一种火焰南天竹初代培养的培养基的制作方法
【技术领域】
[0001] 本发明属于组织培养技术领域，特别涉及火焰南天竹组培快繁技术。
【背景技术】
[0002] 火焰南天竹是一种新型的绿化苗木，它冬季叶色娇艳似火深受人民的喜爱。由于 火焰南天竹植株矮小，茎节短，节间只有普通南天竹的1/10,枝条细弱，扦插繁殖困难且繁 殖速度慢。自从1995年上海植物园作为资源收集引进该品种以来，我国对火焰南天竹的研 究才开始，生产上通常采用扦插育苗法，繁殖周期长，繁殖率极低，在生产中不能取得很好 的效果。随着近年组织培养技术的不断发展，特别是利用植物组织培养及快速繁殖技术，进 行苗木繁殖，更是对常规繁殖技术的一次重大革命，显示了强大的生命力和广阔的发展前 景。采用组织培养快繁技术繁殖既可以得到整齐一致的无性系材料，又能提高繁殖系数，在 短期内获得大量苗木，克服常规繁殖的弊端，为火焰南天竹的快速推广和产业化提供保障， 具有较为广泛的社会效益、生态效益和经济效益。
[0003] 在火焰南天竹组织培养快繁的过程中，最重要的是第一步，初代培养。初代培养的 成功与否直接决定后期组培苗的快繁。而初代培养中培养基配方是至关重要的，直接关系 到影响初代苗木的成活率以及植株的繁殖系数以及繁殖的速度。目前对于火焰南天竹组 培的研究不多，在已经报道的初代培养的培养基对于火焰南天竹的培养效果也不是非常理 想，2002年浙江慈溪棉花科学研究所研究表明火焰南天竹采用传统组织培养方法，继代培 养需45d，芽的增殖系数仅为2. 5。因此针对火焰南天竹进行初代培养基的优化研究具有重 要的意义。目前已发表的关于火焰南天竹组培的相关文献资料中，组织培养快繁增殖系数 较低、培养速度慢，因此进行火焰南天竹初代培养就显得尤为重要。
【发明内容】
[0004] 发明目的：本发明的目的是提供一种火焰南天竹的初代培养快培养基配方，新配 方解决了培养基配制原料选购的难题，同时解决生产上火焰南天竹的快速繁殖问题。
[0005] 技术方案：本发明提供了一种最适合火焰南天竹初代培养的培养基配方：改良 MS+玉米素（0.6mg/L)+吲哚乙酸（0.2mg/L) +葡萄糖（15g/L) +琼脂粉（6g/L)。
[0006] 本发明中所用的玉米素（简称ZT)，一种天然的细胞分裂素。它是从甜玉米灌浆期 的籽粒中提取并结晶出的第1个天然细胞分裂素，已能人工合成。它是白色结晶或粉末，难 溶于水，溶于醇和DMF。
[0007] 本发明根据火焰南天竹生长特点，对MS培养基进行了改良，MS培养基是 Murashige和Skoog于1962年为烟草细胞培养设计的，其特点是无机盐和离子浓度较高，是 较稳定的离子平衡溶液，它的硝酸盐含量高，其养分的数量和比例合适，能满足植物细胞的 营养和生理需要，因而适用范围比较广，多数植物组织培养快速繁殖用它作为培养基的基 本培养基。具体配方可参照此书：（曹孜义等，实用植物组织培养教程，1996,甘肃科学技术 出版社）。
[0008] 具体的，本发明所述的改良MS的配方为：
[0009] 大量元素：（NH4) 2S04600mg/L、CO (NH2) 500mg/L、KNO3 950mg/L、CaCl2 · 2H20 220mg/ L、MgSO4 · 7H20 185mg/L、KH2PO4 85mg/L
[0010] 微量元素 ：KI 0· 41mg/L、H3BO3 3. lmg/L、MnSO4 · 4H202 I. 15mg/L、ZnSO4 · 7H20 4. 3mg/L、Na2MoO4 · 2H20 0· 125mg/L、铁盐：FeSO4 · 7H20 (27. 8)、Na2-EDTA · 2H20 (37. 3)
[0011] 有机物质：肌醇50mg/L、烟酸0· 5mg/L、盐酸吡咳醇（维生素 B6)0. 5mg/L、盐酸硫 胺素（维生素 Β1)0· lmg/L、泛酸钙（维生素 B5) lmg/L、维生素 C2mg/L、甘氨酸2. Omg/L
