草甘膦抗性转基因植物的制作方法

专利名称：草甘膦抗性转基因植物的制作方法
技术领域：
本发明涉及能耐受草甘膦作为活性成分的除草剂处理的转基因甜菜植株。
甜菜田间的杂草是农场主的主要问题。它们与农作物竞争因此而降低产量。现在没有单一的除草剂能有效控制所有杂草而不损伤甜菜作物本身(Miller等，甜菜研究杂志，263-4，1989)。实际上，农场主使用除草剂的混合物，而它们也降低农作物生长。同时，已发展出对所述除草剂抗性的野草种类的数目持续增加(Schweizer等，甜菜研究杂志，281-23，1991)，由此加重了甜菜田间杂草控制问题。
Roundup是广谱的、环境上优选的抑制杂草和农作物种类的除草剂。本发明的内容中，1升除草剂Roundup溶液含有260g其活性成分，即被叶吸收的草甘膦(常用名为N-膦酰基甲基-甘氨酸)。到目前为止，在20年使用期间没有发展出草甘膦抗性杂草(Holt等，植物生理学年鉴，1993)；另外在甜菜中没有发现对草甘膦的耐受性。而且Roundup的预先使用在甜菜田间控制杂草方面比甜菜农业中常用的含有苯敌草、苯嗪草酮、甜菜呋的除草剂混合物更有效(Madsen等，杂草研究，35105-111，1995)。
草甘膦通过不可逆地与5-烯醇丙酮酸莽草酸盐-3-磷酸合成酶(epsps)结合抑制芳香族氨基酸的生物合成。在叶绿体中，此酶催化莽草酸盐-3-磷酸和烯醇磷酸丙酮酸形成5-烯醇丙酮酸-3-磷酸和磷酸。在施用除草剂后约一周，可看到肉眼可见的效应，包括萎蔫、黄化后完全变褐，植物组织的萎凋和根的腐烂。
为赋予农作物种类草甘膦耐受性，研究集中于向植物导入能增加草甘膦耐受性的epsps基因。除了植物，细胞和真菌也天然地表达epsps酶活性。发现来自农杆菌属种类的cp4/epsps赋予对草甘膦的耐受性(Barry等，“氨基酸合成的抑制剂赋予农作物植株对草甘膦耐受性的策略，于植物中氨基酸的生物合成和分子调控，Singh等(编辑)，美国植物生理学学会，第139-145页，1992)。将cp4/epsps基因导入大豆和油籽油菜在田间条件产生对叶面施用除草剂的耐受性(Delannay等，农作物科学，351461-1467，1995；Padgette等，农作物科学，351451-1461，1995)。
从农杆菌属种类LBAA分离的草甘膦氧化还原酶(gox)(Barry等，同上)将草甘膦降解成氨甲基膦酸(对植物无毒的化合物)。cp4/epsps和草甘膦氧化酶(gox)基因的结合已成功地用于得到对草甘膦有抗性的转基因小麦(Zhou等，植物细胞报告，15159-163，1995)。
本发明的目的是提供对足以实现最佳除草剂活性的高剂量的草甘膦有耐受性的甜菜植株。这样的植株可进一步通过与优良甜菜株系回交来改良以优化农业特性如产量、病原体抗性等。
甜菜可以用根瘤农杆菌介导转化方法来转化(Fry等，植物分子生物学第三次国际会议，Tuscon，Arizona，USA；D′Halluin等，生物/技术，10309-314，1992；Konwar，植物生化&生物技术杂志，337-41，1994)。农杆菌介导的转化常常导致多于一个拷贝的T-DNA整合入植物基因组。优选地将要整合的基因导入T-DNA，使它位于T-DNA右边则不是左边界附近，它几乎总是会转移至植物中。
根据本发明所述的植株对每公顷大约3×6升除草剂Roundup(每公顷约18升)的处理有耐受性。获得良好杂草控制的总标准剂量根据杂草压力在每公顷4-6升之间变动。在这些浓度时，除草剂处理不产生对植物活力和叶褪绿的任何可测到的影响。根据本发明所述的植株表现的耐受性由转基因表达的cp4/epsps酶活性赋予。本发明优选的实施方案已于1997年10月24日保存于国立工业和海洋微生物保藏有限公司(23St Macher Drive，Aberdeen AB2 1RY，ScotlandUK)，保藏号为97087006/2。
因此本发明涉及表达cp4/epsps酶活性的甜菜植株及其后代。具体地，本发明涉及对每公顷约4至约8升Roundup处理有耐受性的甜菜植株及其后代。
根据本发明所述的植株可以通过使用在T-DNA左和右边界序列间含有如SEQ ID No5所述编码尤其是cp4/epsps的DNA片段的转化载体进行常规农杆菌介导的转化得到。
在本发明的范围内令人惊讶地发现，在转基因的基因组内缺失T-DNA左和右边界序列并导致转化载体DNA相当大部分的缺失而保留了编码cp4/epsps的DNA的转化结果(RRMax)提供了优良的草甘膦耐受性。特别是发现以SEQ ID No1为特征的DNA片段整合入基因组高度重复的区域同时取代了该基因组重复序列的部分。与所用转化载体中与T-DNA右边界序列相连的转基因序列部分直接相邻的基因组DNA具有SEQ ID No2中给出的序列。与整合的转基因DNA的另一末端直接相邻的基因组DNA具有SEQ ID No3中给出的序列。新形成的基因组DNA排列的完整DNA序列在SEQ ID No4中给出。
因此，本发明涉及甜菜植株及其后代，其中以SEQ ID No1的核苷酸序列为特征的DNA形成植物基因组的部分，并且介所述的核苷酸序列取代了植物基因组内高度重复DNA序列。
此处优选的是其中与所述核苷酸序列直接连接的那些基因组部分分别以SEQ ID No2和SEQ ID No3的核苷酸序列为特征的甜菜植株及其后代。
进一步优选的是其中以SEQ ID No4的核苷酸序列为特征的DNA形成植物基因组的部分的甜菜植株及其后代。
上述经操作已导入除草剂抗性的转基因种子和植株通过性繁殖或营养生长传代并因此可以在后代植株中保持和繁殖。通常所述的维持和繁殖使用已知的农业方法，这些方法发展来适应特别目的如耕种、插种或收获。正在生长的农作物易于受由昆虫或感染引起的侵袭和损伤，因此采取措施以控制植物病毒、昆虫、线虫和其它对提高产量不利的条件。这些措施包括机械措施如耕地或除去受侵染的植物和施用农业化学品如杀真菌剂、杀精剂、杀线虫剂、生长调节剂、成熟剂和杀昆虫剂。
根据本发明所述的转基因植物和种子的除草剂耐受性可进一步在植物育种中得到应用，以开发具有改良特性(如虫害、除草剂或逆境耐受性，改良的营养价值，提高的产量，引起更小的由于倒伏或断裂的损失的改良结构)的植物。各种育种步骤的特征在于成熟的人类干预如选择要杂交的株系、引导亲本株系的传粉或选择适当的后代植株。根据所需的特性采取不同的育种措施。相关技术在本领域内众所周知并且包括但不限于杂交、近交、回交育种、多线育种、品种掺合、种间杂交、非整倍体技术等。因此，根据本发明所述的转基因种子和植株可用于培育改良的植物株系，例如用于提高传统方法如除草剂或杀虫剂处理的效力或由于其修饰的遗传特性而允许用所述方法施用。选择性地，可以得到具有改良的逆境耐受性的新农作物，由于它们的优化遗传装备，产生比不能耐受相对不利发育条件的产品更高质量的收获产品。
在种子生产中，发芽质量和种子的均一性是必需的产品特征，而农场主收获和出售的种子的发芽质量和种子均一性并不重要。因为使农作物与其它农作物和杂草种子分开、控制种生疾病和生产具良好发芽率的种子是困难的，所以在培养、控制和销售纯种子领域有经验的种子生产者已开发了相当广泛和成熟的种子生产技术。因此农场主常用的方法是购买经鉴定符合特定质量标准的种子而不是使用从他自己的农作物收获的种子。用作种子的繁殖材料习惯用含有杀虫剂、杀昆虫剂、杀真菌剂、杀细菌剂、杀线虫剂、杀软体动物剂或其混合物的保护剂涂层处理。常规使用的保护剂涂层包含诸如克菌丹、萎锈灵、福美双(TMTD)、methalaxyl(Apron)和虫螨磷(Actellic)的化合物。如果需要，将这些化合物与其它载体、表面活性剂或配制领域常规使用的促进施用佐剂一起配制以提供针对由细菌、真菌或动物虫害引起的损伤的保护。保护剂涂层可以通过用液体制品浸渍繁殖材料或通过用混合的干或湿配方包裹来施用。也可能是其它施用方法如直接处理芽或果实。
本发明的另一方面提供新的农业方法如上面列举的方法，其特征在于使用根据本发明所述的转基因植物、转基因植物材料或转基因种子。
在另一实施方案中，本发明涉及来自转基因植物的转基因植物细胞、组织、器官、种子或植物部分。本发明也包括转基因植物后代及后代的转基因植物细胞、组织、器官、种子和植物部分。
本发明进一步涉及含有能表达cp4/epsps的具Roundup耐受性的甜菜种子的商品包及其使用说明。本发明内优选的是包含含有稳定整合入其基因的具有SEQ ID No1所示核苷酸序列的DNA片段的转基因植物种子的商品包。
所用的转化方法学总结如下(a)用含有如SEQ ID No5中所示的编码cp4/epsps的DNA片段的载体，使用根瘤农杆菌转化体外培养的甜菜子叶。
(b)在草甘膦存在时再生芽；(c)将芽转移到温室的土壤中；(d)用处理苗；(e)对植株活力和叶褪绿进行目测评级；(g)选择未受草甘膦处理影响的具有正常活力和叶子的完全正常的植株；并且(h)使用传统育种技术繁殖所选植株。
具体地，在选择8-12周后，在约0.1至约10mM，优选地1mM草甘膦存在时再生芽。每个转基因芽进一步繁殖成10个拷贝，在将它转移至温室中生根前，可以用聚合酶链式反应(PCR)分析cp4/epsps转基因的存在。温室中光照条件是16小时光照和8小时黑暗，温度为22±2℃。在3-4叶期，用每公顷0.1-20升，优选地1升剂量的Roundup水溶液喷洒苗。草甘膦施用后2周基于0(死亡植株)到9(完受未受影响的植制)的等级对单个植物进行植株活力和植物褪绿的目测损伤评级。0-3的评级是易感植物的特征。3-7的评级表明耐受性的低至中间水平，8或9的评级表明耐受性的良好水平。具体地，评级有以下意义9与未处理的对照相同的未受影响的植株8只有叶尖上很小的坏死，少于5％的叶面积受到影响并黄化7叶尖上很小的坏死开始卷曲，少于5％的叶面积受到影响并黄化6，5，4坏死和叶卷曲增强；叶变得比正常的更小3，2没有或非常有限的叶生长；所有的叶子卷曲并受坏死影响1无植物生长，最多5％的植株保持绿色0死亡植株为收集田间实验数据，通过传统技术进一步繁殖或培育有正常活力并且不受草甘膦处理影响的(评分9)植株。
优选地，使用含有具有SEQ ID No5给出序列的DNA片段的载体进行转化，其中DNA片段含有cp4/epsps和gox基因(都已被报道赋予某些植物种类对草甘膦的耐受性)和报告基因UidA基因(编码β-葡糖醛酸酶)。增强的35S启动子(odell等，自然313810-812，1995)与UidA基因相连，玄参花叶病毒(FMV)启动子(Gouwda等，J.Cell.Biochem.Suppl.13D301，1989)与cp4/epsps和gox基因相连。在cp4/epsps和gox基因的上游插入转运肽(Gasser等，生物化学杂志，2634280-4289，1988)以将两个蛋白靶向叶绿体。
令人惊奇地发现，根据本发明产生的一个转化结果不受每公顷多达约3×6升(约18升)除草剂Roundup剂量的影响。分子分析表明·有整合于单一位点的单拷贝转基因DNA；·整合的DNA编码cp4/epsps并对应于截短的载体DNA；·整合的DNA取代了基因组DNA片段并具有SEQ ID No1所示的序列；·与整合的DNA直接相邻的基因组DNA的特征在于SEQ ID No2和SEQ ID No3的序列，导致SEQ ID No4的新基因组序列排列；
·cp4/epsps和UidA基因是完整的，而gox因是截断的；·其它载体序列不存在于转基因植物中。
目前可以知道这一信息，即来自根据本发明所述的特定转化结果的植株可以容易地通过PCR方法与其它甜菜植株区分开。适当的引物对组合使得可以特异地鉴定仅存在于直接或间接来自相同转化结果的植物的基因组DNA序列。这样的事件不以任何方式限制在由农杆菌介导的转化得到的那些结果，而也可以来自biolistic转化实验。
因此本发明涉及甜菜植株及其后代，其特征在于用其基因组DNA为模板的PCR导致以下片段的扩增当使用以SEQ ID NoB和SEQ ID Noa的序列为特征的寡核苷酸引物对时，739bp DNA片段；或者当使用以SEQ ID NoD和SEQ ID Noe的序列为特征的寡核苷酸引物对时，834bp DNA片段；或者当使用以SEQ ID NoA和SEQ ID Nob的序列为特征的寡核苷酸引物对时，1057bp DNA片段；或者当使用以SEQ ID NoC和SEQ ID Nof的序列为特征的寡核苷酸引物对时，1224bp DNA片段。
实施例以下实施例进一步描述了得到本发明和随后的结果时所用的材料和方法。它们通过举例说明提供，并且它们的复述不应认为是要求权利的本发明的限制。实施例1甜菜转化用含有cp4/epsps和gox因(能赋予草甘膦耐受性)、nptII基因(典型对抗生素卡那素的抗性)及报告基因uidA(编码β-葡糖醛酸酶。GUS)的载体转化A1012基因型甜菜。nptII和uidA基因与加强的35S启动子(odell等，自然，313810-812，1995)功能性连接，而cp4/epsps和gox基因在玄参花叶病毒(FMV)启动子(Gouwda等，J.Cell.Biochem.Suppl.13D301，1989)的控制下。另外，cp4/epsps和gox基因在5′与转运肽(Gasser等，生物化学杂志，2634280-4289，1988)连接以使两个蛋白靶向叶绿体。cp4/epsps和uidA使用E9 3′终止子序列，而gox和nptII使用相应的NOS 3′序列。
使用根瘤农杆菌转化体外培养的甜菜(Beta vulgaris.L)。使用1mM浓度的草甘膦作为选择剂，如Fry等(“使用根瘤农杆菌的基因型依赖的甜菜转化”，第三次植物分子生物学国际会议，Tuscon，Arizona，USA，1991)和Konwar(植物生物化学及生物技术杂志，337-41，1994)所述使植物再生。为杀灭根癌农杆菌，将子叶在含500mg/l头孢的MS培养基中培养三次(45-50rpm，60分钟)。在1mM草甘膦和500mg/l头孢噻肟上筛选8-12周(包括每三周转至新鲜培养基上)后分析再生芽。将每一转基因芽进一步微量繁殖(micropropagate)成十个拷贝，分析转基因的存在并转移至温室中生根。
聚合酶链式反应(PCR)用于确定cp4/epsps基因的存在。从再生的体外芽收集20mg植物材料至微量离心管。基本上按照Tai等，植物分子生物学报告，8297-303，1990抽提总DNA。次要的改进是加入500μl含有50mM Na-EDTA，1.25％SDS(重量/体积)，0.38％Na-Bisulfite(重量/体积)和200μg/ml蛋白酶K的100mM Tris-HCl(pH8.0)并于65℃温育2小时。挑出未溶解的叶材料并于-20℃冷冻和沉淀总DNA 2小时。用Perkin-Elmer Gene-Amp PCR试剂盒(Perkin-Elmer公司)按照所含的说明进行PCR，使用含有10mMTris-HCl(pH8.3)，500mM KCL，30mM MgCl2，1.0％NonidetP-40(重量/体积)，24％蔗糖(重量/体积)中的0.4μM甲酚红和Taq Start Antibody(Clontech)的修饰的10×反应缓冲液。为扩增cp4/epsps序列，使用如下引物(Shah等，科学，233478-481，1986)5′-CAC CGG TCT TTT GGA AGG TGA AG-3′(SEQ ID NO6)和5′-AAC GAG ACC CAT AAC GAG GAA GC-3′(SEQ ID NO7).为扩增基因间调控序列(surA，surB)，使用如下引物5′-AAA CAG TCC CGT GCA TCC CCA AC-3′(SEQ ID NO8)和5′-GAC GCT CTC CTT GAT TCT GTC CC-3′(SEQ ID NO9).
