用于细胞培养和组织培养平台的组合物和方法

专利名称：用于细胞培养和组织培养平台的组合物和方法
本申请要求于2003年10月10日提交的美国专利申请系列号60/510,358和60/510,348的优先权，并将其全部内容加入本发明作为参考。
背景技术：
发明领域本发明一般性地涉及通过使用细胞培养法体外生长各种哺乳动物细胞的改进的方法，和新的细胞培养表面组合物以及应用的方法。
现有技术的描述已经建议将细胞移植作为用于各种治疗需要的全体器官替换的备选方法，所述的治疗需要包括眼、脑、肝、皮肤、软骨和血管中的疾病治疗。例如见JP Vacanti等，J.Pediat.Surg.，Vol.23，1988，pp.3-9；PAebischer等，Brain Res.Vol.488，1998，pp.364-368；CB Weinberg和E.Bell，Science，Vol.231，1986 pp.397-400；IV Yannas，CollagenIII，ME Nimni，ed.，CRC Press，Boca Raton，1988；GL Bumgardner等，Hepatology，Vol.8，1988，pp.1158-1161；AM Sun等，Appl.Bioch.Biotech.，Vol.10，1984，pp.87-99；AA Demetriou等，Proc.Nat.Acad.Sci.USA，Vol.83，1986，pp.7475-7479；WT Green Jr.，Clin.Orth.Rel.Res.，Vol 124.1977，pp.237-250；CA Vacanti等，J.Plas.Reconstr.Surg.，1991；88753-9；PA Lucas等，J.Biomed.Mat.Res.，Vol.24，1990，pp.901-911。在组织培养中产生人细胞系的能力会提高将细胞移植作为治疗模型以恢复丧失组织功能的前景。能够产生从神经嵴组织中产生人培养的细胞系是非常重要的，因为源自其的组织或者器官通常不能在个体达到成年期后从损伤中自我修复。
传统的用于细胞体外培养的组织培养实验室器皿通常被涂布有负电荷以增强培养中哺乳动物细胞的粘附和一些时候的增殖。但是，用常规的组织培养表面来实现哺乳动物神经元细胞的令人满意的粘附、维持、和增殖在传统上是最为困难的。已经通过加入胶原凝胶层或者将大鼠EHS肿瘤细胞分泌的细胞外基质沉积到组织培养板和皿上来促进神经细胞粘附和增殖进行了改进。然而，由于存在材料不得不在接种细胞前即刻被铺到培养物表面这一缺点而妨碍了这些技术的应用。
使用生物聚合物载体来支持粘附、生长、并最终作为载体来在移植过程中携带这些细胞，对于细胞替换治疗、特别在衰老过程中通常被损坏的源自神经嵴的脑和眼后部的细胞替换治疗的成功是重要的。存在7种一般类别的生物聚合物多核苷酸类、聚酰胺类、多糖类、聚异戊二烯类、木素、多聚磷酸盐/酯类、和聚羟基烷羧酸盐/酯类。见例如美国专利6,495,152。生物聚合物的范围包括从IV胶原到聚硅氧烷组合物，其表面嵌有碳颗粒，或者其被伯胺和任选的肽处理，或者其被伯胺或者含有羧基的硅烷或者硅氧烷共处理(美国专利4,822,741)，或者例如，其它修饰的胶原是已知含有天然软骨材料的(美国专利6,676,969)，所述的天然软骨材料已经经历了脱脂和其它处理而只剩下II型胶原材料和氨基葡聚糖，或者备选地将纯化的II型胶原的纤维与氨基葡聚糖和任何其它所需添加剂混和。这些额外的添加剂可以，例如，包含用来协助软骨细胞对II型胶原纤维的粘附作用的软骨粘连蛋白或者锚蛋白II，和生长因子例如软骨诱导因子(CIF)，胰岛素样生长因子(IGF)和转化生长因子(TGFβ)。