[0012] 由于国家对于册1以03的购买进行管制，不利于大量的组培生产，我们将培养基中 的順4勵3用（NH4)2SO4和尿素来替代。将NH 4NO3替代后使培养基配方中的SO42浓度升高，因 此将培养基中其他元素含量进行调配；去除微量元素中的CuSOjP CoCl 2属于重金属元素， 加入后对火焰南天竹的培养不利，因此去掉微量元素中的CuSOjP CoCl 2;火焰南天竹在培 养中容易褐化在培养基中加入VBjP VC能够防止褐化，提高茎尖的成活率。改良后的培养 基成分不同于传统的培养基，能够增加火焰南天竹茎尖的成活率。
[0013] 本发明所用的吲哚丁酸（简称IBA)，是一种生长素类物质。能够促进植物主根生 长，提高发芽率，成活率，能促进细胞分裂与细胞生长，诱导形成不定根。将IBA配制成Img/ mL的母液供配制培养基使用。
[0014] 本发明所用的蔗糖，在植物组织培养基中起到能源物质和渗透调节剂的作用，除 供能之外，还能诱导愈伤组织组织的再分化，使用工业生产的分析纯的蔗糖。
[0015] 本发明所用的琼脂粉，在培养基中主要的作用是固定支撑的作用。一般使用纯度 较高，没有杂质的琼脂粉。
[0016] 火焰南天竹组织培养对PH值的要求比较严格，过高或者过低都会造成植株生长 不好，或者死亡，因此一定要精准调节PH值。研究发现，将培养基pH值调节为5. 7的时候， 最适合。
[0017] 本发明还提供了上述培养基的制备方法：将以上初代培养基配制的材料准备齐全 后，进行培养基配制：按照要求的量加入每种材料，煮沸使所有材料充分混匀溶解。调培养 基PH到5. 7,分装在需要的容器中进行高温高压灭菌20分钟。
[0018] 有益效果：1.本发明培养基中的激素配比合理，将初代培养和生根培养合为一 步，初代培养的过程中茎段就能够生根，简化培养流程，缩短培养时间。
[0019] 2.使用本发明所提供的初代培养基提高初代培养植株的萌芽数，植株生长健壮， 有利于下一步继代扩繁。为火焰南天竹提供供更多优质苗木，利于的大面积推广，创造更大 经济效益。
【具体实施方式】：
[0020] 培养基配方：改良MS+玉米素（0.6mg/L) +吲哚乙酸（0.2mg/L) +葡萄糖（15g/L) + 琼脂粉（6g/L)。
[0021] 改良MS的配方为：
[0022] 大量元素：（NH4)2SO4 600mg/L、CO (NH2) 500mg/L、KNO3 950mg/L、CaCl2 · 2H20 220mg/L、MgSO4· 7H20 185mg/L、KH2PO4 85mg/L。
[0023] 微量元素 ：KI 0· 41mg/L、H3BO3 3. lmg/L、MnSO4 · 4H202 I. 15mg/L、ZnSO4 · 7H20 4. 3mg/L、Na2MoO4 · 2H20 0· 125mg/L、铁盐：FeSO4 · 7H20 (27. 8)、Na2-EDTA · 2H20 (37. 3)。
[0024] 有机物质：肌醇50mg/L、烟酸0· 5mg/L、盐酸吡咳醇（维生素 Β6)0· 5mg/L、盐酸硫 胺素（维生素 Β1)0· lmg/L、泛酸钙（维生素 B5) lmg/L、维生素 C2mg/L、甘氨酸2. Omg/L。
[0025] 按照上述培养基配方要求的量加入每种材料，煮沸使所有材料充分混匀溶解。调 培养基PH到5. 7,分装在需要的容器中进行高温高压灭菌20分钟。
[0026] 应用试验：
[0027] 1.培养基配制方法试验过程：
[0028] (1)将火焰南天竹的莖段分别接种于附加 ZT(0. 6mg/L)、IBA(0. 2mg/L)、葡萄糖 (15g/L)、琼脂粉（6g/L)的MS、改良MS、B5、WPM四种不同的基本培养基上，筛选出火焰南天 竹初代培养的最适基本培养基。