不同双元载体间未见到转化效率的不同。
将微量繁殖的芽转移到温室的土壤中。温室中的光照条件是200μmol m-2sec-1(Osram Power Star HQI-Z，400w)，16小时光照，8小时黑暗，温度为22±2℃。用Roundup处理来自260个独立转化子的三至四叶期小苗。使用刻度喷雾器以每公顷1升的剂量(360g.a.i.l-1)施用除草剂的水溶液。草甘膦施用后2周，基于0(完全叶坏死)至9(无可见影响)的等级，对每个植株进行植物毒性影响的目测损伤评级。对于75个不同的转化子，检测到的植物毒性效应在评分0-6之间变动。其它185个(75％)转化子评分为7或更高，这意味着在用除草剂处理之后，它们表现较少或不可见的影响。将它们与非转基因甜菜杂交以产生F1子代用于随后的田间实验评估。
进行田间实验以评估田间条件下的不同转化结果。每一块地包含三排，每排9米长，行间距0.5米。在每一块地插种一个不同的转化子。在子叶期每公顷1升(360g.a.i.l-1)的初始Roundup施用去除非转基因植物后，人工挑选各行至最终标准每20厘米1个植株。每一小块地分成独立处理的三部分。一部分用传统的除草剂苯嗪草酮(0.1kg a.i.ha-1)、苯敌草(0.2kg a.i.ha-1)和甜菜呋(0.1kg a.i.ha-1)处理。另一部分用每公顷2升Roundup处理2次(1400g a.i.ha-1)，第三部分用4升Roundup处理2次(2880ga.i.l-1)，在二叶期和四叶期处理植物。最后施用后二周，评估植物由于施用除草剂的植物毒性效应。发现症状从完全易感变化至完全耐受。观察到温室中评分和田间实验中评分的不同。这可能是由于温室和田间实验的环境不同，包括在玻璃下缺少紫外光。与用传统除草剂混合物处理相比，用不同剂量的Roundup处理的地区的植物间没有形态学或生理学上的变化。两个转化子在用每公顷2升2次和4升2次处理后，表现对Roundup的高度耐受性。
用Roundup喷酒后，通过植株活力(Tr.vig)和叶褪绿(Tr.ch1)评级测定耐受性。不同的评级有如下意义9与未处理的对照相同的未受影响的植株8只有叶尖上很小的坏死，少于5％的叶面积受到影响并黄化7叶尖上很小的坏死开始卷曲，少于5％的叶面积受到影响并黄化6，5，4坏死和叶卷曲增强；叶变得比正常的更小3，2没有或非常有限的叶生长；所有的叶子卷曲并受坏死影响1无植物生长，最多5％的植株保持绿色0死亡植株用1+4+4升Roundup/公顷(共9升/公顷)喷洒22个不同的转化结果(1-22项)和一个非转基因对照(23项)。目测损伤评级的结果在下表中给出。
RRMax)(非转基因植物)实施例2 整合的转基因DNA的拷贝数通过对在所用转化载体的左和右边界序列之外延伸的限制性片段的Southern印迹分析测定具有最高草甘膦耐受性的转化子(RRMax)的基因组内整合的转基因DNA的拷贝数。
按照Saghai-Maroof等，美国国家科学院院报，818014-8018，1984，从250mg冷冻干燥的甜菜材料分离来自RRMax和具有相同遗传学的非转基因植物的基因组DNA。所用转化载体的DNA作用为阳性对照。用120单位的限制性酶在400μl总体积中于37℃消化15μgDNA 4小时。使消化的DNA沉淀并重新溶解于50μl总体积中。消化的DNA、阳性对照质粒和标准的分子大小标记(用EcoRI和HindIII消化的λDNA)在0.8％琼脂糖凝胶上分离。用溴化乙锭观察DNA，并包括尺子进行摄影。然后将DNA转移到Hybond N+膜上并如Ausubel等(编辑)，于“现代分子生物学常用方法”，Green PublishingAssociates，Inc.和John Wiley&Sons，Inc.，New York，1987所述与探针杂交。
通过聚合酶链式反应(PCR，其中所用的转化载体作用为反应的模板DNA)制备与cp4/epsps基因序列(SEQ ID No5)的975-1766碱基对和gox基因序列(SEQ ID No5)的7108-7535碱基对互补的探针。cp4/epsps探针用于测定邻近右边界区域的插入数。gox探针用于测定邻近左边界区域的插入数。使用BIO 101(La Jolla，CA)的Geneclean II试剂盒纯化PCR产物。使用AmershamInternational(Little Chalfont，UK)的MegaprimeTMDNA标记系统进行探针的32P标记。
拷贝数测定可以通过对邻近右边界区域的基因组DNA的分析进行。用限制性酶NcoI消化基因组DNA，NcoI切割35s启动子和uidA基因间的和甜菜基因组内的质粒来源的序列。用cp4/epsps基因的内部PCR片段探测膜。用NcoI消化并用cp4/epsps探针杂交后，在RRMax中检测到4.7kb的单一条带。这证明了转移DNA在单一位点的单拷贝。
拷贝数测定可以通过对邻近左边界区域的基因组DNA的分析进行。用限制性酶HindIII消化基因组DNA，HindIII切割gox的FMV启动子和uidA基因的E93′终止子间的和甜菜基因组内的质粒来源的序列。在用HindIII消化并用gox探针杂交后，检测到转化子在RRMax中的2.0kb的单一条带。因为预期的最小片段大小是≥4.4kb，所以结果表面在转移入植物基因组DNA的过程中质粒DNA的截断。而且结果证明了转移DNA单拷贝整合在单一位点。实施例3 RRMax整合位点的序列分析按照Saghai-Maroof等，同上，从250mg冷冻干燥的甜菜叶材料分离RRMax基因组DNA。制备在XhoI克隆位点中带有9-23kb大小插入的λFIXII噬菌体文库。并用cp4/epsps和gox探针探测以筛选覆盖整合结果的推测克隆。检测到与cp4/epsps或gox探针杂交的总共25个噬菌体。发现分别与cp4/epsps探针和gox探针杂交的2个克隆。纯化其中之一(Fritsch等，1987)并通过Southern印迹分析和PCR进一步评估。它含有15-16kb的基因组DNA插入，包括转基因DNA和侧翼的甜菜序列。所述侧翼序列通过PCR、使用与FMV启动子或gox基因序列匹配的引物结合与λFIXII克隆元件中的序列匹配的引物(详细的序列在下面1中给出)来扩增。整合的DNA/甜菜接合区域通过Sanger双脱氧介导的链终止法使用Applied Biosystem，373A型，2.1.1版测序。所用的测序引物在表2中给出。
表1用于扩增边界区域的引物
序列分析表明整合在RRMax基因组中的转基因DNA具有SEQ IDNo1中给出的核苷酸序列。整合起始点位于右边界序列和FMV启动子之间并终止于gox起始密码子下游的897碱基对。截短的gox基因的翻译终止密码子可在接合点下游的130和235碱基对找到。在gox起始密码子下游210碱基对识别了一个HindIII位点，而在下游650碱基对识别了一个转录终止信号(AATAAA)。SEQ ID No2表示了与转基因DNA的右边界区域直接相连的基因组DNA序列，而SEQ ID No3表示与转基因DNA的左边界区域直接相连的基因组DNA序列。实施例4 RRMax整合的转基因DNA的特征鉴定为进一步鉴定右边界区域，用限制性酶BamHI、HindIII、BcII或EcoRI消化基因组DNA和转化载体DNA。在Southern印迹分析中，用实施例2中所述的cp4/epsps PCR片段探测切开的DNA。与所用的限制性酶无关，用不同的限制性酶消化在Southern印迹分析中产生单一片段。检测到的片段大小在表3中表示。数据表明单一拷贝的DNA已转移至植物中，并且DNA向甜菜植株的转移导致cp4/epsps基因的完整转移。结果与实施例2中的拷贝数测定和实施例3的核苷酸序列一致。
表3 Southern印迹片段大小
为进一步鉴定整合的转基因片段，用限制性酶NcoI、BamHI或HindIII消化来自RRMax的基因组DNA。作为对照，用相同的限制性酶消化转化载体DNA。用横跨SEQ ID No5中uidA基因的3796-4837碱基对的PCR扩增的DNA片段探测印迹。检测到的片段大小在表4中表示。与所用的限制性酶无关，用不同的限制性酶消化在放射自显影胶片上产生单一信号，这表明DNA插入具有与所用转化载体的内部DNA相同的特征。
表4 Southern印迹片段大小
为进一步鉴定左边界区域，用限制性酶NcoI、BamHI、HindIII或EcoRI消化转化载体DNA。在Southern分析中用实施2中所述的goxPCR片段探测切开的DNA。检测到的片段大小在表5中表示。与所用的限制性酶无关，用不同的限制性酶消化在放射自显影胶片上产生单一片段。用限制性酶NcoI、BamHI、HindIII或EcoRI消化预期识别已知大小的内部片段。但是，这些限制性酶没有产生这样的预期大小的内部片段。这表明NcoI、BamHI、HindIII或EcoRI的限制性位点在转基因植物中缺乏。这些结果与通过测序发现的gox基因仅部分整合入植物的结果一致。用限制性酶HindIII消化产生的2kb片段，进一步确定了测序数据，即HindIII位点位于基因组中gox基因的下游。结果也表明转基因DNA的单拷贝已转移到植物中。它们与实施例2中的拷贝数测定和实施例3中的核苷酸序列分析的最初结果很好地相关。单一拷贝已整合入植物基因组，而gox基因部分缺失。
表5Southern印迹片段大小
实施例5其它载体DNA序列的缺失为确定转化结果RRMax中oriV，ori-322，aad和nptII序列的缺失，Southern印迹分析可以使用覆盖oriV，ori-322，add和nptII的限制性酶/探针组合进行。
用限制性酶NspI消化转化载体DNA，NspI在17处位点切割质粒。为了分析，纯化覆盖oriV的NspI片段和覆盖ori-322和aad的片段并用于Southern印迹分析。具有SEQ ID No26中给出的核苷酸序列的PCR扩增的片段用于探针nptII列。用BIO 101(La Jolla，CA)的Geneclean II试剂盒纯化。用Amersham International(Littlechalfont，UK)的MegaprimeTMDNA标记系统进行P32的标记。
用限制性酶BamHI消化RRMax的基因组DNA，BamHI在分别位于SEQID No5的碱基对2321、5544和8413的三处位点切割转化载体DNA。相应Southern转移膜与覆盖oriV探针的杂交没有检测到信号，必然得出结论oriV不存在于RRMax中。
相应Southern转移膜与覆盖ori-322和aad的探针的杂交没有检测到信号。必然得出结论ori-322和aad序列不存在于RRMax中。
相应Southern转移膜与nptII探针的杂交也未检测到信号，这证明nptII基因不存在于RRMax株系中。实施例6 RRMax株系的稳定性如实施例2中所述的用限制性酶BcII消化基因组DNA并使用cp4/epsps基因作为探针进行Southern印迹分析。来自2和3代的四株植物和来自4代的5株植物用于此分析。另外，3株非转基因植物用作负对照。最初转化结果的分析得到3.2kb的单一片段。如果导入的DNA在代与代之间稳定遗传，那么预期在所有植株中有相同的3.2kb片段。
如实施例2中所述的用HindIII消化基因组DNA并用gox基因的内部片段作为探针进行Southern印迹分析。最初转化结果的分析得到2.0kb的单一片段。子代的Southern印迹分析也得到2.0kb的单一片段，表明特征的稳定遗传。实施例7 RRMax的PCR测定。
如实施例2中所述制备RRMax株系的基因组DNA。在PCR反应中，约0.5μg DNA用作模板DNA，且使用以表6中给出的序列为特征的特定引物组合，所述的特定组合和扩增片段的大小在表7中给出。在每个30-35扩增循环中，根据引物对组合，使用55℃和65℃之间的退火温度。
表6引物序列
序列表(1)基本信息(i)申请人NOVARTIS AG(A)街道Schwarzwaldallee 215(B)城市Basel(C)国家瑞士(D)邮政编号4058(E)电话+41 61 324 11 11(F)传真+41 61 322 75 32(ii)发明名称转基因植物(iii)序列数27(iv)计算机可读形式(A)介质类型软盘(B)计算机IBM PC兼容机(C)操作系统PC-DOS/MS-DOS(D)软件PatentIn Release#1.0，版本#1.25(EPO)(2)关于SEQ ID NO1的信息(i)序列特征(A)长度8012个碱基对(B)类型核酸(C)链型双链(D)拓扑结构线形(ii)分子类型DNA(基因组)(iii)假设无(iii)反义无(xi)序列描述SEQ ID NO1AACGACAATC TGATCCCCAT CAAGCTTGAG CTCAGGATTT AGCAGCATTC CAGATTGGGT 60TCAATCAACA AGGTACGAGC CATATCACTT TATTCAAATT GGTATCGCCA AAACCAAGAA 120GGAACTCCCA TCCTCAAAGG TTTGTAAGGA AGAATTCTCA GTCCAAAGCC TCAACAAGGT 180CAGGGTACAG AGTCTCCAAA CCATTAGCCA AAAGCTACAG GAGATCAATG AAGAATCTTC 240AATCAAAGTA AACTACTGTT CCAGCACATG CATCATGGTC AGTAAGTTTC AGAAAAAGAC 300ATCCACCGAA GACTTAAAGA TAGTGGGCAT CTTTGAAAGT AATCTTGTCA ACATCGAGCA 360GCTGGCTTGT GGGGACCAGA CAAAAAAGGA ATGGTGCAGA ATTGTTAGGC GCACCTACCA 420AAAGCATCTT TGCCTTTATT GCAAAGATAA AGCAGATTCC TCTAGTACAA GTGGGGAACA 480AAATAACGTG GAAAAGAGCT GTCCTGACAG CCCACTCACT AATGCGTATG ACGAACGCAG 