一种硫化钼‑三氧化二铁复合纳米抑菌材料的制备与应用的制作方法

本发明涉及一种硫化钼-三氧化二铁复合纳米材料的制备技术领域，还涉及抑菌的方法技术。

背景技术：

细菌广泛存在于我们周围的环境中。细菌感染已经严重威胁到人们的身体健康。传统的抗菌剂(如纳米Ag，抗生素等)已广泛用于杀死细菌，但其对环境存在潜在的危害且效率较低、成本较高，具有一定的局限性。所以，对环境友好的、低成本、高效的抗菌材料的研究和开发是很重要的。

近年来，半导体由于其无毒、无害以及优异的抗菌性能受到关注。因此，探索利用此类材料研发出新型、高效、无毒、低廉的抗菌材料成为新的热点。

三氧化二铁是一种常见的铁氧化物。硫化钼是一种典型的二维材料，就有良好的导电性能，硫化钼剥离后产生的二维纳米片具有良好的弹性和柔性，可以作为载体。利用水热合成法制备的硫化钼-三氧化二铁纳米材料，经试验证明该纳米材料的抗菌性能针对于革兰氏阳菌，在一定的浓度范围内具有很好的选择性。

技术实现要素：

本发明的目的在于，克服现有技术中存在的问题，提供一种新的抗菌剂，具体涉及硫化钼-三氧化二铁复合物制备方法及抑菌技术，此复合物具有优良的抗菌性能，是一种新型的革兰氏阳性抗菌剂。

实现本发明目的的技术解决方案是：

一种硫化钼-三氧化二铁复合纳米抑菌材料的制备方法，包括如下步骤：

(1)将5～10mmol的七水合硫酸亚铁溶解在10～30mL的去离子水中，配置成溶液I；

(2)将1.0～2.0mmol的氯酸钠溶解在10～30mL的去离子水中，配置成溶液II；

(3)将溶液II逐滴加入溶液I，边加入边搅拌，配制成溶液III；

(4)将溶液III转移至高压反应釜中，高温反应；

(5)待溶液冷却后，收集沉淀分别用去离子水、无水乙醇清洗，然后烘干，即得纳米三氧化二铁；

(6)称取二水钼酸钠、硫代乙酰胺以及步骤(5)的产物纳米三氧化二铁加入水中，并搅拌均匀，然后将溶液转移至高压反应釜中，高温反应；

(7)对步骤(6)反应产物进行离心分离去除水分后，用乙醇和去离子水分别清洗数次，将清洗后的反应产物置于烘箱中烘干过夜，即得硫化钼-三氧化二铁复合物纳米材料。

步骤(1)中，每5～10mmol的七水合硫酸亚铁溶解在10～30mL的去离子水中；步骤(2)中，每1.0～2.0mmol的氯酸钠溶解在10～30mL的去离子水中；所述七水合硫酸亚铁与氯酸钠按物质的量计，比例为(5～10)：(1.0～2.0)。

步骤(4)所述的反应温度为160～200℃，反应时间为10～18小时；步骤(5)所述的乙醇和水的清洗次数为3～5次，烘箱温度60～80℃，烘干时间为8～16小时。

步骤(6)所述二水钼酸钠和硫代乙酰胺按物质的量计，比例为(1～2)：(3～7)；每1～2mmol二水钼酸钠，对应的纳米三氧化二铁质量为20～190mg和60mL水，高压反应时间为10～24小时，反应温度为180～220℃。

