专利名称：酶递送系统、制备方法和用途的制作方法
技术领域：
本发明总体涉及包衣的消化酶/胰酶制剂、含有该制剂的药物组合物和酶递送系统，及其制备、使用方法，以及在治疗患有对酶治疗敏感的神经或行为疾病或病症的个体中的控制递送方法。
背景技术：
消化酶由唾液腺、胃中的腺、胰腺和小肠中的腺产生。例如，由胰腺产生并分泌入胃和小肠中的消化酶有助于消化。由胰腺产生的消化酶分泌入PH为约5到6的十二指肠或小肠上段，且该酶有助于消化食物组分，包括碳水化合物、脂质、蛋白质和核酸。然而，当经口给予消化酶时，所述酶暴露于PH约1-2的胃内的高酸性环境以及暴露于使酶变性和降解的胃蛋白酶。给予哺乳动物消化酶以治疗由影响胰腺的病症(例如胰腺炎和胰酶缺陷)而引起的酶缺陷。给予人类的胰酶通常来源于猪。酶制剂的生产商也为用于需要施用脂肪酶的患有囊性纤维化的个体的脂肪酶组合物使用肠溶包衣。用于递送脂肪酶的制剂使用例如包含邻苯二甲酸羟丙甲纤维素、二甲基硅油1000和邻苯二甲酸二丁酯的肠溶包衣。用于包覆敏感的生物活性物质的某些方法已经被描述了。Narayanaswamy等的美国专利No. 6，261，613公开了可包含包被在β底涂层(prime)形式的脂肪(即，具有块状对称性(blocky symmetry)的甘油三酯晶体)的壳中的酵母颗粒。包衣材料还可以包含例如在氢化植物油中发现的乳化剂。然而，所述包衣仅允许在约40°C到约50°C的有限温度范围内释放酵母。I^acifiC0等的美国专利No. 6，251，478B1公开了包封在脂质材料中的某些敏感物质，包括某些生物活性化合物。
背景技术：
部分中的描述不应被视为承认这种公开构成本发明的现有技术。发明简述本发明涉及包衣的消化酶制剂，以及包含包衣的消化酶制剂的药物组合物和酶递送系统，其可用于治疗患有孤独症、ADD、ADHD、帕金森氏病、囊性纤维化、其他神经和行为疾病或病症的个体。本发明的包衣和包封的消化酶制剂允许向患有对消化酶治疗敏感的神经和行为疾病和病症的患者受控地递送具有增加的稳定性和增强的施用性能的酶。在一些方面，本发明涉及包衣和/或包封的胰酶/消化酶制剂，其包括含有消化酶和/或胰酶的核心及含有可乳化脂质的包衣。所述核心包含用于有效治疗患者病症的量的胰酶/消化酶，所述病症例如可以是神经系统障碍，例如孤独症、ADD、ADHD、CF和帕金森氏病，或可以给予有效量胰酶/消化酶的其他疾病。特别地，所述包衣保护胰酶/消化酶免受去稳定因素例如溶剂、热、光、水分及其他环境因素的影响。当所述复合物暴露于溶剂时，所述包衣还提供胰酶/消化酶的控制释放。此外，在本发明的一个方面，本发明的包衣消化酶制剂具有消化酶颗粒的改善的倾倒性能(pour properties)、改善的味道和气味。本发明也涉及用于在患有帕金森氏病、ADD、ADHD、孤独症和囊性纤维化及其他行为或神经病症和疾病的个体中施用酶的酶和脂质的特定混合物。所述包衣的消化酶制剂可用于在选定的传送时间或在人胃肠道的选定的位置获得释放。在一个方面中，本发明涉及控制释放的酶制剂。另一个方面中，本发明涉及包衣的消化酶制剂，包含(a)含有消化酶颗粒的核心， 其中所述酶以颗粒的约5重量％到90重量％的量存在；和(b)含有可乳化脂质的包衣，其中所述包衣连续地包覆核心，且所述可乳化脂质在暴露于溶剂时乳化。另一个方面中，本发明涉及含有治疗有效量的包封的酶制剂的药物组合物，所述酶制剂包含(a)含有用于有效治疗患有孤独症、ADD、ADHD、帕金森氏病、囊性纤维化或对酶治疗敏感的其他神经病症或行为障碍的受试者的量的胰酶或消化酶的核心；和(b)含有可乳化脂质的包衣。又另一方面中，本发明涉及包含具有颗粒的包封酶制剂的酶递送系统，所述颗粒包含(a)包含胰酶或消化酶的核心，其中所述酶以颗粒的约5重量％到95重量％的量存在；和(b)用于提供酶的受控释放的总体均勻的包衣，所述包衣包含可乳化脂质。在一个方面中，所述酶递送系统的包封的酶制剂颗粒是不可雾化的。在某些方面中，本发明的酶制备方法产生包衣的酶制剂，其特征在于例如受控的释放速率、雾化减少和更安全的给药、具有通过喷淋(sprinkle)/扁囊递送方法给药的能力、改善的流动特性、增加的贮存期和贮存能力以及本文描述的其他性质。在其他方面中， 包衣的酶制剂具有改善的倾倒性能，这有助于制备和包装过程，例如包装在药袋和扁囊中。在一些方面中，本发明是基于令人惊讶的和意外的发现，即包含可乳化脂质包衣和消化酶核心的特定的包衣消化酶制剂具有有利的释放和活性特征，并允许沿着胃肠道的位点时间特异性的和/或位置特异性的靶向释放，从而治疗孤独症、ADD、ADHD、帕金森氏病及对消化酶治疗敏感的其他神经或行为病症。在一些方面中，制备了所述包封的胰酶/消化酶制剂以达到人胃肠(GI)道内的特定递送时间或特定区域。在其他方面中，可乳化脂质组分是氢化大豆油，但可以是任何适当的脂质或脂质混合物在一些方面中，本发明还涉及更稳定的酶制剂，其对抗环境影响从而减少例如酶的降解和/或变性。这使得将更准确剂量的酶制剂递送至治疗个体。在一些方面中，所述包衣也可以在所述酶制剂与适当溶剂接触时产生乳化，而且同时令人惊异地提供酶在胃肠 (GI)系统中的受控释放。包衣在溶剂中的乳化性能允许酶受制地释放，优选在酶应用提供最有效治疗的选定的胃肠道位置。本发明也涉及通过消化酶的脂质包覆和/或包封制备酶制剂的方法。所述方法包括提供可乳化脂质，并用所述脂质包覆筛选的胰酶/消化酶颗粒。所述消化酶占到包衣酶制剂的5-95重量％。另一方面中，如本文所述的，发明人意外地发现本发明的方法可用于制备包含用单独的可乳化脂质或用脂质混合物包覆的消化酶和/或胰酶的包衣消化酶制剂，以在包封制剂暴露于适当溶剂时实现受控的酶释放速率，增加胰酶/消化酶的释放。发明人发现，在包封复合物暴露于溶剂例如水时，具有基本上由一种或多种单酸甘油酯组成的包衣的包封胰酶/消化酶制剂显示出胰酶/消化酶的释放增加，而同时在0. IN HCl中避免释放。本发明还涉及用于施用酶制剂的方法。在一些方面中，所述方法包括施用作为包衣制剂的胰酶/消化酶。在一些方面中，本发明涉及一种治疗方法，包括将至少两剂包含治疗有效量的包封消化酶制剂的复合物给予患有孤独症、ADD、ADHD、帕金森氏病、囊性纤维化或需要消化酶治疗的其他行为或神经病症的受试者，其中所述消化酶制剂包含含有消化酶的核心和含有可乳化脂质的包衣。受试者是否需要有效量消化酶的治疗的确定可以基于所述受试者具有酶缺陷的确定。此外，本发明涉及将酶制剂中不含或含有较少量赋形剂、载体、添加剂和/或增容剂，和/或不需要使用或使用较少量溶剂的胰酶/消化酶复合物、制剂、酶递送组合物或系统递送给人。在一些实施方式中，所述包衣基本上由氢化大豆油组成。这可以减少与潜在毒性物质的接触，且也降低过敏症形成的可能性。本发明还涉及具有改善的给药安全性的胰酶和/或消化酶的递送。此外，本发明涉及由通过脂质包封赋予酶制剂的增强流动性而产生的改善的制备方法。胰酶/消化酶的脂质包封形成了对于水分的脂质屏障，这使得包封的酶制剂在包装机中更好地流动。发明简述不是意图完整或详尽的叙述本发明的每个方面。本发明的其他方面将从下面的进一步描述中变得明显。