540TGACGACCAC AAAAGAATTC CCTCTATATA AGAAGGCATT CATTCCCATT TGAAGGATCA 600TCAGATACTG AACCAATCCT TCTAGAAGAT CTAAGCTTAT CGATAAGCTT GATGTAATTG 660GAGGAAGATC AAAATTTTCA ATCCCCATTC TTCGATTGCT TCAATTGAAG TTTCTCCGAT 720GGCGCAAGTT AGCAGAATCT GCAATGGTGT GCAGAACCCA TCTCTTATCT CCAATCTCTC 780GAAATCCAGT CAACGCAAAT CTCCCTTATC GGTTTCTCTG AAGACGCAGC AGCATCCACG 840AGCTTATCCG ATTTCGTCGT CGTGGGGATT GAAGAAGAGT GGGATGACGT TAATTGGCTC 900TGAGCTTCGT CCTCTTAAGG TCATGTCTTC TGTTTCCACG GCGTGCATGC TTCACGGTGC 960AAGCAGCCGT CCAGCAACTG CTCGTAAGTC CTCTGGTCTT TCTGGAACCG TCCGTATTCC 1020AGGTGACAAG TCTATCTCCC ACAGGTCCTT CATGTTTGGA GGTCTCGCTA GCGGTGAAAC 1080TCGTATCACC GGTCTTTTGG AAGGTGAAGA TGTTATCAAC ACTGGTAAGG CTATGCAAGC 1140TATGGGTGCC AGAATCCGTA AGGAAGGTGA TACTTGGATC ATTGATGGTG TTGGTAACGG 1200TGGACTCCTT GCTCCTGAGG CTCCTCTCGA TTTCGGTAAC GCTGCAACTG GTTGCCGTTT 1260GACTATGGGT CTTGTTGGTG TTTACGATTT CGATAGCACT TTCATTGGTG ACGCTTCTCT 1320CACTAAGCGT CCAATGGGTC GTGTGTTGAA CCCACTTCGC GAAATGGGTG TGCAGGTGAA 1380GTCTGAAGAC GGTGATCGTC TTCCAGTTAC CTTGCGTGGA CCAAAGACTC CAACGCCAAT 1440CACCTACAGG GTACCTATGG CTTCCGCTCA AGTGAAGTCC GCTGTTCTGC TTGCTGGTCT 1500CAACACCCCA GGTATCACCA CTGTTATCGA GCCAATCATG ACTCGTGACC ACACTGAAAA 1560GATGCTTCAA GGTTTTGGTG CTAACCTTAC CGTTGAGACT GATGCTGACG GTGTGCGTAC 1620CATCCGTCTT GAAGGTCGTG GTAAGCTCAC CGGTCAAGTG ATTGATGTTC CAGGTGATCC 1680ATCCTCTACT GCTTTCCCAT TGGTTGCTGC CTTGCTTGTT CCAGGTTCCG ACGTCACCAT 1740CCTTAACGTT TTGATGAACC CAACCCGTAC TGGTCTCATC TTGACTCTGC AGGAAATGGG 1800TGCCGACATC GAAGTGATCA ACCCACGTCT TGCTGGTGGA GAAGACGTGG CTGACTTGCG 1860TGTTCGTTCT TCTACTTTGA AGGGTGTTAC TGTTCCAGAA GACCGTGCTC CTTCTATGAT 1920CGACGAGTAT CCAATTCTCG CTGTTGCAGC TGCATTCGCT GAAGGTGCTA CCGTTATGAA 1980CGGTTTGGAA GAACTCCGTG TTAAGGAAAG CGACCGTCTT TCTGCTGTCG CAAACGGTCT 2040CAAGCTCAAC GGTGTTGATT GCGATGAAGG TGAGACTTCT CTCGTCGTGC GTGGTCGTCC 2100TGACGGTAAG GGTCTCGGTA ACGCTTCTGG AGCAGCTGTC GCTACCCACC TCGATCACCG 2160TATCGCTATG AGCTTCCTCG TTATGGGTCT CGTTTCTGAA AACCCTGTTA CTGTTGATGA 2220TGCTACTATG ATCGCTACTA GCTTCCCAGA GTTCATGGAT TTGATGGCTG GTCTTGGAGC 2280TAAGATCGAA CTCTCCGACA CTAAGGCTGC TTGATGAGCT CAAGAATTCG AGCTCGGTAC 2340CGGATCCTCT AGCTAGAGCT TTCGTTCGTA TCATCGGTTT CGACAACGTT CGTCAAGTTC 2400AATGCATCAG TTTCATTGCG CACACACCAG AATCCTACTG AGTTCGAGTA TTATGGCATT 2460GGGAAAACTG TTTTTCTTGT ACCATTTGTT GTGCTTGTAA TTTACTGTGT TTTTTATTCG 2520GTTTTCGCTA TCGAACTGTG AAATGGAAAT GGATGGAGAA GAGTTAATGA ATGATATGGT 2580CCTTTTGTTC ATTCTCAAAT TAATATTATT TGTTTTTTCT CTTATTTGTT GTGTGTTGAA 2640TTTGAAATTA TAAGAGATAT GCAAACATTT TGTTTTGAGT AAAAATGTGT CAAATCGTGG 2700CCTCTAATGA CCGAAGTTAA TATGAGGAGT AAAACACTTG TAGTTGTACC ATTATGCTTA 2760TTCACTAGGC AACAAATATA TTTTCAGACC TAGAAAAGCT GCAAATGTTA CTGAATACAA 2820GTATGTCCTC TTGTGTTTTA GACATTTATG AACTTTCCTT TATGTAATTT TCCAGAATCC 2880TTGTCAGATT CTAATCATTG CTTTATAATT ATAGTTATAC TCATGGATTT GTAGTTGAGT 2940ATGAAAATAT TTTTTAATGC ATTTTATGAC TTGCCAATTG ATTGACAACA TGCATCAATC 3000GACCTGCAGC CACTCGAAGC GGCCGCGTTC AAGCTTCTGC AGGTCCGATG TGAGACTTTT 3060CAACAAAGGG TAATATCCGG AAACCTCCTC GGATTCCATT GCCCAGCTAT CTGTCACTTT 3120ATTGTGAAGA TAGTGGAAAA GGAAGGTGGC TCCTACAAAT GCCATCATTG CGATAAAGGA 3180AAGGCCATCG TTGAAGATGC CTCTGCCGAC AGTGGTCCCA AAGATGGACC CCCACCCACG 3240AGGAGCATCG TGGAAAAAGA AGACGTTCCA ACCACGTCTT CAAAGCAAGT GGATTGATGT 3300GATGGTCCGA TGTGAGACTT TTCAACAAAG GGTAATATCC GGAAACCTCC TCGGATTCCA 3360TTGCCCAGCT ATCTGTCACT TTATTGTGAA GATAGTGGAA AAGGAAGGTG GCTCCTACAA 3420ATGCCATCAT TGCGATAAAG GAAAGGCCAT CGTTGAAGAT GCCTCTGCCG ACAGTGGTCC 3480CAAAGATGGA CCCCCACCCA CGAGGAGCAT CGTGGAAAAA GAAGACGTTC CAACCACGTC 3540TTCAAAGCAA GTGGATTGAT GTGATATCTC CACTGACGTA AGGGATGACG CACAATCCCA 3600CTATCCTTCG CAAGACCCTT CCTCTATATA AGGAAGTTCA TTTCATTTGG AGAGGACACG 3660CTGACAAGCT GACTCTAGCA GATCTCCATG GTCCGTCCTG TAGAAACCCC AACCCGTGAA 3720ATCAAAAAAC TCGACGGCCT GTGGGCATTC AGTCTGGATC GCGAAAACTG TGGAATTGAT 3780CAGCGTTGGT GGGAAAGCGC GTTACAAGAA AGCCGGGCAA TTGCTGTGCC AGGCAGTTTT 3840AACGATCAGT TCGCCGATGC AGATATTCGT AATTATGCGG GCAACGTCTG GTATCAGCGC 3900GAAGTCTTTA TACCGAAAGG TTGGGCAGGC CAGCGTATCG TGCTGCGTTT CGATGCGGTC 3960ACTCATTACG GCAAAGTGTG GGTCAATAAT CAGGAAGTGA TGGAGCATCA GGGCGGCTAT 4020ACGCCATTTG AAGCCGATGT CACGCCGTAT GTTATTGCCG GGAAAAGTGT ACGTATCACC 4080GTTTGTGTGA ACAACGAACT GAACTGGCAG ACTATCCCGC CGGGAATGGT GATTACCGAC 4140GAAAACGGCA AGAAAAAGCA GTCTTACTTC CATGATTTCT TTAACTATGC CGGAATCCAT 4200CGCAGCGTAA TGCTCTACAC CACGCCGAAC ACCTGGGTGG ACGATATCAC CGTGGTGACG 4260CATGTCGCGC AAGACTGTAA CCACGCGTCT GTTGACTGGC AGGTGGTGGC CAATGGTGAT 4320GTCAGCGTTG AACTGCGTGA TGCGGATCAA CAGGTGGTTG CAACTGGACA AGGCACTAGC 4380GGGACTTTGC AAGTGGTGAA TCCGCACCTC TGGCAACCGG GTGAAGGTTA TCTCTATGAA 4440CTGTGCGTCA CAGCCAAAAG CCAGACAGAG TGTGATATCT ACCCGCTTCG CGTCGGCATC 4500CGGTCAGTGG CAGTGAAGGG CGAACAGTTC CTGATTAACC ACAAACCGTT CTACTTTACT 4560GGCTTTGGTC GTCATGAAGA TGCGGACTTA CGTGGCAAAG GATTCGATAA CGTGCTGATG 4620GTGCACGACC ACGCATTAAT GGACTGGATT GGGGCCAACT CCTACCGTAC CTCGCATTAC 4680CCTTACGCTG AAGAGATGCT CGACTGGGCA GATGAACATG GCATCGTGGT GATTGATGAA 4740ACTGCTGCTG TCGGCTTTAA CCTCTCTTTA GGCATTGGTT TCGAAGCGGG CAACAAGCCG 4800AAAGAACTGT ACAGCGAAGA GGCAGTCAAC GGGGAAACTC AGCAAGCGCA CTTACAGGCG 4860ATTAAAGAGC TGATAGCGCG TGACAAAAAC CACCCAAGCG TGGTGATGTG GAGTATTGCC 4920AACGAACCGG ATACCCGTCC TGCACGGGAA TATTTCGGCA TTTCGCCACT GGCGGAAGCA 4980ACGCGTAAAC TCGACCCGAC GCGTCCGATC ACCTGCGTCA ATGTAATGTT CTGCGACGCT 5040CACACCGATA CCATCAGCGA TCTCTTTGAT GTGCTGTGCC TGAACCGTTA TTACGGATGG 5100TATGTCCAAA GCGGCGATTT GGAAACGGCA GAGAAGGTAC TGGAAAAAGA ACTTCTGGCC 5160TGGCAGGAGA AACTGCATCA GCCGATTATC ATCACCGAAT ACGGCGTGGA TACGTTAGCC 5220GGGCTGCACT CAATGTACAC CGACATGTGG AGTGAAGAGT ATCAGTGTGC ATGGCTGGAT 5280ATGTATCACC GCGTCTTTGA TCGCGTCAGC GCCGTCGTCG GTGAACAGGT ATGGAATTTC 5340GCCGATTTTG CGACCTCGCA AGGCATATTG CGCGTTGGCG GTAACAAGAA AGGGATCTTC 5400ACTCGCGACC GCAAACCGAA GTCGGCGGCT TTTCTGCTGC AAAAACGCTG GACTGGCATG 5460AACTTCGGTG AAAAACCGCA GCAGGGAGGC AAACAATGAA TCAACAACTC TCCTGGCGCA 5520CCATCGTCGG CTACAGCCTC GGTGGGGAAT TCGAGCTCGC CCGGGGATCC TCTAGCTAGA 5580GCTTTCGTTC GTATCATCGG TTTCGACAAC GTTCGTCAAG TTCAATGCAT CAGTTTCATT 5640GCGCACACAC CAGAATCCTA CTGAGTTCGA GTATTATGGC ATTGGGAAAA CTGTTTTTCT 5700TGTACCATTT