本发明涉及农业技术领域，具体涉及一种冬枣花药培养再生单倍体植株体系及其培养方法。
背景技术：
1953年，tuleck用银杏花粉在人工培养基上第一次成功地诱导形成单倍体愈伤组织guha和maheshwari(1964)首次成功地从毛叶曼陀罗(daturainoxia)花药培养中获得单倍体植株，随后证实是由胚状体途径获得的单倍体花粉植株，从此开创了利用花粉培育单倍体的新途径，近30年来，利用花药培养产生单倍体植株的技术已被广泛应用到10个科，24个属，34个种的250多种植物上。果树花药培养单倍体的研究起步较晚，20世纪70年代末到80年代初先后在柑橘、苹果、葡萄、草莓、荔枝、龙眼等树种上取得了成功。枣(ziziphusjujubamill.)是我国特色优势果树，关于枣的花药培养，鲜有报道，并存在愈伤组织诱导率较低(43.1％)的问题。
中国专利公开号cn104041414b公开了一种辣椒花药培养获得单倍体植株的方法，包括选取花蕾，花蕾消毒，花药接种，预处理，花药培养，诱导愈伤组织再分化为单倍体植株；该发明采用固体培养基将小孢子和花药壁共培养，低温、热激预处理，调节愈伤诱导、分化培养基成分和培养条件，提高了愈伤率和愈伤组织的分化能力；应用此方法进行辣椒花药培养，愈伤诱导率60％以上，出苗率80％以上，解决了辣椒花药培养诱导率低的难题。但是该发明并不适用于冬枣培养。
中国专利公开号cn1934932公开了一种离体诱导冬枣花药愈伤组织的方法，即通过冬枣花药的组织培养获得其愈伤组织,愈伤组织诱导率达86.23％，包括外植体采集、消毒、初始诱导、增殖培养。在5～6月选取田间直径为0.3～0.6cm、花萼尚未张开的冬枣未成熟花蕾，4℃冰箱预处理1～3d。流水冲洗1～2h,超净工作台上将花蕾放入70％乙醇30s，再转入0.1％hgcl2溶液中8mic，无菌水冲洗3～4次后剥取花药，启动培养时将无菌花药接种在ms+麦芽糖15～20g/l+tdz0.5-1.0mg/l+naa0-0.5mg/l的培养基上进行暗培养三周，然后转至弱光下(800～1000lux)培养。花药逐渐产生黄绿色的、松散颗粒状的愈伤组织，且随培养时间的延长逐渐增多。增殖培养时将获得的初始愈伤组织转接到ms+麦芽糖15～20g/l+tdz0.1-0.5mg/l+naa0-0.5mg/l的培养基中进行增殖培养,愈伤组织可快速增殖。该方法可在70d左右获得大量冬枣花药愈伤组织；但是该方法步骤繁琐，应用受限。
花药培养是单倍体育种的重要途径，不但缩短了育种年限，并且提高了育种效率。就枣树而言，通过单倍体育种有可能使无性繁殖的枣树也能用种子繁殖，并为基因型高度杂合的枣品种遗传性研究提供纯系材料，从而缩短育种年限并促进枣树遗传理论工作的研究。
技术实现要素：
本发明的目的在于克服现有技术的不足，提供一种冬枣花药培养再生单倍体植株体系及其培养方法，体系组成简单，易于培养，通过单倍体育种使无性繁殖的枣树也能用种子繁殖，并为基因型高度杂合的枣品种遗传性研究提供纯系材料，从而缩短育种年限并促进枣树遗传理论工作的研究。
本发明的目的是通过以下技术方案来实现的：
一种冬枣花药培养再生单倍体植株体系，包括花药培养基、一级愈伤组织培养基和二级愈伤组织培养基，
所述花药培养基由1/2的ms、0.8～1.2mol/l2，4-d、18～22g/l的麦芽糖和3.2～3.7g/l的琼脂组成；
所述一级愈伤组织培养基由ms、0.8～1.2mg/l的tdz、18～22g/l的麦芽糖和3.2～3.7g/l的琼脂组成；
所述二级愈伤组织培养基由ms、1.8～2.2mg/l的三十烷醇、18～22g/l的麦芽糖和3.2～3.7g/l的琼脂组成。
进一步地，所述花药培养基由1/2的ms、1.0mol/l2，4-d、20g/l的麦芽糖和3.5g/l的琼脂组成；
所述一级愈伤组织培养基由ms、1.0mg/l的tdz、20g/l的麦芽糖和3.5g/l的琼脂组成；
所述二级愈伤组织培养基由ms、2.0mg/l的三十烷醇、20g/l的麦芽糖和3.5g/l的琼脂组成。
一种冬枣花药培养再生单倍体植株体系的培养方法，采用上述的冬枣花药培养再生单倍体植株体系进行培养。
进一步地，包括以下步骤：
s1.将冬枣花蕾浸泡在0.10mol/l的甘露醇中3天，然后接种在花药培养基上，培养40～60天，得到愈伤组织；
s2.将愈伤组织接种在一级愈伤组织培养基上，培养25～35天；