步骤(7)所述的的离心速率为2000～6000转/分，乙醇和水的清洗次数为3～6次，烘箱温度60～80℃。

本发明还公开了利用上述硫化钼-三氧化二铁复合纳米抑菌材料抑菌的方法，包括如下步骤：

a)取硫化钼-三氧化二铁复合物纳米材料2～5mg于1～2mL试管中，加入无水乙醇消毒，然后离心去除酒精，加入灭菌水充分悬浮；

b)称取20～50g胰蛋白胨大豆肉汤培养基搅拌溶于0.5～2.0L水中，即得到胰蛋白胨大豆肉汤，将胰蛋白胨大豆肉汤其均分成两份；在其中一份胰蛋白胨大豆肉汤中加入5～10g琼脂粉，即胰蛋白胨大豆琼脂培养基；然后置于高压灭菌锅中灭菌；将灭菌的胰蛋白胨大豆琼脂培养基制成平板以备用；

c)取-80℃下保存的大肠杆菌(革兰氏阴性菌)及葡萄球菌(革兰氏阳性菌)，分别在胰蛋白胨大豆琼脂培养基平板上划板，倒置活化培养过夜；然后挑取单克隆于含3～6mL胰蛋白胨大豆肉汤培养基的试管中，在摇床上培养过夜，取0.5～1.5ml菌离心去除培养基，再用含5～15g氯化钠的灭菌水将菌稀释，即得大肠杆菌及葡萄球菌的试验用菌；

d)取不同量步骤a)产物加入到2～8mL步骤c)的产物中，从而将步骤a)产物配制成10～100mg/L的工作浓度；随后将这些溶液置于摇床处理；

e)将步骤d)的产物稀释，再各取50～200ul均匀涂在胰蛋白胨大豆琼脂培养基平板上，倒置培养过夜并计数；

f)计算细菌去除率或抑菌率＝(C₀-C₁)/C₀×100％(C₀菌液中不加材料处理后的CFU，C1菌液中加入材料处理后的CFU)

步骤a)所述的加入无水乙醇的体积为1～1.5毫升，消毒时间为5～20分钟，加入灭菌水的体积为0.5～1.5毫升。

步骤b)所述的高压灭菌的温度为120～125℃，灭菌时间为10～30分钟。

步骤c)所述的活化培养温度为32～38℃，摇床培养温度为32～38℃，转速为150～220转/分，稀释后的浓度为0.5～1.0×10⁷CFU/mL。

步骤d)所述处理时间0.5～2小时；处理时的温度为32～38℃，转速不低于150～220转/分；步骤e)所述的稀释后的浓度范围为10^-1～10^-4，培养温度为32～38℃。

相对于现有技术，本发明取得了以下有益效果：

①在硫化钼合成体系中加入三氧化二铁是为了调控硫化钼的结构，促使硫化钼复合物具有更大的比表面积和更好的分散性能，三氧化二铁与硫化钼的协同作用，能有效降低硫化钼的带隙宽度，从而确保所得复合物具有更好的抗菌性能以及光增强抗菌性能。

②先用乙醇清洗去除未反应的聚乙烯吡咯烷酮，再用去离子水清洗去除未反应的无机离子，可以获得纯净的硫化钼-三氧化二铁复合物纳米材料。

③加入无水乙醇的目的是去除硫化钼-三氧化二铁复合物纳米材料中可能携带的细菌，保证后续抗菌实验结果的准确性。

④本发明制得的硫化钼-三氧化二铁复合材料中钼：铁的摩尔比大约为1:(0.25～11)，具有优异的对革兰氏阳性菌的抗菌性能，且成本较低，用于针对革兰氏阳性菌污染具有很高的去除率，具有较高的潜在工业应用价值。对于初始细菌浓度为0.5～1.0×10⁷CFU/mL的水，按照7.5mg/L硫化钼-三氧化二铁，对葡萄球菌处理60分钟后，细菌去除率可达90％以上。

本发明的硫化钼-三氧化二铁复合材料对革兰氏阳性菌均具有良好的抑制效果，对革兰氏阴性菌抑制效率不高，因此其抑菌特性具有选择性，本发明的硫化钼-三氧化二铁复合材料对环境友好不会引发细菌的耐药性等问题。