图1显示未加工的、粗消化酶颗粒的电子显微照片；图2显示粗消化酶制剂过筛和脂质包覆后的包衣酶制剂的电子显微照片；图3显示粗消化酶颗粒的条形图粒径分析，具有可以通过如y轴所示的USSS筛的颗粒的％ ；图4显示粗消化酶颗粒和包封后的包含70 %、80 %和90 %重量的消化酶的包衣酶制剂的脂肪酶活性％的条形图；图5显示在y轴所示的时间，包含70^^80%和90%重量消化酶的酶制剂的酶释放％的条形图；图6显示粗消化酶颗粒的粒径分布与包含70%或80%重量消化酶的包衣酶制剂的粒径分布相比的条形图；图7显示可用于包封消化酶颗粒的方法的流程图；图8显示对于工作标准品(顶线)、稀释剂(当时间是4分钟时从顶部第三位开始的线)、HPLC中所使用的流动相G分钟时的底线)和安慰剂(当时间是4分钟时顶线下方的第二条线)的峰面积(mAU)相对于时间的色谱图，其表明与标准胰蛋白酶峰没有干扰。图9显示使用HPLC获得的已知胰蛋白酶浓度的峰面积(mAU)相对于样品浓度 (mg/mL)的曲线图，以测量包衣消化酶制剂中的胰蛋白酶。图10显示具有孤独症症状的九名儿童中测得的粪胰凝乳蛋白酶(FCT)水平。图11显示具有孤独症症状的沈名儿童中测得的FCT水平。图12显示46名儿童中测得的FCT水平。25名儿童具有孤独症症状，而21名儿童没有孤独症症状。
图13显示320名年龄匹配的儿童中测得的粪胰凝乳蛋白酶水平。藏青色线(以灰度级表示，上部，黑线)显示患有已知病症(遗传性的及其他病症)的儿童的FCT水平。紫色线(以灰度级表示，上部，暗灰色线)显示没有任何已知病症的正常儿童的FCT水平。浅绿色线(以灰度级表示，下部，中灰线)显示患有孤独症的儿童的FCT水平。粉红色线(以灰度级表示，下部，暗灰色线)显示患有ADHD的儿童的FCT测量值。黄色线(以灰度级表示，下部，浅灰色线)显示患有ADD的儿童的FCT测定。图14显示基线的及施用Viokas或Ultrase酶替代物30、60、90和120天后的平均粪胰凝乳蛋白酶水平。发明详述如始终描述的，在一些实施方式中，本发明涉及包衣的消化酶制剂，以及包含包衣的消化酶制剂的药物组合物和酶递送系统，其用于治疗患有孤独症、ADD、ADHD、帕金森氏病、囊性纤维化、其他神经和行为疾病或病症的个体。孤独症(有时称为“典型性孤独症”)是被称为孤独症谱系障碍(autism spectrum disorder) (ASD)的一组发育障碍中最常见的病症。孤独症的特征在于社会相互作用受损、 语言和非语言交流存在问题以及罕有的、重复性的或严重受限的行为和兴趣。其他ASD包括Asperger综合症、Rett综合症、儿童期崩解症(disintegrative disorder)和未分类的广泛性发展障碍(通常称为PDD-NOQ。据估计每1000名儿童中有三到六名儿童患有孤独症。注意力缺陷多动障碍是影响美国全部儿童中的3-5%的神经行为障碍。其干扰个人保持在某项任务上并运用年龄相当的约束(单独的认知或认知和行为两者)的能力。 ADHD的一些预警症候包括无法听从指令、不能安排自身和学校作业、手脚不停运动、说话太多、遗弃未完成的任务、日常杂事和家庭作业以及不能注意细节并作出反应。有着几种类型的ADHD 主要注意缺陷亚型、主要多动冲动亚型和混合亚型。ADHD通常在儿童期确诊，尽管该病症可以持续到成年。帕金森氏病(PD)属于称作运动系统障碍的一组病症，其与产生多巴胺的脑细胞的丧失有关。PD的四种主要症状是手、臂、腿、颂和脸的颤动或抖动；四肢和躯干的僵化或硬化；运动徐缓，或运动缓慢；及姿态保持反射障碍(postural instability)，或平衡性和协调性受损。随着这些症状变得更明显，患者将难以行走、说话或完成其他简单任务。PD通常影响50岁以上的人。PD的早期症状是轻微的，且是逐渐发生的。在有些人中，疾病发展比其他人更快。随着疾病发展，影响大多数PD患者的晃动或颤动可开始妨碍日常活动。其他症状可包括抑郁及其他情绪改变；吞咽、咀嚼和说话困难；泌尿系统问题或便秘；皮肤问题；和睡眠障碍。囊性纤维化(CF)是最常见的缩短生命的遗传性疾病之一。在美国，4000个儿童中 1个出生时就患有CF。它在西方欧洲人群中最常见；地中海血统的二十二个人中就有一个携带有一个CF基因，这使得CF成为这些人群中最常见的遗传性疾病。CF由基因(囊性纤维化跨膜传导调节蛋白(CFTR))的突变所引起。该基因的产物是产生汗液、消化液和粘液中起重要作用的氯离子通道。尽管没有CF的大多数人具有CFTR基因的两个工作拷贝(等位基因)，但仅需要一个来防止囊性纤维化。囊性纤维化影响肺、肝、胰和肠的外分泌(粘液)腺，从而由于多系统功能障碍引起进行性失能。CF可以通过例如1)导致频繁的肺感染的稠粘液产生；2)胰酶分泌减少，导致生长不良、多脂粪便和脂溶性维生素缺乏；和3)由于先天性双侧输精管缺如导致的男性不育来表征。通常，CF的症状在婴儿期和儿童期出现。 胎粪性肠梗阻是患有CF的新生婴儿的典型现象。具有非脂质肠溶包衣的酶制剂已用于向患有需要酶治疗的囊性纤维化的个体递送脂肪酶至需要施用脂肪酶的个体中。此外，i^llon描述了用于治疗患有孤独症、ADD、 ADHD、帕金森氏病及其他神经疾病或病症的儿童及其他个体的某些方法和酶组合物，例如， 美国专禾IJ Nos. 7，138，123,6, 660，831,6, 632，429,6, 534，063，其以引用方式合并在此正如
其全文在本文中给出一样。人类消化道的特性对将消化酶递送至患有对消化酶治疗敏感的神经和行为病症的患者造成了挑战。该消化道的整个路线中多种温度和PH的变化使得特异性递送成为必要和挑战。例如，胃中的PH低至1，但在近端小肠迅速增加到5-6的更碱性的pH。例如，通常胃中的PH为约1.2，十二指肠中的pH为约5.0到6.0 ；空肠中的pH为约6. 8，近端回肠中的PH为约7. 2，远端回肠中的pH为约7. 5。胃中的低pH在近端小肠迅速变化至5_6的更碱性的PH，这要求一种基于酶需要递送的位置的特异性递送方法。例如，患有囊性纤维化的儿童(其病症需要给予脂肪酶)需要将脂肪酶递送至小肠后部。相反，本发明人确定，需要用蛋白酶治疗的患有孤独症的儿童需要将那些酶递送至近端小肠。消化酶的递送也由于酶在环境室温下快速降解和变性，以及可能在高的温度、压力、湿度和/或光线暴露下发生的增强的降解和变性而具有挑战性。水分和热一起可以迅速使酶失稳，降低其效力并缩短贮存期，从而导致不准确的给药剂量。酶的变性或失稳可由于降低活性酶剂量至低于有效治疗所需的量而降低其效力。或者，试图通过增量剂量来补偿变性或失稳以确保活性酶的有效水平可能具有用药过量或过量装填胶囊或其他剂型的风险。为保护胰腺/消化酶免受不利条件(例如渗透、分解)的影响并使其稳定，胰腺/消化酶(核心)可以包覆或包封在包含可乳化脂质的连续包衣中。在另一方面，本发明提供具有改善的贮存期的新型包衣酶制剂。酶制剂的制造商已使用肠溶包衣来将脂肪酶递送至需要施用脂肪酶的个体，例如患有囊性纤维化的个体。因为猪来源的酶以蛋白酶、脂肪酶和淀粉酶的混合物递送，且因为用于人类服用的这些组合物制备用于递送脂肪酶，这些肠溶包衣(其包括如邻苯二甲酸羟丙甲纤维素、二甲基硅油1000和邻苯二甲酸二丁酯的物质)的使用阻碍了将蛋白酶递送至消化道的适当位置。目前销售的所有其他酶制剂包含这些肠溶包衣物质中的至少一种和/ 或制剂中的其他添加剂。使得生产成为可能的一些添加剂(例如改善流动性能的添加剂) 还可使患者冒对酶制剂产生反应性或敏感性的风险。一个实施方式中，本发明包括包衣的消化酶制剂和/或复合物，在一些实施方式中其是包封的胰酶/消化酶制剂。在其他方面中，本发明包括含有包衣的胰酶/消化酶制剂的酶递送系统和药物组合物。这些包衣或包封的酶制剂包括含有胰酶或消化酶颗粒的核心和含有可乳化脂质的包衣。