专利名称：一种通过体胚发生大量繁殖大花蕙兰的方法
技术领域：
本发明涉及一种通过体胚发生大量繁殖大花蕙兰的方法。
背景技术：
大花蕙兰(Cymbidium hybridum)，有“兰花之王”称誉，在所有的观赏洋兰中，大花蕙兰的平均市场售价最高。大花蕙兰种苗传统繁殖方式为分株繁殖或用组织培养以芽增方式快繁，繁殖系数较低，周期较长，尤其是工厂化生产条件下，优良品种的快繁有较高的种苗生产成本，较难在较短时间内形成规模产量。
发明内容
本发明提供了一种通过体胚发生大量繁殖大花蕙兰的方法，它极大地节约了生产成本，缩短了繁殖周期，解决了大花蕙兰优良品种在较短时间内难以形成规模产量的问题。
本发明采用了以下技术方案如下一种通过体胚发生大量繁殖大花蕙兰的方法，它采用如下步骤步骤一，采取正在生长中的未展叶新芽消毒处理后，在显微镜下剥取茎尖，在无菌条件下，将茎尖接种于培养基上，建立无菌体系；步骤二，切取无菌体系幼苗的茎段，在适宜的激素组合和适宜的培养基上，诱导体细胞胚胎的发生；步骤三，对体胚进行切伤处理后，接种在适宜的培养基上快速大量增殖；步骤四，将得到的足够数量的体细胞胚团，在适宜的分化培养基上培育成完整的小植株；步骤五，将得到的足够数量的小植株培养至状苗后出瓶移栽；步骤六，对小苗进行正常管理，培育至成品花。
在繁殖前需要对快繁的大花蕙兰品种存档保存亲本图像资料。步骤一中所述的对未展叶新芽进行消毒的过程为首先流水冲洗10min后，75％酒精表面灭菌5～8s，无菌水冲净，然后在3％次氯酸钠溶液中浸10min，无菌水冲洗3～5遍后。步骤一中茎尖接种的培养基为大花蕙兰组培芽增殖培养基。
采用如上技术方案，本发明利用细胞全能性的原理，使大花蕙兰种苗在规模生产时直接以体细胞胚胎发生的方式进行，较短时间内得到大量单细胞起源的、同步性好的胚性细胞和两极性的胚状体，进而得到大量个体间遗传背景一致、无性系变异小的完整植株，从而解决了在较短时间内形成规模产量的问题，极大地节约了生产成本，缩短了繁殖周期。
具体实施例方式
本发明为一种通过体胚发生大量繁殖大花蕙兰的方法，它采用如下步骤步骤一，采取正在生长中的未展叶新芽，首先用流水冲洗10min后，75％酒精表面灭菌5～8s，无菌水冲净，然后在3％次氯酸钠溶液中浸10min，无菌水冲洗3～5遍后，在显微镜下剥取茎尖，在无菌条件下，将茎尖接种于大花蕙兰组培芽增殖培养基，建立无菌体系；步骤二，切取无菌体系幼苗的茎段，在激素组合和适宜的培养基上，诱导体细胞胚胎的发生，选取不同发育阶段的体胚细胞团，用锋利的单面刀片切割成0.2cm×0.2cm×0.2cm的材料块，材料用FAA(70％)固定，注射器抽气，正丁醇逐级脱水，石蜡透入包埋，常规石蜡切片，切片厚度8-10μm，番红-固绿对染，显微镜下观察照相，建立档案；步骤三，对体胚进行切伤处理后，接种在适宜的培养基上快速大量增殖；步骤四，将得到的足够数量的体细胞胚团，在适宜的分化培养基上培育成完整的小植株；步骤五，将得到的足够数量的小植株培养至状苗后出瓶移栽；步骤六，对小苗进行正常管理，培育至成品花。
本发明在繁殖前选择需要快繁的大花蕙兰品种，用数码相机拍照，存档保存亲本图像资料；
权利要求
1.一种通过体胚发生大量繁殖大花蕙兰的方法，它采用如下步骤步骤一，采取正在生长中的未展叶新芽消毒处理后，在显微镜下剥取茎尖，在无菌条件下，将茎尖接种于培养基上，建立无菌体系；步骤二，切取无菌体系幼苗的茎段，在适宜的激素组合和适宜的培养基上，诱导体细胞胚胎的发生；步骤三，对体胚进行切伤处理后，接种在适宜的培养基上快速大量增殖；步骤四，将得到的足够数量的体细胞胚团，在适宜的分化培养基上培育成完整的小植株；步骤五，将得到的足够数量的小植株培养至状苗后出瓶移栽；步骤六，对小苗进行正常管理，培育至成品花。
2.根据权利要求1所述的一种通过体胚发生大量繁殖大花蕙兰的方法，其特征是在繁殖前需要对快繁的大花蕙兰品种存档保存亲本图像资料。
3.根据权利要求1所述的一种通过体胚发生大量繁殖大花蕙兰的方法，其特征是步骤一中所述的对未展叶新芽进行消毒的过程为首先用流水冲洗10min后，75％酒精表面灭菌5～8s，无菌水冲净，然后在3％次氯酸钠溶液中浸10min，无菌水冲洗3～5遍后。
4.根据权利要求1所述的一种通过体胚发生大量繁殖大花蕙兰的方法，其特征是步骤一中茎尖接种的培养基为大花蕙兰组培芽增殖培养基。
全文摘要
本发明公开了一种通过体胚发生大量繁殖大花蕙兰的方法，它采用如下步骤步骤一，采取正在生长中的未展叶新芽消毒处理后，在显微镜下剥取茎尖，在无菌条件下，将茎尖接种于培养基上，建立无菌体系；步骤二，切取无菌体系幼苗的茎段，在适宜的激素组合和适宜的培养基上，诱导体细胞胚胎的发生；步骤三，对体胚进行切伤处理后，接种在适宜的培养基上快速大量增殖；步骤四，将得到的足够数量的体细胞胚团，在适宜的分化培养基上培育成完整的小植株；步骤五，将得到的足够数量的小植株培养至状苗后出瓶移栽；步骤六，对小苗进行正常管理，培育至成品花。
文档编号A01G1/00GK1994069SQ20061016152
公开日2007年7月11日 申请日期2006年12月27日 优先权日2006年12月27日
发明者李 杰 申请人:李 杰