本发明涉及一种青稞花药分化培养基配方，具体涉及一种可以显著提高青稞花药愈伤组织分化率、提高绿苗率，从而可以显著提高青稞花药培养效率的青稞花药分化培养基配方，属于农业高新技术领域。
背景技术：
青稞（Hordeum vulgare L．var．nudum Hook．f．），又称为米大麦、米麦、裸麦、裸大麦、元麦，是禾本科大麦属的一种禾谷类作物，在我国主要分布于西藏、青海、甘肃、四川阿坝和甘孜州，在青藏高原具有悠久的栽培历史，距今已有3500年。青稞分为白青稞，黑青稞，墨绿色青稞等种类，具有丰富的营养价值和突出的医药保健作用。据《本草拾遗》记载：青稞，下气宽中、壮精益力、除湿发汗、止泻。藏医典籍《晶珠本草》更把青稞作为一种重要药物，用于治疗多种疾病。青稞是一种很重要的高原谷类作物，耐瘠薄和高寒，生长期短，高产早熟，适应性广。在海拔4500m以上的局部高寒地带，青稞是唯一可以正常成熟的作物。青稞在多数国家和地区主要用作饲料，而在我国青藏高原地区，50%以上的藏族居民都以青稞为主食，是西藏四宝之首糌粑的主要原料，全自治区青稞常年种植面积近200万亩，占农作物总面积的60%以上，生产地位突出，在整个农业生产和社会经济发展中起着举足轻重的作用。
我国青稞具有“三高两低”（高蛋白、高纤维、高维生素和低脂肪、低糖）的特点，但是西藏的青稞品种仍然存在一些缺陷，主要包括品种的株型普遍高大、叶片较大、抗倒伏性差等。尽管通过传统的杂交育种手段育成了一系列良种，但是对一些常规的青稞病症不能得到有效解决，产量也没有较为明显的增加，青稞倒伏严重的问题以及育种年限较长一直没有克服，青稞品质、抗逆性也没有关键性的突破。培育高产、优质、高效青稞新品种是确保西藏粮食安全、改善人民健康，促进西藏农业可持续发展的重要途径之一。因此，开拓高效率、高选择性、缩短周期的高新育种技术成为青稞产业发展的重中之重。
花药培养是利用植物组织培养技术，把发育到一定阶段的花药，通过无菌操作接种在培养基上，在一系列条件诱导下改变花药的发育程序，进行有丝分裂，经过脱分化后形成细胞团，进而形成愈伤组织，经历再分化发育成完整的单倍体植株的过程。利用花药培养可以明显的加快育种进程、缩短育种年限，在提高选择效率、改善品质、增强品种抗逆性上已在其他农作物上发挥重要作用，正逐步成为实现作物育种突破的关键，而在西藏地区青稞成熟胚和花药再生体系研究还鲜有报道，对青稞花药再生研究就显得尤为重要，建立青稞花药培养体系是应用青稞单倍体育种的重要基础和保证。
我们课题组在禾本科花药培养育种技术领域进行了多年的研究，在水稻、小麦、高粱、糯玉米等禾本科的花药培养领域取得显著的进步，青稞虽然同为禾本科作物，但是实践发现，现有的多种禾本科作物的花药培养诱导培养基和分化培养基并不适用于青稞。花药培养育种体系的关键就是花药诱导和分化阶段的培养基配方组成。在花药培养程序中，愈伤分化是青稞花药培养过程的第二步，愈伤组织绿苗分化率的好坏，极大影响着青稞再生植株的效率。针对目前青稞花药分化培养基分化效率低下、白化率畸高的缺陷，研发一种愈伤组织分化率高、白化率低的青稞花药分化培养基对青稞花培育种产业的发展具有重要的促进意义。因此，迫切需要研发一种适用于青稞的花药分化培养基，从而为青稞花药培养育种体系奠定基础。