GTTGTGCTTG TAATTTACTG TGTTTTTTAT TCGGTTTTCG CTATCGAACT 5760GTGAAATGGA AATGGATGGA GAAGAGTTAA TGAATGATAT GGTCCTTTTG TTCATTCTCA 5820AATTAATATT ATTTGTTTTT TCTCTTATTT GTTGTGTGTT GAATTTGAAA TTATAAGAGA 5880TATGCAAACA TTTTGTTTTG AGTAAAAATG TGTCAAATCG TGGCCTCTAA TGACCGAAGT 5940TAATATGAGG AGTAAAACAC TTGTAGTTGT ACCATTATGC TTATTCACTA GGCAACAAAT 6000ATATTTTCAG ACCTAGAAAA GCTGCAAATG TTACTGAATA CAAGTATGTC CTCTTGTGTT 6060TTAGACATTT ATGAACTTTC CTTTATGTAA TTTTCCAGAA TCCTTGTCAG ATTCTAATCA 6120TTGCTTTATA ATTATAGTTA TACTCATGGA TTTGTAGTTG AGTATGAAAA TATTTTTTAA 6180TGCATTTTAT GACTTGCCAA TTGATTGACA ACATGCATCA ATCGACCTGC AGCCCAAGCT 6240TGAGCTCAGG ATTTAGCAGC ATTCCAGATT GGGTTCAATC AACAAGGTAC GAGCCATATC 6300ACTTTATTCA AATTGGTATC GCCAAAACCA AGAAGGAACT CCCATCCTCA AAGGTTTGTA 6360AGGAAGAATT CTCAGTCCAA AGCCTCAACA AGGTCAGGGT ACAGAGTCTC CAAACCATTA 6420GCCAAAAGCT ACAGGAGATC AATGAAGAAT CTTCAATCAA AGTAAACTAC TGTTCCAGCA 6480CATGCATCAT GGTCAGTAAG TTTCAGAAAA AGACATCCAC CGAAGACTTA AAGTTAGTGG 6540GCATCTTTGA AAGTAATCTT GTCAACATCG AGCAGCTGGC TTGTGGGGAC CAGACAAAAA 6600AGGAATGGTG CACAATTGTT AGGCGCACCT ACCAAAAGCA TCTTTGCCTT TATTGCAAAG 6660ATAAAGCAGA TTCCTCTAGT ACAAGTGGGG AACAAAATAA CGTGGAAAAG AGCTGTCCTG 6720ACAGCCCACT CACTAATGCG TATGACGAAC GCAGTGACGA CCACAAAAGA ATTCCCTCTA 6780TATAAGAAGG CATTCATTCC CATTTGAAGG ATCATCAGAT ACTGAACCAA TCCTTCTAGA 6840AGATCTCCAC AATGGCTTCC TCTATGCTCT CTTCCGCTAC TATGGTTGCC TCTCCGGCTC 6900AGGCCACTAT GGTCGCTCCT TTCAACGGAC TTAAGTCCTC CGCTGCCTTC CCAGCCACCC 6960GCAAGGCTAA CAACGACATT ACTTCCATCA CAAGCAACGG CGGAAGAGTT AACTGCATGC 7020AGGTGTGGCC TCCGATTGGA AAGAAGAAGT TTGAGACTCT CTCTTACCTT CCTGACCTTA 7080CCGATTCCGG TGGTCGCGTC AACTGCATGC AGGCCATGGC TGAGAACCAC AAGAAGGTTG 7140GTATCGCTGG AGCTGGAATC GTTGGTGTTT GCACTGCTTT GATGCTTCAA CGTCGTGGAT 7200TCAAGGTTAC CTTGATTGAT CCAAACCCAC CAGGTGAAGG TGCTTCTTTC GGTAACGCTG 7260GTTGCTTCAA CGGTTCCTCC GTTGTTCCAA TGTCCATGCC AGGAAACTTG ACTAGCGTTC 7320CAAAGTGGCT TCTTGACCCA ATGGGTCCAT TGTCCATCCG TTTCAGCTAC TTTCCAACCA 7380TCATGCCTTG GTTGATTCGT TTCTTGCTTG CTGGAAGACC AAACAAGGTG AAGGAGCAAG 7440CTAAGGCACT CCGTAACCTC ATCAAGTCCA CTGTGCCTTT GATCAAGTCC TTGGCTGAGG 7500AGGCTGATGC TAGCCACCTT ATCCGTCACG AAGGTCACCT TACCGTGTAC CGTGGAGAAG 7560CAGACTTCGC CAAGGACCGT GGAGGTTGGG AACTTCGTCG TCTCAACGGT GTTCGTACTC 7620AAATCCTCAG CGCTGATGCA TTGCGTGATT TCGATCCTAA CTTGTCTCAC GCCTTTACCA 7680AGGGAATCCT TATCGAAGAG AACGGTCACA CCATCAACCC ACAAGGTCTC GTGACTCTCT 7740TGTTTCGTCG TTTCATCGCT AACGGTGGAG AGTTCGTGTC TGCTCGTGTT ATCGGATTCG 7800AGACTGAAGG TCGTGCTCTC AAGGGTATCA CCACCACCAA CGGTGTTCTT GCTGTTGATG 7860CAGCTGTTGT TGCAGCTGGT GCACACTCCA AGTCTCTTGC TAACTCCCTT GGTGATGACA 7920TCCCATTGGA TACCGAACGT GGATACCACA TCGTGATCGC CAACCCAGAA GCTGCTCCAC 7980GTATTCCAAC TACCGATGCT TCTGGAAAGT TC8012(2)关于SEQ ID NO2的信息(i)序列特征(A)长度89个碱基对(B)类型核酸(C)链型单链(D)拓扑结构线形(ii)分子类型DNA(基因组)(iii)假设无(iii)反义无(xi)序列描述SEQ ID NO2GGATTGTGTT TGGGTTTTGT CTGTGTGTTT AATGTGTTTA AGGGATGAAT TAGAATGCTC 60TTAATCAACC TACAGCTGAT TTGGACCGG89(2)关于SEQ ID NO3的信息(i)序列特征(A)长度697个碱基对(B)类型核酸(C)链型双链(D)拓扑结构线形(ii)分子类型DNA(基因组)(iii)假设无(iii)反义无(xi)序列描述SEQ ID NO3CGGTCCAAAT TTGTTTACAT TGTGTCCAAA TTTCGGCTGA TTTGGACTTC CCTAGCTATG 60CCAACTAAGC TAATAAAAAA CATGAAACAA CAATTACAAA CTGTCGAGCA CACCTTCTAC 120AAACTAGCTT AGATTTCTAT TGGAAGTTAC AAAACAGTAA AACTACCAAT AGGATACTAA 180ATTAAACATA TTAAACTATT ACTCCTCAAA AGCTTGTACA ATTTGCAGAA GAAATGATGG 240TTGCCCAAAA GCTTCAAAGG GAACCTGCTG GGAAGCCTGC TGGGACGCTG GGGATGCTGG 300CAGCAGCATA CCTTGGCTTG AAGTACTCTT CTCTCATTGG TTTTGCTTCC CTTGCCCATG 360TGGTCTTCAT ATGGCCTCAT TACTTCCCAA GGGCTTCAAA TCAGTAGGTG GTGGCAACCA 420AAAGCATCAA AAACATCTCC TAAAACTAGC TTATACAACC GGATTACATG AGCTTATACT 480AGCTTAACTC TTAAAGCATG ATTAACATAA TGATGTTTAA GGTGTCATTA AGTATTACTA 540ATCTTGCTTA AGTAGAGATT AACATAGGAT TAGCCTAATC AAGTTGCTTA AGTAAGGTTT 600TAGAATAAAC CGAGCTAGTT AGGCTTAAGT AGAGATTAAC ATAGGATTAG CCTAATCAAG 660TTGCTTAAGT AAGGTTTTAG AATAAACCGA GCTAGTT 697(2)关于SEQ ID NO4的信息(i)序列特征(A)长度8798个碱基对(B)类型核酸(C)链型双链(D)拓扑结构线形
(ii)分子类型DNA(基因组)(iii)假设无(iii)反义无(xi)序列描述SEQ ID NO4GGATTGTGTT TGGGTTTTGT CTGTGTGTTT AATGTGTTTA AGGGATGAAT TAGAATGCTC60TTAATCAACC TACAGCTGAT TTGGACCGGA ACGACAATCT GATCCCCATC AAGCTTGAGC 120TCAGGATTTA GCAGCATTCC AGATTGGGTT CAATCAACAA GGTACGAGCC ATATCACTTT 180ATTCAAATTG GTATCGCCAA AACCAAGAAG GAACTCCCAT CCTCAAAGGT TTGTAAGGAA 240GAATTCTCAG TCCAAAGCCT CAACAAGGTC AGGGTACAGA GTCTCCAAAC CATTAGCCAA 300AAGCTACAGG AGATCAATGA AGAATCTTCA ATCAAAGTAA ACTACTGTTC CAGCACATGC 360ATCATGGTCA GTAAGTTTCA GAAAAAGACA TCCACCGAAG ACTTAAAGTT AGTGGGCATC 420TTTGAAAGTA ATCTTGTCAA CATCGAGCAG CTGGCTTGTG GGGACCAGAC AAAAAAGGAA 480AGGTGCAGAA TTGTTAGGCG CACCTACCAA AAGCATCTTT GCCTTTATTG CAAAGATAAA 540GCAGATTCCT CTAGTACAAG TGGGGAACAA AATAACGTGG AAAAGAGCTG TCCTGACAGC 600CCACTCACTA ATGCGTATGA CGAACGCAGT GACGACCACA AAAGAATTCC CTCTATATAA 660GAAGGCATTC ATTCCCATTT GAAGGATCAT CAGATACTGA ACCAATCCTT CTAGAAGATC 720TAAGCTTATC GATAAGCTTG ATGTAATTGG AGGAAGATCA AAATTTTCAA TCCCCATTCT 780TCGATTGCTT CAATTGAAGT TTCTCCGATG GCGCAAGTTA GCAGAATCTG CAATGGTGTG 840CAGAACCCAT CTCTTATCTC CAATCTCTCG AAATCCAGTC AACGCAAATC TCCCTTATCG 900GTTTCTCTGA AGACGCAGCA GCATCCACGA GCTTATCCGA TTTCGTCGTC GTGGGGATTG 960AAGAAGAGTG GGATGACGTT AATTGGCTCT GAGCTTCGTC CTCTTAAGGT CATGTCTTCT 1020GTTTCCACGG CGTGCATGCT TCACGGTGCA AGCAGCCGTC CAGCAACTGC TCGTAAGTCC 1080TCTGGTCTTT CTGGAACCGT CCGTATTCCA GGTGACAAGT CTATCTCCCA CAGGTCCTTC 1140ATGTTTGGAG GTCTCGCTAG CGGTGAAACT CGTATCACCG GTCTTTTGGA AGGTGAAGAT 1200GTTATCAACA CTGGTAAGGC TATGCAAGCT ATGGGTGCCA GAATCCGTAA GGAAGGTGAT 1260ACTTGGATCA TTGATGGTGT TGGTAACGGT GGACTCCTTG CTCCTGAGGC TCCTCTCGAT 1320TTCGGTAACG CTGCAACTGG TTGCCGTTTG ACTATGGGTC TTGTTGGTGT TTACGATTTC 1380GATAGCACTT TCATTGGTGA CGCTTCTCTC ACTAAGCGTC CAATGGGTCG TGTGTTGAAC 1440CCACTTCGCG AAATGGGTGT GCAGGTGAAG TCTGAAGACG GTGATCGTCT TCCAGTTACC 1500TTGCGTGGAC CAAAGACTCC AACGCCAATC ACCTACAGGG TACCTATGGC TTCCGCTCAA 1560GTGAAGTCCG CTGTTCTGCT TGCTGGTCTC AACACCCCAG GTATCACCAC TGTTATCGAG 1620CCAATCATGA CTCGTGACCA CACTGAAAAG ATGCTTCAAG GTTTTGGTGC TAACCTTACC 1680GTTGAGACTG ATGCTGACGG TGTGCGTACC ATCCGTCTTG AAGGTCGTGG TAAGCTCACC 1740GGTCAAGTGA TTGATGTTCC AGGTGATCCA TCCTCTACTG CTTTCCCATT GGTTGCTGCC 1800TTGCTTGTTC