附图说明

图1为本发明实施例1的硫化钼-三氧化二铁复合物的XRD图谱。

图2是本发明中硫化钼-三氧化二铁在不同工作浓度在黑暗及光下对大肠杆菌的抑菌率。

图3是本发明中硫化钼-三氧化二铁在不同工作浓度在黑暗及光下对葡萄球菌的抑菌率。

具体实施方式

下面结合附图和具体实施方式对本发明作进一步详细的说明，附图仅提供参考与说明用，非用以限制本发明。

实施例1

本发明的一种硫化钼-三氧化二铁复合纳米抑菌材料的制备与应用，依次包括如下步骤：

⑴将8mmol的FeSO₄·7H₂O溶解在15mL的去离子水中，配置成溶液I；

⑵将1.6mmol的NaClO₃溶解在16mL的去离子水中，配置成溶液II；

⑶将溶液II逐滴加入溶液I，边加入边搅拌，配制成溶液III；

⑷将溶液III转移至高压反应釜中，在180℃下反应12小时；

⑸待溶液冷却后，收集沉淀分别用去离子水、无水乙醇各洗三次，然后在60℃的烘箱中烘干10小时，从而得到纳米Fe₂O₃；

⑹称取1mmol二水钼酸钠，5mmol硫代乙酰胺以及0.5g步骤⑸的产物加入60mL水中并搅拌均匀，然后将溶液转移至高压反应釜中，200℃反应20小时；

⑺对步骤⑹反应产物进行离心分离去除水分后，用乙醇和去离子水分别清洗数次，将清洗后的反应产物置于烘箱中烘干过夜，即得硫化钼-三氧化二铁复合物纳米材料；

⑻取步骤⑺的产物4mg于1.5mL试管中，加入1mL无水乙醇消毒10分钟，然后离心去除酒精，加入1mL灭菌水充分悬浮；

⑼称取30g胰蛋白胨大豆肉汤培养基搅拌溶于1000mL水中，即得到胰蛋白胨大豆肉汤，将胰蛋白胨大豆肉汤其均分成两份。在其中一份胰蛋白胨大豆肉汤中加入7.5g琼脂粉，即胰蛋白胨大豆琼脂培养基，然后将他们置于高压灭菌锅中，121℃下灭菌15分钟。将灭菌的胰蛋白胨大豆琼脂培养基制成平板以备用。

⑽取-80℃下保存的大肠杆菌，在胰蛋白胨大豆琼脂培养基平板上划板，于37℃下倒置活化培养过夜。然后挑取单克隆于含5mL胰蛋白胨大豆肉汤培养基的试管中，在37℃的摇床上以180rpm/min的转速培养过夜，取1ml菌离心去除培养基，再用含8.5g NaCl的灭菌水将菌稀释至1～0.5×10⁷CFU/mL，从而制备得到大肠杆菌试验用菌；

⑾取不同量步骤⑻产物加入到5mL步骤⑽的产物中，从而将步骤⑻产物配制成15mg/L的工作浓度。随后将这些溶液置于37℃的摇床，以180rpm/min的转速下处理2小时。

⑿将步骤⑾的产物稀释成10^-1、10^-2、10^-3、10^-4，再各取100ul均匀涂在胰蛋白胨大豆琼脂培养基平板上，在37℃下倒置培养过夜并计数。

⒀计算细菌去除率或抑菌率＝(C₀-C₁)/C₀×100％(C₀菌液中不加材料处理后的CFU，C1菌液中加入材料处理后的CFU)