通过组合和优化基本培养基组分来摸索试验可用的青稞花药分化培养基配方是技术研发的关键，我们以早先研发的其它禾本科作物的花药分化培养基配方为基础，进一步优化了基本培养基配方，同时将与青稞花药愈伤分化效率或绿苗分化率无关的添加物去除，并且不断试验加入一些可以提高青稞花药愈伤分化率和绿苗分化率的各种添加物并组合其种类搭配及浓度，最终大大提高了青稞花药绿苗分化率和绿苗率。
技术实现要素：
为解决背景技术中存在的技术问题，本发明提出一种青稞花药分化培养基，本发明所提供的青稞花药分化培养基具有显著提高青稞花药愈伤组织分化率、提高绿苗率的优点，可以显著提高青稞花药培养效率。
本发明的目的是通过以下技术方案解决的：
一种青稞花药分化培养基，其特征在于，该培养基的配方如下：
KNO3 1800～2000mg/L，NH4NO3 2000～2400mg/L，谷氨酰胺 600～800mg/L，CaCl2∙2H2O 420～460mg/L，MgSO4∙7H2O 230～270mg/L，KH2PO4 160～180mg/L，甲硫氨酸 150～200mg/L，精氨酸 80～120mg/L，Na2-EDTA 90～100mg/L，FeSO4∙7H2O 65～72mg/L，MnSO4∙4H2O 52～60mg/L，ZnSO4∙7H2O 16～20mg/L，H3BO3 3.5～4.5mg/L，KI 0.7～0.9mg/L，肌醇 90～110mg/L，甘氨酸 1.8～2.2mg/L，维生素B1 0.35～0.45mg/L，维生素B6 0.45～0.55mg/L，烟酸 0.45～0.55mg/L，亚精胺 24～28mg/L，麦芽糖 20～25g/L，植物凝胶 5～6g/L，CuSO4∙5H2O 0.02～0.03mg/L，Na2MoO4∙2H2O 0.2～0.3mg/L，CoCl2∙6H2O 0.02～0.03mg/L；
2，4-D 3.5～4.5mg/L，NAA 0.6～0.8mg/L，秋水仙碱 70～90mg/L，水解蛋白 1.2～1.4g/L，活性炭 1.8～2.2g/L，山梨醇 28～32g/L，pH 5.6～6.0。
本发明所提供的青稞花药分化培养基具有显著提高青稞花药愈伤组织分化率、提高绿苗率的优点，可以显著提高青稞花药培养效率。下面的实施例以及对比实验可以清楚地反映本发明所述培养基的特点。
具体实施方式
实施例1
配制如下配方的培养基：
一种青稞花药分化培养基，其特征在于，该培养基的配方如下：
KNO3 1900mg/L，NH4NO3 2200mg/L，谷氨酰胺 700mg/L，CaCl2∙2H2O 440mg/L，MgSO4∙7H2O 250mg/L，KH2PO4 170mg/L，甲硫氨酸 175mg/L，精氨酸 100mg/L，Na2-EDTA 95mg/L，FeSO4∙7H2O 68.5mg/L，MnSO4∙4H2O 56mg/L，ZnSO4∙7H2O 18mg/L，H3BO3 4mg/L，KI 0.8mg/L，肌醇 100mg/L，甘氨酸 2mg/L，维生素B1 0.4mg/L，维生素B6 0.5mg/L，烟酸 0.5mg/L，亚精胺 26mg/L，麦芽糖 22.5g/L，植物凝胶 5.5g/L，CuSO4∙5H2O 0.025mg/L，Na2MoO4∙2H2O 0.25mg/L，CoCl2∙6H2O 0.025mg/L；
2，4-D 4mg/L，NAA 0.7mg/L，秋水仙碱 80mg/L，水解蛋白 1.3g/L，活性炭 2g/L，山梨醇 30g/L，pH 5.8。