消化酶/胰酶制剂中的包衣产生对于降解和变性的屏障，并使得到达治疗个体的活性酶水平更加准确。本发明的脂质包衣通过形成物理屏障以及阻止和或减少水解的屏障提供对于水分、热、湿度和光线暴露的显著屏障。由于脂质包衣的保护使其不受环境中水分的影响，所述包衣的酶制剂发生较少的水解。本发明的结果是提供可以长时间耐受贮存条件(例如，水分、热、氧气等)从而能够使得贮存期延长的胰酶/消化酶。包封酶制剂的包衣保护酶免受环境影响，并提供在溶剂中的乳化而不损害包衣的耐磨性。因此本发明还涉及更稳定的酶制剂。因此包衣的酶制剂降低了酶剂量的过量装填，并增强了将更准确的酶剂量递送给患有孤独症、ADD、ADHD、帕金森氏病、囊性纤维化及对胰酶或消化酶治疗敏感的其他神经或行为病症的个体。此外，因为患有孤独症及其他病症的儿童及其他个体通常对食物、添加剂、着色剂及用于药物制剂中的其他载体、赋形剂或物质有着多种敏感性，因此制备避免使用过敏原及可能潜在地增加患者的不良症状或发病的其他载体、赋形剂、增容剂、着色剂等的酶递送系统是一项挑战。此外，在年龄很小的儿童中，具有简易性和可耐受性的酶输送系统是极为重要的。迄今为止也没有实现这些酶制剂的扁囊递送系统。本发明的另一方面是制备不使用增容剂、着色剂、染料、流动增强剂及其他添加剂的酶制剂，从而减少儿童及其他治疗个体中过敏原及其他敏感反应的可能性。在一些实施方式中已经发现，消化酶可意外地用单一脂质赋形剂包封以改善酶活性的保持、给药简易性、可耐受性和给药安全性，以及其他性质。意外地，包含脂肪酶的消化酶颗粒可由基本上仅由氢化大豆油组成的包衣成功地包封。此外，猪胰酶/消化酶有着类似于腌/熏猪肉的明显气味和味道。这种味道对摄取酶替代物的一些个体特别是对于儿童而言是强烈和令人不快的。添加脂质包衣为酶制剂提供有效掩味作用，这使得患者对味道能够耐受，因为脂质包衣是无嗅且无味的。不涉及使用颜料、染料、香精、接受剂(recipients)或其他物质的这种掩味方法的使用对于施用具有使人不愉快的或不受欢迎的味道和气味的药物而言是优选的。在其他实施方式中，本发明涉及具有改善的味道和气味的包衣消化酶制剂。在一些实施方式中，消化酶颗粒核心上的包衣优选是连续包衣。“连续”是指胰酶 /消化酶受到均勻的保护。连续包衣完全围绕或包封胰酶/消化酶。所述包封提供胰酶/ 消化酶的保护使其免受例如水分、温度条件以及贮存期间遇到的条件的环境影响。此外，所述包封也提供胰酶/消化酶的控制释放。包衣在溶剂中的乳化特性使得酶能够在胃肠系统中控制释放，优选在酶被利用的胃肠道区域中控制释放。包封复合物的包衣保护酶免受环境影响，并提供在溶剂中的乳化而不损害包衣的耐磨性。例如，对于需要用蛋白酶治疗的病症，酶的蛋白酶释放部分必须在近端小肠中，从而溶解分布在30-90分钟之间的脂质包封是必要的。溶解分布也可以为约30、35、40、45、50、55、60、65、70、75、80、 85或90分钟。溶解分布可使用本领域技术人员已知的方法和条件获得。例如，溶解分布可以在各种PH下，包括pH 1、2、3、4、5、6、7、8、9、10下测定。生物活性物质的释放速率可通过添加如下所述的添加剂来控制。当所述制剂暴露于溶剂时，溶剂与包衣中的可软化脂质相互作用，导致包衣乳化并释放生物活性物质。本发明所使用的“包封”是指包衣完全围绕胰酶/消化酶。在包封颗粒群中，包封的酶制剂可以包括混杂的或小部分带有基本上连续的包衣的颗粒，只要包封颗粒的释放曲线不明显改变。包衣或包封颗粒可以包含一个或多个包封在一层包衣内的消化酶颗粒，以形成包衣或包封的消化酶制剂中的一个包衣或包封的消化酶颗粒。
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本发明也包括用于制备用于治疗神经或行为障碍例如孤独症、ADD、ADHD、帕金森氏病、囊性纤维化以及对胰酶或消化酶治疗敏感的其他行为或神经病症或疾病的酶制剂、 药物组合物和递送系统的方法。“对胰酶或消化酶治疗敏感”是指疾病或病症的一种或多种症状可通过施用有效量的胰酶或消化酶来缓和、治疗或减少。在一些方面，本发明涉及通过用之前未用于包衣的消化酶制剂中的脂质来包覆消化酶颗粒从而制备选定的包衣酶制剂。可乳化脂质和酶的单一混合物可将胰酶/消化酶的特定组分递送到递送到选定位置和/或在胃肠道转运中的选定时间递送。在一些方面，本发明涉及基于溶解分布将消化酶递送给人的方法。所述可乳化脂质是当暴露于溶剂时发生乳化的任何脂质、脂质混合物或脂质和乳化剂的混合物，且具有使得所述脂质在典型贮存温度下是固体的熔点。所述可乳化脂质可以是植物或动物来源的脂质。在一些实施方式中，所述可乳化脂质基本上由一种或多种单酸甘油酯、二甘油酯或甘油三酯，或其他组分(例如包括氢化植物油中发现的乳化剂)或包含它们。在另一个实施方式中，所述脂质是非极性脂质。如本发明所使用的，动物和/或植物“来源”的脂质可以包括来源于植物或动物来源和/或组织的脂肪和油脂，和/或基于来源于植物或动物来源的脂肪和油脂的结构合成制备的脂肪和油脂。脂质材料可以通过已知化学或机械过程精炼、提取或纯化。存在于脂质中的某些脂肪酸(称为必需脂肪酸)必须存在于哺乳动物饮食中。在一些实施方式中， 所述脂质可以包含USP-国家处方集(National i^ormulary) I类的植物油。用于本发明的消化酶可以是由胰腺生成的消化酶类型(包括但不限于胰腺来源或其它来源的消化酶)的任何组合。本发明范围不限于猪源的胰酶，也可以是其他动物或植物来源以及合成衍生的那些。所述消化酶可以来自哺乳动物来源，例如猪源的消化酶。该酶可以包括一种或多种酶，且也可以是植物来源的、合成来源的、由微生物、酵母或哺乳动物细胞重组产生的，且可以包括来自一种或多种来源的酶的混合物。例如，消化酶可以包括混合在一起的来自一个或多个来源的一种或多种酶。例如，这包括将单一消化酶添加到源自胰腺来源的消化酶中，以提供特定酶的适当水平以为选定疾病或病症提供更有效的治疗。例如，消化酶的一种来源可以从科学蛋白实验室实验室(Scientific Protein Laboratories)获得(参见表6)。例如，消化酶可以是胰酶/胰脂肪酶组合物。在一个实施方式中，消化酶将包含或基本上由25USP单位/mg蛋白酶、2USP单位/mg和25USP单位/ mg淀粉酶组成。术语消化酶可以指由胰腺产生类型的一种或多种酶。本发明中用作核心的消化酶颗粒包括约90%的颗粒大小为USSS筛约#40到#140 目，或为约105到425 μ m的消化酶颗粒，或者至少约75%的颗粒为约#40到#80目，或为约 180到425 μ m的消化酶颗粒。大小为#40到#140目的颗粒通过#40目筛但不能通过#140 目筛。在本发明的一个实施方式中，所述包衣或包封的消化酶颗粒可以包含小于约35、30、 25、20、15或10%的可以通过#100目筛(150μπι)的颗粒。在一些实施方式中，术语“不可雾化的”是指小于约20%或小于约15%的颗粒可以通过#100目筛(150μπι)的包衣或包封的酶制剂。所述包封的消化酶制剂可以是包封的消化酶复合物，其中消化酶颗粒包含两种或更多种酶。存在于核心中的胰酶的最小量为所述包衣酶制剂的至少约5%重量的活性酶，但在其他实施方式中可以是至少约30%，或至少约50%重量。存在于复合物中的胰酶/消化酶的最大量为至多约95%重量，且在其他实施方式中至多为包衣酶制剂的约90%、85%、 80 %、75 %或70 %。