抑菌率＝(C₀-C₁)/C₀×100％＝12.1％

实施例2

本发明的一种硫化钼-三氧化二铁复合纳米抑菌材料的制备与应用，依次包括如下步骤：

⑴将8mmol的FeSO₄·7H₂O溶解在15mL的去离子水中，配置成溶液I；

⑵将1.6mmol的NaClO₃溶解在16mL的去离子水中，配置成溶液II；

⑶将溶液II逐滴加入溶液I，边加入边搅拌，配制成溶液III；

⑷将溶液III转移至高压反应釜中，在180℃下反应12小时；

⑸待溶液冷却后，收集沉淀分别用去离子水、无水乙醇各洗三次，然后在60℃的烘箱中烘干10小时，从而得到纳米Fe₂O₃；

⑹称取1mmol二水钼酸钠，5mmol硫代乙酰胺以及0.5g步骤⑸的产物加入60mL水中并搅拌均匀，然后将溶液转移至高压反应釜中，200℃反应20小时；

⑺对步骤⑹反应产物进行离心分离去除水分后，用乙醇和去离子水分别清洗数次，将清洗后的反应产物置于烘箱中烘干过夜，即得硫化钼-三氧化二铁复合物纳米材料；

⑻取步骤⑺的产物4mg于1.5mL试管中，加入1mL无水乙醇消毒10分钟，然后离心去除酒精，加入1mL灭菌水充分悬浮；

⑼称取30g胰蛋白胨大豆肉汤培养基搅拌溶于1000mL水中，即得到胰蛋白胨大豆肉汤，将胰蛋白胨大豆肉汤其均分成两份。在其中一份胰蛋白胨大豆肉汤中加入7.5g琼脂粉，即胰蛋白胨大豆琼脂培养基，然后将他们置于高压灭菌锅中，121℃下灭菌15分钟。将灭菌的胰蛋白胨大豆琼脂培养基制成平板以备用。

⑽取-80℃下保存的大肠杆菌，在胰蛋白胨大豆琼脂培养基平板上划板，于37℃下倒置活化培养过夜。然后挑取单克隆于含5mL胰蛋白胨大豆肉汤培养基的试管中，在37℃的摇床上以180rpm/min的转速培养过夜，取1ml菌离心去除培养基，再用含8.5g NaCl的灭菌水将菌稀释至1～0.5×10⁷CFU/mL，从而制备得到大肠杆菌试验用菌；

⑾取不同量步骤⑻产物加入到5mL步骤⑽的产物中，从而将步骤⑻产物配制成30mg/L的工作浓度。随后将这些溶液置于37℃的摇床，以180rpm/min的转速下处理2小时。

⑿将步骤⑾的产物稀释成10^-1、10^-2、10^-3、10^-4，再各取100ul均匀涂在胰蛋白胨大豆琼脂培养基平板上，在37℃下倒置培养过夜并计数。

⒀计算细菌去除率或抑菌率＝(C₀-C₁)/C₀×100％(C₀菌液中不加材料处理后的CFU，C1菌液中加入材料处理后的CFU)