在本发明出现前，从神经嵴或者个体神经元培养哺乳动物或者人神经组织并使其体外生长和分裂是不可能的。
发明简述本发明的一个方面公开了用碳血浆的稳定层涂布组织培养实验室器具的方法，所述的碳血浆最优选为DLC，其能够增强神经细胞粘附和生长并且可以提供仪器的预先准备好的供应(ready supply)以成功进行这些细胞类型的组织培养。
已知来自所述神经嵴源或者特别是神经元的人或者哺乳动物细胞呈现出两种不利的状态。一是它们通常在体内或者在组织培养条件下不复制，二是它们对常规细胞培养物表面的粘附不大好。通过用被称为钻石样碳(DLC)的碳血浆涂布表面，发明者已经发现神经元会容易地粘附到培养物表面并且呈现增殖应答。
DLC膜的机械和摩擦学特性与钻石的这些特性非常类似(空气中的摩擦系数大约为0.1，硬度达到大约80GPa，弹性模量接近600GPa)。此外，这些膜在最侵蚀性的环境中是化学上惰性的，而且可以以接近于钻石密度的密度沉积。但是，与碳汽相沉积相比，钻石、DLC膜通常在室温下产生，这使得它们在无法经历高温的基材的应用中非常有吸引力。
本发明公开了DLC涂层到生物聚合物表面的沉积，其又依次支持人和哺乳动物神经元、以及源自神经嵴的其它类型细胞的粘附和生长。
本发明的一个目的是产生一个用于神经元细胞和神经嵴源细胞的体外生长和维持的特化的组织培养平台，以用于细胞系增殖目的和进行试验。DLC涂布的本发明的产物包括组织培养皿、烧瓶、载玻片、滤室，聚合物和玻璃珠，板，和块。所述的涂层可以被沉积到塑料、玻璃、合成的和天然的生物聚合物，和金属上。所述的DLC涂层可以被添加到其它类型的涂层例如由培养的牛角膜内皮细胞所分泌的细胞外基质(ECM)、粘附分子涂层、和生长因子涂层的顶上以产生用于特定人或者哺乳动物细胞生长的改进的产物。
此外，本发明所使用的生物聚合物可以是天然或者合成来源的。天然生物聚合物包含胶原和其它已知的聚合物质。对于合成的聚合物，它们可以是丙烯酸的及其衍生物或者共聚物例如聚甲基丙烯酸甲酯，聚-N-异丙基丙烯酰胺或者聚-2-羟基甲基丙烯酸酯，聚乙烯醇及衍生物及共聚物。所述的生物聚合物可以是薄板或者是微颗粒形式。为了增强所述生物聚合物的生长支持特性，可以将粘附或生长促进因子在合成过程中嵌入或者整合到其组合物中。此外，适合于支持含有半固体生物聚合物的神经细胞的生长和复制的三维生长介质也可以被DLC涂布以提高其支持神经元生长和维持的能力。所述的生物聚合物还可以含有壳聚糖或者藻朊酸钠这些“maypolymer”。
通过对下面优选实施方案的详细描述，本发明的这些和其它目标，以及其许多伴随的益处，将变得更明朗。
发明详述在描述本发明的优选实施方案的时候，为了清楚起见采用了特定的命名学。但是，本发明并不意欲被这些所选择的特定的术语所限，而且应该理解每个特定的术语包括所有以类似方式操作来实现类似目的的技术等价物。
本发明所描述的方法允许用DLC和类似的涂层对聚合物表面进行涂布，从而使得其可被用作衍生自神经嵴源的细胞的载体。生物聚合物可以是生物可降解的部分。生物聚合物可以以薄板、微颗粒，或者半固体块形式存在。使用血浆枪来涂布生物聚合物，所述的血浆枪将在目的培养物表面沉积一层厚度为200-400的碳血浆薄层。
