专利名称：一种产漆酶的灵芝菌株的制作方法
技术领域：
本发明涉及生化领域，具体涉及一种发酵漆酶的真菌菌株。
背景技术：
漆酶(Laccase, EC1. 10. 3. 2)是一类含铜的多酚氧化酶，主要包括植物漆酶和真菌漆酶； 前者主要催化底物的氧化聚合，与植物伤口保护等有关[雷福厚等(2003)中国生漆，2003(1): 4-7];后者主要在木腐菌中发现，能促进木质素等底物的降解[Bajpai (1999) Biotech Prog， 15:147-157;涂宁宇等(2006)造纸科学与技术，25:27-31]。真菌漆酶的用途十分广泛。在 木材加工中，用漆酶处理促使表面胶合，可替代胶合剂；在造纸工业中，漆酶用于漂白纸张， 降低纸浆硬度、降低化学品用量和降低能耗以及降低废液中有机氯含量；在食品业中，漆酶 用于去除啤酒和果汁混浊；在纺织业中，漆酶用于脱色、漂白和去除木质素；在环境保护中， 漆酶用于污染物脱毒、土壤修复以及有机磷农药分解等。因此，漆酶具有极大的应用潜力 [Bourbonnais等(1997) Appl Environ Microbial, 63:4627-4632;王国栋等(2003)植物学 通报，20:469-475]。
尽管漆酶的用途广，但产量的不足极大地限制了其潜能的发挥。目说有关漆酶的研究多 是围绕提高漆酶的产量而展开的，如筛选优良的产漆酶菌株或构建基因工程菌，探索最佳的 产漆酶培养条件，以期能进行工业化生产。近十几年尤其是近五六年来，这方面的研究取得
了一定的进展，然而仍存在着不少问题多数试验菌株在人工和天然培养基上生长时的发酵 周期长、不易操作，产酶能力弱，且往往需要有毒或昂贵的诱导剂，不环保，致使利用现有 菌种生产成本高，限制了漆酶的产业化进程。
灵芝(fe/wArma)是一类寄生在树木上的真菌，能产生漆酶，将所寄生树木的木质素消 化。关于灵芝的研究主要围绕着其药用价值和保健功能这两个方面展开，而关于灵芝漆酶的 研究尚不多见。国家知识产权局于2007年3月28日公开了一项发明专利申请"一种灵芝漆 酶的清洁高效生成方法"(申请号200610096638. 5)，该申请涉及一种灵芝漆酶的生产方法， 该方法利用树舌灵芝ST (CCTCC N0.M206100)在含有玉米粉、粮食麸皮和花生饼粉的培养基 中发酵5天，获得酶活为9000U/L的灵芝漆酶。国外也有关于利用灵芝生产漆酶的研究，如 Trevor M等人利用fe/ ot/e，a ao^Der^y/ 7液体发酵14天，获得酶活达34000 U/L (ABTS法) 的漆酶[Songulashvili G et W (2006) Biotechnol Lett 28:1425-1429]。虽然上述方
法利用灵芝发酵漆酶的产量有较大的提高，但是离产业化生产仍有相当的距离。
发明内容
本发明的目的是提供一种产漆酶的灵芝菌菌株。
本发明所提供的灵芝菌菌株是韦伯灵芝TZC1 (fe/7oofe/y^ we力erj'朋y/z TZC1),己于2008 年9月1日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(简称CGMCC)，保藏号为 CGMCC No. 2648。
本发明韦伯灵芝TZC1是从野生灵芝中分离出来的，经形态学和分子鉴定为韦伯灵芝 fe"ocfeme/bery朋咖(BRES & Henn. ex Sacc. ) Steyairt。依据《中国真菌志，第十八巻， 灵芝科》(2000)、《中国药用真菌图鉴》(1987)和《中国灵芝图鉴》(2005)对本发明菌株进 行形态学检验，其宏观特征和显微特征符合韦伯灵芝fe/ oofe/^a ^6en'a77"瓜(BRES & Henn. ex Sacc. ) Steyarrt种的特征范围。对从本发明菌株所产生的菌丝提取的DNA进行PCR扩增、 测序和序列比对，结果表明韦伯灵芝TZC1的ITS序列(如SEQ NO. 1所示)与韦伯灵芝的同 源性达99.9%;但TZC1的Mn-S0D基因的部分序列(如SEQN0.2所示)与韦伯灵芝的同源性 仅为96%。 .
