br>[0184] 表 7
[0185] 在三个区域中种植的种子（精米）中白藜芦醇含量的分析
[0187] 如表7所示，与益山相比，在水原和密阳的常规转化水稻和本发明的白藜芦醇合 酶水稻分别显示出白藜芦醇含量增加了约30%以上和25%以上。这是由于白藜芦醇合成 是依据种植区域的温度差异通过白藜芦醇合酶基因植保素效应而增加的。
[0188] 实施例7.测量白藜芦醇强化水稻在代谢件疾病诱导的动物樽铟中的作用
[0189] 本发明的含有高浓度白藜芦醇的水稻对代谢性疾病的作用研究，利用了通过长期 高脂饮食而诱导了代谢性疾病的动物模型（小鼠）。具体的，每15个C57BL/6近交系小鼠 伺以尚脂饮食被伺喂12周，从而建立代谢性疾病如糖尿病，肥胖症，尚脂血症，尚胆固醇血 症等诱导的模型。其次，转化水稻或东津稻种子生产的饲料分施于动物12周。12周之后， 通过每3周从尾静脉采血一次，对血糖和胆固醇等进行了分析，从而检验诱导了代谢性疾 病的动物模型中的白藜芦醇强化转基因水稻和转化水稻的作用。
[0190] 实施例7-1.血糖的比较测量
[0191] 如上所述，对实验动物喂以饲料之后，其中用东津稻和白藜芦醇强化转基因水稻 取代碳水化合物成分而进入被代谢性疾病诱导的小鼠中，测定血糖水平（图2)。
[0192] 如图2所示，消耗了所述转化水稻生产的饲料的小鼠，从第八周显示出血糖降低， 且在第十二周血糖下降22%。另一方面，对照组表现出不变或升高的血糖水平。进一步的， 当喂以普通饲料，其中包含的白藜芦醇（Resv)的量与转化水稻生产的饲料中的相当，小鼠 没有显示出明显的不同，从而证实了所述转化水稻对降低血糖的作用优于简单的包含白藜 芦醇。
[0193] 实施例7-2.血脂代谢的比较测量
[0194] 如上所述，喂以饲料之后，其中用东津稻和白藜芦醇强化转基因水稻取代碳水化 合物成分而进入被代谢性疾病诱导的小鼠中，测定了血液中的总胆固醇，血液中的总天然 脂肪，和血液中的LDL和HDL胆固醇（图3)。
[0195] 如图3所示，小鼠消耗了所述转化水稻生产的饲料后显示出，血液中的总胆固醇 降低27. 0%，血液中的总天然脂肪降低37. 4%，和血液中的LDL胆固醇降低59. 6%，而血液 中的HDL胆固醇增加14. 8%，起到预防代谢性疾病的作用。
[0196] 其他对照组无作用或作用低于消耗了所述转化水稻生产的饲料的组。此外，即 使与喂普通饲料的组相比，所述普通饲料包含白藜芦醇（Resv)的量与转化的未去壳稻谷 (unhulled rice)生产的饲料中的相当，消耗转化水稻生产的饲料的组表现出改善血脂的 作用。这表明，转化水稻对改善血脂的效果优于简单的含有白藜芦醇。
[0197] 实施例7-3.体重和身体脂肪的比较测量
[0198] 如上所述，喂以饲料之后，其中用东津稻和白藜芦醇强化转基因水稻取代碳水化 合物成分而进入被代谢性疾病诱导的小鼠中，测量了体重变化和总脂肪量（图4)。
[0199] 如图4所示，消耗所述转化水稻生产的饲料的小鼠表现出体重降低24. 7%。同 时，当使用活体断层微计算机扫描测量总脂肪量时，总脂肪量减少了 21. 55% (对照组减少 了 25. 43%组），内脏脂肪量减少了 16. 33% (对照组减少了 20. 02% )，皮下脂肪量减少了 3. 1% (对照组减少了 3. 83%组）。因此，证实了总脂肪含量与对照组相比显著降低。