CAGGTTCCGA CGTCACCATC CTTAACGTTT TGATGAACCC AACCCGTACT 1860GGTCTCATCT TGACTCTGCA GGAAATGGGT GCCGACATCG AAGTGATCAA CCCACGTCTT 1920GCTGGTGGAG AAGACGTGGC TGACTTGCGT GTTCGTTCTT CTACTTTGAA GGGTGTTACT 1980GTTCCAGAAG ACCGTGCTCC TTCTATGATC GACGAGTATC CAATTCTCGC TGTTGCAGCT 2040GCATTCGCTG AAGGTGCTAC CGTTATGAAC GGTTTGGAAG AACTCCGTGT TAAGGAAAGC 2100GACCGTCTTT CTGCTGTCGC AAACGGTCTC AAGCTCAACG GTGTTGATTG CGATGAAGGT 2160GAGACTTCTC TCGTCGTGCG TGGTCGTCCT GACGGTAAGG GTCTCGGTAA CGCTTCTGGA 2220GCAGCTGTCG CTACCCACCT CGATCACCGT ATCGCTATGA GCTTCCTCGT TATGGGTCTC 2280GTTTCTGAAA ACCCTGTTAC TGTTGATGAT GCTACTATGA TCGCTACTAG CTTCCCAGAG 2340TTCATGGATT TGATGGCTGG TCTTGGAGCT AAGATCGAAC TCTCCGACAC TAAGGCTGCT 2400TGATGAGCTC AAGAATTCGA GCTCGGTACC GGATCCTCTA GCTAGAGCTT TCGTTCGTAT 2460CATCGGTTTC GACAACGTTC GTCAAGTTCA ATGCATCAGT TTCATTGCGC ACACACCAGA 2520ATCCTACTGA GTTCGAGTAT TATGGCATTG GGAAAACTGT TTTTCTTGTA CCATTTGTTG 2580TGCTTGTAAT TTACTGTGTT TTTTATTCGG TTTTCGCTAT CGAACTGTGA AATGGAAATG 2640GATGGAGAAG AGTTAATGAA TGATATGGTC CTTTTGTTCA TTCTCAAATT AATATTATTT 2700GTTTTTTCTC TTATTTGTTG TGTGTTGAAT TTGAAATTAT AAGAGATATG CAAACATTTT 2760GTTTTGAGTA AAAATGTGTC AAATCGTGGC CTCTAATGAC CGAAGTTAAT ATGAGGAGTA 2820AAACACTTGT AGTTGTACCA TTATGCTTAT TCACTAGGCA ACAAATATAT TTTCAGACCT 2880AGAAAAGCTG CAAATGTTAC TGAATACAAG TATGTCCTCT TGTGTTTTAG ACATTTATGA 2940ACTTTCCTTT ATGTAATTTT CCAGAATCCT TGTCAGATTC TAATCATTGC TTTATAATTA 3000TAGTTATACT CATGGATTTG TAGTTGAGTA TGAAAATATT TTTTAATGCA TTTTATGACT 3060TGCCAATTGA TTGACAACAT GCATCAATCG ACCTGCAGCC ACTCGAAGCG GCCGCGTTCA 3120AGCTTCTGCA GGTCCGATGT GAGACTTTTC AACAAAGGGT AATATCCGGA AACCTCCTCG 3180GATTCCATTG CCCAGCTATC TGTCACTTTA TTGTGAAGAT AGTGGAAAAG GAAGGTGGCT 3240CCTACAAATG CCATCATTGC GATAAAGGAA AGGCCATCGT TGAAGATGCC TCTGCCGACA 3300GTGGTCCCAA AGATGGACCC CCACCCACGA GGAGCATCGT GGAAAAAGAA GACGTTCCAA 3360CCACGTCTTC AAAGCAAGTG GATTGATGTG ATGGTCCGAT GTGAGACTTT TCAACAAAGG 3420GTAATATCCG GAAACCTCCT CGGATTCCAT TGCCCAGCTA TCTGTCACTT TATTGTGAAG 3480ATAGTGGAAA AGGAAGGTGG CTCCTACAAA TGCCATCATT GCGATAAAGG AAAGGCCATC 3540GTTGAAGATG CCTCTGCCGA CAGTGGTCCC AAAGATGGAC CCCCACCCAC GAGGAGCATC 3600GTGGAAAAAG AAGACGTTCC AACCACGTCT TCAAAGCAAG TGGATTGATG TGATATCTCC 3660ACTGACGTAA GGGATGACGC ACAATCCCAC TATCCTTCGC AAGACCCTTC CTCTATATAA 3720GGAAGTTCAT TTCATTTGGA GAGGACACGC TGACAAGCTG ACTCTAGCAG ATCTCCATGG 3780TCCGTCCTGT AGAAACCCCA ACCCGTGAAA TCAAAAAACT CGACGGCCTG TGGGCATTCA 3840GTCTGGATCG CGAAAACTGT GGAATTGATC AGCGTTGGTG GGAAAGCGCG TTACAAGAAA 3900GCCGGGCAAT TGCTGTGCCA GGCAGTTTTA ACGATCAGTT CGCCGATGCA GATATTCGTA 3960ATTATGCGGG CAACGTCTGG TATCAGCGCG AAGTCTTTAT ACCGAAAGGT TGGGCAGGCC 4020AGCGTATCGT GCTGCGTTTC GATGCGGTCA CTCATTACGG CAAAGTGTGG GTCAATAATC 4080AGGAAGTGAT GGAGCATCAG GGCGGCTATA CGCCATTTGA AGCCGATGTC ACGCCGTATG 4140TTATTGCCGG GAAAAGTGTA CGTATCACCG TTTGTGTGAA CAACGAACTG AACTGGCAGA 4200CTATCCCGCC GGGAATGGTG ATTACCGACG AAAACGGCAA GAAAAAGCAG TCTTACTTCC 4260ATGATTTCTT TAACTATGCC GGAATCCATC GCAGCGTAAT GCTCTACACC ACGCCGAACA 4320CCTGGGTGGA CGATATCACC GTGGTGACGC ATGTCGCGCA AGACTGTAAC CACGCGTCTG 4380TTGACTGGCA GGTGGTGGCC AATGGTGATG TCAGCGTTGA ACTGCGTGAT GCGGATCAAC 4440AGGTGGTTGC AACTGGACAA GGCACTAGCG GGACTTTGCA AGTGGTGAAT CCGCACCTCT 4500GGCAACCGGG TGAAGGTTAT CTCTATGAAC TGTGCGTCAC AGCCAAAAGC CAGACAGAGT 4560GTGATATCTA CCCGCTTCGC GTCGGCATCC GGTCAGTGGC AGTGAAGGGC GAACAGTTCC 4620TGATTAACCA CAAACCGTTC TACTTTACTG GCTTTGGTCG TCATGAAGAT GCGGACTTAC 4680GTGGCAAAGG ATTCGATAAC GTGCTGATGG TGCACGACCA CGCATTAATG GACTGGATTG 4740GGGCCAACTC CTACCGTACC TCGCATTACC CTTACGCTGA AGAGATGCTC GACTGGGCAG 4800ATGAACATGG CATCGTGGTG ATTGATGAAA CTGCTGCTGT CGGCTTTAAC CTCTCTTTAG 4860GCATTGGTTT CGAAGCGGGC AACAAGCCGA AAGAACTGTA CAGCGAAGAG GCAGTCAACG 4920GGGAAACTCA GCAAGCGCAC TTACAGGCGA TTAAAGAGCT GATAGCGCGT GACAAAAACC 4980ACCCAAGCGT GGTGATGTGG AGTATTGCCA ACGAACCGGA TACCCGTCCT GCACGGGAAT 5040ATTTCGGCAT TTCGCCACTG GCGGAAGCAA CGCGTAAACT CGACCCGACG CGTCCGATCA 5100CCTGCGTCAA TGTAATGTTC TGCGACGCTC ACACCGATAC CATCAGCGAT CTCTTTGATG 5160TGCTGTGCCT GAACCGTTAT TACGGATGGT ATGTCCAAAG CGGCGATTTG GAAACGGCAG 5220AGAAGGTACT GGAAAAAGAA CTTCTGGCCT GGCAGGAGAA ACTGCATCAG CCGATTATCA 5280TCACCGAATA CGGCGTGGAT ACGTTAGCCG GGCTGCACTC AATGTACACC GACATGTGGA 5340GTGAAGAGTA TCAGTGTGCA TGGCTGGATA TGTATCACCG CGTCTTTGAT CGCGTCAGCG 5400CCGTCGTCGG TGAACAGGTA TGGAATTTCG CCGATTTTGC GACCTCGCAA GGCATATTGC 5460GCGTTGGCGG TAACAAGAAA GGGATCTTCA CTCGCGACCG CAAACCGAAG TCGGCGGCTT 5520TTCTGCTGCA AAAACGCTGG ACTGGCATGA ACTTCGGTGA AAAACCGCAG CAGGGAGGCA 5580AACAATGAAT CAACAACTCT CCTGGCGCAC CATCGTCGGC TACAGCCTCG GTGGGGAATT 5640CGAGCTCGCC CGGGGATCCT CTAGCTAGAG CTTTCGTTCG TATCATCGGT TTCGACAACG 5700TTCGTCAAGT TCAATGCATC AGTTTCATTG CGCACACACC AGAATCCTAC TGAGTTCGAG 5760TATTATGGCA TTGGGAAAAC TGTTTTTCTT GTACCATTTG TTGTGCTTGT AATTTACTGT 5820GTTTTTTATT CGGTTTTCGC TATCGAACTG TGAAATGGAA ATGGATGGAG AAGAGTTAAT 5880GAATGATATG GTCCTTTTGT TCATTCTCAA ATTAATATTA TTTGTTTTTT CTCTTATTTG 5940TTGTGTGTTG AATTTGAAAT TATAAGAGAT ATGCAAACAT TTTGTTTTGA GTAAAAATGT 6000GTCAAATCGT GGCCTCTAAT GACCGAAGTT AATATGAGGA GTAAAACACT TGTAGTTGTA 6060CCATTATGCT TATTCACTAG GCAACAAATA TATTTTCAGA CCTAGAAAAG CTGCAAATGT 6120TACTGAATAC AAGTATGTCC TCTTGTGTTT TAGACATTTA TGAACTTTCC TTTATGTAAT 6180TTTCCAGAAT CCTTGTCAGA TTCTAATCAT TGCTTTATAA TTATAGTTAT ACTCATGGAT 6240TTGTAGTTGA GTATGAAAAT ATTTTTTAAT GCATTTTATG ACTTGCCAAT TGATTGACAA 6300CATGCATCAA TCGACCTGCA GCCCAAGCTT GAGCTCAGGA TTTAGCAGCA TTCCAGATTG 6360GGTTCAATCA ACAAGGTACG AGCCATATCA CTTTATTCAA ATTGGTATCG CCAAAACCAA 6420GAAGGAACTC CCATCCTCAA AGGTTTGTAA GGAAGAATTC TCAGTCCAAA GCCTCAACAA 6480GGTCAGGGTA CAGAGTCTCC AAACCATTAG CCAAAAGCTA CAGGAGATCA ATGAAGAATC 6540TTCAATCAAA GTAAACTACT GTTCCAGCAC ATGCATCATG GTCAGTAAGT TTCAGAAAAA 6600GACATCCACC GAAGACTTAA AGTTAGTGGG CATCTTTGAA AGTAATCTTG TCAACATCGA 6660GCAGCTGGCT TGTGGGGACC AGACAAAAAA GGAATGGTGC AGAATTGTTA GGCGCACCTA 6720CCAAAAGCAT CTTTGCCTTT ATTGCAAAGA TAAAGCAGAT TCCTCTAGTA CAAGTGGGGA 6780ACAAAATAAC GTGGAAAAGA GCTGTCCTGA CAGCCCACTC ACTAATGCGT ATGACGAACG 6840CAGTGACGAC CACAAAAGAA TTCCCTCTAT ATAAGAAGGC ATTCATTCCC ATTTGAAGGA 6900TCATCAGATA CTGAACCAAT CCTTCTAGAA GATCTCCACA ATGGCTTCCT CTATGCTCTC 6960TTCCGCTACT