与钻石样(DLC)涂层一样，无定形碳氮化物(C-N)膜可以是非常坚硬且抗磨损的。它们可以作为候选物来解决全部髋关节置换中无菌松弛(aseptic loosening)的问题。Du等已经报道用扫描电镜研究了器官培养物中的成骨细胞在硅、DLC涂布的硅、和无定形C-N膜沉积的硅上的形态学表现。硅晶片(silicon wafers)上的细胞能够粘附，但是不能在粘附之后扩展。相反，在DLC涂层和无定形C-N膜上，细胞粘附、扩展并增殖而对细胞生理学方面则并未有明显损害。细胞在涂层和膜上的形态学发育与在对照中的细胞类似。这样的结果支持DLC涂层的生物相容性，并且对本发明中无定形C-N膜的潜在生物医学应用是鼓舞人心的(C.Du等，Biomaterials.1998 Apr-May；19(7-9)651-8)。
DLC涂布过程如下血浆装置由下列部分组成由Lawrence Berkeley NationalLaboratory，Berkeley，CA生产的真空弧形血浆枪，其以重复脉冲方式运作从而将高电功率和热负荷相关问题最小化。装备有碳负极的血浆枪形成了纯碳血浆的浓密的羽状物(plume)，其具有大约20eV的定向流能(streaming energy)。将血浆注射入一个90°的磁性滤器(弯曲的电磁线圈)以从负极移除所有颗粒材料，随后将其转运过一个用来平化辐射形血浆分布的大的永久磁多孔构型。通过这种方式，会使得碳血浆沉积在大的沉积区域范围内在空间上是均质的。
为了进一步增强膜的均匀性，将要被DLC涂布的基质放置于缓慢旋转的盘上，从而消除了方位角不均一性。所描述的装置被用来形成厚度为大约2-4000，优选约200-400的DLC膜。
为了提高生物聚合物支持细胞生长或者粘附的能力，含有一种或者多种下列物质的粘附混合物可以在合成过程中被嵌入或者整合到其组合物中浓度范围为1μg-500μg/ml聚合物胶的纤连蛋白，浓度范围为1μg-500μg/ml聚合物胶的层粘连蛋白，浓度范围为0.1μg-100μg/ml聚合物胶的RGDS，浓度范围为1ng-500ng/ml聚合物胶的缀合了聚卡波非(polycarbophil)的bFGF，浓度范围为10ng-1000ng/ml聚合物胶的缀合了聚卡波非的EGF，浓度范围为1ng-1000ng/ml聚合物胶的NGF，和浓度为范围为1μg-500μg/ml聚合物胶的硫酸肝素。
在薄板或者微颗粒形式中，在一个优选的实施方案中，涂布的生物聚合物被用作用于神经细胞生长的携带者和在细胞移植步骤中用于细胞传递的载体。半固体聚合物块形式可以与集成电路芯片或者CCD芯片偶联被用作神经细胞维持装置来发挥神经刺激监测器的功能。可以通过用培养的牛角膜内皮细胞沉积的细胞外基质涂布并随后铺上DLC涂层，来进一步改善涂布的表面。
实施例1用DLC涂布板形式的生物聚合物生物聚合物板可以是任何尺寸的，优选将本发明尺寸为大约2cm×2cm的生物聚合物板固定到一个转动盘上，该盘被依次设立在DLC涂布室中一个缓慢旋转马达的顶部。该血浆设备将会通过具有大约20eV的定向流能的喷射枪产生纯碳血浆的浓密的羽状物。血浆被注射入90°磁性滤器中以去除所有颗粒材料来形成高质量、无氢的钻石样碳。当被转运通过用来平化辐射形血浆分布的大的永久性磁多孔构型的时候，碳血浆沉积将会在一个很大的沉积区域中被在空间上均质化。当碳血浆羽状物接近持有聚合物板的缓慢旋转的盘的时候，DLC的均匀膜将会涂布该板的表面。该板可以被用于生长许多种类的细胞，而且优选是神经细胞，其或者在UV放射或者70％酒精清洗而消毒后作为细胞移植的载体。