[0200] 比较例1.白藜芦醇合成水稻的作用
[0201] 为了比较同样的白藜芦醇合酶基因被插入至不同的染色体中的转化水稻的作用， 对其中同样的白藜芦醇合酶基因插入至天然水稻的第4号染色体中的转化水稻的作用进 行了测验。
[0202] 首先，通过实施例1至3中所述的方法生产转化水稻，其中同样的白藜芦醇合酶基 因插入至天然水稻的第4号染色体中。进一步的，通过实施例4中所述的方法证实了，白藜 芦醇合酶基因是插在第4号染色体的第29, 358, 342个碱基上，且被命名为对照转化水稻。
[0203] 已证实所述对照转化水稻包含白藜芦醇I. 60±0. 05 μ g/g(糙米）或 L 41±0· 014 μ g/g(精米），以及白藜芦醇苷 3. 21±0· 06 μ g/g(糙米）或 0· 48±0· 03 μ g/ g (精米），从而证实了白藜芦醇合成水稻中白藜芦醇合酶基因是正常起作用的。
[0204] 参照实施例7,通过同样的方法证实了另一个也像这样生产的白藜芦醇合成水稻 在诱导了代谢性疾病的动物模型中的作用。
[0205] 比较例1-1.血糖的比较测量
[0206] 如上所述，喂以饲料之后，其中用东津稻和白藜芦醇强化转基因水稻取代碳水化 合物成分而进入被代谢性疾病诱导的小鼠中，测定血糖水平（图5)。
[0207] 如图5所示，相比于消耗所述含等量白藜芦醇的东津稻的组，消耗所述对照转化 水稻的小鼠在整个实验期间表现出较高的血糖水平。
[0208] 因此，如图2,说明了关于转化水稻的试验，表明与消耗了含等量的白藜芦醇的饲 料相比，消耗了所述转化水稻时降低血糖水平的作用明显优越。然而，图5说明了关于对照 转化水稻的试验，表明所述对照转化水稻与含等量的白藜芦醇的饲料相比，表现出同等或 更差的效果。
[0209] 比较例1-2.血脂代谢的比较测量
[0210] 如上所述，喂以饲料之后，其中用东津稻和含白藜芦醇的转化水稻取代碳水化合 物成分而进入被代谢性疾病诱导的小鼠中，测量了血液中的总胆固醇，血液中的总天然脂 肪量，和血液中的LDL和HDL胆固醇（图6至9)。
[0211] 如图6至9所示，与消耗东津稻的组相比，消耗所述对照转化水稻的小鼠对血液中 的总胆固醇、血液中的总天然脂肪、和血液中的LDL胆固醇表现出不变的或更差的作用。但 是，尽管血液中的HDL胆固醇稍微有增加，这种差异并不显著。
[0212] 因而，图3所示为关于转化水稻的试验，其表明与消耗含有等量白藜芦醇的饲料 相比，当消耗所述转化水稻时，观察到使血液中的总胆固醇，血液中的总天然脂肪和血液中 的LDL胆固醇降低并使血液中的HDL胆固醇升高的作用。然而，图6至9所示为关于所述 对照转化水稻的试验，其表明对于那些含有等量白藜芦醇的饲料的组来说，所述对照转化 水稻表现出了更差的作用。
[0213] 比较例1-3.体重的比较测量
[0214] 如上所述，喂以饲料之后，其中用东津稻和含白藜芦醇的转化水稻取代碳水化合 物成分而进入被代谢性疾病诱导的小鼠中，测量体重变化（图10)。
[0215] 如图10所示，与消耗含有等量白藜芦醇的东津稻的组相比，消耗所述对照转化水 稻的小鼠显示无变化达到9周，从12周开始体重降低。
[0216] 但是，相比之下，图4a所显示的关于所述转化水稻的试验中的差异为24. 7%，而 所述对照转化水稻的体重降低的作用是弱如6% .