ATGGTTGCCT CTCCGGCTCA GGCCACTATG GTCGCTCCTT TCAACGGACT 7020TAAGTCCTCC GCTGCCTTCC CAGCCACCCG CAAGGCTAAC AACGACATTA CTTCCATCAC 7080AAGCAACGGC GGAAGAGTTA ACTGCATGCA GGTGTGGCCT CCGATTGGAA AGAAGAAGTT 7140TGAGACTCTC TCTTACCTTC CTGACCTTAC CGATTCCGGT GGTCGCGTCA ACTGCATGCA 7200GGCCATGGCT GAGAACCACA AGAAGGTTGG TATCGCTGGA GCTGGAATCG TTGGTGTTTG 7260CACTGCTTTG ATGCTTCAAC GTCGTGGATT CAAGGTTACC TTGATTGATC CAAACCCACC 7320AGGTGAAGGT GCTTCTTTCG GTAACGCTGG TTGCTTCAAC GGTTCCTCCG TTGTTCCAAT 7380GTCCATGCCA GGAAACTTGA CTAGCGTTCC AAAGTGGCTT CTTGACCCAA TGGGTCCATT 7440GTCCATCCGT TTCAGCTACT TTCCAACCAT CATGCCTTGG TTGATTCGTT TCTTGCTTGC 7500TGGAAGACCA AACAAGGTGA AGGAGCAAGC TAAGGCACTC CGTAACCTCA TCAAGTCCAC 7560TGTGCCTTTG ATCAAGTCCT TGGCTGAGGA GGCTGATGCT AGCCACCTTA TCCGTCACGA 7620AGGTCACCTT ACCGTGTACC GTGGAGAAGC AGACTTCGCC AAGGACCGTG GAGGTTGGGA 7680ACTTCGTCGT CTCAACGGTG TTCGTACTCA AATCCTCAGC GCTGATGCAT TGCGTGATTT 7740CGATCCTAAC TTGTCTCACG CCTTTACCAA GGGAATCCTT ATCGAAGAGA ACGGTCACAC 7800CATCAACCCA CAAGGTCTCG TGACTCTCTT GTTTCGTCGT TTCATCGCTA ACGGTGGAGA 7860GTTCGTGTCT GCTCGTGTTA TCGGATTCGA GACTGAAGGT CGTGCTCTCA AGGGTATCAC 7920CACCACCAAC GGTGTTCTTG CTGTTGATGC AGCTGTTGTT GCAGCTGGTG CACACTCCAA 7980GTCTCTTGCT AACTCCCTTG GTGATGACAT CCCATTGGAT ACCGAACGTG GATACCACAT 8040CGTGATCGCC AACCCAGAAG CTGCTCCACG TATTCCAACT ACCGATGCTT CTGGAAAGTT 8100CCGGTCCAAA TTTGTTTACA TTGTGTCCAA ATTTCGGCTG ATTTGGACTT CCCTAGCTAT 8160GCCAACTAAG CTAATAAAAA ACATGAAACA ACAATTACAA ACTGTCGAGC ACACCTTCTA 8220CAAACTAGCT TAGATTTCTA TTGGAAGTTA CAAAACAGTA AAACTACCAA TAGGATACTA 8280AATTAAACAT ATTAAACTAT TACTCCTCAA AAGCTTGTAC AATTTGCAGA AGAAATGATG 8340GTTGCCCAAA AGCTTCAAAG GGAACCTGCT GGGAAGCCTG CTGGGACGCT GGGGATGCTG 8400GCAGCAGCAT ACCTTGGCTT GAAGTACTCT TCTCTCATTG GTTTTGCTTC CCTTGCCCAT 8460GTGGTCTTCA TATGGCCTCA TTACTTCCCA AGGGCTTCAA ATCAGTAGGT GGTGGCAACC 8520AAAAGCATCA AAAACATCTC CTAAAACTAG CTTATACAAC CGGATTACAT GAGCTTATAC 8580TAGCTTAACT CTTAAAGCAT GATTAACATA ATGATGTTTA AGGTGTCATT AAGTATTACT 8640AATCTTGCTT AAGTAGAGAT TAACATAGGA TTAGCCTAAT CAAGTTGCTT AAGTAAGGTT 8700TTAGAATAAA CCGAGCTAGT TAGGCTTAAG TAGAGATTAA CATAGGATTA GCCTAATCAA 8760GTTGCTTAAG TAAGGTTTTA GAATAAACCG AGCTAGTT 8798(2)关于SEQ ID NO5的信息(i)序列特征(A)长度8418个碱基对(B)类型核酸(C)链型双链(D)拓扑结构线形(ii)分子类型DNA(基因组)(iii)假设无(iii)反义无(xi)序列描述SEQ ID NO3AAGCTTGAGC TCAGGATTTA GCAGCATTCC AGATTGGGTT CAATCAACAA GGTACGAGCC 60ATATCACTTT ATTCAAATTG GTATCGCCAA AACCAAGAAG GAACTCCCAT CCTCAAAGGT 120TTGTAAGGAA GAATTCTCAG TCCAAAGCCT CAACAAGGTC AGGGTACAGA GTCTCCAAAC 180CATTAGCCAA AAGCTACAGG AGATCAATGA AGAATCTTCA ATCAAAGTAA ACTACTGTTC 240CAGCACATGC ATCATGGTCA GTAACTTTCA GAAAAAGACA TCCACCGAAG ACTTAAAGTT 300AGTGGGCATC TTTGAAAGTA ATCTTGTCAA CATCGAGCAG CTGGCTTGTG GGGACCAGAC 360AAAAAAGGAA TGGTGCAGAA TTGTTAGGCG CACCTACCAA AAGCATCTTT GCCTTTATTG 420CAAAGATAAA GCAGATTCCT CTAGTACAAG TGGGGAACAA AATAACGTGG AAAAGAGCTG 480TCCTGACAGC CCACTCACTA ATGCGTATGA CGAACGCAGT GACGACCACA AAAGAATTCC 540CTCTATATAA GAAGGCATTC ATTCCCATTT GAAGGATCAT CAGATACTGA ACCAATCCTT 600CTAGAAGATC TAAGCTTATC GATAAGCTTG ATGTAATTGG AGGAAGATCA AAATTTTCAA 660TCCCCATTCT TCGATTGCTT CAATTGAAGT TTCTCCGATG GCGCAAGTTA GCAGAATCTG 720CAATGGTGTG CAGAACCCAT CTCTTATCTC CAATCTCTCG AAATCCAGTC AACGCAAATC 780TCCCTTATCG GTTTCTCTGA AGACGCAGCA GCATCCACGA GCTTATCCGA TTTCGTCGTC 840GTGGGGATTG AAGAAGAGTG GGATGACGTT AATTGGCTCT GAGCTTCGTC CTCTTAAGGT 900CATGTCTTCT GTTTCCACGG CGTGCATGCT TCACGGTGCA AGCAGCCGTC CAGCAACTGC 960TCGTAAGTCC TCTGGTCTTT CTGGAACCGT CCGTATTCCA GGTGACAAGT CTATCTCCCA 1020CAGGTCCTTC ATGTTTGGAG GTCTCGCTAG CGGTGAAACT CGTATCACCG GTCTTTTGGA 1080AGGTGAAGAT GTTATCAACA CTGGTAAGGC TATGCAAGCT ATGGGTGCCA GAATCCGTAA 1140GGAAGGTGAT ACTTGGATCA TTGATGGTGT TGGTAACGGT GGACTCCTTG CTCCTGAGGC 1200TCCTCTCGAT TTCGGTAACG CTGCAACTGG TTGCCGTTTG ACTATGGGTC TTGTTGGTGT 1260TTACGATTTC GATAGCACTT TCATTGGTGA CGCTTCTCTC ACTAAGCGTC CAATGGGTCG 1320TGTGTTGAAC CCACTTCGCG AAATGGGTGT GCAGGTGAAG TCTGAAGACG GTGATCGTCT 1380TCCAGTTACC TTGCGTGGAC CAAAGACTCC AACGCCAATC ACCTACAGGG TACCTATGGC 1440TTCCGCTCAA GTGAAGTCCG CTGTTCTGCT TGCTGGTCTC AACACCCCAG GTATCACCAC 1500TGTTATCGAG CCAATCATGA CTCGTGACCA CACTGAAAAG ATGCTTCAAG GTTTTGGTGC 1560TAACCTTACC GTTGAGACTG ATGCTGACGG TGTGCGTACC ATCCGTCTTG AAGGTCGTGG 1620TAAGCTCACC GGTCAAGTGA TTGATGTTCC AGGTGATCCA TCCTCTACTG CTTTCCCATT 1680GGTTGCTGCC TTGCTTGTTC CAGGTTCCGA CGTCACCATC CTTAACGTTT TGATGAACCC 1740AACCCGTACT GGTCTCATCT TGACTCTGCA GGAAATGGGT GCCGACATCG AAGTGATCAA 1800CCCACGTCTT GCTGGTGGAG AAGACGTGGC TGACTTGCGT GTTCGTTCTT CTACTTTGAA 1860GGGTGTTACT GTTCCAGAAG ACCGTGCTCC TTCTATGATC GACGAGTATC CAATTCTCGC 1920TGTTGCAGCT GCATTCGCTG AAGGTGCTAC CGTTATGAAC GGTTTGGAAG AACTCCGTGT 1980TAAGGAAAGC GACCGTCTTT CTGCTGTCGC AAACGGTCTC AAGCTCAACG GTGTTGATTG 2040CGATGAAGGT GAGACTTCTC TCGTCGTGCG TGGTCGTCCT GACGGTAAGG GTCTCGGTAA 2100CGCTTCTGGA GCAGCTGTCG CTACCCACCT CGATCACCGT ATCGCTATGA GCTTCCTCGT 2160TATGGGTCTC GTTTCTGAAA ACCCTGTTAC TGTTGATGAT GCTACTATGA TCGCTACTAG 2220CTTCCCAGAG TTCATGGATT TGATGGCTGG TCTTGGAGCT AAGATCGAAC TCTCCGACAC 2280TAAGGCTGCT TGATGAGCTC AAGAATTCGA GCTCGGTACC GGATCCTCTA GCTAGAGCTT 2340TCGTTCGTAT CATCGGTTTC GACAACGTTC GTCAAGTTCA ATGCATCAGT TTCATTGCGC 2400ACACACCAGA ATCCTACTGA GTTCGAGTAT TATGGCATTG GGAAAACTGT TTTTCTTGTA 2460CCATTTGTTG TGCTTGTAAT TTACTGTGTT TTTTATTCGG TTTTCGCTAT CGAACTGTGA 2520AATGGAAATG GATGGAGAAG AGTTAATGAA TGATATGGTC CTTTTGTTCA TTCTCAAATT 2580AATATTATTT GTTTTTTCTC TTATTTGTTG TGTGTTGAAT TTGAAATTAT AAGAGATATG 2640CAAACATTTT GTTTTGAGTA AAAATGTGTC AAATCGTGGC CTCTAATGAC CGAAGTTAAT 2700ATGAGGAGTA AAACACTTGT AGTTGTACCA TTATGCTTAT TCACTAGGCA ACAAATATAT 2760TTTCAGACCT AGAAAAGCTG CAAATGTTAC TGAATACAAG TATGTCCTCT TGTGTTTTAG 2820ACATTTATGA ACTTTCCTTT ATGTAATTTT CCAGAATCCT TGTCAGATTC TAATCATTGC 2880TTTATAATTA TAGTTATACT CATGGATTTG TAGTTGAGTA TGAAAATATT TTTTAATGCA 2940TTTTATGACT TGCCAATTGA TTGACAACAT GCATCAATCG ACCTGCAGCC ACTCGAAGCG 3000GCCGCGTTCA AGCTTCTGCA GGTCCGATGT GAGACTTTTC AACAAAGGGT AATATCCGGA 3060AACCTCCTCG GATTCCATTG CCCAGCTATC TGTCACTTTA TTGTGAAGAT AGTGGAAAAG 3120GAAGGTGGCT CCTACAAATG CCATCATTGC GATAAAGGAA AGGCCATCGT TGAAGATGCC 3180TCTGCCGACA GTGGTCCCAA AGATGGACCC CCACCCACGA GGAGCATCGT GGAAAAAGAA 3240GACGTTCCAA