在其他实施方式中，存在于复合物中的胰酶量为约10 %、15 %、20 %、 25%,35%,40%,45%,55%,60%,65%,70%,72. 5%,75%,77. 5%,80%,82. 5%,87. 5% 或92. 5%重量，或两者之间的任意值。至少约或至多约某％的酶可以包括等于或大约该％ 的酶。术语“约”包括等于，以及考虑了给定测量的实验误差的范围。当用于粒径时，术语 “约”可以指加上或减去10、9、8、7、6、5、4、3、2或或两者之间的任意值。当用于可以筛分的％颗粒时，术语“约”可以指加上或减去10、9、8、7、6、5、4、3、2或或两者之间的任意值。包含包封的消化酶制剂或复合物的组合物可作为喷淋剂、粉末、胶囊、片剂、小丸剂、锭剂或其他形式递送。将包封的酶制剂包装在还包含单剂量扁囊装的喷淋制剂的酶递送系统中使得能够通过在各次给药中递送特定量酶而易于递送以及准确地施用酶。允许以特定单元给药的酶制剂(其以比其他喷淋制剂增强的方式将酶活性维持在特定稳定性参数内)容纳在允许空气、水分和热毁坏酶制剂并使酶制剂变性的多单元剂型中。在优选的实施方式中，粉末或扁囊容纳于三层箔袋或类似屏障中，从而抵挡湿气并保护酶制剂免受不良环境因素的影响。本发明还涉及由于脂质包封使得由水解减少导致稳定性改善。而且，所述脂质包封方法减少了如果通过肺或鼻吸入可能对儿童造成腐蚀伤害的酶制剂的雾化。在另一个实施方式中，本发明包括通过减少酶雾化量从而具有改善的给药安全性的消化酶递送。脂质包封减少雾化以及在儿童和酶制剂服用者中腐蚀性烧伤、吸入和/或吸入性肺炎的可能性，从而减少在已经患病儿童(例如患有囊性纤维化的儿童)中造成伤病的可能性，并实现更为安全的给药。如本发明所使用的，术语“不可雾化的”是指基本上所有的颗粒都足够大以在倾倒包衣酶制剂时与未包衣酶颗粒相比能消除或减少雾化的包衣或包封酶制剂。例如，术语“不可雾化的”可指其中至少约90%的颗粒大小为约#40到#140目，或为约106到425 μ m，或其中至少约75%的颗粒为约#40到#80目，或约180到425 μ m的包衣或包封酶制剂。术语 “不可雾化的”也可以指小于约35、30、25、20、15或10%的颗粒可以通过#100目筛(150 μ m) 的包衣或包封酶制剂。在一些实施方式中，术语“不可雾化的”是指小于约20%或小于约 15%的颗粒可以通过#100目筛(150μπι)的包衣或包封的酶制剂。如本发明描述和提及的，适当的胰酶/消化酶和适当的包衣可用于本发明组合物和方法中。适当的酶和适当的脂质包衣的选择，包括酶或包衣的类型或含量的选择，由个体以及待治疗的选定疾病的特定酶需要来指引。作为本发明一个方面的包封酶制剂是之前没有描述过的。在一些实施方式中，本发明涉及选定用于基于在人胃肠道的转运时间递送至患有帕金森氏病、ADD、ADHD、孤独症、囊性纤维化及对消化酶/胰酶治疗敏感的其他神经和行为障碍的酶和脂质的特定混合物。它还可以基于待治疗患者对消化酶的各种组分的需要。此外，本发明涉及特别地基于所需递送时间和溶解分布改善消化酶到人的递送。尽管用于包覆某些敏感的生物学物质的一般方法已有描述，例如参见美国专利 No. 6，251，478，其以引用方式合并于此，但本发明的包封的生物活性物质是包含核心和包衣的酶制剂，所述核心包含含有或由多种蛋白酶、脂肪酶和淀粉酶组成的消化酶，所述包衣包含或基本上由可乳化脂质组成。
添加剂可以与可乳化脂质混合。脂质和添加剂的选择将控制生物活性物质的释放速率。在消化酶和或胰酶的情况下，必须特别地选择脂质包衣，以在选定释放的消化道区域中释放生物活性物质，从而优化治疗。本发明还涉及以扁囊或药袋制剂施用包衣和/或包封的酶制剂，从而易于递送给儿童和成人。在一些实施方式中，本发明尤其涉及施用容纳于扁囊或药袋中的包衣酶颗粒制剂。这有利于施用，包括但不限于，在食品或饮料中施用、直接施用入口腔中或通过NG 管、G管或其他胃肠输入或递送装置直接施用到胃肠系统中。在一些实施方式中，各剂量包含约100到1500mg包衣或包封的酶制剂，且各剂量可以包含约 100、150、200、250、300、350、400、450、500、550、600、650、700、750、800、850、 900、950、1000、1050、1100、1150、1200、1250、1300、1350、1400、1450 或 1500mg 包衣或包封的酶制剂。“约”可以包括80到125%的所述制剂。各剂量也可以加上或减去10%的所述重量。在一个实施方式中，各剂量具有不小于约156USP单位/mg加上或减去10%的蛋白酶活性。蛋白酶活性也可以不小于约 100、105、110、115、120、125、130、135、140、145、150、155、 160、165、170、175、180、185、190、195 或 200USP 单位 /mg。在其他实施方式中，本发明涉及治疗方法，包括将至少两剂包含治疗有效量的包衣消化酶制剂的组合物施用于患有孤独症、ADD、ADHD、帕金森氏病、囊性纤维化或对消化酶治疗敏感的其他行为或神经病症的患者。在某些实施方式中，约80%的酶在pH 6. 0下进行的溶出试验中在约30分钟内释放。在其他实施方式中，约80%的酶在包衣消化酶制剂到达小肠后约30分钟内释放。本发明的另一个实施方式涉及通过减少当前用于将消化酶递送给人的制剂中的赋形剂。增容剂和溶剂的使用来改善酶到人的递送。例如，包封的消化酶制剂可以仅包含一种赋形剂，这通过减少过敏反应的机会而增加给药安全性。在一个实施方式中，所述赋形剂是氢化大豆油。因为，在一些实施方式中，脂质包封方法不需要用溶剂、增容剂和赋形剂处理酶制剂来促进流动性或改善稳定性，本发明的一个方面包括待施用的GRAS物质(通常认为是安全的)的“干净”制剂。本发明的方法允许减少使用溶剂、增容剂、赋形剂及其他添加剂减少了摄取酶替代物的个体与潜在过敏原的接触，从而产生低过敏性的酶制剂，这进一步提高了其在治疗可能对治疗另外产生过敏反应的个体中的潜在用途。因此，施用本发明的包衣酶制剂可以减少与潜在毒性物质的接触，并也可减少过敏形成的可能性。因此，在一些实施方式中，包封消化酶制剂是低过敏性的。另一方面，本发明还涉及具有提高的给药安全性的消化酶递送。脂质包衣增加了酶制剂的重量，这减少了雾化的可能性。之前的未包衣酶已表明形成雾化，并可因此被吸入并与鼻腔或肺接触，弓I起摄取者和施用酶制剂者的黏膜损伤。本发明还涉及施用用于递送至儿童的扁囊制剂的改进。本发明尤其涉及施用容纳于扁囊中的包衣消化酶制剂，这允许特定类型的给药，包括但不限于，在食品或饮料中给药、直接施用到口腔中或通过NG管、G管或其他胃肠输入装置直接施用到胃肠系统中。目前销售的酶制剂中还未使用酶的扁囊递送。代表一天用量的单位剂量或多剂量的扁囊代表单一单位剂量。三层箔的扁囊使得酶/脂质粉末保持稳定，并使得易于施用。在另一个实施方式中，本发明涉及控制在暴露于溶剂时胰酶/消化酶从包封酶制剂中释放的速率的方法。在一些方面，所述方法包括使可乳化脂质与一定量的一种或多种添加剂混合，以获得脂质混合物；并用所述混合物包覆消化酶颗粒，以形成包含颗粒的包封消化酶制剂，该颗粒包含含有酶的核心和含有脂质的包衣。在一些实施方式中，可乳化脂质是其中可乳化脂质与添加剂不相同的混合物，且其中随着添加剂量增加，在暴露于溶剂时酶从包封复合物中释放的速率降低。或者，随着添加剂量减少，在暴露于溶剂时酶从包封复合物中释放的速率增加。令人意外地，脂质包衣似乎不被存在于胃中的HCl (盐酸)降解或破坏，因此在给药后保护酶不被降解直到酶制剂到达其胃肠道中的目标区域。此外，脂质包衣减少酶对水侵袭的暴露，因此降低水解，并进一步保护消化酶不被降解。此外，发明人发现仅包含脂质的赋形剂可用于包覆或包封含脂肪酶的消化酶颗粒。在本发明的一个方面中，可以通过制备具有不同的释放特征的包封消化酶复合物来利用消化酶治疗特定疾病靶标。因为多种神经和行为疾病可能以多种方式影响人胃肠系统，使用特定酶制剂和确保包封可以产生酶制剂递送到哪里以及递送持续多长时间的差
