氢钠19毫当量，氯化钾18. 5毫当量，硫酸镁37毫当量/升），在40毫 米汞柱的条件下灌注20-30分钟。
[0260] 8.在20°C下利用被氧化的血液（红细胞压积> 15% )进行再灌注，灌注压力40 毫米汞柱，灌注20分钟。提升所述的灌注压力至60毫米汞柱并且在30分钟的时间内将所 述的温度逐步升高至37°C。所述的器官缓慢的升温至，例如，10°C，18°C，20°C，22°C等等，直 至所述的器官达到37°C。
[0261] 9.在所述试验的过程中检查过度挛缩。
[0262] 10.所述的心脏运行至窦性心律，具有正常的心脏输出量（CO)以及左心室舒张末 压（LVEDP)，收缩/舒张压。
[0263] 11.进行转变，经由正常的生理学途径对所述的心脏进行灌注，通过所述的肺静脉 或者左心房（心脏处于工作状态）。
[0264] 12.将所述的心脏维持在工作状态，直至达到期望的稳定态。
[0265] 13.测量心脏功能参数。
[0266] 使用本发明所述的、在下文中被称为β -Lazarus溶液的溶液对所述的心脏进行 重新启动，其中所述的心脏在a-Lazarus中进行了存储。表2表示的是在β-Lazarus中 每种试剂的浓度。使用碳酸氢钠（8.4% )或者Tris-羟甲基氨基甲烷（THAM)将其pH调整 至7. 4,并且维持在21-37 °C下。
[0267] 替代性方案：
[0268] 1.将所述的心脏钩在所述的灌注系统中。
[0269] 2.在40-120毫米汞柱下将β -Iazarus在所述的心脏中循环，其中所述的心脏具 有非工作状态的构造（即，经由所述的主动脉根），直至所述的灌注液和/或心脏的PH稳定 在> 7. 2 ;这一过程可能需要花费30分钟或者更久的灌注时间，来达到这种状态。
[0270] 3.为了使之能够发生，通常按照需要，需要对所述的循环β -Lazarus的pH进行调 整，所述的调整使用碳酸氢钠或者Tris-羟甲基氨基甲烷，依照在线彩色多普勒显像（CDI) 以及血液气体监测进行调整。一旦达到所述的稳定态，将所述的循环β-Lazarus的pH维 持在7. 4。
[0271] 4.按照需要，依照在线监测结果，将所述的β-Lazarus浓度，f丐浓度，钾浓度以及 钠浓度调整至生理水平。
[0272] 5. -旦所述溶液的pH在7. 4下稳定了 5-10分钟，缓慢的排放出所述的 β-Lazarus，同时使用血小板以及不含白细胞计数（WBC)的全血对其进行替代，直至所述 的水池中达到4 : 1(血液：β-Iazarus)的配给量。或者，按照需要，这一配给量可以变化 为5 : 0,3 : 2,2 : 3,等等。
[0273] 6. -旦所述的系统重新获得稳定态：即电解液以及pH的生理学水平（在线测量 值），将灌注血液=Iazarus的温度缓慢的升高，每2-5分钟升高1°C，直至达到37°C。按照 需要，在这段时间内对所述的电解液以及PH进行持续的调整。
[0274] 7. -旦所述的温度达到28-30°C，所述的心脏应当开始搏动并且当所述的温度被 升高至β 7°C时，持续进行搏动。在这一阶段，所述的血液=Lazarus混合液可以完全被全血 所替代。
[0275] 8.之后可以按照描述的方法将所述的系统转换至工作状态，并且按照需要进行监 测。
[0276] 表2.用于对心脏进行重新启动的β -Lazarus器官保存溶液中的组分
[0277] CN 105123670 A 说明书 23/24 页
[0278] 附图27表示的是对人类心脏进行体外保存的系统，其中所述的人类心脏处于非 工作状态。使用这一系统，器官例如心脏在进行复苏之前能够维持达到10天或者两周。灌 注是经由所述的主动脉进行的，并且维持一种流动，例如，直通流动或者脉冲流动。所述溶 液的流动抑制了凋亡基因的活化，而所述的流速为大约40毫升/分钟。将所述的存储单元 保持在4-21Γ的温度下，例如，在4-15Γ的范围内。为了维持这样的温度，将所述的单元放 置在一个冷却的腔室或者冰冷的房间内。可以选择的，所述的系统包括一个热交换器，用于 调节并且维持在所期望的温度下。
[0279] 在一个方面，在冰冷的温度下，在本发明所述的溶液中使用高浓度的钾离子使所 述的心脏停止循环。优选的，存在于所述溶液中的高浓度的钾离子不会对所述心脏的内皮 层以及离子通道产生伤害。更加优选的，从所述心脏中将所述的高浓度钾离子驱除出去，从 而避免损伤。任选的，存在于本发明所述溶液中的镁的浓度是变化的。