选择青稞品种冬青11号和果洛作为花药培养供体，青稞花药于2014年5月下旬选取花药发育时期处于单核晚期的青稞穗子，将冬青11号和果洛的花药先进行花药诱导培养，花药愈伤组织产生后，挑选直径为5～9mm的花药愈伤组织接种于该分化培养基上诱导绿苗，培养条件控制为：温度24～26℃、湿度70～80%、光照强度2000～2500lx、光周期光l2h/暗12h。绿苗产生后，计算愈伤组织分化率和绿苗率，愈伤分化率=出苗数/转移的愈伤块数×100%；绿苗率=分化绿苗数/转移的愈伤块数×100%。
实施例2
为了比较本发明所提供的青稞花药分化培养基与前人采用的培养基对青稞花药愈伤组织分化效果的差异，我们从相关文献查找到了2个青稞花药分化培养基配方，并将课题组研发的小麦花药分化培养基一起进行对比试验。
对比试验选择的其它3种分化培养基为：
MS培养基：MS基本培养基+1.5mg/L 6-BA+1.5mg/L KT（对比文件来自于危文波等《青稞品种肚里黄成熟胚愈伤组织诱导与植株再生》）；
改良MS培养基：2/3MS基本培养基+1.5mg/L KT+0.5mg/L 6-BA+0.05mg/L NAA+100mg/L肌醇+30g/L蔗糖+5.5g/L琼脂粉（对比文件来自于王亦菲等《青稞花药的离体培养与植株再生》）；
小麦花药分化培养基：KNO3 2950mg/L，C8H7O2K 3000mg/L，(NH4)2SO4 430mg/L，KH2PO4 350mg/L，CaCl2 110mg/L，MgSO4 85mg/L，Na2-EDTA 32.5mg/L，FeSO4∙7H2O 24mg/L，MnSO4∙H2O 3.0mg/L，ZnSO4∙H2O 1.3mg/L，H3BO3 1.4mg/L，KI 0.65mg/L，CuSO4∙5H2O 0.05mg/L，Na2MoO4∙2H2O 0.16mg/L，CoCl2∙6H2O 0.16mg/L，甘氨酸 2.0mg/L，叶酸 0.8mg/L，甲基亚硝基脲 2.5mg/L，丙氨酸 5.0mg/L，赖氨酸 2.5mg/L，维生素B1 5.0mg/L，维生素B6 1.0mg/L，3-吡啶甲酸 1.0mg/L，蔗糖 30g/L，植物凝胶 5.5g/L；
NAA 0.8mg/L，KT 1.0mg/L，调环酸钙1.0mg/L，山梨醇 30g/L，水解蛋白1.5g/L，秋水仙碱 0.03mg/L，生物素 0.16mg/L，pH 5.9（对比文件来自于专利ZL 2015101568897）。
同样选取该两个青稞品种花药愈伤组织进行分化培养，操作方法、培养方法同实施例1，调查统计愈伤组织分化率和绿苗率。
将实施例2与实施例1进行对比，对比的结果如下表1所示：
从表1可以发现，本发明的青稞花药分化培养基对2个青稞品种冬青11号和果洛的花药愈伤组织分化率平均值高达73.1%、绿苗率平均值则高达89.5%，均远远超过了对比实施例2中MS培养基、改良MS培养基和小麦花药分化培养基的花药愈伤组织分化率和绿苗率。因此可以发现，本发明的青稞花药分化培养基对青稞花药愈伤组织的分化效果要远远好于其它培养基。
以上2个实施例可以说明本发明提供的青稞花药分化培养基的组分配比是较优组合，本发明提供的培养基对青稞花药愈伤组织的分化效果比前人研发的青稞花药分化培养基具有明显优势。适用于青稞的花药分化培养基的研发，为青稞花药培养育种体系的建立奠定了基础。
本领域技术人员可以根据本发明公开的内容和所掌握的本领域技术对本发明内容作出替换或变型，但是这些替换或变型都不应视为脱离本发明构思的，这些替换或变型均在本发明要求保护的权利范围内。