已因此本发明涉及尤其基于所需递送时间和溶解分布的消化酶递送给人的改进。例如，在本发明的某些方面中，释放速率和溶解特征对于本发明的脂质包封是独特的。使用选定用于优化对消化酶治疗敏感的行为和神经病症以及疾病的治疗的的酶和脂质制备包衣消化酶是之前没有描述过的。作为一个例子，之前用于消化酶和或胰酶的肠溶包衣使得酶混合物的延迟释放时间相对于将蛋白酶部分递送到近端小肠来说太长。例如，在向患有囊性纤维化的患者(其中递送脂肪酶是有效治疗所需的)给药时，肠溶包衣的消化酶的溶解分布需要有利于酶释放的较长的延迟以及递送高脂肪酶制剂。在本发明之前，脂质包封未用于治疗患有囊性纤维化个体的脂肪酶递送的延迟和 /或保护机制。发明人还认识到，为治疗患有孤独症的患者(其需要递送蛋白酶以进行有效治疗)，可以改进脂质包封以在较早的转运时间窗中在近端小肠中递送蛋白酶，以优化蛋白消化。在另一个例子中，发明人认识到，对于患有帕金森氏病的患者，由于其神经状态的自主神经功能障碍特性，其具有较慢的胃肠转运时间，因此还需要另一种释放特性以递送酶以用于有效治疗。进行脂质和/或添加剂的选择以获得给药后较晚时间的酶释放。之前没有认识到，消化酶通过消化系统的转运时间可通过使脂质成层 (layering)，或通过用特定脂质类型包封来控制。又另一方面中，本发明涉及基于人胃肠系统中的转运时间用于在患有帕金森氏病、ADD、ADHD、孤独症和囊性纤维化及对胰酶/消化酶治疗敏感的其他行为或神经疾病的个体中递送的酶和脂质的选定混合物。本发明还涉及由脂质包封赋予的增强流动性则导致的制备的改进。制备的改进也可由于对水分的脂质屏障而通过胰酶/消化酶的脂质包封来实现，因此使得在包装机内获得流动性改善。改善的流动性能可有利于包衣消化酶制剂包装到例如药袋或扁囊中。一个方面中，本发明涉及使用脂质包封方法来制备用于治疗特定疾病或病症的在人胃肠(GI)道内实现特定递送时间的包衣的消化酶制剂。该疾病或病症可由可通过将消化酶递送至胃肠道的适当区域来治疗的消化不足引起或以其为特征。神经或行为疾病或病症是通常不与消化系统相关的疾病或病症，而其中一种或多种症状可以通过施用有效量的胰酶和/或消化酶制剂来治疗。因此，本说明书涉及目的用于治疗特定疾病的特定酶的脂质包封，所述包封方法包括在用于制备包封的消化酶复合物的本发明方法中使用的脂质量和种类。本发明也涉及通过胰酶和/或消化酶的脂质包覆和/或包封制备酶制剂的方法。该方法包括提供可乳化脂质，和用所述脂质包覆胰酶/消化酶颗粒，其中所述胰酶/消化酶包含包衣酶制剂重量的 5-90%。在一些方面中，未包衣胰酶/消化酶颗粒的粒径范围为约105-425μπι。在一个实施方式中，本发明涉及制备包封消化酶制剂的方法，所述方法包括a)筛选未包衣消化酶颗粒以获得大小适于包封的颗粒；b)用可乳化脂质包覆筛选的消化酶颗粒以形成包衣或包封的消化酶，其含有包含胰酶/消化酶的核心和包含可乳化脂质的包衣。在一些实施方式中，所述包封的消化酶制剂是控制释放的消化酶制剂，其可具有增强的流动性能。该制剂可用于治疗患有孤独症、ADD、ADHD、帕金森氏病、囊性纤维化及其他神经病症的个体。颗粒的筛选可包括质量控制步骤，以改善消化酶的活性、外观或粒径。例如，可分析颗粒以测定酶活性含量，和/或使用层析、显微镜或其他分析法使颗粒可见。也可通过去除太小或太大的颗粒对所述颗粒进行筛选，从而获得具有用于包封的适当大小的颗粒。例如，可使所述颗粒过筛以获得具有用于包封的适当大小或更均勻的粒径范围的颗粒。作为另一个例子，所述颗粒可通过USSS#40目筛和通过USSS#140目筛过筛。通过#40目筛但被#140目筛保留的颗粒具有用于包衣或包封的适当粒径范围。也可通过USSS#140、#120、 #100、#80、#70、#60、#50、#45或#40目筛或其任意组合过筛来筛选颗粒。由API供应商提供的酶制剂可以带有不平边缘和许多结块，并包含一些晶体盐颗粒的形状不规则的且多尺寸的颗粒提供(例如参见图1)。不均勻粒径和形状降低了流动性能，并干扰包装。此外，将未包衣酶倒入个体的嘴中将是困难的，且潜在地可能引起递送太多或太少的酶。根据本发明的一个方面的方法，消化酶颗粒的加工产生非粉末状的、自由流动的微粒制剂，其适用于扁囊包装并适于倒在食品或饮料上。此外，如始终讨论的，使用脂质包封来防止雾化(因此增加安全性)，以增加流动性(其改善药物的制备)是本发明的一种实施方式。典型的粗酶制剂中的粒径分布显示于图3所示的图中。较大颗粒(> 40目)和极小颗粒(< 140目)通常不适合于适当包封，因此可通过筛选去除。为了提高包封的胰酶制剂的流动性能，可使消化酶颗粒过筛以去除微细的和过大的颗粒，例如仅包括大小为 40-140目，或约105到4 微米的颗粒。在一些实施方式中，通过用氢化植物油包覆过筛的胰酶颗粒来制备含有80%重量消化酶的包衣的消化酶制剂，其中使用201b.酶颗粒和51b. 氢化植物油。在一些实施方式中，脂质或脂质混合物的温度保持在110 °F，直到施加不加热的消化酶。在一些实施方式中，脂质应该以包封复合物重量的约5 %的最小量，优选包封复合物重量的约30%，更优选包封复合物重量的约50%的量存在于制剂中。存在于包封复合物中的胰酶/消化酶的最大量为复合物重量的约95%，更优选包封复合物的约90%，更优选约85%。可乳化脂质可以是乳化或产生乳液的任何脂质或脂质源材料，其熔点使得所述可乳化脂质在典型贮存温度例如23摄氏度下是固体。本发明所使用的“可乳化脂质”是指包含至少一个亲水基团和至少一个疏水基团， 并具有能够形成亲水和疏水界面的结构的脂质。可乳化脂质的上述这些化学和/或物理性质允许乳化作用。界面的例子例如包括胶束和双层。亲水基团可以是极性基团且可以是带电或不带电的。可乳化脂质可以来自动物或植物来源，例如，棕榈仁油、大豆油、棉籽油、菜籽油和家禽脂肪，包括I型氢化植物油。在一些实施方式中，所述脂质是氢化的。所述脂质也可以是饱和的或部分饱和的。可乳化脂质的例子包括但不限于单酸甘油酯、甘油二酯、脂肪酸、 脂肪酸酯、磷脂、它们的盐及其组合。可乳化脂质优选是食品级可乳化脂质。食品级可乳化脂质的一些例子包括失水山梨糖醇单硬脂酸酯、失水山梨糖醇三硬脂酸酯、硬脂酰乳酰乳酸钙和硬脂酰乳酰乳酸钙。作为可乳化脂质的食品级脂肪酸酯的例子包括乙酸单酸甘油酯和甘油二酯、柠檬酸单酸甘油酯和甘油二酯、乳酸单酸甘油酯和甘油二酯、脂肪酸聚甘油酯、脂肪酸丙二醇酯及二乙酰酒石酸单酸甘油酯和甘油二酯。例如，脂质可以包括氢化大豆油。任何可乳化脂质可用于本发明的方法和产品中。在某些实施方式中，所使用的可乳化脂质将产生非团聚、非雾化的酶制剂颗粒。在其他实施方式中，本方法涉及用于治疗患有孤独症、ADD、ADHD、帕金森氏病、囊性纤维化及其他神经病症的个体的具有增强的流动性能的包封的控制释放消化酶制剂的制备，所述方法包括a)将可乳化脂质与一种或多种添加剂混合以获得混合物；和b)用所述混合物包覆筛选的消化酶以形成包封的消化酶，其含有包含消化酶的核心和包含可乳化脂质的混合物的包衣。