抑菌率＝(C₀-C₁)/C₀×100％＝15.7％

实施例3

本发明的一种硫化钼-三氧化二铁复合纳米抑菌材料的制备与应用，依次包括如下步骤：

⑴将8mmol的FeSO₄·7H₂O溶解在15mL的去离子水中，配置成溶液I；

⑵将1.6mmol的NaClO₃溶解在16mL的去离子水中，配置成溶液II；

⑶将溶液II逐滴加入溶液I，边加入边搅拌，配制成溶液III；

⑷将溶液III转移至高压反应釜中，在180℃下反应12小时；

⑸待溶液冷却后，收集沉淀分别用去离子水、无水乙醇各洗三次，然后在60℃的烘箱中烘干10小时，从而得到纳米Fe₂O₃；

⑹称取1mmol二水钼酸钠，5mmol硫代乙酰胺以及0.5g步骤⑸的产物加入60mL水中并搅拌均匀，然后将溶液转移至高压反应釜中，200℃反应20小时；

⑺对步骤⑹反应产物进行离心分离去除水分后，用乙醇和去离子水分别清洗数次，将清洗后的反应产物置于烘箱中烘干过夜，即得硫化钼-三氧化二铁复合物纳米材料；

⑻取步骤⑺的产物4mg于1.5mL试管中，加入1mL无水乙醇消毒10分钟，然后离心去除酒精，加入1mL灭菌水充分悬浮；

⑼称取30g胰蛋白胨大豆肉汤培养基搅拌溶于1000mL水中，即得到胰蛋白胨大豆肉汤，将胰蛋白胨大豆肉汤其均分成两份。在其中一份胰蛋白胨大豆肉汤中加入7.5g琼脂粉，即胰蛋白胨大豆琼脂培养基，然后将他们置于高压灭菌锅中，121℃下灭菌15分钟。将灭菌的胰蛋白胨大豆琼脂培养基制成平板以备用。

⑽取-80℃下保存的大肠杆菌，在胰蛋白胨大豆琼脂培养基平板上划板，于37℃下倒置活化培养过夜。然后挑取单克隆于含5mL胰蛋白胨大豆肉汤培养基的试管中，在37℃的摇床上以180rpm/min的转速培养过夜，取1ml菌离心去除培养基，再用含8.5g NaCl的灭菌水将菌稀释至1～0.5×10⁷CFU/mL，从而制备得到大肠杆菌试验用菌；

⑾取不同量步骤⑻产物加入到5mL步骤⑽的产物中，从而将步骤⑻产物配制成60mg/L的工作浓度。随后将这些溶液置于37℃的摇床，以180rpm/min的转速下处理2小时。

⑿将步骤⑾的产物稀释成10^-1、10^-2、10^-3、10^-4，再各取100ul均匀涂在胰蛋白胨大豆琼脂培养基平板上，在37℃下倒置培养过夜并计数。

⒀计算细菌去除率或抑菌率＝(C₀-C₁)/C₀×100％(C₀菌液中不加材料处理后的CFU，C1菌液中加入材料处理后的CFU)

抑菌率＝(C₀-C₁)/C₀×100％＝22.6％

实施例4

本发明的一种硫化钼-三氧化二铁复合纳米抑菌材料的制备与应用，依次包括如下步骤：

⑴将8mmol的FeSO₄·7H₂O溶解在15mL的去离子水中，配置成溶液I；

⑵将1.6mmol的NaClO₃溶解在16mL的去离子水中，配置成溶液II；

⑶将溶液II逐滴加入溶液I，边加入边搅拌，配制成溶液III；

⑷将溶液III转移至高压反应釜中，在180℃下反应12小时；

⑸待溶液冷却后，收集沉淀分别用去离子水、无水乙醇各洗三次，然后在60℃的烘箱中烘干10小时，从而得到纳米Fe₂O₃；

⑹称取1mmol二水钼酸钠，5mmol硫代乙酰胺以及0.5g步骤⑸的产物加入60mL水中并搅拌均匀，然后将溶液转移至高压反应釜中，200℃反应20小时；

⑺对步骤⑹反应产物进行离心分离去除水分后，用乙醇和去离子水分别清洗数次，将清洗后的反应产物置于烘箱中烘干过夜，即得硫化钼-三氧化二铁复合物纳米材料；

⑻取步骤⑺的产物4mg于1.5mL试管中，加入1mL无水乙醇消毒10分钟，然后离心去除酒精，加入1mL灭菌水充分悬浮；

⑼称取30g胰蛋白胨大豆肉汤培养基搅拌溶于1000mL水中，即得到胰蛋白胨大豆肉汤，将胰蛋白胨大豆肉汤其均分成两份。在其中一份胰蛋白胨大豆肉汤中加入7.5g琼脂粉，即胰蛋白胨大豆琼脂培养基，然后将他们置于高压灭菌锅中，121℃下灭菌15分钟。将灭菌的胰蛋白胨大豆琼脂培养基制成平板以备用。