[0217] 对上述结果的总结为，本发明中白藜芦醇合酶基因被插入至天然水稻的第12号 染色体中，与其中同样的基因被插入至不同的染色体的转化水稻相比，本发明表现出优异 的预防和治疗代谢性疾病的作用。
[0218] 基于以上的描述，本领域普通技术人员应该了解，其他具体实施例可用于实施本 发明，但不脱离本发明的技术理念或本质特征。对此，上述例子仅作说明用途，本发明的目 的不限于这些例子。本发明的范围应理解为包括所有的来自如下权利要求或其等效概念的 含义和范围的修改或修正的形式，而不是上述的详细描述。
[0219] 保藏证明
[0220] 致：白苏铉
[0221] 农村振兴厅长国立作物科学研究所
[0222] 457pyeongdong-ro, iksan-si, jeollabuk-do 570-080
[0223] 韩国
[0224]
【主权项】
1. 一种用于生物合成白藜芦醇的白藜芦醇强化转基因水稻，其中，两拷贝数的白藜芦 醇合酶基因被连续的和可表达地插入至天然未去壳稻谷的第12号染色体中。2. 根据权利要求1所述的水稻，其中所述白藜芦醇合酶基因源自落花生。3. 根据权利要求1所述的水稻，其中所述白藜芦醇合酶基因由SEQIDNO: 1表示的核 苷酸序列组成。4. 根据权利要求1所述的水稻，其中所述两份白藜芦醇合酶基因是在彼此相反的方向 被插入。5. 根据权利要求1所述的水稻，其中所述的白藜芦醇合酶基因被插入至以SEQID NO:7表示的核苷酸序列的区域中，所述核苷酸序列在所述天然水稻的第12号染色体中。6. 根据权利要求5所述的水稻，其中所述白藜芦醇合酶基因被插入至以SEQIDN0:7 表示的所述核苷酸序列中的第572个碱基之后。7. 根据权利要求1所述的水稻，其中所述水稻是保藏在登记号KCTC12529BP之下的水 稻。8. 根据权利要求1所述的水稻，其中所述水稻成熟时，在糙米中包括白藜芦醇约2yg/ g至5. 3yg/g，并且，在精米中包括白藜芦醇约I. 8yg/g至4.Iyg/g。9. 根据权利要求1所述的水稻，进一步生物合成白藜芦醇苷。10. 根据权利要求9所述的水稻，其中所述水稻成熟时在精米中包括约I. 0yg/g至 6. 5yg/g的白藜芦醇苷。11. 一种根据权利要求1-10中任一项所述的水稻生产的水稻种子。12. -种用于预防和改善代谢性疾病的保健功能性食物组成，包括用于生物合成白藜 芦醇的白藜芦醇强化转基因水稻生产的水稻种子，其中，两拷贝数的白藜芦醇合酶基因被 可表达的插入至天然水稻的第12号染色体中。13. 根据权利要求12中所述的保健功能性食物组成，其中所述天然水稻是天然东津 稻。14. 根据权利要求12中所述的保健功能性食物组成，其中所述白藜芦醇合酶基因在所 述天然水稻第12号染色体中在以SEQIDN0:7表示的核苷酸序列的区域中，被插入至第 572个碱基之后。15. 根据权利要求12中所述的保健功能性食物组成，其中所述用于生物合成白藜芦醇 的白藜芦醇强化转基因水稻进一步生物合成白藜芦醇苷。16. 根据权利要求12中所述的保健功能性食物组成，其中所述代谢性疾病选自肥胖 症，糖尿病，尚脂血症和尚胆固醇血症的组。17. -种用于预防和改善代谢性疾病的动物饲料组成，其包括用于生物合成白藜芦醇 的白藜芦醇强化转基因水稻生产的水稻种子，其中，两拷贝数的白藜芦醇合酶基因被可表 达的插入至天然水稻的第12号染色体中。18. -种用于预防和改善代谢性疾病的药物组成，其包括用于生物合成白藜芦醇的白 藜芦醇强化转基因水稻生产的水稻种子，其中，两拷贝数的白藜芦醇合酶基因被可表达地 插入至天然水稻的第12号染色体中。
【专利摘要】本发明涉及一种白藜芦醇强化转基因水稻，用于高浓度下生物合成白藜芦醇,其中白藜芦醇合酶基因被可表达地插入至天然水稻、以及从该水稻生产的水稻种子的第12号染色体中。进一步的，本发明涉及一种保健功能性食物组成，一种动物饲料组成和一种药物组成，用于预防和改善代谢性疾病，包括从用于生物合成白藜芦醇的所述白藜芦醇强化转基因水稻生产的水稻种子，其中，所述白藜芦醇合酶基因被可表达地插入至天然水稻的第12号染色体中。本发明的被插入白藜芦醇合酶基因的白藜芦醇强化转基因水稻生产的水稻种子包含一个高浓度的白藜芦醇，与简单的摄入等量的白藜芦醇相比，其表现出非常优异的作用。进一步的，因为水稻作为食物是以直接使用的形式生产的，没有附加的分离或提取白藜芦醇的过程，因此，可以被广泛地应用于食品，饲料和医药品，用于预防和改善代谢性疾病。KCTC 12529BP20131205
【IPC分类】C12N5/04, A01H5/00, A01H1/02
【公开号】CN105007718
【申请号】CN201380065894
【发明人】白苏铉, 申运澈, 牟荣俊, 金补经, 洪性出, 金善砺, 权纯种
【申请人】大韩民国（农村振兴厅长）
【公开日】2015年10月28日
【申请日】2013年12月17日
【公告号】EP2932825A1, WO2014098438A1