实施例2用DLC涂布以微颗粒形式的生物聚合物将生物聚合物微颗粒放置到特化的旋转室中，碳血浆的羽状物如实施例1所描述的那样生成。当旋转室以垂直轴方向缓慢旋转的时候，血浆枪被用于将DLC喷雾引入室中，这样，微颗粒被连续地从顶部抛到底部从而使得碳血浆有机会被以均匀的方式沉积到每个微球的全部表面区域。该过程被持续大约2-3个小时的时间来确保均匀和完成全部颗粒表面的覆盖。
实施例3在合成过程中将粘附或者生长促进因子嵌入或者整合到生物聚合物的组合物中并随后用DLC涂布在合成过程中，可以将粘附或者生长促进因子嵌入或者整合到本发明的生物聚合物的组合物中，所述的因子包含下列中的一种或者多种浓度范围为1μg-500μg/ml聚合物胶的纤连蛋白，浓度范围为1μg-500μg/ml聚合物胶的层粘连蛋白，浓度范围为0.1μg-100μg/ml聚合物胶的RGDS，浓度范围为1ng-500ng/ml聚合物胶的缀合了聚卡波非的bFGF，浓度范围为10ng-1000ng/ml聚合物胶的缀合了聚卡波非的EGF，浓度范围为1ng-1000ng/ml聚合物胶的NGF，和浓度为范围为1μg-500μg/ml聚合物胶的硫酸肝素。将生物聚合物随后制备成薄板或者半固体块(bloc)，如前面实施例1中描述的那样来实现DLC的沉积。或者可以将聚合物制备成微颗粒或者球体，用前面实施例2中描述的那样来实现DLC的沉积。
实施例4用培养的牛角膜内皮细胞沉积的细胞外基质涂布生物聚合物并随后用DLC涂布板或者微颗粒在将DLC沉积到培养物表面之前，可以首先用细胞外基质(ECM)涂布生物聚合物板和微颗粒块。为了实现这一目的，将牛角膜内皮细胞(BCE)以低密度(大约2000-150,000细胞/ml，优选大约20,000细胞/ml)接种到板或者块的表面，或者允许其粘附到微颗粒的表面。将BCE细胞保持在含有DME-H16的培养基中，所述的培养基被补充有10％牛血清，5％胎牛血清，2％葡聚糖(40,000MV)，和50ng/ml的bFGF。将细胞在37℃下10％的CO2中培养7天，期间每隔一天加入浓度为50ng/ml的bFGF。通过用20mM氢氧化铵处理5分钟所述的聚合物板、块或者微颗粒来移除BCE细胞。随后，用足量的PBS清洗10遍带有细胞外基质涂层的生物聚合物。干燥后，如先前描述在实施例1中的那样对涂布有ECM的聚合物板或者块进行DLC沉积，而如先前描述在实施例2中的那样对涂布有ECM的微颗粒进行DLC沉积。在顺序涂布ECM和DLC后，所述的聚合物板、块、或者微颗粒被通过UV辐射或者酒精清洗来灭菌，并用于神经细胞生长或者作为细胞移植的载体。
实施例5包含生物聚合物的基质，所述生物聚合物具有电连接到集成电路的神经元在合成过程中，可以将粘附或者生长促进因子嵌入或者整合到本发明的生物聚合物的组合物中，所述的因子包含下列中的一种或者多种浓度范围为1μg-500μg/ml聚合物胶的纤连蛋白，浓度范围为1μg-500μg/ml聚合物胶的层粘连蛋白，浓度范围为0.1μg-100μg/ml聚合物胶的RGDS，浓度范围为1ng-500ng/ml聚合物胶的缀合了聚卡波非的bFGF，浓度范围为10ng-1000ng/ml聚合物胶的缀合了聚卡波非的EGF，浓度范围为1ng-1000ng/ml聚合物胶的NGF，和浓度为范围为1μg-500μg/ml聚合物胶的硫酸肝素。将生物聚合物随后制备成薄板或者半固体块，如前面实施例1中描述的那样来实现DLC的沉积。或者可以将聚合物制备成微颗粒或者球体，如前面实施例2中描述的那样来实现DLC的沉积。
