路线图。
【具体实施方式】
[0026] 下面结合附图1与实施例对本发明作进一步的说明。
[0027] 如图1的技术路线图所示：一种白叶枯病抗性粳稻育种新方法，该育种新方法的 步骤如下。
[0028] ( 1)选取待改良梗稻品种/系和抗白叶枯病軸稻抗源： 选取农艺性状良好的粳稻品种/系，因为籼粳交杂种F1代通常具有株高偏高、生育期 超亲晚熟的特点，故该农艺性状良好的粳稻品种/系是指产量高、米质优良、白叶枯病抗性 有待改良的以及株高不宜过高、生育期早熟或中熟的粳稻品种/系；然后对选取的粳稻品 种/系进行排籼培养基的诱导培养，以检验该粳稻品种/系是否适用于排籼培养基中进行 花药诱导愈伤组织，诱导培养的过程如下：（1. 1)取材与预处理：将选取的农艺性状良好的 粳稻品种/系大田常规栽培，取叶枕距为5?7cm、穗色呈淡黄绿色、花药淡黄色且长度约 为颖壳的1/3?1/2、孕穗不裂开的健壮主穗为供试材料，保留2?3张叶片，75%酒精擦拭 表面后，用湿毛巾包裹且外套塑料袋，置4°C下低温预处理3天；（1. 2)接种：预处理后，将 含主穗的稻苞剪下，稻苞是指稻苞顶枕距为7cm至穗下节间上部0. 5cm的区域内剪材获得 的部分，然后将该稻苞浸泡于75%的酒精中处理3?4min，接着将该稻苞转移于超净工作 台中剥离主穗，进一步剥取小穗为大小均匀的小支梗，每个小支梗上花药数量限制为15? 25粒，接下来用消毒过的纱布包裹小支梗后用浓度为0. 1%的升汞灭菌不低于lOmin，无菌 水漂洗3?4次，打开纱布晾干，最后用消毒过的剪刀剪开花药上部，抖药法接种花药于排 籼培养基，排籼培养基配方为：N6大量元素+N6微量元素+N6有机质+2mg/L2, 4-D+O. 5mg/ LNAA+O. 5mg/L水解蛋白+5%蔗糖+0. 8%植物凝胶，该排籼培养基的pH值为5. 8 ;(1. 3)诱导 培养：将排籼培养基置于24?26°C的黑暗环境中诱导愈伤组织，30?40天后在花药的边 缘出现白-淡黄色的无定型细胞团，并在花药接种培养50天后统计花药愈伤组织诱导率， 选定花药愈伤组织诱导率高于25%的农艺性状良好的粳稻品种/系作为待改良粳稻品种/ 系。同时选取农艺性状良好且含有白叶枯病高抗基因的籼稻品种/系作为抗白叶枯病籼稻 抗源，抗白叶枯病籼稻抗源是指产量高、米质优良、高抗白叶枯病的籼稻品种/系，确保该 軸稻抗源含有白叶枯病尚抗基因。
[0029] (2)对选取的待改良粳稻品种/系进行粗毒素耐性浓度的鉴定： 粗毒素耐性浓度鉴定过程如下：（2. 1)粗毒素的制备：将混合白叶枯病菌株接种于装 有100mL牛肉膏蛋白胨液体培养基的三角瓶中扩繁，牛肉膏蛋白胨液体培养基配方为：牛 肉膏0.5%+蛋白胨1%+似(：10.5%411值7.5,281：、130印111恒温振荡培养5011后，然后将培养 的种子液按2. 5%的接种量转接到1500mL牛肉膏蛋白胨液体培养基中，继续扩繁72h，再用 8500rpm离心20min收集上清液，50°C旋转蒸发浓缩至原体积的1/10,然后再采用乙酸乙酯 法提取粗毒素；（2. 2)对选取的待改良粳稻品种/系进行粗毒素耐力浓度鉴定：分别在分 化培养基中加入一定梯度浓度的粗毒素提取液，然后将步骤（1)中选定的待改良粳稻品种 /系诱导培养的花药愈伤组织转移进分化培养基，分化培养基配方为：MS基本培养基+2mg/ L6-BA+0. 2mg/LNAA+梯度浓度粗毒素提取液且分化培养基的pH值为6. 0,诱导培养30?40 天后统计愈伤组织分化率，并选择达到合适筛选压力水平浓度的粗毒素提取液作为三交F1 杂交种花药培养粗毒素选择压浓度，其中合适筛选压力水平浓度是指选定的待改良粳稻品 种/系诱导培养的花药愈伤组织在含有粗毒素的分化培养基中的分化率为〇. 8%?1. 2%时 的粗毒素浓度。