⑽取-80℃下保存的葡萄球菌，在胰蛋白胨大豆琼脂培养基平板上划板，于37℃下倒置活化培养过夜。然后挑取单克隆于含5mL胰蛋白胨大豆肉汤培养基的试管中，在37℃的摇床上以180rpm/min的转速培养过夜，取1ml菌离心去除培养基，再用含8.5g NaCl的灭菌水将菌稀释至1～0.5×10⁷CFU/mL，从而制备得到大肠杆菌试验用菌；

⑾取不同量步骤⑻产物加入到5mL步骤⑽的产物中，从而将步骤⑻产物配制成15mg/L的工作浓度。随后将这些溶液置于37℃的摇床，以180rpm/min的转速下处理1小时。

⑿将步骤⑾的产物稀释成10^-1、10^-2、10^-3、10^-4，再各取100ul均匀涂在胰蛋白胨大豆琼脂培养基平板上，在37℃下倒置培养过夜并计数。

⒀计算细菌去除率或抑菌率＝(C₀-C₁)/C₀×100％(C₀菌液中不加材料处理后的CFU，C1菌液中加入材料处理后的CFU)

抑菌率＝(C₀-C₁)/C₀×100％＝99.1％

实施例5

本发明的一种硫化钼-三氧化二铁复合纳米抑菌材料的制备与应用，依次包括如下步骤：

⑴将8mmol的FeSO₄·7H₂O溶解在15mL的去离子水中，配置成溶液I；

⑵将1.6mmol的NaClO₃溶解在16mL的去离子水中，配置成溶液II；

⑶将溶液II逐滴加入溶液I，边加入边搅拌，配制成溶液III；

⑷将溶液III转移至高压反应釜中，在180℃下反应12小时；

⑸待溶液冷却后，收集沉淀分别用去离子水、无水乙醇各洗三次，然后在60℃的烘箱中烘干10小时，从而得到纳米Fe₂O₃；

⑹称取1mmol二水钼酸钠，5mmol硫代乙酰胺以及0.5g步骤⑸的产物加入60mL水中并搅拌均匀，然后将溶液转移至高压反应釜中，200℃反应20小时；

⑺对步骤⑹反应产物进行离心分离去除水分后，用乙醇和去离子水分别清洗数次，将清洗后的反应产物置于烘箱中烘干过夜，即得硫化钼-三氧化二铁复合物纳米材料；

⑻取步骤⑺的产物4mg于1.5mL试管中，加入1mL无水乙醇消毒10分钟，然后离心去除酒精，加入1mL灭菌水充分悬浮；

⑼称取30g胰蛋白胨大豆肉汤培养基搅拌溶于1000mL水中，即得到胰蛋白胨大豆肉汤，将胰蛋白胨大豆肉汤其均分成两份。在其中一份胰蛋白胨大豆肉汤中加入7.5g琼脂粉，即胰蛋白胨大豆琼脂培养基，然后将他们置于高压灭菌锅中，121℃下灭菌15分钟。将灭菌的胰蛋白胨大豆琼脂培养基制成平板以备用。

⑽取-80℃下保存的葡萄球菌，在胰蛋白胨大豆琼脂培养基平板上划板，于37℃下倒置活化培养过夜。然后挑取单克隆于含5mL胰蛋白胨大豆肉汤培养基的试管中，在37℃的摇床上以180rpm/min的转速培养过夜，取1ml菌离心去除培养基，再用含8.5g NaCl的灭菌水将菌稀释至1～0.5×10⁷CFU/mL，从而制备得到大肠杆菌试验用菌；

⑾取不同量步骤⑻产物加入到5mL步骤⑽的产物中，从而将步骤⑻产物配制成30mg/L的工作浓度。随后将这些溶液置于37℃的摇床，以180rpm/min的转速下处理1小时。

⑿将步骤⑾的产物稀释成10^-1、10^-2、10^-3、10^-4，再各取100ul均匀涂在胰蛋白胨大豆琼脂培养基平板上，在37℃下倒置培养过夜并计数。

⒀计算细菌去除率或抑菌率＝(C₀-C₁)/C₀×100％(C₀菌液中不加材料处理后的CFU，C1菌液中加入材料处理后的CFU)