本发明所述的韦伯灵芝TZC1在液体产酶基础培养基中发酵，可获得酶活高达46,780U/L (ABTS法检测)的漆酶，比已经报道的最高的灵芝漆酶活性34，000U/L高出26.4M。所述的 液体产酶基础培养基每升中含有马铃薯200g，葡萄糖20g， KH2P043g， MgS(V7H20 1.5g， 维生素Bi2mg，酵母膏5g和70mL微量元素溶液，余量为水，pH4.8;其中所述的微量元素 溶液是指含有MgS04.7H20 3g/L， MnS04.H20 0.5g/L, NaCl lg/L， FeS04.7H20 0.1g/L， CoCl2 0.1g/L， ZnSO4.7H2O0.1g/L， CuS04.5H20 0.1g/L， KA1(S04)2.12H20 0. 01g/L， H3B030. 01g/L， Na2Mo04 2H20 0. Olg/L的水溶液。
本发明所述的韦伯灵芝TZC1可以在上述培养基中发酵获得，也可以在下述专用培养基发 酵获得麸皮15~35g/L，葡萄糖5~25g/L，酵母粉l~10g/L， KH2P04 l~5g/L， MgSO40.5~5 g/L, VBil 5mg/L， Cu2+0.1~5wmol/L， Zn2+0.1~5 H mol/L， Mn2+5 100u mol/L，其余为水。将本 发明所述的韦伯灵芝TZC1菌丝按10%接种量接种于上述培养基中，在20~32°C、 120~250 r/min 条件下振荡或搅拌培养6天，可获得酶活高达8620,830U/L (ABTS法检测)的漆酶。
本发明韦伯灵芝TZC1发酵所得的漆酶在pH值2. 64 5. 0范围内活性较为稳定，在pH 值为4.2时酶活最高。本发明韦伯灵芝TZC1发酵所得漆酶的酶促反应温度范围较广，其最适 温度为50 60°C， 70。C时为最高酶活的81. 7%， 20°C、 3(TC及4(TC均可达到最高酶活的88% 以上，10°。为最高酶活的65%。同时，这种漆酶具有较好的热稳定性，在40、 50、 60、 70和 75°C、 80。C下反应0.5h，其酶活分别为原酶活的99.1%、 96.2%、 93.7%、 67.2%、 6.5%和0; 在60。C时，反应1、 1.5、 3.5和4h的残存酶活分别为69.1%、 68.2%、 47.1%和40.1%;在70°C时，反应l、 1.5和2h残存酶分别为6.9。/。、 3.4%禾卩1.6%。金属阳离子对所述漆酶的活性有较 大的影响，如Mg"、 Cu2+、 K+和Hg+对其活性有激活作用，而A产、Fe2+、 Zn2+、 Mn2+、 Ba2+ 则有抑制作用，尤其是F^+可使本发明所述的漆酶完全失活。
本发明TZC1发酵所分泌的漆酶能促进木质素的分解，对印染染料脱色具有显著的促进 作用，对纸浆脱墨也具有一定的促进作用。
图1是温度与本发明漆酶酶活的关系曲线图。 图2是反映本发明漆酶热稳定性的曲线图。
图3是本发明漆酶在60°C和70°C时反应其酶活随时间变化的曲线图，其中*表示60°C ， "^"表示7(TC。
图4是本发明漆酶在pH值为3-8的环境中pH值与酶活关系的曲线图。 图5是本发明漆酶在pH值为4-6的环境中pH值与酶活关系的曲线图。 图6是反映本发明漆酶的pH值稳定性的曲线图。 图7是本发明漆酶用于染料脱色的效果图。
具体实施例方式
以下实施例检测酶活的方法均为ABTS法
液体摇瓶培养物取样后以12,000:"/1^11离心101^11，上清液即为待测酶液。酶活测定以2,2'-连氮-二(3-乙基苯并噻唑-6-磺酸)(简称ABTS)为底物，反应体系包括1.5mLpH 5.0醋酸缓冲 液、0.5mL0.5mmol/LABTS (pH 5.0醋酸缓冲液配制)及lmL适当稀释的酶液(以pH 5.0醋 酸缓冲液稀释)，室温下测定反应的前3min内反应液在波长420nm处OD值的增加量，以灭 活酶液做空白对照。将每分钟内生成l^unol反应物所需的酶量定义为一个酶活力单位，以酶 液事先灭活后的反应混合液为对照。定义每分钟转化lpmol的底物所需的酶量为一个酶活力 单位(U))其计算公式
鹏活力(U) 、^x^x酷液禾布释倍数 其中，e 二3.6Xl()4mol,cm"; At: 3min; AOD: 3min内吸光度OD的变化值；V总酶 反应中，反应液的总体积；Vffi:酶反应中，酶液的体积。