[0280] 在另外一个方面，对所述搏动的心脏的功能性进行评价，从而确定所述的心脏是 否适合进行移植。任选的，对所述心脏的收缩性和/或所述心脏的PH进行评价，从而确定 所述的心脏是否适合进行移植。可以选择的，对所述心脏腔室内的压力和/或体积进行测 定，其目的在于对所述心脏的功能性进行评价。
[0281] 在一个方面，本发明所述的系统能够将所述的组织维持在冰冷的温度下，例如，在 4-15Γ的范围内。在有规律的时间间隔处对所述溶液的pH进行测定，例如，每1小时，每2 小时，每4小时，每8小时，或者每10小时。当所述的pH下降至低于6. 8时，向所述的系统 中加入本发明所述的新鲜溶液，其目的在于增加浸泡所述组织的所述溶液的pH。重复进行 这一过程，直至所述的pH稳定在6. 8至7. 0左右，这标志着存储于所述组织中的三磷酸腺 苷得到了补充。优选的，所述的组织是心脏。在一个方面，当所述系统的PH稳定在6.8至 7. 0之间时，所述的心脏重新启动。
[0282] 可以选择的，在有规律的时间间隔处对所述组织的pH进行测定，例如，每1小时， 每2小时，每4小时，每8小时，或者每10小时。优选的，所述的组织是心脏。任选的，使用 PH电极对所述心脏的pH进行测定。或者，使用一种光纤探针系统对所述心脏的pH进行测 定。在一个方面，对所述心脏的心肌层、前室壁、和/或后室壁的PH进行测定。
[0283] 对所述组织或者溶液的pH进行测定，用以评价所述的组织是否适合进行移植。优 选的，所述的组织是心脏。所述心脏的PH在6. 8至7. 0之间标志着所述的心脏在存储过程 中得到的充分的保护。优选的，适合进行移植的所述心脏的PH在6. 8至7. 0之间。
[0284] 本发明还提供了下述内容：在所述组织/器官的切离、存储、或者复苏的过程中对 所述组织或者溶液的PH进行测定。优选的，所述的组织/器官是心脏。
[0285] 在另外一个方面，对所述心脏腔室内的压力进行测定。任选的，对所述心脏的心室 压力进行测定。在一个方面，使用聚酯薄膜（Mylar)导管对所述的压力进行测定。
[0286] 在一个方面，将所述的心脏存储于本发明所述的溶液中（静态的）。在另外一个方 面，对所述心脏的冠状动脉进行灌注。
[0287] 在另外一个方面，所述的装置含有心脏输入口以及输出口。任选的，在所述的左肺 血管以及右肺血管上进行插管。优选的，所述的主动脉以及左心房导管排放至所述装置中。
【主权项】
1. 一种用于保存或者复苏生物组织的组合物，所述的组合物包括一种生理盐溶液，进 一步包括至少一种选自下述组中的组分：用于生成三磷酸腺苷的底物，用于消耗氨的底物， 用于缓冲细胞内酸度的试剂，用于淬火活性氧组分的试剂，以及用于平衡组织水肿/脱水 的试剂。2. -种用于保存或者复苏生物组织的组合物，所述的组合物包括一种生理盐溶液以及 一种用于生成三磷酸腺苷的底物。3. 根据权利要求2所述的组合物，其中所述的用于生成三磷酸腺苷的底物选自下述组 中：磷酸肌酸，肌酸乙酯，二肌酸苹果酸，肌酸葡糖酸，果糖，蔗糖，核糖，己糖以及戊糖。4. 根据权利要求2所述的组合物，其中所述的用于生成三磷酸腺苷的底物选自下述组 中：肌酸乳清酸，一水合肌酸，腺苷，以及葡萄糖。5. -种用于保存或者复苏生物组织的组合物，所述的组合物包括一种生理盐溶液以及 一种用于消耗氨的化合物。6. 根据权利要求5所述的组合物，其中所述的用于消耗氨的化合物选自由鸟氨酸与羧 基磷酸所组成的组中。7. 根据权利要求5所述的组合物，其中所述的用于消耗氨的化合物是L-瓜氨酸苹果 酸。8. -种用于保存或者复苏生物组织的组合物，所述的组合物包括一种生理盐溶液以及 一种用于缓冲细胞内酸度的试剂。9. 根据权利要求8所述的组合物，其中所述的用于缓冲细胞内酸度的试剂选自下述组 中：组氨酸，谷氨酰胺，色氨酸，赖氨酸，以及牛磺酸。10. 根据权利要求8所述的组合物，其中所述的用于缓冲细胞内酸度的试剂选自下述 组中：碳酸氢钠，Tris-羟甲基氨基甲烷，以及L-肌肽。11. 一种用于保存或者复苏生物组织的组合物，所述的组合物包括一种生理盐溶液以 及一种用于淬火活性氧组分的试剂。12. 