为0.5～1.0厘米的王莲茎尖作为王莲培养物；(2)将王莲培养物用流水冲冼20～30分钟，再用75％的酒精棉球擦洗王莲培养物的表面，然后用0.1％的氯化汞浸泡6～8分钟，无菌水冲洗8～10分钟；(3)将经步骤(2)处理的王莲培养物接入诱导培养基中，培养20～30天；诱导培养基为每升MS基本培养基中加入0.5毫克BA(6-苄基腺嘌呤)、0.02毫克NAA(萘乙酸)、0.3毫克GA3(赤霉素)、2克活性碳、30克蔗糖、6克琼脂；其中每升MS基本培养基含NH4NO3(硝酸铵) 1650毫克KNO3(硝酸钾)1900毫克CaCl2·2H2O(二水氯化钙)440毫克MgSO4.7H2O(硫酸镁) 370毫克KH2PO4(磷酸二氢钾) 170毫克KI(碘化钾)0.83毫克
H3BO3(硼酸) 6.2毫克MnSO4·4H2O(硫酸锰) 22.3毫克ZnSO4·7H2O(硫酸锌) 8.6毫克Na2MoO4·2H2O(钼酸钠) 0.25毫克CuSO4·5H2O(硫酸铜) 0.025毫克CoCl2·6H2O(氯化钴) 0.025毫克FeSO4·7H2O(硫酸亚铁)27.8毫克乙二胺四乙酸二钠37.3毫克肌醇100毫克烟酸0.5毫克盐酸吡哆醇 0.5毫克盐酸硫胺素 0.1毫克甘氨酸 2毫克余者为水；(4)将经步骤(3)培养的王莲培养物转接于分化与增殖培养基，培养30～45天长出许多王莲新芽；分化与增殖培养基为每升MS基本培养基中加入0.5毫克BA(6-苄基腺嘌呤)、0.02毫克NAA(萘乙酸)、0.3毫克GA3(赤霉素)、2克活性碳、30克蔗糖、6克琼脂；(5)若将步骤(4)的王莲新芽分株，可作为新的王莲培养物，重复步骤(4)可得到大量的王莲新芽；(6)若将步骤(4)的王莲新芽转接于生根培养基中诱导生根，培养30～45天即得到王莲苗；生根培养基为每升MS基本培养基中加入1升蒸馏水、1.0毫克IBA(吲哚丁酸)、0.02毫克NAA(萘乙酸)、40克蔗糖、12克琼脂。
本发明具有如下优点本发明的诱导培养基、分化与增殖培养基及生根培养基是最适合王莲三个不同生长阶段---诱导培养、分化与增殖及生根培养的最佳培养基配方，一个王莲茎尖经反复增殖，一年可繁殖上万株种苗，为我国长江以北地区栽植、观赏、布置园林水景等提供大量的种苗。
具体实施例方式为了快速繁殖王莲种苗，本发明按以下步骤进行(1)取长度为0.5～1.0厘米的王莲茎尖作为王莲培养物；(2)将王莲培养物用流水冲冼20～30分钟，再用75％的酒精棉球擦洗王莲培养物的表面，然后用0.1％的氯化汞浸泡6～8分钟，无菌水冲洗8～10分钟；(3)将经步骤(2)处理的王莲培养物接入诱导培养基中，培养20～30天，王莲培养物开始萌动、生长；诱导培养基为每升MS基本培养基中加入0.5毫克BA(6-苄基腺嘌呤)、0.02毫克NAA(萘乙酸)、0.3毫克GA3(赤霉素)、2克活性碳、30克蔗糖、6克琼脂；其中每升MS基本培养基含NH4NO3(硝酸铵)1650毫克KNO3(硝酸钾) 1900毫克CaCl2·2H2O(二水氯化钙) 440毫克MgSO4.7H2O(硫酸镁)370毫克
KH2PO4(磷酸二氢钾) 170毫克KI(碘化钾) 0.83毫克H3BO3(硼酸) 6.2毫克MnSO4·4H2O(硫酸锰) 22.3毫克ZnSO4·7H2O(硫酸锌) 8.6毫克Na2MoO4·2H2O(钼酸钠) 0.25毫克CuSO4·5H2O(硫酸铜) 0.025毫克CoCl2·6H2O(氯化钴) 0.025毫克FeSO4·7H2O(硫酸亚铁)27.8毫克乙二胺四乙酸二钠 37.3毫克肌醇 100毫克烟酸 0.5毫克盐酸吡哆醇 0.5毫克盐酸硫胺素 0.1毫克甘氨酸 2毫克余者为水；(4)将经步骤(3)培养的王莲培养物转接于分化与增殖培养基，培养30～45天长出许多王莲新芽；分化与增殖培养基为每升MS基本培养基中加入0.5毫克BA(6-苄基腺嘌呤)、0.02毫克NAA(萘乙酸)、0.3毫克GA3(赤霉素)、2克活性碳、30克蔗糖、6克琼脂；(5)若将步骤(4)的王莲新芽分株，可作为新的王莲培养物，重复步骤(4)可得到大量的王莲新芽；
(6)若将步骤(4)的王莲新芽转接于生根培养基中诱导生根，培养30～45天即得到王莲苗；生根培养基为每升MS基本培养基中加入1升蒸馏水、1.0毫克IBA(吲哚丁酸)、0.02毫克NAA(萘乙酸)、40克蔗糖、12克琼脂。
实施本发明，可在短期内得到大量的王莲试管苗。
权利要求
1.一种快速繁殖王莲的方法，按下列步骤进行(1)取长度为0.5～1.0厘米的王莲茎尖作为王莲培养物；(2)将王莲培养物用流水冲冼20～30分钟，再用75％的酒精棉球擦洗王莲培养物的表面，然后用0.1％的氯化汞浸泡6～8分钟，无菌水冲洗8～10分钟；(3)将经步骤(2)处理的王莲培养物接入诱导培养基中，培养20～30天；诱导培养基为每升MS基本培养基中加入0.5毫克6-苄基腺嘌呤、0.02毫克萘乙酸、0.3毫克赤霉素、2克活性碳、30克蔗糖、6克琼脂；(4)将经步骤(3)培养的王莲培养物转接于分化与增殖培养基，培养30～45天长出许多王莲新芽；分化与增殖培养基为每升MS基本培养基中加入0.5毫克6-苄基腺嘌呤、0.02毫克萘乙酸、0.3毫克赤霉素、2克活性碳、30克蔗糖、6克琼脂；(5)将步骤(4)的王莲新芽分株，作为新的王莲培养物，重复步骤(4)可得到大量的王莲新芽；(6)将步骤(4)的王莲新芽转接于生根培养基中诱导生根，培养30～45天即得到王莲苗；生根培养基为每升MS基本培养基中加入1升蒸馏水、1.0毫克吲哚丁酸、0.02毫克萘乙酸、40克蔗糖、12克琼脂。
全文摘要
本发明公开了一种快速繁殖王莲的方法，该方法以王莲茎尖为培养物，将王莲培养物经消毒、诱导培养、分化与增殖及生根培养，可快速繁殖王莲，一棵王莲茎尖一年可繁殖上万株王莲种苗，为我国长江以北地区栽植、观赏、美化水面、布置水景等提供大量的种苗。
文档编号A01H3/04GK1586173SQ20041006062
公开日2005年3月2日 申请日期2004年7月23日 优先权日2004年7月23日
发明者徐立铭, 刘艳玲, 李洪林 申请人:中国科学院武汉植物园