在DLC涂布的基质上，集成电路或者芯片已经就位。如描述在Zeck，G.& Fromherz，Proc.Nat.Acad.Sci.，98，10457-10462，(2001)中所述。神经细胞将被放置到具有DLC涂层的硅片上，随后这些神经细胞被微塑料钉(peg)原地圈起来。附近的细胞将会生长到彼此相连并与该片相连。每个神经细胞下的刺激物将会产生会引发穿过细胞的电脉冲的电压变化。施加于片的电脉冲将会从一个神经细胞传到另一个，并传回片以关闭(trip)硅开关。
实施例6在组织培养实验室器具的培养物表面的DLC沉积当使用平培养表面如皿，滤器衬垫(filter insert)，室载玻片，板，和块的时候，可以将这些器具培养表面向上地放置在真空室中呈现给血浆枪，并且如前所述地进行涂布操作。当使用微载体珠的时候，需要使它们在室中流动以确保其所有面都被均匀地涂布。对于封闭表面例如烧瓶或者管，可以将一种特殊修饰过的血浆枪插入到该容器中并涂布目的表面。厚度为大约20-约4000，优选约200-400的均匀的DLC薄层将被沉积到培养物表面。随后用UV辐射或者酒精冲洗来灭菌产物，包装、密封并储存上架直至使用。
实施例7用培养的牛角膜内皮细胞分泌的ECM顺序涂布培养物表面并随后DLC沉积在该实施方案中，将牛角膜内皮细胞的稀疏培养物(sparse culture)(大约1000-约50,000细胞/ml，优选2000-5000细胞/ml)接种到所需实验室器具的培养表面，所述器具包括皿、烧瓶、管、滤器衬垫、室载玻片、微载体珠、辊瓶(roller bottle)、细胞收集器、片、和块。将细胞保持在含有DME-H16的培养基中，所述的培养基被补充有10％牛血清，5％胎牛血清，2％葡聚糖(40,000MV)，和50ng/ml的bFGF。将牛角膜内皮细胞培养7-10天直至汇合，期间每隔一天加入浓度为50ng/ml的bFGF。然后去除培养基，用充分的20mM氢氧化铵的蒸馏水溶液处理细胞3-30分钟。随后，用足量的PBS清洗表面10遍以去除残留的氢氧化铵，在无菌层流通风橱中干燥。随后如前所述在胞外基质的顶部进行DLC的涂布。随后用UV辐射或者酒精冲洗来灭菌产物，包装、密封并储存上架直至使用。
实施例8DLC沉积后顺序向培养物表面涂布粘附或者生长促进剂在该备选的实施方案中，一种或者多种粘附或者生长促进剂包括浓度范围为1μg-500μg/ml纤连蛋白，浓度范围为1μg-500μg/ml层粘连蛋白，浓度范围为0.1μg-100μg/mlRGDS，浓度范围为1ng-400ng/ml缀合了聚卡波非的bFGF，浓度范围为10ng-1000ng/ml缀合了聚卡波非的EGF。所述的粘附或者生长促进剂将被添加到培养物表面，并随后在4℃下温育20分钟-2小时。随后用PBS清洗表面3遍并在无菌层流通风橱中干燥。随后在培养物表面上的粘附或者生长促进剂涂层的顶部用DLC层沉积产品。而后用UV辐射或者酒精冲洗来灭菌实验室器具，包装、密封并储存上架直至使用。
已经对本发明进行了描述，对于本领域技术人员来说，很容易对本发明做出许多修饰而无需离开由所附权利要求所限定的本发明主旨。
在此将上文引用的美国专利，专利申请以及所有其它参考文献的内容全文加入本说明书作为参考。
权利要求
1.一种用于细胞生长和粘附的改进的表面，其包含涂布有高质量、无氢的钻石样碳表面的生物聚合物。
2.权利要求1的改进的表面，其中的生物聚合物是可生物降解的
3.权利要求1的改进的表面，其中的生物聚合物是板的形式。