例1韦伯灵芝TZC1在液体产酶基础培养基中的发酵
1、菌种分离韦伯灵芝TZC1 (fe/wAr/^ (re6er^/7湖TZCl)子实体经釆用组织分离法分离纯化，再转接于新鲜的综合PDA斜面培养基，于电热恒温培养箱28。C培养6天，挑取 菌丝块以三点接种方法转接到平板上，28。C培养4d，用无菌打孔器将平板菌种制成直径10 mm，厚2mm的菌种塞，备用。
2、 种液培养将菌种塞接种到装有50mL摇瓶种子培养基和10个直径5mm的玻璃珠 的300ml三角锥形瓶中，每瓶接入3个菌塞，在28。C、 160r/min条件下振荡培养4天。
3、 摇瓶发酵培养按10%接种量将摇瓶种子接入装有100mL液体产酶基础培养基的 500mL三角瓶中，在28。C、 160r/min条件下振荡培养。每天定时取样检测漆酶酶活(ABTS 法)，发现摇瓶培养至第6天酶活最高，达到46,780U/L，比已经报道的最高的灵芝漆酶活性 34,000U/L高出26.4%。
上述方法中所用到的培养基配方为
综合PDA斜面培养基马铃薯200g/L，葡萄糖20g/L，KH2PO43g/L，MgS(V7H2O 1.5g/L， 维生素B^mg/L，琼脂15g/L。
摇瓶种子培养基马铃薯200g/L，葡萄糖20g/L， KH2P043g/L， MgS04'7H20 1.5g/L， 维生素B!2mg/L，酵母膏5g/L， pH4.8。
液体产酶基础培养基马铃薯200g/L，葡萄糖20g/L， KH2P04 3g/L， MgS(V7H20 1.5g/L， 维生素Bi 2mg/L,酵母膏5g/L， 70mL/L微量元素溶液，pH4.8。其中所述的微量元素溶液 为含有以下组分的水溶液MgS047H20 3g/L， MnS(VH20 0.5g/L， NaCl lg/L， FeS(V7H20 0.1g/L， CoCl20.1g/L, ZnSO4.7H2O0.1g/L， CuS04'5H20 0.1g/L， KA1(S04)2'12H20 0. 01g/L， H3BO30.01g/L， Na2MoO4.2H2O0.01g/L。 例2韦伯灵芝TZC1在专用培养基培养基中的发酵
1、 菌种分离韦伯灵芝TZC1 『e力eri朋湖TZCl)子实体经采用组织分离法 分离纯化，再转接于新鲜的综合PDA斜面培养基，于电热恒温培养箱28'C培养6天，挑取 菌丝块以三点接种方法转接到平板上，28T:培养4d，用无菌打孔器将平板菌种制成直径10 mm，厚2mm的菌种塞，备用。
2、 种液培养将菌种塞接种到装有50mL摇瓶种子培养基和10个直径5mm的玻璃珠 的300ml三角锥形瓶中，每瓶接入3个菌塞，在28t:、 160 r/min条件下振荡培养4天。
3、 摇瓶发酵培养按10%接种量将摇瓶种子接入装有lOOmL本发明优化的发酵培养基 的500mL三角瓶中，在28。C、 160r/min条件下振荡培养6天后，采用ABTS法测得酶活高达 8620,830U/L，是产酶基础培养基上生产酶活的184倍(是利用fe/700fe，a at/印er^7 液体发 酵253倍)。将培养液离心，除去菌丝球即得到灵芝粗酶液，可以直接应用也可以纯化加工后 再应用。上述方法中所用到的培养基配方为
综合PDA斜面培养基马铃薯200g/L，葡萄糖20g/L， KH2P04 3g/L， MgS04.7H20 1.5g/L， 维生素B! lmg/L，琼脂15g/L。
摇瓶种子培养基马铃薯200g/L，葡萄糖20g/L， KH2P043g/L， MgS04.7H20 1.5g/L， 维生素Bi2mg/L，酵母膏5g/L， pH4.8。
本发明优化的发酵培养基麸皮25g/L，葡萄糖10g/L，酵母粉5g/L， KH2P04 3g/L， MgS041.5g/L， VBi2mg/L， CuS04-5H20 0.5 u mol/L， ZnS04-7H20 0.5 u mol/L， MnS04'H20 50ymol/L，其余为水。
例3韦伯灵芝TZC1在专用培养基培养基中的发酵
1、 菌种分离韦伯灵芝TZC1 (G朋o^m^w6m'"m/w TZC1)子实体经采用组织分离 法分离纯化，再转接于新鲜的综合PDA斜面培养基，于电热恒温培养箱28'C培养6天，挑 取菌丝块以三点接种方法转接到平板上，28'C培养4d，用无菌打孔器将平板菌种制成直径10 mm，厚2mm的菌种塞，备用。