s3然后将愈伤组织再接种到二级愈伤组织培养基上，培养25～35天。
进一步地，所述步骤s1中，接种到花药培养基后，在25～28℃下进行暗培养。
进一步地，所述步骤s2、步骤s3分别在25～28℃下进行培养。
进一步地，单倍体发生率达到33.33％。
本发明的有益效果是：本发明的体系组成简单，易于培养，通过单倍体育种使无性繁殖的枣树也能用种子繁殖，并为基因型高度杂合的枣品种遗传性研究提供纯系材料，从而缩短育种年限并促进枣树遗传理论工作的研究。
具体实施方式
下面结合具体实施例进一步详细描述本发明的技术方案，但本发明的保护范围不局限于以下所述。
实施例1
一种冬枣花药培养再生单倍体植株体系，包括花药培养基、一级愈伤组织培养基和二级愈伤组织培养基，
所述花药培养基由1/2的ms、0.8mol/l的2，4-d、18g/l的麦芽糖和3.2g/l的琼脂组成；
所述一级愈伤组织培养基由ms、0.8mg/l的tdz、19g/l的麦芽糖和3.3g/l的琼脂组成；
所述二级愈伤组织培养基由ms、2.2mg/l的三十烷醇、18g/l的麦芽糖和3.7g/l的琼脂组成。
实施例2
一种冬枣花药培养再生单倍体植株体系，包括花药培养基、一级愈伤组织培养基和二级愈伤组织培养基，
所述花药培养基由1/2的ms、1.2mol/l2，4-d、19g/l的麦芽糖和3.7g/l的琼脂组成；
所述一级愈伤组织培养基由ms、1.1mg/l的tdz、22g/l的麦芽糖和3.2g/l的琼脂组成；
所述二级愈伤组织培养基由ms、1.9mg/l的三十烷醇、20g/l的麦芽糖和3.4g/l的琼脂组成。
实施例3
一种冬枣花药培养再生单倍体植株体系，包括花药培养基、一级愈伤组织培养基和二级愈伤组织培养基，
所述花药培养基由1/2的ms、1.1mol/l2，4-d、22g/l的麦芽糖和3.6g/l的琼脂组成；
所述一级愈伤组织培养基由ms、1.2mg/l的tdz、18g/l的麦芽糖和3.7g/l的琼脂组成；
所述二级愈伤组织培养基由ms、1.8mg/l的三十烷醇、22g/l的麦芽糖和3.2g/l的琼脂组成。
实施例4
一种冬枣花药培养再生单倍体植株体系，包括花药培养基、一级愈伤组织培养基和二级愈伤组织培养基，
所述花药培养基由1/2的ms、1.0mol/l2，4-d、20g/l的麦芽糖和3.5g/l的琼脂组成；
所述一级愈伤组织培养基由ms、1.0mg/l的tdz、20g/l的麦芽糖和3.5g/l的琼脂组成；
所述二级愈伤组织培养基由ms、2.0mg/l的三十烷醇、20g/l的麦芽糖和3.5g/l的琼脂组成。
实施例5
一种冬枣花药培养再生单倍体植株体系，包括花药培养基、一级愈伤组织培养基和二级愈伤组织培养基，
所述花药培养基由1/2的ms、1.50mol/l2，4-d、20g/l的麦芽糖和3.5g/l的琼脂组成；
所述一级愈伤组织培养基由ms、1.0mg/l的tdz、20.5g/l的麦芽糖和3.5g/l的琼脂组成；
所述二级愈伤组织培养基由ms、2.0mg/l的三十烷醇、20g/l的麦芽糖和3.6g/l的琼脂组成。
试验例
一种冬枣花药培养再生单倍体植株体系的培养方法，采用上述的冬枣花药培养再生单倍体植株体系进行培养。
具体地，包括以下步骤：
s1.选择从外观看为黄绿色的冬枣花蕾(此时的花粉多处于单核靠边期)，将花蕾浸泡在0.10mol/l的甘露醇中3d，然后将花药接种在1/2ms+2，4-d1.0mol/l+麦芽糖20g/l+琼脂3.5g/l培养基上，置于25-28℃培养箱中暗培养，50天后花药出愈率达98.56％；
s2.将愈伤组织接种在ms+tdz1.0mg/l+麦芽糖20g/l+琼脂3.5g/l的培养基上进行增殖和分化，30天后进行观察，愈伤组织增殖迅速，颜色翠绿，生长健壮；
s3.将愈伤组织接种到ms+三十烷醇2.0mg/l+麦芽糖20g/l+琼脂3.5g/l的培养基上，经过30天后观察，愈伤组织分化率达100％，再生植株率8.22％；
s4.通过流式细胞仪对冬枣花药培养将再生植株进行鉴定，发现有单倍体，以及单倍体和二倍体的嵌合体，单倍体发生率33.33％。
以上所述仅是本发明的优选实施方式，应当理解本发明并非局限于本文所披露的形式，不应看作是对其他实施例的排除，而可用于各种其他组合、修改和环境，并能够在本文所述构想范围内，通过上述教导或相关领域的技术或知识进行改动。而本领域人员所进行的改动和变化不脱离本发明的精神和范围，则都应在本发明所附权利要求的保护范围内。