抑菌率＝(C₀-C₁)/C₀×100％＝99.5％

实施例6

本发明的一种硫化钼-三氧化二铁复合纳米抑菌材料的制备与应用，依次包括如下步骤：

⑴将8mmol的FeSO₄·7H₂O溶解在15mL的去离子水中，配置成溶液I；

⑵将1.6mmol的NaClO₃溶解在16mL的去离子水中，配置成溶液II；

⑶将溶液II逐滴加入溶液I，边加入边搅拌，配制成溶液III；

⑷将溶液III转移至高压反应釜中，在180℃下反应12小时；

⑸待溶液冷却后，收集沉淀分别用去离子水、无水乙醇各洗三次，然后在60℃的烘箱中烘干10小时，从而得到纳米Fe₂O₃；

⑹称取1mmol二水钼酸钠，5mmol硫代乙酰胺以及0.5g步骤⑸的产物加入60mL水中并搅拌均匀，然后将溶液转移至高压反应釜中，200℃反应20小时；

⑺对步骤⑹反应产物进行离心分离去除水分后，用乙醇和去离子水分别清洗数次，将清洗后的反应产物置于烘箱中烘干过夜，即得硫化钼-三氧化二铁复合物纳米材料；

⑻取步骤⑺的产物4mg于1.5mL试管中，加入1mL无水乙醇消毒10分钟，然后离心去除酒精，加入1mL灭菌水充分悬浮；

⑼称取30g胰蛋白胨大豆肉汤培养基搅拌溶于1000mL水中，即得到胰蛋白胨大豆肉汤，将胰蛋白胨大豆肉汤其均分成两份。在其中一份胰蛋白胨大豆肉汤中加入7.5g琼脂粉，即胰蛋白胨大豆琼脂培养基，然后将他们置于高压灭菌锅中，121℃下灭菌15分钟。将灭菌的胰蛋白胨大豆琼脂培养基制成平板以备用。

⑽取-80℃下保存的葡萄球菌，在胰蛋白胨大豆琼脂培养基平板上划板，于37℃下倒置活化培养过夜。然后挑取单克隆于含5mL胰蛋白胨大豆肉汤培养基的试管中，在37℃的摇床上以180rpm/min的转速培养过夜，取1ml菌离心去除培养基，再用含8.5g NaCl的灭菌水将菌稀释至1～0.5×10⁷CFU/mL，从而制备得到大肠杆菌试验用菌；

⑾取不同量步骤⑻产物加入到5mL步骤⑽的产物中，从而将步骤⑻产物配制成60mg/L的工作浓度。随后将这些溶液置于37℃的摇床，以180rpm/min的转速下处理1小时。

⑿将步骤⑾的产物稀释成10^-1、10^-2、10^-3、10^-4，再各取100ul均匀涂在胰蛋白胨大豆琼脂培养基平板上，在37℃下倒置培养过夜并计数。

⒀计算细菌去除率或抑菌率＝(C₀-C₁)/C₀×100％(C₀菌液中不加材料处理后的CFU，C1菌液中加入材料处理后的CFU)

抑菌率＝(C₀-C₁)/C₀×100％＝99.9％

对实施例1～6的数据汇总如下表，并且根据实施例1～3的数据绘制成图2，根据实施例4～6的数据绘制成图3。

以上所述仅为本发明之较佳可行实施例而已，非因此局限本发明的专利保护范围。除上述实施例外，本发明还可以有其他实施方式，例如可以将各成分的质量和体积等比例放大若干倍。凡采用等同替换或等效变换形成的技术方案，均落在本发明要求的保护范围内。本发明未经描述的技术特征可以通过或采用现有技术实现，在此不再赘述。