[0030] (3)杂交育种获得三交F1杂交种： 将大田种植筛选的抗白叶枯病籼稻抗源与广亲和材料籼粳架桥获得杂交种F1，选取杂 交种F1的花药再与待改良粳稻品种/系杂交获取杂交种三交F1。
[0031] (4)对三交F1杂交种进行排籼培养基花药培养： 三交F1杂交种正季播种，选取健壮主穗花药进行排籼培养基花药诱导培养获得花药 愈伤组织，排籼培养基配方为：N6大量元素+N6微量元素+N6有机质+2mg/L2, 4-D+O. 5mg/ LNAA+0. 5mg/L水解蛋白+5%蔗糖+0. 8%植物凝胶，排籼培养基的pH值为5. 8 ;当三交F1杂 交种的花药愈伤组织诱导率低于3%时，需将三交F1杂交种与粳稻亲本回交获得BC1F1杂 交种，BC1F1杂交种正季播种，选取健壮主穗重新进行排籼培养基花药诱导培养，直至获得 诱导率不低于3%的花药愈伤组织，挑选直径0. 4?0. 8cm的花药愈伤组织接种于添加了选 择压浓度粗毒素的分化培养基，分化培养基配方为：MS无机盐+MS有机物+蔗糖3%+琼脂 0? 7%+KT2. 0mg/L+NAA0. 5mg/L+水解蛋白lg/L+筛选压力水平的梯度浓度的粗毒素提取液 且分化培养基的pH值为5. 8,在温度27?29°C、光14h/暗10h的条件下培养，获得花培幼 苗；待花培苗长至2cm之后转接于生根培养基进行继代培养，生根培养基配方为：l/2Ms大 量+Ms微量+Ms有机物+蔗糖3%+琼脂0. 8%且生根培养基的pH值为5. 8,待花培苗长至 8cm后移栽至周转箱壮苗，10?15天后移栽入大田。
[0032] (5)花培苗单株收种获得花培家系，进一步农艺性状、白叶枯病抗性筛选获得改良 的梗稻新品系： 大田种植花培苗，单株收种获得白叶枯病抗性改良的粳稻花培家系若干，不同花培家 系进一步大田播种，以待改良粳稻品种/系亲本为对照，筛选获得农艺形状良好且白叶枯 病抗性得到改良的粳稻新品系。 实施例
[0033] (1)分别筛选W08479和赣早籼40号作为粳稻育种亲本和籼稻白叶枯病抗源： 多年的育种实践发现，育种主干品系W08479具有产量高、米质优良的特点，同时， W08479的株高两年测定平均只有97. 4cm，全生育期仅有151天，感白叶枯病，2011年正季取 W08479花药接种于排籼培养基进行诱导培养，实验发现W08479愈伤组织的诱导率高达45% (花药培养操作步骤同前)，非常适合该技术路线的粳稻育种亲本的要求。赣早籼40号是江 西省农科院水稻所采用早熟优质早籼品系"85-140"为母本、"珍龙13"为父本杂交育成的 中早熟早籼水稻新品种，对多地白叶枯病病区的多个白叶枯病菌系表现高度抗性，非常适 合作为抗白叶枯病育种的籼稻抗源。
[0034] (2)对W08479进行粗毒素耐性浓度的鉴定： 2011年对选取的W08479进行粗毒素耐力浓度鉴定，在分化培养基中加入0、5%、10%、 15%、20%、25%的粗毒素提取液，配制分化培养基，分化培养基配方为：MS基本培养基+2mg/ L6-BA+0. 2mg/LNAA+梯度浓度粗毒素提取液，pH值6. 0,然后将步骤（1)中诱导培养的花药 愈伤组织转移进分化培养基，统计愈伤组织分化率。结果如下：
【主权项】
1. 一种白叶枯病抗性粳稻育种新方法，其特征在于：该育种新方法的步骤如下： (1) 选取待改良粳稻品种/系和抗白叶枯病籼稻抗源：选取农艺性状良好的粳稻品种/ 系并对选取的粳稻品种/系进行排籼培养基的诱导培养，最终选定花药愈伤组织诱导率高 于25%的粳稻品种/系作为待改良粳稻品种/系，选取农艺性状良好且含有白叶枯病高抗 基因的籼稻品种/系作为抗白叶枯病籼稻抗源； (2) 对选取的待改良粳稻品种/系进行粗毒素耐性浓度的鉴定：分别