如图2所示的，酶用脂质包覆使得酶的大小和形状变得更加均勻，而减少了与粗酶有关的锯齿状边缘，并使得易于服用和易于制备，因为与包被的酶有关的流动性能将允许制备机械容易用酶装填扁囊/药袋，并减少扁囊的过量装填或装填不足。单位剂量包装降低了儿童打开多剂量听/盒/或其他容器的能力。三层箔的药袋或扁囊进一步降低了儿童打开扁囊/药袋的能力，并高度利用酶。在另一个实施方式中，本发明涉及通过使用脂质混合物来包覆消化酶从而控制消化酶从包封制剂中释放的速率的方法。该方法包括使可乳化脂质与一种或多种添加剂混合以获得混合物，并用所述混合物包覆消化酶以形成包封消化酶，其含有包含消化酶的核心和包含可乳化脂质混合物的包衣。随着添加剂的量增加，在暴露于溶剂时酶从包封制剂中释放的速率降低。或者，随着添加剂的量减少，在暴露于溶剂时酶从包封复合物中释放的速率增加。因此，包衣的性质允许酶从包封物中控制释放。不可乳化脂质不具有上述与乳化相关的化学和/或物理性质，且包括任何脂质、 脂质衍生材料、蜡、有机酯或其组合。不可乳化脂质本身通常不乳化。只要包衣和组成脂质的性质允许乳化，不可乳化脂质可用作添加剂。例如，不可乳化脂质如甘油三酯可与本发明的可乳化脂质混合。不可乳化脂质可以源自动物、植物、无机或合成来源。不可乳化脂质优选是氢化的，且可以是饱和的或部分饱和的，包括但不限于甘油三酯。在优选的实施方式中，所述包衣包含应用于胰酶/消化酶的单酸甘油酯和甘油三酯的混合物。一种或多种添加剂和本发明可乳化脂质的包含物用于控制包衣的乳化并酶的释放。例如，添加剂(甘油三酯)可以与单酸甘油酯(例如，可乳化脂质)混合，以控制包衣的乳化并因此控制(例如，降低)酶从复合物中释放的速率。在另一个实施例中，一种或多种添加剂(例如甘油二酯和甘油三酯)可以与可乳化脂质混合，以控制酶的释放速率。氢化植物油可以包含乳化剂，例如大豆卵磷脂或其他组分。当选择用于消化酶的适当脂质包衣时，可以考虑包括机械强度、熔点和疏水性的性质。熔点较低或极性、亲水性较高的脂质通常不适于包封，因为它们形成在加速贮存稳定性条件下结块的产物。例如使用氢化大豆油、氢化蓖麻蜡和棕榈蜡制备的酶制剂全部显示良好的倾倒性且不发生结块。蜡可以是石蜡；石油蜡；矿物蜡例如地蜡、白地蜡或褐煤蜡；植物蜡，例如棕榈蜡、 杨梅蜡或亚麻蜡；动物蜡，例如鲸蜡；或虫蜡，例如蜂蜡。另外，蜡材料可以是具有12到31个碳原子的脂肪酸和具有12到31个碳原子的脂肪醇的酯、具有M到62个碳原子含量的酯或其混合物。实例包括棕榈酸蜂花酯、鲸蜡醇棕榈酸酯、蜡酸蜂花酯、鲸蜡醇豆蔻酸酯、棕榈酸蜡酯、蜡酸蜡酯、蜂花酸蜂花酯、棕榈酸十八烷基酯、豆蔻酸十八烷基酯和月桂酸月桂酯。在进一步的实施方式中，本发明提供用于控制暴露于溶剂时胰酶/消化酶从包封复合物中释放的速率的方法。所述方法包括用一定量可乳化脂质包覆酶以形成包封的胰酶物质复合物，其中随着基于包封复合物总重量的可乳化脂质的量增加，所述酶从包封复合物中释放的速率降低。或者，随着基于包封复合物总重量的可乳化脂质的量降低，所述胰酶从包封复合物中释放的速率增加。用于该实施方式的可乳化脂质可主要由一种或多种单酸甘油酯组成。脂质于其中乳化的溶剂可以是水性溶剂。所述水性溶剂与存在于可乳化脂质中的亲水基团相互作用并破坏包衣的连续性，导致水性溶剂和包衣中的脂质之间形成乳液，因此将生物活性物质从复合物中释放。用于包封胰酶或消化酶核心以治疗神经病症或障碍的本发明方法之前没有被描述过。具有时间-释放药物特征且利用脂质包封获得稳定性的供人服用的药物脂质包封方法之前没有被描述过。在本发明描述的实验之前，没有公布允许制备包含可乳化脂质包衣和消化酶的包封酶制剂的方案，该包封酶制剂所适于沿着胃肠道时间-特异性和/或位点-特异性地靶向释放，用于治疗孤独症、ADD、ADHD、帕金森氏病及对消化酶治疗敏感的其他神经或行为病症。本发明的各方面和实施方式基于令人惊讶和意外的发现，即含有可乳化脂质包衣和消化酶的某些药剂的制剂可以具有新颖的增强的活性沿着胃肠道的各个部分的出人意料的有利释放和溶解分布及吸收动力参数。这些特征可用于配制特定生体活性酶，以使其沿着胃肠道位点特异性地靶向释放，从而治疗孤独症、ADD、ADHD、帕金森氏病及其他神经病症。受试者是否需要用有效量的消化酶治疗的确定可基于所述受试者具有酶缺陷的确定。本发明的一个方面中，所述方法包括使用本发明的酶制剂来治疗患有孤独症、 ADD、ADHD、帕金森氏病及其他神经疾病或病症的儿童及其他个体，其也具有酶缺陷。所述酶缺陷可以通过用于确定或诊断酶缺陷的任何方法确定。一个方面，所述确定或诊断可通过评估症状，包括饮食习性、自我强制的饮食控制、饮食障碍和/或胃肠紊乱的症状，来进行。 在其他方面，所述确定可基于生化试验以检测例如胃肠道分泌、排泄或存在的酶水平中活性来进行，和/或通过测定基因中突变的存在或编码一种或多种消化酶的基因的异常表达来进行。 在一些方面中，也可以测试待治疗个体中共病(co-morbidity)的存在，所述共病是不影响消化酶的活性或表达的共病。在某些方面中，用本发明描述的酶递送系统治疗基于临床症状而不是共病(例如遗传性共病)而确认为患有孤独症的个体。然而，也可以用本发明的酶递送系统治疗基于临床症状和共病而确认为患有孤独症的个体，其也另外测试使用胃肠病原体的另一指示的异常低的FCT水平或阳性和/或低的消化酶活性或表达。
0116]以下共病作为典型共病列出0117]脆性χ染色体0118]Hal 1 ermann-Stre iff0119]21染色体三体性0120]9染色体上的移位0121]Beckwith-Wiedemann 综合征0122]21染色体三体性0123]18染色体三体性0124]Rubenstein-Tabi 综合征0125]脆性χ染色体0126]Prader-Willi 综合征0127]21染色体三体性0128]Rett综合征0129]Klippel-Feil 综合征0130]Rett综合征0131]杜兴氏肌营养不良0132]Tourette综合征0133]子宫内中风(In-utero stroke)0134]21染色体三体性0135]脆性X染色体0136]青少年RA0137]子宫内中风0138]6染色体三体性0139]杜兴氏肌营养不良0140]青少年糖尿病0141]I型糖尿病0142]肾上腺脑白质营养不良0143]Wilson 病0144]子宫内中风0145]I型糖尿病
