专利名称：一种高效的红花石蒜快速繁殖方法
技术领域：
本发明涉及高效的红花石蒜快 速繁殖方法，属于植物的人工繁殖和栽培方法技术领域。
背景技术：
红花石蒜(L. radiata)是石蒜科石蒜属多年生草本植物，地下有球形鱗茎，外包暗褐色膜质鳞被。花瓣色泽鲜红，又名“曼珠沙华”，是重要的观赏植物和药用植物。红花石蒜鳞茎的主要药用成分是各种石蒜碱和加兰他敏。石蒜碱及其衍生物具有一定抗癌活性，并能抗炎、解热、镇静及催吐，对阿米巴痢疾亦有疗效。加兰他敏为可逆性胆碱酯酶抑制剂，用于治疗老年痴呆症，脊髄灰质炎等中枢性麻痹疾病引起的瘫痪、重症肌无カ等。目前这些成分均已可以以商业规模提取。在自然条件下，多数石蒜自然结实率很低，即使结实，但受生长环境的制約，能萌发成苗的极少。目前的红花石蒜多为三倍体，主要以无性繁殖为主，毎年母鱗茎以“自然分裂”法分裂为2个子鳞茎成长为2个新植株，自然繁殖系数很低。近几年来，由于制药エ业的大量提取，原分布最广、蕴藏量最多的红花石蒜(L. radiata)和忽地笑(L. aurea)的野生资源也急剧減少。长期的人工繁殖是导致红花石蒜鱗茎退化的原因，并严重影响红花石蒜对逆境的抵抗能力和种球质量，且制约了红花石蒜的育种进程。
发明内容
本发明的目的在于提供一种高效的红花石蒜快速繁殖方法，进行规模化生产以及以红花石蒜组培为基础的其他学科的研究工作的需要。本发明的技术方案是这样实现的，该种石蒜快速繁殖方法的主要特点是A外植体消毒选取多年生红花石蒜的鱗茎洗浄，剥去外层鳞片，切除根部，切去鳞茎上半部分约1/2 2/3。将留有鳞茎盘的鳞茎均分为4 8块，用O. I %的安利洗涤液在摇床上震荡洗涤15 20min，流水冲洗30 60min后，再在超净工作台上用75%的酒精漂洗30s,无菌水清洗4遍后,用含I %的次氯酸钠，无菌水冲洗4-5遍,最后用无菌滤纸吸干表面水分；B丛生芽诱导将灭过菌的小块鳞茎接种到以下培养基中MS基本培养基，适当浓度的植物生长激素，适当PH值，进行光照培养30 40天；C不定芽増殖待不定芽生长至2-3cm，将带有不定芽的鱗茎接种到以下培养基中MS基本培养，适当浓度的植物生长激素，适当PH值；D生根培养选取生长健壮的试管苗，连同小鱗茎接种到如下培养基中1/2MS或MS基本培养基，蔗糖60 90g/L，适当浓度的植物生长激素，适当PH值，进行光照培养50 60天。E炼苗移栽将组培瓶盖打开，并添加少量的蒸馏水，进行有菌条件驯化；用镊子将组培苗从瓶中取出，移栽到已经灭菌的栽培基质中，进行遮阴驯化3周，期间不定期的喷施1/2MS营养液。所述的红花石蒜快速繁殖方法的延伸技术方案包括步骤A中的消毒试剂和时间、步骤B中的pH值范围以及步骤B、C、D、E中石蒜快速繁殖所述的培养基中涉及的植物生长激素，包括6-卞基腺嘌呤(6-BA)、吲哚丁酸(IBA)、萘乙酸(NAA)、2，4_ 二氯苯氧乙酸(2,4-D)其中一种或几种。所述的红花石蒜快速繁殖方法的延伸技术方案包括步骤A中的种子消毒用试剂O. I %的安利洗涤液在摇床上震荡洗涤15 20min和含I %次氯酸钠灭菌20 30min。所述的红花石蒜快速繁殖方法的延伸技术方案包括步骤B，C，D中pH值范围为5. 8 7. O。所述的红花石蒜快速繁殖方法的延伸技术方案包括其特征在于步骤B所涉及到的植物生长激素为6-卞基腺嘌呤(6-BA) 3. O 5. Omg/L，萘乙酸(NAA) O. I O. 5mg/L。 所述的红花石蒜快速繁殖方法的延伸技术方案包括步骤C中所涉及到的植物生长激素为，植物生长激素6-卞基腺嘌呤出-BA) 5. O 6. Omg/L，2，4-二氯苯氧乙酸(2，4-D) O. 5 2. Omg/L,蔡乙酸(NAA) O. I O. 5mg/L。所述的红花石蒜快速繁殖方法的延伸技术方案包括步骤D中所涉及到的植物生长激素为卩引哚丁酸(IBA) I. O 2. Omg/L,鹿糖60 90g/L。采用植物组织培养的方法繁殖红花石蒜，不仅可以摆脱外界条件的影响，四季都能进行生产，而且可以节约育苗占地，降低生产成本。植物组织培养技术是利用细胞的全能性，采取植物体上的细胞团伙一块组织，通过人为条件的控制，使这些组织形成千百万植株，并且保存了母体的全部优良性状，且遗传性状稳定。组织培养快速繁殖是目前尽快满足市场需求的有效途径，同时也是种质保存(超低温保存)、诱变育种及遗传转化的基础。这种方法保留了红花石蒜的植株活性，可在短期内形成大量优良试管苗，进行规模化、工厂化生产。
图I是开始萌发不定芽的红花石蒜鳞茎图，图2增殖和生长的不定芽，图3是生根壮苗的红花石蒜植株，图4是炼苗移栽前的红花石蒜小鳞茎和植株。
具体实施例方式下面结合红花石蒜的快速繁殖的实例说明本发明的具体实施方式