根据权利要求11所述的组合物，其中所述的用于淬火活性氧组分的试剂选自下 述组中：二硫苏糖醇（DTT)，(6-巯基乙醇，乙酰半胱氨酸，a-硫辛酸，牛磺酸，白藜芦醇 (Resveratrol)，叶黄素，硒，甲硫氨酸，以及生育酚/维生素E。13. -种用于保存或者复苏生物组织的组合物，所述的组合物包括一种生理盐溶液以 及一种用于平衡组织水分含量的试剂。14. 根据权利要求13所述的组合物，其中所述的用于平衡组织水分含量的试剂选自下 述组中：甘露醇，尿素，丙三醇，异山梨醇，以及五水合蜜三糖。15. 根据权利要求1所述的组合物，其中所述的组合物中包括： 0. 1-0. 5克/升氯化钙 0. 25-0. 75克/升氯化钾 0? 01-0. 5克/升磷酸钾（一钾盐） 0? 01-0. 5克/升氯化镁（六水合物） 0? 01-0. 5克/升硫酸镁（五水合物） 5. 0-10. 0克/升氯化钠 0. 01-0. 5克/升碳酸氢钠 0? 01-0. 5克/升磷酸钠（二钠盐；五水合物） 1. 0-5. 0克/升D-葡萄糖/葡萄糖 0.01-0. 5克/升腺苷 0? 01-0. 75克/升谷胱甘肽（还原态） 0.01-0. 5克/升抗坏血酸 0.01-0. 5克/升L-精氨酸 0.01-0. 5克/升肌酸乳清酸 0.01-0. 5克/升一水合肌酸 0. 01-0. 5克/升L-瓜氨酸苹果酸 0.01-0. 5克/升二氯乙酸 0? 23-2. 3克/升L-肌肽 0. 20-2. 0克/升L-肉碱 0? 0021-0. 21克/升a -硫辛酸 0? 25-0. 75毫升/升胰岛素 用于调整pH的Tris-羟甲基氨基甲烷 0. 01-3. 0升蒸馏水。16. -种灌注装置，其包括 腔室组件， 灌注回路，包括第一导管，用于向所述的器官提供权利要求1所述的组合物，以及 温度控制单元。17. 根据权利要求16所述的灌注装置，其中所述的器官选自下述组中：心脏，肾脏，肝 脏，胃，脾脏，胰腺，肺脏，大脑，眼睛，肠，以及膀胱。18. -种用于维持或者复苏哺乳动物器官的系统，其包括 a. 容器，用于保持所述的器官与权利要求1所述的组合物进行接触； b. -种递送工具，用于将所述的组合物递送至所述器官的至少一个脉管中； c. 一种分离工具，用于将所述的组合物转移出所述的器官； d. 温度控制工具； e. 氧化工具； f. 过滤工具； g. 流动控制工具； 其中所述的递送工具，所述的分离工具，所述的温度工具，所述的氧化工具，所述的过 滤工具，以及所述的流动控制工具提供或者重建了一种生理学可接受性的哺乳动物环境。19. 根据权利要求1所述的组合物，其中所述的组合物中包括以纳米范围的尺寸存在 的水团。20. 根据权利要求15所述的组合物，其中所述的组合物中包括以纳米范围的尺寸存在 的水团。21. -种测量离体心脏的pH的方法，其包括： h. 将所述的离体心脏与权利要求1所述的溶液进行接触；1. 测定所述的离体心脏的pH ; 其中存在于6. 8至7. O之间的pH标志着所述的心脏适合进行移植。22. -种测量权利要求1所述的溶液的pH的方法，其包括： j. 将离体心脏与权利要求1所述的溶液进行接触； k. 测定权利要求1所述的溶液的pH ; 其中存在于6. 8至7. O之间的pH标志着所述的心脏适合进行移植。
【专利摘要】用于复苏、储备、以及保存器官以及组织的功能完整性的方法以及组合物。通过维持ATP(三磷酸腺苷)的水平，线粒体的功能，心肌细胞的收缩性，预防酸中毒，抑制细胞凋亡的诱发，维持变力性(inotrophy)以及变松性(lusitropy)从而维持代谢功能，其中所述的变力性以及变松性的维持是通过调节钙离子、钠离子、钾离子以及氯离子来完成的。
【IPC分类】A01N1/02
【公开号】CN105123670
【申请号】CN201510337174
【发明人】H·塔特, P·特里诺尔, S·克胡利, L·罗索
【申请人】哈佛学院董事会, 美国政府退伍军人事务部
【公开日】2015年12月9日
【申请日】2008年2月19日
【公告号】CA2678486A1, CN101790306A, EP2124539A2, EP2543249A1, EP2543249A8, EP2543250A1, US8211628, US8945823, US20100151435, US20120264103, US20120282591, WO2008100636A2, WO2008100636A3