本发明属于海洋生物技术领域，具体涉及一种温度对刺参胚胎发育和生长的影响研究方法。
背景技术：
刺参生态苗种繁育是一种基于生态学原理,充分利用自然环境条件,采用高效设施和生态增养殖模式,通过科学管理而生产出的优质健康苗种的方法。由于刺参从早期浮游幼虫阶段便进入到野生环境下生存,与室内培育条件相比更加复杂和多变。受到昼夜交替、潮汐、降水等环境因素的影响,水体的温度、盐度、浊度、浮游生物等的变化更为剧烈,对刺参幼虫发育和生长势必造成影响。因此在选择适宜生态苗种繁育的海区之前,首先需要弄清各种环境因子对刺参幼虫发育的影响,而在这些环境因子中,与室内培育相比温度、盐度、光照、浊度等环境因素差异最为明显。
温度是影响刺参胚胎发育至关重要的一个环境因子。我国不少学者对刺参幼虫培育的最适温度进行过相关研究,隋锡林研究表明幼虫培育的最适温度为18~22°c，刘广斌和li等研究指出幼虫生长和发育的最适温度为21~24°c,最适于幼虫变态附着的温度为18~21°c。温度升高到27°c时孵化率显著降低,而在19.7~24°c之间没有差异。最适温度的探讨对于室内苗种培育的温度选择提供了理论依据。然而,随着近年来刺参生态育苗模式的兴起,研究刺参幼虫发育的温度阈值对于生产实践意义重大,为此,申请人设计了一系列温度梯度实验,弥补了低温对刺参胚胎发育影响研究的缺失,并计算了胚胎发育的生物学零度,以期对刺参生态育苗的环境选择以及刺参胚胎发育研究提供借鉴。
技术实现要素：
针对上述问题，本发明旨在提供一种方法，可以研究温度对刺参胚胎发育和生长的影响。
一种温度对刺参胚胎发育和生长的影响研究方法，步骤如下：性腺发育成熟的亲参经升温刺激后排放精和卵，4h后取样观察，选择受精率>99%，直径大于160μm受精卵的用于实验；实验开始时受精卵已于22.5°c的水体中孵化约6–7h，处于囊胚初期；将囊胚分别放入预先准备好的各温度梯度海水中，所用海水为沙滤后又经800滤水袋过滤的自然海水，盐度~31，ph7.8~8.2；各温度梯度设置如下:5、10、12、15、19、21、25、28、31和34°c；实验各组培养于2l烧杯中，置于恒温培养箱内培养；每组设置两个平行，温度波动在0.5°c以内，白天室内自然光照，夜间无光照；各组培养密度为0.5ind/ml，两天换水一次，每次1/2，不充气，胚胎发育至小耳幼虫后以海洋红酵母为饵料；隔天取样15~30只幼虫进行观察和测量，观察使用olympus-c21普通显微镜，拍照使用cannonpowershot-a4000数码相机。
本发明的方法设计合理，温度梯度设置巧妙，可以方便、有效的测定出温度变化对刺参胚胎发育和生长的影响。
具体实施方式
下面结合具体实施例对本发明做进一步详细说明。
一种温度对刺参胚胎发育和生长的影响研究方法，实验设计如下：
性腺发育成熟的亲参经升温刺激后排放精和卵，4h后取样观察，选择受精率>99%，直径大于160μm受精卵的用于实验。实验开始时受精卵已于22.5°c的水体中孵化约6–7h，处于囊胚初期。将囊胚分别放入预先准备好的各温度梯度海水中，所用海水为沙滤后又经800滤水袋过滤的自然海水，盐度~31，ph7.8~8.2。各温度梯度设置如下:5、10、12、15、19、21、25、28、31和34°c。实验各组培养于2l烧杯中，置于恒温培养箱内培养。每组设置两个平行，温度波动在0.5°c以内，白天室内自然光照，夜间无光照。各组培养密度为0.5ind/ml，两天换水一次，每次1/2，不充气，胚胎发育至小耳幼虫后以海洋红酵母为饵料。隔天取样15~30只幼虫进行观察和测量，观察使用olympus-c21普通显微镜，拍照使用cannonpowershot-a4000数码相机。
经过一周的培养，结果表明：刺参囊胚在10°c及以上温度组中均能够发育，发育速度随温度的升高而加快，在25°c达到最快；温度继续升高到28°c时，虽然前期发育较快，但由于死亡率升高，平均体长快速增长后迅速减小；在温度31°c条件下，刺参幼虫经过一周的培养全部死亡;培养在34°c条件下的刺参幼虫在24h内全部死亡。培养于10°c中的囊胚发育很慢，但能够正常孵化并发育至耳状幼虫，在21°c条件下发育仅需约36h可以达到的小耳幼虫，在该温度下经历了约两周。处于囊胚初期(64~256细胞)的刺参胚胎在5°c条件下不能正常发育，囊胚胚层加厚，并逐渐萎缩，最终死亡消解。刺参幼虫在温度15~21°c条件下死亡率并没有明显变化，在25°c或更高的温度下死亡率明显升高。在低于15°c的各处理中，由于胚胎发育缓慢，畸形胚胎相对增多，难于界定死亡与存活以及正常与畸形，因而在本实验中未进行统计。