CCACGTCTTC AAAGCAAGTG GATTGATGTG ATGGTCCGAT GTGAGACTTT 3300TCAACAAAGG GTAATATCCG GAAACCTCCT CGGATTCCAT TGCCCAGCTA TCTGTCACTT 3360TATTGTGAAG ATAGTGGAAA AGGAAGGTGG CTCCTACAAA TGCCATCATT GCGATAAAGG 3420AAAGGCCATC GTTGAAGATG CCTCTGCCGA CAGTGGTCCC AAAGATGGAC CCCCACCCAC 3480GAGGAGCATC GTGGAAAAAG AAGACGTTCC AACCACGTCT TCAAAGCAAG TGGATTGATG 3540TGATATCTCC ACTGACGTAA GGGATGACGC ACAATCCCAC TATCCTTCGC AAGACCCTTC 3600CTCTATATAA GGAAGTTCAT TTCATTTGGA GAGGACACGC TGACAAGCTG ACTCTAGCAG 3660ATCTCCATGG TCCGTCCTGT AGAAACCCCA ACCCGTGAAA TCAAAAAACT CGACGGCCTG 3720TGGGCTTTCA GTCTGGATCG CGAAAACTGT GGAATTGATC AGCGTTGGTG GGAAAGCGCG 3780TTACAAGAAA GCCGGGCAAT TGCTGTGCCA GGCAGTTTTA ACGATCAGTT CGCCGATGCA 3840GATATTCGTA ATTATGCGGG CAACGTCTGG TATCAGCGCG AAGTCTTTAT ACCGAAAGGT 3900TGGGCAGGCC AGCGTATCGT GCTGCGTTTC GATGCGGTCA CTCATTACGG CAAAGTGTGG 3960GTCAATAATC AGGAAGTGAT GGAGCATCAG GGCGGCTATA CGCCATTTGA AGCCGATGTC 4020ACGCCGTATG TTATTGCCGG GAAAAGTGTA CGTATCACCG TTTGTGTGAA CAACGAACTG 4080AACTGGCAGA CTATCCCGCC GGGAATGGTG ATTACCGACG AAAACGGCAA GAAAAAGCAG 4140TCTTACTTCC ATGATTTCTT TAACTATGCC GGAATCCATC GCAGCGTAAT GCTCTACACC 4200ACGCCGAACA CCTGGGTGGA CGATATCACC GTGGTGACGC ATGTCGCGCA AGACTGTAAC 4260CACGCGTCTG TTGACTGGCA GGTGGTGGCC AATGGTGATG TCAGCGTTGA ACTGCGTGAT 4320GCGGATCAAC AGGTGGTTGC AACTGGACAA GGCACTAGCG GGACTTTGCA AGTGGTGAAT 4380CCGCACCTCT GGCAACCGGG TGAAGGTTAT CTCTATGAAC TGTGCGTCAC AGCCAAAAGC 4440CAGACAGAGT GTGATATCTA CCCGCTTCGC GTCGGCATCC GGTCAGTGGC AGTGAAGGGC 4500GAACAGTTCC TGATTAACCA CAAACCGTTC TACTTTACTG GCTTTGGTCG TCATGAAGAT 4560GCGGACTTAC GTGGCAAAGG ATTCGATAAC GTGCTGATGG TGCACGACCA CGCATTAATG 4620GACTGGATTG GGGCCAACTC CTACCGTACC TCGCATTACC CTTACGCTGA AGAGATGCTC 4680GACTGGGCAG ATGAACATGG CATCGTGGTG ATTGATGAAA CTGCTGCTGT CGGCTTTAAC 4740CTCTCTTTAG GCATTGGTTT CGAAGCGGGC AACAAGCCGA AAGAACTGTA CAGCGAAGAG 4800GCAGTCAACG GGGAAACTCA GCAAGCGCAC TTACAGGCGA TTAAAGAGCT GATAGCGCGT 4860GACAAAAACC ACCCAAGCGT GGTGATGTGG AGTATTGCCA ACGAACCGGA TACCCGTCCT 4920GCACGGGAAT ATTTCGGCAT TTCGCCACTG GCGGAAGCAA CGCGTAAACT CGACCCGACG 4980CGTCCGATCA CCTGCGTCAA TGTAATGTTC TGCGACGCTC ACACCGATAC CATCAGCGAT 5040CTCTTTGATG TGCTGTGCCT GAACCGTTAT TACGGATGGT ATGTCCAAAG CGGCGATTTG 5100GAAACGGCAG AGAAGGTACT GGAAAAAGAA CTTCTGGCCT GGCAGGAGAA ACTGCATCAG 5160CCGATTATCA TCACCGAATA CGGCGTGGAT ACGTTAGCCG GGCTGCACTC AATGTACACC 5220GACATGTGGA GTGAAGAGTA TCAGTGTGCA TGGCTGGATA TGTATCACCG CGTCTTTGAT 5280CGCGTCAGCG CCGTCGTCGG TGAACAGGTA TGGAATTTCG CCGATTTTGC GACCTCGCAA 5340GGCATATTGC GCGTTGGCGG TAACAAGAAA GGGATCTTCA CTCGCGACCG CAAACCGAAG 5400TCGGCGGCTT TTCTGCTGCA AAAACGCTGG ACTGGCATGA ACTTCGGTGA AAAACCGCAG 5460CAGGGAGGCA AACAATGAAT CAACAACTCT CCTGGCGCAC CATCGTCGGC TACAGCCTCG 5520GTGGGGAATT CGAGCTCGCC CGGGGATCCT CTAGCTAGAG CTTTCGTTCG TATCATCGGT 5580TTCGACAACG TTCGTCAAGT TCAATGCATC AGTTTCATTG CGCACACACC AGAATCCTAC 5640TGAGTTCGAG TATTATGGCA TTGGGAAAAC TGTTTTTCTT GTACCATTTG TTGTGCTTGT 5700AATTTACTGT GTTTTTTATT CGGTTTTCGC TATCGAACTG TGAAATGGAA ATGGATGGTG 5760AAGAGTTAAT GAATGATATG GTCCTTTTGT TCATTCTCAA ATTAATATTA TTTGTTTTTT 5820CTCTTATTTG TTGTGTGTTG AATTTGAAAT TATAAGAGAT ATGCAAACAT TTTGTTTTGA 5880GTAAAAATGT GTCAAATCGT GGCCTCTAAT GACCGAAGTT AATATGAGGA GTAAAACACT 5940TGTAGTTGTA CCATTATGCT TATTCACTAG GCAACAAATA TATTTTCAGA CCTAGAAAAG 6000CTGCAAATGT TACTGAATAC AAGTATGTCC TCTTGTGTTT TAGACATTTA TGAACTTTCC 6060TTTATGTAAT TTTCCAGAAT CCTTGTCAGA TTCTAATCAT TGCTTTATAA TTATAGTTAT 6120ACTCATGGAT TTGTAGTTGA GTATGAAAAT ATTTTTTAAT GCATTTTATG ACTTGCCAAT 6180TGATTGACAA CATGCATCAA TCGACCTGCA GCCCAAGCTT GAGCTCAGGA TTTAGCAGCA 6240TTCCAGATTG GGTTCAATCA ACAAGGTACG AGCCATATCA CTTTATTCAA ATTGGTATCG 6300CCAAAACCAA GAAGGAACTC CCATCCTCAA AGGTTTGTAA GGAAGAATTC TCAGTCCAAA 6360GCCTCAACAA GGTCAGGGTA CAGAGTCTCC AAACCATTAG CCAAAAGCTA CAGGAGATCA 6420ATGAAGAATC TTCAATCAAA GTAAACTACT GTTCCAGCAC ATGCATCATG GTCAGTAAGT 6480TTCAGAAAAA GACATCCACC GAAGACTTAA AGTTAGTGGG CATCTTTGAA AGTAATCTTG 6540TCAACATCGA GCAGCTGGCT TGTGGGGACC AGACAAAAAA GGAATGGTGC AGAATTGTTA 6600GGCGCACCTA CCAAAAGCAT CTTTGCCTTT ATTGCAAAGA TAAAGCAGAT TCCTCTAGTA 6660CAAGTGGGGA ACAAAATAAC GTGGAAAAGA GCTGTCCTGA CAGCCCACTC ACTAATGCGT 6720ATGACGAACG CAGTGACGAC CACAAAAGAA TTCCCTCTAT ATAAGAAGGC ATTCATTCCC 6780ATTTGAAGGA TCATCAGATA CTGAACCAAT CCTTCTAGAA GATCTCCACA ATGGCTTCCT 6840CTATGCTCTC TTCCGCTACT ATGGTTGCCT CTCCGGCTCA GGCCACTATG GTCGCTCCTT 6900TCAACGGACT TAAGTCCTCC GCTGCCTTCC CAGCCACCCG CAAGGCTAAC AACGACATTA 6960CTTCCATCAC AAGCAACGGC GGAAGAGTTA ACTGCATGCA GGTGTGGCCT CCGATTGGAA 7020AGAAGAAGTT TGAGACTCTC TCTTACCTTC CTGACCTTAC CGATTCCGGT GGTCGCGTCA 7080ACTGCATGCA GGCCATGGCT GAGAACCACA AGAAGGTTGG TATCGCTGGA GCTGGAATCG 7140TTGGTGTTTG CACTGCTTTG ATGCTTCAAC GTCGTGGATT CAAGGTTACC TTGATTGATC 7200CAAACCCACC AGGTGAAGGT GCTTCTTTCG GTAACGCTGG TTGCTTCAAC GGTTCCTCCG 7260TTGTTCCAAT GTCCATGCCA GGAAACTTGA CTAGCGTTCC AAAGTGGCTT CTTGACCCAA 7320TGGGTCCATT GTCCATCCGT TTCAGCTACT TTCCAACCAT CATGCCTTGG TTGATTCGTT 7380TCTTGCTTGC TGGAAGACCA AACAAGGTGA AGGAGCAAGC TAAGGCACTC CGTAACCTCA 7440TCAAGTCCAC TGTGCCTTTG ATCAAGTCCT TGGCTGAGGA GGCTGATGCT AGCCACCTTA 7500TCCGTCACGA AGGTCACCTT ACCGTGTACC GTGGAGAAGC AGACTTCGCC AAGGACCGTG 7560GAGGTTGGGA ACTTCGTCGT CTCAACGGTG TTCGTACTCA AATCCTCAGC GCTGATGCAT 7620TGCGTGATTT CGATCCTAAC TTGTCTCACG CCTTTACCAA GGGAATCCTT ATCGAAGAGA 7680ACGGTCACAC CATCAACCCA CAAGGTCTCG TGACTCTCTT GTTTCGTCGT TTCATCGCTA 7740ACGGTGGAGA GTTCGTGTCT GCTCGTGTTA TCGGATTCGA GACTGAAGGT CGTGCTCTCA 7800AGGGTATCAC CACCACCAAC GGTGTTCTTG CTGTTGATGC AGCTGTTGTT GCAGCTGGTG 7860CACACTCCAA GTCTCTTGCT AACTCCCTTG GTGATGACAT CCCATTGGAT ACCGAACGTG 7920GATACCACAT CGTGATCGCC AACCCAGAAG CTGCTCCACG TATTCCAACT ACCGATGCTT 7980CTGGAAAGTT CATCGCTACT CCTATGGAGA TGGGTCTTCG TGTTGCTGGA ACCGTTGAGT 8040TCGCTGGTCT CACTGCTGCT CCTAACTGGA AGCGTGCTCA CGTTCTCTAC ACTCACGCTC 8100GTAAGTTGCT TCCAGCTCTC GCTCCTGCCA GTTCTGAAGA ACGTTACTCC AAGTGGATGG 8160GTTTCCGTCC AAGCATCCCA GATTCCCTTC CAGTGATTGG TCGTGCTACC CGTACTCCAG 8220ACGTTATCTA CGCTTTCGGT CACGGTCACC TCGGTATGAC TGGTGCTCCA ATGACCGCAA 8280CCCTCGTTTC TGAGCTCCTC GCAGGTGAGA AGACCTCTAT CGACATCTCT CCATTCGCAC 8340CAAACCGTTT CGGTATTGGT AAGTCCAAGC AAACTGGTCC TGCATCCTAA GTGGGAATTC 8400GAGCTCGGTA CCGGATCC8418(2)关于SEQ ID NO6的信息(i)序列特征