4.权利要求1的改进的表面，其中的生物聚合物是微颗粒的形式。
5.一种在培养物中生长神经元的方法，其包含在涂布有高质量、无氢的钻石样碳表面的生物聚合物上接种和生长神经元。
6.权利要求5的方法，其中的生物聚合物是可生物降解的。
7.权利要求5的方法，其中的生物聚合物是板的形式。
8.权利要求5的方法，其中的生物聚合物是微颗粒的形式。
9.权利要求1的改进的表面，其中的生物聚合物已经被在其合成过程中嵌入或者整合入了粘附剂，该粘附剂包含下列的一种或者多种层粘连蛋白、纤连蛋白、RGDS、缀合了聚卡波非的bFGF、缀合了聚卡波非的EGF，和硫酸肝素。
10.一种在培养物中生长神经元的方法，其包含在使用权利要求9的方法制备的生物聚合物上接种和生长神经元。
11.一种用来检测神经细胞信号的仪器，其包含a)生物聚合物单元，其具有在它的合成过程中被嵌入或者整合入了粘附剂，所述的粘附剂包含下列的一种或者多种层粘连蛋白、纤连蛋白、RGDS、缀合了聚卡波非的bFGF、缀合了聚卡波非的EGF，和硫酸肝素或者神经生长因子，其足以使得神经的或者神经细胞以低密度被移植到所述的单元内来增殖和发送神经突起；b)集成电路芯片或者电荷偶联装置，其具有一种为所述神经突起或者树突制造电连接的机构；c)用来测量来自神经元的电信号的检测机构；和d)用于将所述的芯片粘附到检测机构的机构。
12.权利要求11的仪器，其中的生物聚合物单元是独立的。
13.权利要求11的仪器，其中的生物聚合物单元是半固体的。
14.权利要求11的仪器，其中的集成电路芯片或者电荷偶联的装置在其合成过程中已经被在其表面涂布了包含一种或者多种神经生长因子或者钻石样碳的粘附剂，以增强神经突起或者树突与所述的芯片之间的电接触。
15.一种适于支持神经细胞生长和复制的三维生长介质，其包含能够支持神经元生长的半固体生物聚合物。
16.权利要求15的生长介质，其还包含“May Polymer”。
17.权利要求16的生长介质，其中所述的“May Polymer”在其合成过程中已经被嵌入或者整合入了粘附剂，所述的粘附剂包含下列的一种或者多种层粘连蛋白、纤连蛋白、RGDS、缀合了聚卡波非的bFGF、缀合了聚卡波非的EGF，和硫酸肝素或者神经生长因子，其足以使得神经的或者神经细胞以低密度被移植到所述的单元内来增殖和发送神经突起。
18.权利要求17的生长介质，其中缀合了聚卡波非或者硫酸肝素的bFGF的浓度为大约50μg/mL，缀合了聚卡波非或者硫酸肝素的NGF的浓度为大约50μg/mL，层粘连蛋白的浓度为大约500μg/mL并且RGDS的浓度为大约500μg/mL。
19.一种适于支持神经细胞生长和复制的三维生长介质，其包含能够支持神经元生长的、涂布了钻石样碳的半固体生物聚合物。
20.权利要求19的生长介质，其还包含“May Polymer”。
21.权利要求20的生长介质，其中所述的“May Polymer”在其合成过程中已经被嵌入或者整合入了粘附剂，所述的粘附剂包含下列的一种或者多种层粘连蛋白、纤连蛋白、RGDS、缀合了聚卡波非的bFGF、缀合了聚卡波非的EGF，和硫酸肝素或者神经生长因子，其足以使得神经的或者神经细胞以低密度被移植到所述的单元内来增殖和发送神经突起。
22.权利要求21的生长介质，其中所述的生物聚合物被制作成珠、板、或者微颗粒的形状。
23.一种将神经元移植到受体宿主中的方法，其包含将目的神经元接种到权利要求19的生长介质，使所述神经元生长到足够的密度，并将在所述生长介质中的所述神经元植入所述宿主。
