大叶钩藤的快速繁殖方法_2

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9、在第一培养基中加入罗汉果渣,内含丰富的葡萄糖和维生素,可提供大叶钩藤 组培所需的糖原,同时还补充了维生素的摄入,更容易吸收。
[0032] 本发明的其它优点、目标和特征将部分通过下面的说明体现,部分还将通过对本 发明的研究和实践而为本领域的技术人员所理解。
【附图说明】
[0033] 图1为本发明所述培养盒的结构示意图。
【具体实施方式】
[0034] 下面结合实施例对本发明做进一步的详细说明,以令本领域技术人员参照说明书 文字能够据以实施。
[0035]实施例1
[0036] -种大叶钩藤的快速繁殖方法,包括以下步骤:
[0037] 步骤一、制作大叶钩藤的无菌外植体,选取大叶钩藤靠近顶芽的带节嫩茎段,摘 除多余叶片,用细毛刷在流水下轻轻刷洗外植体表面,然后剪成4cm长的带腋芽的嫩茎段 作为大叶钩藤的外植体。对大叶钩藤的外植体进行消毒,具体消毒的过程为:用质量比为I: 100的大蒜素和乙醇的混合溶液浸泡所述外植体5min,再用无菌水润洗所述外植体三 遍,之后将所述外植体下方的1/3处及以下部分浸泡于质量分数为1%的竹醋液中30min, 之后用消毒后的茶叶水持续冲洗所述外植体30s。
[0038]步骤二、将所述无菌外植体转入第一培养基中进行光照培养,控制温度为26°C,控 制光照强度为16001x,每天的光照时间为8小时,诱导腋芽形成。所述第一培养基包括B5 培养基、I. 3mg/L的竹醋液、35g/L的罗汉果渣和4g/L的琼脂,调节pH为5. 7。
[0039] 步骤三、将步骤二培养的带有腋芽的无菌外植体转入第二培养基中进行光照培 养,控制温度为26°C,控制光照强度为20001x,每天的光照时间为11小时,培养直至生根。 其中,所述第二培养基包括固态培养基和液态培养基,所述第二培养基放置于无菌培养盒 中,使固态培养基在所述液态培养基的上方。从无菌外植体的下端开始,将带有腋芽的无菌 外植体的1/8浸没于所述液态培养基,将带有腋芽的无菌外植体的3/8置于所述固态培养 基中。
[0040] 所述固态培养基包括white培养基、0?2mg/L的香蕉泥、0?5mg/L的激动素KT、 0. 8mg/L的吲噪丁酸、4g/L的琼脂和0. 5g/L的活性炭,调节所述固态培养基的pH为5. 7。
[0041] 所述液态培养基包括B5培养基、0. 9mg/L竹醋液和0. 4mg/L椰子提取液,调节所述 液态培养基的PH为5. 3。所述椰子提取液的制作方法为将所述椰衣纤维粉碎至150-200目, 向所述椰衣纤维中加入其5倍质量的淘米水,控制温度为70°C,温浸1小时;过滤,得第一 滤液和第一滤渣,向所述第一滤渣中加入其3倍质量的淘米水,控制温度为80°C,温浸1. 5 小时,过滤,得第二滤液,将所述第一滤液和第二滤液合并,并浓缩至I. 52mg/L,即得所述椰 子提取液。
[0042] 步骤四、将生根的大叶钩藤苗移栽至基质中培养,移栽后在所述基质表面铺设一 层聚乙烯缓释膜,所述聚乙烯缓释膜中注入有质量配比为10 : 1 : 10 : 2的硫酸亚铁、有 机螯合肽、硼砂和七水硫酸锌;
[0043] 所述基质从下到上由草灰层、细胞分裂剂层、鱼骨层和膨润土层按厚度比为 4 : 1 : 2 : 5构成。
[0044] 如图1所示,其中,所述培养盒1包括:
[0045] 盒体11,其为去顶倒置圆锥状;
[0046] 隔板12,其为圆形,所述隔板12可拆卸的固定于所述盒体11内,使所述盒体11形 成上部空间和下部空间,所述隔板12平行于所述盒体11的底部,所述隔板12上间隔设置 有2~4个使所述无菌外植体通过的第一通孔121;
[0047] 其中,所述盒体11的底部设置有排水管14,所述排水管14上设有第一控制阀,所 述盒体11的下部空间的侧壁设置有进水管13,所述进水管13上设有第二控制阀,所述固态 培养基设置于所述上部空间中,所述液态培养基置于所述下部空间中。
[0048] 实施例2
[0049] -种大叶钩藤的快速繁殖方法,包括以下步骤:
[0050] 步骤一、制作大叶钩藤的无菌外植体,选取大叶钩藤靠近顶芽的带节嫩茎段,摘 除多余叶片,用细毛刷在流水下轻轻刷洗外植体表面,然后剪成2cm长的带腋芽的嫩茎段 作为大叶钩藤的外植体。对大叶钩藤的外植体进行消毒,具体消毒的过程为:用质量比为 I: 100的大蒜素和乙醇的混合溶液浸泡所述外植体5min,再用无菌水润洗所述外植体三 遍,之后将所述外植体下方的1/3处及以下部分浸泡于质量分数为1%的竹醋液中25min, 之后用消毒后的茶叶水持续冲洗所述外植体20s。
[0051]步骤二、将所述无菌外植体转入第一培养基中进行光照培养,控制温度为24°C,控 制光照强度为16001x,每天的光照时间为8小时,诱导腋芽形成。所述第一培养基包括B5 培养基、lmg/L的竹醋液、35g/L的罗汉果渣和4g/L的琼脂,调节pH为5. 7。
[0052] 步骤三、将步骤二培养的带有腋芽的无菌外植体转入第二培养基中进行光照培 养,控制温度为24°C,控制光照强度为20001x,每天的光照时间为11小时,培养直至生根。 其中,所述第二培养基包括固态培养基和液态培养基,所述第二培养基放置于无菌培养盒 中,使固态培养基在所述液态培养基的上方。从无菌外植体的下端开始,将带有腋芽的无菌 外植体的1/8浸没于所述液态培养基,将带有腋芽的无菌外植体的3/8置于所述固态培养 基中。
[0053] 所述固态培养基包括white培养基、0?lmg/L的香蕉泥、0?lmg/L的激动素KT、 0. 7mg/L的吲噪丁酸、4g/L的琼脂和0.lg/L的活性炭,调节所述固态培养基的pH为5. 7。
[0054] 所述液态培养基包括B5培养基、0.6mg/L竹醋液和0.2mg/L椰子提取液,调节所述 液态培养基的PH为5. 3。所述椰子提取液的制作方法为将所述椰衣纤维粉碎至150-200目, 向所述椰衣纤维中加入其5倍质量的淘米水,控制温度为70°C,温浸1小时;过滤,得第一 滤液和第一滤渣,向所述第一滤渣中加入其3倍质量的淘米水,控制温度为80°C,温浸1. 5 小时,过滤,得第二滤液,将所述第一滤液和第二滤液合并,并浓缩至I. 52mg/L,即得所述椰 子提取液。
[0055] 步骤四、将生根的大叶钩藤苗移栽至基质中培养,移栽后在所述基质表面铺设一 层聚乙烯缓释膜,所述聚乙烯缓释膜中注入有质量配比为10 : 1 : 10 : 2的硫酸亚铁、有 机螯合肽、硼砂和七水硫酸锌。
[0056] 所述基质从下到上由草灰层、细胞分裂剂层、鱼骨层和膨润土层按厚度比为 4 : 1 : 2 : 5构成。
[0057] 其中,所述培养盒包括:
[0058] 盒体,其为去顶倒置圆锥状;
[0059] 隔板,其为圆形,所述隔板可拆卸的固定于所述盒体内,使所述盒体形成上部空间 和下部空间,所述隔板平行于所述盒体的底部,所述隔板上间隔设置有2~4个使所述无菌 外植体通过的第一通孔;
[0060] 其中,所述盒体的底部设置有排水管,所述排水管上设有第一控制阀,所述盒体的 下部空间的侧壁设置有进水管,所述进水管上设有第二控制阀,所述固态培养基设置于所 述上部空间中,所述液态培养基置于所述下部空间中。
[0061] 实施例3
[0062] -种大叶钩藤的快速繁殖方法,包括以下步骤:
[0063] 步骤一、制作大叶钩藤的无菌外植体,选取大叶钩藤靠近顶芽的带节嫩茎段,摘 除多余叶片,用细毛刷在流水下轻轻刷洗外植体表面,然后剪成3cm长的带腋芽的嫩茎段 作为大叶钩藤的外植体。对大叶钩藤的外植体进行消毒,具体消毒的过程为:用质量比为 1 : 100的大蒜素和乙醇的混合溶液浸泡所述外植体5min,再用无菌水润洗所述外植体三 遍,之后将所述外植体下方的1/3处及以下部分浸泡于质量分数为1%的竹醋液中27min, 之后用消毒后的茶叶水持续冲洗所述外植体24s。
[0064]步骤二、将所述无菌外植体转入第一培养基中进行光照培养,控制温度为25°C,控 制光照强度为16001x,每天的光照时间为8小时,诱导腋芽形成。所述第一培养基包括B5 培养基、I.lmg/L的竹醋液、35g/L的罗汉果渣和4g/L的琼脂,调节pH为5. 7。
[0065] 步骤三、将步骤二培养的带有腋芽的无菌外植体转
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