(A)长度23个碱基对(B)类型核酸(C)链型单链(D)拓扑结构线形(ii)分子类型DNA(基因组)(iii)假设无(iii)反义无(xi)序列描述SEQ ID NO6CACCGGTCTT TTGGAAGGTG AAG 23(2)关于SEQ ID NO7的信息(i)序列特征(A)长度23个碱基对(B)类型核酸(C)链型单链(D)拓扑结构线形(ii)分子类型DNA(基因组)(iii)假设无(iii)反义无(xi)序列描述SEQ ID NO7AACGAGACCC ATAACGAGGA AGC 23(2)关于SEQ ID NO8的信息(i)序列特征(A)长度23个碱基对(B)类型核酸(C)链型单链
(D)拓扑结构线形(ii)分子类型DNA(基因组)(iii)假设无(iii)反义无(xi)序列描述SEQ ID NO8AAACAGTCCC GTGCATCCCC AAC 23(2)关于SEQ ID NO9的信息(i)序列特征(A)长度23个碱基对(B)类型核酸(C)链型单链(D)拓扑结构线形(ii)分子类型DNA(基因组)(iii)假设无(iii)反义无(xi)序列描述SEQ ID NO9GACGCTCTCC TTGATTCTGT CCC 23(2)关于SEQ ID NO10的信息(i)序列特征(A)长度20个碱基对(B)类型核酸(C)链型单链(D)拓扑结构线形(ii)分子类型DNA(基因组)(iii)假设无
(iii)反义无(xi)序列描述SEQ ID NO10CAAGAAGGTT GGTATCGCTG 20(2)关于SEQ ID NO11的信息(i)序列特征(A)长度23个碱基对(B)类型核酸(C)链型单链(D)拓扑结构线形(ii)分子类型DNA(基因组)(iii)假设无(iii)反义无(xi)序列描述SEQ ID NO11TCTTTTGTGG TCGTCACTGC GTT 23(2)关于SEQ ID NO12的信息(i)序列特征(A)长度24个碱基对(B)类型核酸(C)链型单链(D)拓扑结构线形(ii)分子类型DNA(基因组)(iii)假设无(iii)反义无(xi)序列描述SEQ ID NO12GCGAGCTCTA ATACGACTCA CTAT 24(2)关于SEQ ID NO13的信息(i)序列特征(A)长度23个碱基对(B)类型核酸(C)链型单链(D)拓扑结构线形(ii)分子类型DNA(基因组)(iii)假设无(iii)反义无(xi)序列描述SEQ ID NO13CGCGAGCTCA ATTAACCCTC ACT 23(2)关于SEQ ID NO14的信息(i)序列特征(A)长度20个碱基对(B)类型核酸(C)链型单链(D)拓扑结构线形(ii)分子类型DNA(基因组)(iii)假设无(iii)反义无(xi)序列描述SEQ ID NO14TCTGTACCCT GACCTTGTTG 20(2)关于SEQ ID NO15的信息(i)序列特征(A)长度20个碱基对
(B)类型核酸(C)链型单链(D)拓扑结构线形(ii)分子类型DNA(基因组)(iii)假设无(iii)反义无(xi)序列描述SEQ ID NO15CGTGGATACC ACATCGTGAT 20(2)关于SEQ ID NO16的信息(i)序列特征(A)长度19个碱基对(B)类型核酸(C)链型单链(D)拓扑结构线形(ii)分子类型DNA(基因组)(iii)假设无(iii)反义无(xi)序列描述SEQ ID NO16ACCTTGGCTT GAAGTACTC 19(2)关于SEQ ID NO17的信息(i)序列特征(A)长度23个碱基对(B)类型核酸(C)链型单链(D)拓扑结构线形
(ii)分子类型DNA(基因组)(iii)假设无(iii)反义无(xi)序列描述SEQ ID NO17TCAACCTACA GCTGATTTGG ACC 23(2)关于SEQ ID NO18的信息(i)序列特征(A)长度22个碱基对(B)类型核酸(C)链型单链(D)拓扑结构线形(ii)分子类型DNA(基因组)(iii)假设无(iii)反义无(xi)序列描述SEQ ID NO18GGACCGGAAC GACAATCTGA TC 22(2)关于SEQ ID NO19的信息(i)序列特征(A)长度22个碱基对(B)类型核酸(C)链型单链(D)拓扑结构线形(ii)分子类型DNA(基因组)(iii)假设无(iii)反义无
(xi)序列描述SEQ ID NO19CTAGGGAAGT CCAAATCAGC CG 22(2)关于SEQ ID NO20的信息(i)序列特征(A)长度23个碱基对(B)类型核酸(C)链型单链(D)拓扑结构线形(ii)分子类型DNA(基因组)(iii)假设无(iii)反义无(xi)序列描述SEQ ID NO20TTTGGACCGG AACTTTCAG AAG 23(2)关于SEQ ID NO21的信息(i)序列特征(A)长度23个碱基对(B)类型核酸(C)链型单链(D)拓扑结构线形(ii)分子类型DNA(基因组)(iii)假设无(iii)反义无(xi)序列描述SEQ ID NO21CTAACTTGCG CCATCGGAGA AAC 23(2)关于SEQ ID NO22的信息(i)序列特征(A)长度23个碱基对(B)类型核酸(C)链型单链(D)拓扑结构线形(ii)分子类型DNA(基因组)(iii)假设无(iii)反义无(xi)序列描述SEQ ID NO22GACTTGTCAC CTGGAATACG GAC 23(2)关于SEQ ID NO23的信息(i)序列特征(A)长度23个碱基对(B)类型核酸(C)链型单链(D)拓扑结构线形(ii)分子类型DNA(基因组)(iii)假设无(iii)反义无(xi)序列描述SEQ ID NO23ATTCTTGAGC TCATCAAGCC 23(2)关于SEQ ID NO24的信息(i)序列特征(A)长度22个碱基对
(B)类型核酸(C)链型单链(D)拓扑结构线形(ii)分子类型 DNA(基因组)(iii)假设无(iii)反义无(xi)序列描述SEQ ID NO24AAGGTTGGTA TCGCTGGAGC TG 22(2)关于SEQ ID NO25的信息(i)序列特征(A)长度23个碱基对(B)类型核酸(C)链型单链(D)拓扑结构线形(ii)分子类型DNA(基因组)(iii)假设无(iii)反义无(xi)序列描述SEQ ID NO25TCTCCACAAT GGCTTCCTCT ATG 23(2)关于SEQ ID NO26的信息(i)序列特征(A)长度671个碱基对(B)类型核酸(C)链型双链(D)拓扑结构线形
(ii)分子类型DNA(基因组)(iii)假设无(iii)反义无(xi)序列描述SEQ ID NO26CAAGATGGAT TGCACGCAGG TTCTCCGGCC GCTTGGGTGG AGAGGCTATT CGGCTATGAC 60TGGGCACAAC AGACAATCGG CTGCTCTGAT GCCGCCGTGT TCCGGCTGTC AGCGCAGGGG 120CGCCCGGTTC TTTTTGTCAA GACCGACCTG TCCGGTGCCC TGAATGAACT CCAGGACGAG 180GCAGCGCGGC TATCGTGGCT GGCCACGACG GGCGTTCCTT GCGCAGCTGT GCTCGACGTT 240GTCACTGAAG CGGGAAGGGA CTGGCTGCTA TTGGGCGAAG TGCCGGGGCA GGATCTCCTG 300TCATCTCACC TTGCTCCTGC CGAGAAAGTA TCCATCATGG CTGATGCAAT GCGGCGGCTG 360CATACGCTTG ATCCGGCTAC CTGCCCATTC GACCACCAAG CGAAACATCG CATCGAGCGA 420GCACGTACTC GGATGGAAGC CGGTCTTGTC GATCAGGATG ATCTGGACGA AGAGCATCAG 480GGGCTCGCGC CAGCCGAACT GTTCGCCAGG CTCAAGGCGC GCATGCCCGA CGGCGAGGAT 540CTCGTCGTGA CCCATGGCGA TGCCTGCTTG CCGAATATCA TGGTGGAAAA TGGCCGCTTT 600TCTGGATTCA TCGACTGTGG CCGGCTGGGT GTGGCGGACC GCTATCAGGA CATAGCGTTG 660GCTACCCGTG A 671(2)关于SEQ ID NO27的信息(i)序列特征(A)长度739个碱基对(B)类型核酸(C)链型双链(D)拓扑结构线形(ii)分子类型 DNA(基因组)(iii)假设无(iii)反义无(xi)序列描述 SEQ ID NO27GGACCGGAAC GACAATCTGA TCCCCATCAA GCTTGAGCTC AGGATTTAGC AGCATTCCAG 60ATTGGGTTCA ATCAACAAGG TACGAGCCAT ATCACTTTAT TCAAATTGGT ATCGCCAAAA 120CCAAGAAGGA ACTCCCATCC TCAAAGGTTT GTAAGGAAGA ATTCTCAGTC CAAAGCCTCA 180ACAAGGTCAG GGTACAGAGT CTCCAAACCA TTAGCCAAAA GCTACAGGAG ATCAATGAAG 240AATCTTCAAT CAAAGTAAAC TACTGTTCCA GCACATGCAT CATGGTCAGT AAGTTTCAGA 300AAAAGACATC CACCGAAGAC TTAAAGTTAG TGGGCATCTT TGAAAGTAAT CTTGTCAACA 360TCGAGCAGCT GGCTTGTGGG GACCAGACAA AAAAGGAATG GTGCAGAATT GTTAGGCGCA 420CCTACCAAAA GCATCTTTGC CTTTATTGCA AAGATAAAGC AGATTCCTCT AGTACAAGTG 480GGGAACAAAA TAACGTGGAA AAGAGCTGTC CTGACAGCCC ACTCACTAAT GCGTATGACG 540AACGCAGTGA CGACCACAAA AGAATTCCCT CTATATAAGA AGGCATTCAT TCCCATTTGA 600AGGATCATCA GATACTGAAC CAATCCTTCT AGAAGATCTA AGCTTATCGA TAAGCTTGAT 660GTAATTGGAG GAAGATCAAA ATTTTCAATC CCCATTCTTC GATTGCTTCA ATTGAAGTTT 720CTCCGATGGC GCAAGTTAG 739
权利要求
1.表达cp4/epsps酶活性的甜菜植株及其后代。
2.根据权利要求1所述的植株，对每公顷约4升至约18升Roundup的处理有耐受性。
3.根据权利要求1所述的植株，其特征在于当使用以SEQ IDNo18和SEQ ID No2的序列为特征的寡核苷酸引物对时，以其基因组DNA为模板的PGR扩增产生739bp的DNA片段。
4.根据权利要求3所述的植株，其中以SEQ ID No27的核苷酸序列为特征的DNA形成植物基因组的部分。
5.根据权利要求1所述的植株，其特征在于当使用以SEQ IDNo20和SEQ ID No24的序列为特征的寡核苷酸引物对时，以其基因组DNA为模板的PCR扩增产生834bp的DNA片段。
6.根据权利要求1所述的植株，其特征在于当使用以SEQ IDNo17和SEQ ID No22的序列为特征的寡核苷酸引物对时，以其基因组DNA为模板的PCR扩增产生1057bp的DNA片段。
7.根据权利要求1所述的植株，其特征在于当使用以SEQ IDNo19和SEQ ID No25的序列为特征的寡核苷酸引物对时，以其基因组DNA为模板的PCR扩增产生1224bp的DNA片段。
8.根据权利要求1所述的植株，其中以SEQ ID No1的核苷酸序列为特征的DNA形成植物基因组的部分。
9.根据权利要求8所述的植株，其中所述的核苷酸序列取代了高度重复的DNA序列。
10.根据权利要求8所述的植株，其中基因组的部分与以SEQ IDNo2和SEQ ID No3的核苷酸序列为特征的所述的核苷酸序列直接相连。
11.根据权利要求9所述的植株，其中DNA的特征在于SEQ IDNo4的核苷酸序列形成植物基因组的部分。
12.根据权利要求1-11中的任意一项所述的植株的种子。
13.根据权利要求8所述的植株的种子，以登记号NCIMB97087006/2保藏。
14.产生根据权利要求1所述的甜菜植株的方法，包括(a)用携带含有编码cp4/epsps的DNA片段的载体的农杆菌转化体外培养的甜菜子叶；(b)在草甘膦存在时再生芽；(c)将芽转移到温室的土壤中；(d)用草甘膦处理苗；(e)以0-9的等级对植株活力和叶褪绿进行目测评级；(g)选择植株活力和叶褪绿评级为9的植株；并且(h)通过传统育种技术繁殖所选植株。
15.根据权利要求14所述的方法，其中编码cp4/epsps蛋白的载体是含有具有SEQ ID No5中给出的核苷酸序列的DNA片段的载体。
16.根据权利要求14所述的方法，其中通过PCR分析再生芽中编码cp4/epsps的DNA的存在。
17.草甘膦耐受性甜菜植株及其后代，可通过用使cp4/epsps在植物中表达的基因进行农杆菌介导的转化得到，其中所述的植株缺失左和右T-DNA边界序列。
全文摘要
本发明涉及转基因甜菜植株,该植株由于cp4/epsps酶活性的表达而对每公顷约4至约18升Roundup的处理有耐受性。植物可以其特异整合位点为特征。本发明进一步涉及可从所述植株得到的种子和产生所述植株的方法。
文档编号A01H1/04GK1242803SQ98801636
公开日2000年1月26日 申请日期1998年10月29日 优先权日1997年10月31日
发明者M·曼纳洛弗, P·P·坦宁, P·斯狄恩 申请人:诺瓦提斯公司