24.一种适于支持神经细胞生长和复制的三维生长介质，其包含能够支持神经元生长的、涂布了BCE-ECM的半固体生物聚合物。
25.一种制造权利要求24的生长介质的方法，包含a)将适于其生长的培养介质中的一群牛角膜内皮(BCE)细胞以低密度接种到所述的三维生长介质中；b)使所述的BCE细胞生长至汇合；和c)将所述介质吸出并且用氢氧化铵处理所述的三维生长介质足够长的时间以移除所述细胞。
26.一种适于支持神经细胞生长和复制的三维生长介质，其包含能够支持神经元生长的、涂布了BCE-ECM和钻石样碳的半固体生物聚合物。
27.权利要求26的生长介质，其还含有“May Polymer”。
28.权利要求27的生长介质，其中所述的“May Polymer”在其合成过程中已经被嵌入或者整合入了粘附剂，所述的粘附剂包含下列的一种或者多种层粘连蛋白、纤连蛋白、RGDS、缀合了聚卡波非的bFGF、缀合了聚卡波非的EGF，和硫酸肝素或者神经生长因子，其足以使得神经的或者神经细胞以低密度被移植到所述的单元内来增殖和发送神经突起。
28.权利要求26的生长介质，其中所述的生物聚合物被制作成珠、板、或者微颗粒的形状。
29.具有适于诱导细胞生长和粘附的涂层的实验室仪器，该仪器具有内表面和外表面，其中内表面是与细胞和细胞介质接触的表面，而且所述仪器的所述内表面被涂有钻石样涂层的膜。
30.权利要求29的仪器，其选自由细胞培养皿，平皿，组织培养烧瓶，板，瓶，载玻片，滤室，玻片室，辊瓶，收集器和管组成的组。
31.具有适于诱导细胞生长和粘附的涂层的实验室仪器，其包含在至少一种另外的涂层上用钻石样涂层的膜涂布所述的仪器。
32.权利要求31的仪器，其中的涂层是细胞外基质。
33.权利要求32的仪器，其中的涂层是BCE-ECM。
34.一种涂布适用于诱导细胞生长和粘附的实验室仪器的方法，其包含将钻石样涂层的膜施用于内表面。
35.权利要求34的方法，其还包含首先用至少一种另外的涂层例如BCE-ECM涂布所述仪器的内表面，随后用钻石样涂层涂布。
36.依照权利要求34的方法制造的仪器。
37.依照权利要求35的方法制造的仪器。
38.一种用于细胞生长和粘附的改进的表面，其包含涂布有高质量、无氢的钻石样碳表面的合成的生物聚合物。
39.权利要求38的改进的表面，其中合成的聚合物是丙烯酸聚合物及其衍生物或者共聚物例如聚甲基丙烯酸甲酯，聚-N-异丙基丙烯酰胺或者聚-2-羟基甲基丙烯酸酯，或者聚乙烯醇及其衍生物和共聚物。
全文摘要
本发明描述了一种用钻石样碳(DLC)涂布聚合物表面以使其被用作衍生自神经嵴源的细胞(优选形成树突的神经细胞)的载体的方法。被DLC涂布的生物聚合物包括可生物降解的聚合物和其它可移植的生物聚合物以作为载体系统用于将细胞移植到身体的各部分，包括脑、眼、中枢和周围神经系统、肺、肝脏、脾、肾、和骨及软骨。所述的生物聚合物可以是板的形式或者微颗粒形式，而且可以在其合成过程中被嵌入或者整合入粘附或者生长促进剂以增强并支持神经细胞的粘附和生长。这种涂布方法还可以增加其它涂布制剂例如培养的牛角膜内皮细胞分泌的细胞外基质(ECM)，以及粘附分子例如纤连蛋白、层粘连蛋白和RGDS。涂布步骤可以是连续的过程，其中DLC层被添加到ECM涂布表面或者粘附因子涂布表面的顶部。
文档编号C12N5/00GK1910272SQ200480037074
公开日2007年2月7日 申请日期2004年10月8日 优先权日2003年10月10日
发明者吕革明 申请人:细胞生物工程公司