Prader-Wi 11 i 综合征22ql3Tourette 综合征无脑回症嗜中性粒细胞免疫缺乏综合征I型糖尿病Tourette 综合征18p 染色体四体性(Tetrasomy 18p)高IgE综合征Angelman 综合征I型糖尿病Rett 综合征脆性X染色体Marfan 综合征Waardenburg 综合征谷胱甘肽合成酶缺陷I型糖尿病Rubinstein-TaybAngelman 综合征Klinefelter 综合征出生时脑出血(Brain bleed at birth)Turner 综合征甲状腺机能减退I型糖尿病早产JL白勺H损贞(Brain damage of prematurity)一个方面中，可使用粪胰凝乳蛋白酶水平测试来进行酶缺陷的确定。方法例如PCR 或其他扩增、SNP检测、测序和/或DNA梳可用于检测突变的存在或干扰编码消化酶的一种或多种基因的表达的短RNA序列的存在。例如，突变可以存在于编码消化酶的基因中，其降低或消除酶活性。作为另一个实例，突变可以是MET基因中的突变，所述MET基因是编码多效性MET受体酪氨酸激酶的基因，参见Campbell等，PNAS103 (46)，16834-39 (2006)。这些突变例如可以包括MET启动子变异体rsl858830C等位基因，和或MET信号传导途径(例如 SERPINE 1基因的单体型)或rs 344781 PLAUR启动子变异体T等位基因中的突变。本发明的酶制剂适合用于将消化酶递送给患有孤独症、ADD、ADHD、帕金森氏病及需要酶治疗的其他神经疾病或病症的个体。Fallon描述了用于治疗患有孤独症、ADD、ADHD、 帕金森氏病及其他神经疾病或病症的儿童及其他个体的某些方法和酶组合物，例如美国专利No. 7，138，123,6, 660，831,6, 632，429,6, 534，063，其以引用方式合并于此，好像以全文公开于此一样。现在参考附图和实施例更完整地描述本发明，所述附图和实施例旨在结合发明内容、发明详述和具体讨论或另外公开的任何优选和/或特定实施方式一起阅读。然而，本发明可以许多不同形式实施，并不应视为限于本文所给出的实施方式；相反，这些实施方式仅以举例方式提供，因此本发明是全面和完整的，并将将本发明全部范围完全传达给本领域技术人员。在本文所描述的实验中，发现 若干因素提供意外提高/增强的功效和性能。例如， 发现包含大豆油的特定包封酶制剂显示某些令人惊讶的特征，所述特征导致位点_特异性的活性、释放/溶解分布以及易于制备、包装和贮存。不束缚于具体操作原理，本领域技术人员应理解，本发明还包括也能产生这些有利参数的样品制备和/或配制的其他方法。以下实验描述了本发明的典型过程。应理解，这些实验和相应结果仅以举例形式阐明，且其中的任何内容不应视为对本发明总体范围的限制。通过举例形式，这些研究证明通过本发明的示例性包封酶制剂实现的一些出人意外的进步。实施例1 示例的包封消化酶制剂的更高流动性和倾倒性使用本发明的示例性方法和制剂之前，未加工的粗酶制剂(Scientific Protein Laboratories (SPL) of Wanakee，WI)的检验显示其在粒径和不规则形态方面包含明显的变异性，如图1所显示的颗粒电子显微照片所示。也可见一些晶体盐颗粒。粗酶无法倾倒， 因为其结块且由于不平坦的表面和锯齿状边缘而难以测量。不经过进一步加工，粗制剂也不适合于脂质包封，因为粗产品同时包含对于适当包封而言太大和太小的颗粒。筛分的酶 (尽管粒径更均勻)继续显示不平坦的表面以及倾倒时结块。图2显示过筛且用脂质包覆原料后制备的包衣的酶制剂。该实施例中，颗粒的形态明显改善，具有更圆形的表面。这形成具有良好流动性和感官性能的非粉末状产物。由于表面的圆化，酶的形态目前极大地改善，这形成较少粉末性的、不雾化且具有良好流动性和改善的感官性能的产物。粗酶制剂的粒径分布显示于图3的曲线图中。通常，较大颗粒(> 40目)和极小颗粒(< 140目)不适于适当包封。为了增加包封的胰酶制剂的流动性，可使粗酶颗粒过筛，以仅包括粒径为40-140目，或约106到425微米的颗粒。实施例2 示例性包封消化酶制剂的稳定性温度储存在另一示例性实施方式中，多种类型和重量百分比的脂质用于包覆过筛的酶核心。当选择用于胰酶的适当脂质包衣时，考虑了包括机械强度、熔点和疏水性的性质。以下检验了脂质包衣的多个实例，且在25°C和40°C下检验其物理外观。因此，评估具有多种物理性质如机械强度、熔点和疏水性的脂质用于胰酶的包覆。在该实施例中，据发现包衣的熔点降低或亲水性增加不适合用于包封，因为它们导致在加速储存稳定性条件下结块的产物。使用氢化大豆油、氢化蓖麻蜡和棕榈蜡制备的过筛和包封的酶制剂全部显示良好的倾倒性且不发生结块。表1提供在25°C和40°C下出现的可见物理变化的结果
权利要求
1.包封的消化酶制剂，包含(a)含有消化酶颗粒的核心；和(b)含有可乳化脂质的包衣，其中所述包衣连续地包覆核心，且所述可乳化脂质在暴露于溶剂时乳化，其中所述酶在制剂中以颗粒的约5重量％到95重量％的量存在。
2.权利要求1的制剂，其中所述核心还含有用于有效治疗患有孤独症、ADD、ADHD、帕金森氏病、囊性纤维化或对该酶治疗敏感的其他神经病症或行为障碍的受试者的量的胰酶或消化酶。
3.权利要求1的制剂，其中所述核心为至少约105μ m到至多约425 μ m。
4.权利要求1的制剂，其中所述核心过筛为至多40目且至少140目。
5.权利要求1的制剂，其中所述制剂是不可雾化的。
6.权利要求1的制剂，其中所述脂质选自氢化大豆油、氢化蓖麻蜡和棕榈蜡。
7.权利要求1的制剂，其中至少约80%的酶在pH6. 0下进行的溶出试验中在30分钟内释放。
8.权利要求1的制剂，其中所述包衣基本上由一种或多种单酸甘油酯组成。
9.权利要求1的制剂，其中所述包衣包含单酸甘油酯。
10.含有治疗有效量的包封的酶制剂的药物组合物，所述酶制剂包含核心，其含有用于有效治疗患有孤独症、ADD、ADHD、帕金森氏病、囊性纤维化或对用该酶治疗敏感的其他神经病症或行为障碍的受试者的量的胰酶或消化酶；和包衣，其包含可乳化脂质。
11.权利要求10的药物组合物，其是胶囊、片剂、椭圆形栓剂、栓剂、干胶片、咀嚼片、口含片、舌下片齐 、快速溶解片、泡腾片、颗粒齐 、小丸齐 、珠子、丸剂、扁囊齐 、喷淋齐 、薄膜齐U、 干糖浆、可重构固体、悬浮液、锭剂、糖锭、植入物、粉末、研制剂、小片剂或长片剂的形式。
12.包含具有颗粒的包封的酶制剂的酶递送系统，所述颗粒包含含有胰酶或消化酶的核心，其中所述酶以颗粒的约5重量％到95重量％的量存在；和用于酶的控制释放的大致均勻的包衣，所述包衣含有可乳化脂质；其中所述颗粒是不可雾化的。
13.权利要求12所述的酶递送系统，其中所述核心还含有用于有效治疗患有孤独症、 ADD、ADHD、帕金森氏病、囊性纤维化和/或其他神经病症的受试者的量的胰酶或消化酶，所述酶以颗粒的约5重量％到95重量％的量存在。
14.权利要求1、10或12的酶制剂、药物组合物或酶递送系统，其中所述可乳化脂质以约5重量％、30重量％或50重量％存在于所述包封的酶制剂中。
15.权利要求1、10或12的酶制剂、药物组合物或酶递送系统，其中存在于所述包封的酶制剂中的胰酶或消化酶的量为所述包封的酶制剂的约5重量％到95重量％。
16.权利要求1、10或12的酶制剂、药物组合物或酶递送系统，其中存在于所述包封的酶制剂中的酶的量为所述包封的酶制剂的约80重量％。
17.权利要求1、10或12的酶制剂、药物组合物或酶递送系统，其中存在于所述包封复合物中的酶的量为所述包封的酶制剂的约70重量％。
18.权利要求1、10或12的酶制剂、药物组合物或酶递送系统，其中存在于所述包封复合物中的酶的量为所述包封的酶制剂的约70重量％到90重量％，且所述可乳化脂质是氢化大豆油、氢化蓖麻蜡或棕榈蜡。
19.权利要求1、10或12的酶制剂、药物组合物或酶递送系统，其中所述包封的酶制剂包含颗粒，且其中所述包封的酶制剂中的至少约90%的包封的酶制剂颗粒大小为约#40到 #140目，或为约105到425 μ m，或其中至少约75%的颗粒为约#40到#80目，或为约180到 425 μ m0