。实例I不定芽的诱导和培养I.取红花石蒜的地下鳞茎，剥去外层鳞片，切除根部，切去鳞茎上半部分约1/2 2/3。将留有鳞茎盘的鳞茎均分为4 8块，用O. I %的安利洗涤液在摇床上震荡洗涤15 20min,流水冲洗60min后，再在超净工作台上用75%的酒精漂洗30s，无菌水清洗4遍后，用含I %次氯酸钠溶液消毒20 30min (在次氯酸钠溶液中加入几滴吐温80)，无菌水冲洗4-5次,最后用无菌滤纸吸干种子表面水分。2.将消毒好的红花石蒜鳞茎小块直接接种到不定芽诱导培养基中MS基本培养基中添加，6-卞基腺嘌呤(6-BA)3. Omg/L，萘乙酸(NAA)O. 2mg/L，蔗糖30g/L，适当pH值；培养温度28±1°C，光照强度1000 30001x，光照时间10 16h，进行光照培养。实例2丛生芽的诱导和试管苗的生根、移栽
I.培养30天后，待芽苗生长至2-3cm，将芽苗重新接种到本发明的丛生芽增殖培养基中，进行增殖培养。丛生芽诱导培养基是以MS培养基为基本培养基，并添加植物生长激素6-卞基腺嘌呤(6-BA) 5. Omg/L，2，4-二氯苯氧乙酸(2，4_D) I. Omg/L，萘乙酸(NAA) O. 5mg/L,蔗糖30g/L，进行增殖培养。培养30天以上，诱导率达到98 %，大部分芽苗可诱导出丛生芽数达到7-8个。2.选取生长健壮的试管苗，然后接种到1/2MS基本培养基上，吲哚丁酸(IBA) I. Omg/L,蔗糖60g/L，进行生根诱导。培养40天后，生根率达86 %，平均根数目达18. 5根。3.将红花石蒜组培苗生根培养I. 5-2个月后开始进行炼苗移栽，首先将组培瓶移入光照培养箱，进行变温变光驯化5-7天，再将组培瓶盖打开，并添加IOml蒸馏水，进行有菌条件驯化2-3天。然后将组培苗移栽到已经灭菌的栽培基质(泥潭珍珠岩园土 = 1:1: 5)中，放置无加温加光的温室中，进行遮阴驯化3周，期间不定期的喷施1/2MS营养液，移栽后成活率达78%。以上实例的红花石蒜组培快繁状况见附图。
权利要求
1.一种高效的红花石蒜快速繁殖方法，其特征在于 A、外植体消毒选取多年生红花石蒜的鳞茎洗净，剥去外层鳞片，切除根部，切去鳞茎上半部分约1/2 2/3。将留有鳞茎盘的鳞茎均分为4 8块，用0. I %的安利洗涤液在摇床上震荡洗涤，流水冲洗30 60min后，再在超净工作台上用75%的酒精漂洗30s，无菌水清洗4遍后,用含I %的次氯酸钠,无菌水冲洗4 5遍,最后用无菌滤纸吸干表面水分； B、丛生芽诱导将灭过菌的小块鳞茎接种到以下培养基中MS基本培养基，适当浓度的植物生长激素6-卞基腺嘌呤(6-BA) 3. 0 5. Omg/L，萘乙酸(NAA) 0. I 0. 5mg/L，适当PH值，进行光照培养30 40天； C、不定芽增殖待不定芽长至2-3cm，将带有不定芽的鳞茎接种到以下培养基中MS基本培养，植物生长激素6-卞基腺嘌呤出-BA) 5.0 6. Omg/L，2，4-二氯苯氧乙酸(2，4-D) 0. 5 2. Omg/L，萘乙酸(NAA) 0. I 0. 5mg/L，适当 PH 值； D、生根培养选取生长健壮的试管苗，连同小鳞茎接种到如下培养基中1/2MS或MS基本培养基，蔗糖60 90g/L，吲哚丁酸(IBA) I. 0 2. Omg/L，适当PH值，进行光照培养50 60天； E、炼苗移栽将组培瓶盖打开，并添加少量的蒸馏水，进行有菌条件驯化；用镊子将组培苗从瓶中取出，移栽到已经灭菌的栽培基质中，进行遮阴驯化3周，期间不定期的喷施1/2MS营养液。
2.根据权利要求I所述一种高效的红花石蒜快速繁殖方法，其特征在于步骤A中的种子消毒用试剂0. I %的安利洗涤液在摇床上震荡洗涤15 20min和I %次氯酸钠灭菌20 30mino
3.根据权利要求I所述一种高效的红花石蒜快速繁殖方法，其特征在于步骤B，C，D中所涉及到的pH值范围为5. 8 7. O。
全文摘要
本发明提供一种高效的红花石蒜快速繁殖方法，进行规模化生产和繁殖以满足市场需要的红花石蒜组织培养步骤包括A.外植体消毒，B.不定芽的诱导，C.不定芽的增殖，D.生根培养，E.炼苗与移栽。采用植物组织培养的方法繁殖红花石蒜，不仅不受外界条件的影响，四季皆可进行，节约苗木占地，降低生产成本，而且可以保存母体的全部优良性状，遗传性状稳定。这种方法可在短时间内形成大量的优良试管苗，进行规模化、工厂化生产，为观赏园艺、制药等产业提供大量的原材料。
文档编号A01H4/00GK102696479SQ20121012066
公开日2012年10月3日 申请日期2012年4月24日 优先权日2012年4月24日
发明者夏冰, 彭峰, 李晓丹, 江玉梅, 汪仁, 贺佳 申请人:江苏省中国科学院植物研究所