[0029] (2)将火焰南天竹茎段分别接种于附加不同浓度ZT、IBA、的改良MS培养基上研究 不同配比的植物生长调节剂对火焰南天竹初代培养的影响。
[0030] 火焰南天竹的茎段均接种于250毫升的培养瓶中，每瓶接种8个外植体，每个处理 重复三次。35天换新鲜培养基。培养条件为16hr (光）/8hr (暗），光强2000-30001x，温度 23-25°C。40天后统计茎段分化率、增殖数、平均苗高、褐化率、死亡率、植株长势。
[0031] 2.实验结果
[0032] 从表1、表2中的试验结果能够看出，用改良MS基本培养基，添加 ZT(0.6mg/L)、 IBA(0. 2mg/L)，对火焰南天竹初代培养都有极显著的促进作用。具体表现在茎段分化率、平 均苗高、从生芽增殖倍数以及植株长势都明显高于其他的处理。而褐化率和死亡率低于其 他处理。因此培养基配方改良MS+ZT (0. 6mg/L) +IBA(0. 2mg/L) +葡萄糖（15g/L) +琼脂粉 (6g/L)是火焰南天竹初代培养的最佳培养基。
[0033] 表1.不同基本培养基对火焰南天竹初代培养的影响
[0036] 注：a, b, c表示经Duncan' s测验，P = 0· 05水平差异显著。下同。
[0037] 表2.不同激素配比对火焰南天竹初代培养的影响
[0038] CN 105123531 A 肌 h门-p 4/4 Jfl1
【主权项】
1. 一种火焰南天竹初代培养的培养基，其特征在于所述培养基配方为：改良MS、玉米 素、吲哚乙酸、蔗糖、琼脂粉。2.如权利要求1所述的培养基，其特征在于所述玉米素浓度为0. 4~0. 8mg/L、吲哚乙 酸浓度为〇. 1~〇. 3mg/L、蔗糖浓度为15g/L、琼脂粉浓度为6g/L。3.如权利要求2所述的培养基，其特征在于所述玉米素浓度为0. 6mg/L、吲哚乙酸浓度 为0? 2mg/L、蔗糖浓度为15g/L、琼脂粉6g/L。4. 如权利要求1所述的培养基，其特征在于所述的改良MS，其配方为： 大量元素：（NH4) 2S04 6 00mg/L、CO (NH2) 500mg/L、KNO3 950mg/L、CaCl2 .2H20 220mg/L、 MgSO4 ? 7H20 185mg/L、KH2PO4 85mg/L ; 微量元素：KI 0? 41mg/L、H3BO33. lmg/L、MnSO4? 4H202 I. 15mg/L、ZnSO4 ?7H20 4. 3mg/ L、Na2MoO4 ?2H20 0? 125mg/L、FeSO4 ?7H20 27. 8mg/L、Na2-EDTA ?2H20 37. 3mg/L; 有机物质：肌醇50mg/L、烟酸0. 5mg/L、盐酸吡咳醇0. 5mg/L、盐酸硫胺素0. lmg/L、泛酸I丐lmg/L、维生素C 2mg/L、甘氨酸2. Omg/L。5.如权利要求1所述的培养基，其特征在于pH值为5. 7。
【专利摘要】本发明公开了一种最适合火焰南天竹初代培养的培养基配方：改良MS+玉米素(0.6mg/L)+吲哚乙酸(0.2mg/L)+葡萄糖(15g/L)+琼脂粉(6g/L)。本发明培养基中的激素配比合理，将初代培养和生根培养合为一步，初代培养的过程中茎段就能够生根，简化培养流程，缩短培养时间。同时，可以提高初代培养植株的萌芽数，植株生长健壮，有利于下一步继代扩繁。为火焰南天竹提供更多优质苗木，利于的大面积推广，创造更大经济效益。
【IPC分类】A01H4/00
【公开号】CN105123531
【申请号】CN201510629024
【发明人】贾思振, 张立伟, 王媛花, 颜志明
【申请人】江苏农林职业技术学院
【公开日】2015年12月9日
【申请日】2015年9月28日