20.权利要求1、10或12的酶制剂、药物组合物或酶递送系统，其中所述包封的酶制剂包含颗粒，且进一步其中少于约20%或少于约15%的包封的酶制剂颗粒可通过#100目筛， 或为约150 μ m。
21.权利要求12酶递送系统，还包含扁囊或药袋。
22.权利要求1、10或12的酶制剂、药物组合物或酶递送系统，其中所述可乳化脂质包含至少一个亲水性基团和至少一个疏水性基团。
23.权利要求22的酶制剂、药物组合物或酶递送系统，其中所述脂质能够形成亲水性和疏水性界面。
24.权利要求23的酶制剂、药物组合物或酶递送系统，其中所述界面是胶束界面。
25.权利要求对的酶制剂、药物组合物或酶递送系统，其中所述界面是双层界面。
26.权利要求22的酶制剂、药物组合物或酶递送系统，其中所述可乳化脂质源自动物或植物源。
27.权利要求沈的酶制剂、药物组合物或酶递送系统，其中所述脂质选自下组棕榈核油、大豆油、棉籽油、菜籽油和家禽脂肪、氢化大豆油、氢化蓖麻蜡和棕榈蜡。
28.权利要求1、10或12的酶制剂、药物组合物或酶递送系统，其中所述可乳化脂质是氢化的、饱和或部分饱和的。
29.权利要求1、10或12的酶制剂、药物组合物或酶递送系统，其中所述可乳化脂质基本上由氢化大豆油组成。
30.权利要求1、10或12的酶制剂、药物组合物或酶递送系统，其中所述可乳化脂质选自下组单酸甘油酯、甘油二酯、脂肪酸、脂肪酸酯、磷脂、它们的盐及其组合。
31.权利要求1、10或12的酶制剂、药物组合物或酶递送系统，其中所述可乳化脂质是食品级可乳化脂质。
32.权利要求31的酶制剂、药物组合物或酶递送系统，其中所述食品级可乳化脂质包括失水山梨糖醇单硬脂酸酯、失水山梨糖醇三硬脂酸酯、硬脂酰乳酰乳酸钙或硬脂酰乳酰乳酸钙。
33.权利要求22的酶制剂、药物组合物或酶递送系统，其中所述脂肪酸酯选自下组乙酸单酸甘油酯和甘油二酯、柠檬酸单酸甘油酯和甘油二酯、乳酸单酸甘油酯和甘油二酯、脂肪酸的聚甘油酯、脂肪酸的丙二醇酯和二乙酰酒石酸单酸甘油酯和甘油二酯。
34.权利要求10或12药物组合物或酶递送系统，其中至少约80%的酶在pH6.0下进行的溶出试验中在30分钟内释放。
35.权利要求1、10或12的酶制剂、药物组合物或酶递送系统，其中所述核心通过选自包封、压片、挤出或模制的技术加工。
36.用于控制暴露于溶剂时消化酶从包封的消化酶制剂中释放的速率的方法，所述方法包括(a)提供消化酶颗粒，(b)用可乳化脂质包覆消化酶颗粒以形成包封的消化酶制剂；其中至少约80%的酶在 pH6. 0下进行的溶出试验中在30分钟内释放。
37.用于控制暴露于溶剂时消化酶从包封复合物中释放的速率的方法，所述方法包括(a)提供消化酶颗粒，(b)使可乳化脂质与一定量的一种或多种添加剂混合，以获得脂质混合物；和(c)用所述脂质混合物包覆消化酶颗粒以形成包封的消化酶制剂；其中所述可乳化脂质和添加剂不相同，且其中随着添加剂的量增加，消化酶从包封复合物中释放的速率降低。
38.用于控制暴露于溶剂时消化酶从包封复合物中释放的速率的方法，所述方法包括(a)提供消化酶颗粒，(b)使可乳化脂质与一定量的一种或多种添加剂混合，以获得脂质混合物；和(c)用所述脂质混合物包覆消化酶颗粒以形成包封的消化酶制剂；其中所述可乳化脂质和添加剂不相同，且其中随着添加剂的量减少时，消化酶从包封复合物中释放的速率增加。
39.权利要求36-38任一项的方法，其中所述可乳化脂质是氢化大豆油。
40.权利要求36-38任一项的方法，其中所述颗粒为至少约105μ m到至多约425 μ m。
41.用于控制暴露于溶剂时消化酶从包封的消化酶制剂中释放的速率的方法，所述方法包括(a)提供消化酶颗粒，(b)用可乳化脂质包覆消化酶颗粒以形成包封的消化酶制剂；其中所述包封的消化酶制剂基本上由小于约150 μ m的颗粒组成。
42.一种治疗方法，包括将至少两剂组合物给予患有孤独症、ADD、ADHD、帕金森氏病、囊性纤维化或对消化酶治疗敏感的其他行为或神经病症的受试者，其中所述组合物包含治疗有效量的包封的消化酶制剂，其包含(a)含有消化酶的核心；和(b)含有可乳化脂质的包衣。
43.将消化酶给予患有孤独症、ADD、ADHD、帕金森氏病、囊性纤维化或其他对消化酶治疗敏感的行为或神经病症的受试者的方法，包括施用至少两剂包封的酶制剂，其中约80% 的酶在pH6. 0下进行的溶出试验中在30分钟内释放。
44.将含有包封的消化酶制剂的扁囊或药袋给予需要的患者的方法，所述方法包括提供容纳于扁囊或药袋中的粉末化制剂，其中所述制剂通过添加到食物或饮料中、通过直接施用到口腔中或通过NG管、G管或其他胃肠输入或递送装置直接施用到胃肠系统中而给药。
45.权利要求42-44的方法，其中所述包封的消化酶制剂仅包含一种赋形剂，因此增加了给药安全性。
46.权利要求45的方法，其中所述赋形剂是氢化大豆油。
47.权利要求45的方法，其中所述包封的消化酶制剂是低过敏原性的。
48.权利要求44的方法，其中对消化酶治疗敏感的个体具有酶缺陷。
49.权利要求48的方法，其中所述个体是否具有酶缺陷使用生化标志物进行确定。
50.权利要求49的方法，其中所述生化标志物是FCT水平。
51.权利要求49的方法，其中所述生化标志物是MET基因突变。
52.权利要求48的方法，其中所述个体具有胃肠功能失调的病原性标志物。
53.一种制备具有增强的流动性的包封的控制释放的消化酶制剂的方法，所述制剂用于治疗患有孤独症、ADD、ADHD、帕金森氏病、囊性纤维化及其他神经病症的个体，所述方法包括a)筛选未包衣消化酶颗粒以获得具有合适大小的颗粒用于包封；和b)用可乳化脂质包覆筛选的消化酶颗粒以形成包封的消化酶，其含有包含消化酶的核心和包含可乳化脂质的包衣。
54.一种制备包封的控制释放的消化酶制剂的方法，所述制剂用于治疗患有孤独症、 ADD、ADHD、帕金森氏病、囊性纤维化及其他神经病症的个体，所述方法包括(a)获得约105到450微米的消化酶颗粒；和(b)用可乳化脂质包覆胰酶/消化酶以形成包封的胰酶/消化酶，其含有包含胰酶/消化酶的核心和包含可乳化脂质混合物的包衣。
55.权利要求53的方法，其中所述筛选的酶颗粒通过使用40目筛和140目筛过筛消化酶颗粒而获得。
56.权利要求M的方法，其中所述酶颗粒通过使用40目筛和140目筛过筛消化酶颗粒而获得。
57.权利要求53或M的方法，其中所述可乳化脂质是氢化大豆油。
58.一种制备包封的控制释放的消化酶制剂的方法，所述制剂用于治疗患有孤独症、 ADD、ADHD、帕金森氏病、囊性纤维化及其他神经病症的个体，所述方法包括(a)使可乳化脂质与一种或多种添加剂混合以获得混合物；(b)获得筛选的消化酶颗粒；(c)用脂质混合物包覆胰酶/消化酶以形成包封的胰酶/消化酶，其含有包含胰酶/消化酶的核心和包含可乳化脂质混合物的包衣；和(d)在喷涂过程中以周期性的时间间隔调节批量和油温度，从而在所述过程中维持最佳喷涂条件。
59.权利要求58的方法，其中所述筛选的酶颗粒为约105到450微米。
全文摘要
本发明涉及包封的消化酶制剂以及含有该制剂的酶递送系统和药物组合物。本发明还涉及该系统、药物组合物和制剂的制备方法和用以治疗患有ADD、ADHD、孤独症、囊性纤维化及其他行为和神经疾病的人的用途。
文档编号A01N25/28GK102421284SQ201080021271
公开日2012年4月18日 申请日期2010年4月13日 优先权日2009年4月13日
发明者J·M·法伦, M·海尔 申请人:柯尔马克有限责任公司