2、 种液培养将菌种塞接种到装有50mL摇瓶种子培养基和10个直径5mm的玻璃珠 的300ml三角锥形瓶中，每瓶接入3个菌塞，在28。C、 160 r/min条件下振荡培养4天。
3、 摇瓶发酵培养按10%接种量将摇瓶种子接入装有lOOmL本发明优化的发酵培养基 的500mL三角瓶中，在28。C、 160r/min条件下振荡培养6天后，将培养液离心，除去菌丝球 即得到灵芝粗酶液，可以直接应用也可以纯化加工后再应用。
上述方法中所用到的培养基配方为
综合PDA斜面培养基马铃薯200g/L，葡萄糖20g/L，KH2PO43g/L，MgSO4'7H2O 1.5g/L， 维生素B, lmg/L，琼脂15g/L。
摇瓶种子培养基马铃薯200g/L，葡萄糖20g/L， KH2P043g/L， MgS(V7H20 1.5g/L， 维生素Bi2mg/L，酵母膏5g/L， pH4.8。
本发明优化的发酵培养基麸皮15g/L，葡萄糖5g/L，酵母粉lg/L， KH2P04 lg/L， MgS04 0.5g/L， VB^mg/L， CuS04-5H20 0.1pmol/L， ZnS04'7H20 O.l^mol/L, MnS04H20 5|imol/L， 其余为水。
例4韦伯灵芝TZC1在专用培养基中的发酵
1、菌种分离灵韦伯灵芝TZC1 (G""otfenw" weZ)en'"mw7 TZC1)子实体经采用组织分 离法分离纯化，再转接于新鲜的综合PDA斜面培养基，于电热恒温培养箱28'C培养6天， 挑取菌丝块以三点接种方法转接到平板上，28'C培养4d，用无菌打孔器将平板菌种制成直径 10mm，厚2mm的菌种塞，备用。2、 种液培养将菌种塞接种到装有50mL摇瓶种子培养基和10个直径5mm的玻璃珠 的300ml三角锥形瓶中，每瓶接入3个菌塞，在28。C、 160 r/min条件下振荡培养4天。
3、 摇瓶发酵培养按10%接种量将摇瓶种子接入装有lOOmL本发明优化的发酵培养基 的500mL三角瓶中，在28。C、 160r/min条件下振荡培养6天后，将培养液离心，除去菌丝球 即得到灵芝粗酶液，可以直接应用也可以纯化加工后再应用。
上述方法中所用到的培养基配方为
综合PDA斜面培养基马铃薯200g/L，葡萄糖20g/L，KH2PO43g/L，MgSO4.7H2O 1.5g/L， 维生素Bi lmg/L，琼脂15g/L。
摇瓶种子培养基马铃薯200g/L，葡萄糖20g/L， KH2P043g/L， MgS04'7H20 1.5g/L，维生 素Bt2mg/L，酵母膏5g/L， pH4.8。
本发明优化的发酵培养基麸皮35g/L，葡萄糖25g/L，酵母粉10g/L， KH2P04 5g/L， MgS04 5 g/L， VBi 5mg/L， CuS04'5H20 5,1/L， ZnS04.7H20 5|amol/L， MnS04-H20 100pmol/L，其余为水。
例5韦伯灵芝TZC1发酵所得漆酶的性能研究
1、 温度对本发明漆酶酶促反应的影响 (1)温度对漆酶活性的影响
让反应体系分别在10°C、 20°C、 30°C、 40°C、 50°C、 60°C、 70°C、 80。C温度下反应3min, 测定酶活力，以酶活最高者为100%计算相对酶活力。由图1可知，本发明所生产的漆酶的酶 促反应温度范围较广，其最适温度为50~60°C， 7(TC时为最高酶活的81.7%， 20°C、 3(TC及 40。C均可达到最高酶活的88%以上，IO'C为最高酶活的65%。 (2)漆酶的热稳定性
将粗酶液分别在0。C、 10°C、 20°C、 30°C、 4CTC、 50°C、 60°C、 70°C、 75°C、 80°C、 90°C 水浴保温30min后，然后迅速冷至室温，测定酶活力，以未保温的酶液的酶活为100%，计算 剩余酶活性，结果如图2所示。进一步，将酶液在6(TC和7(TC的水浴中分别保温lh、 1.5 h 、 2h、 2.5 h 、 3h、 3.5 h、 4h后迅速冷至室温，后按前述方法测定和计算剩余酶活，结果如图3 所示。可见，本发明所产生的漆酶具有较好的热稳定性，不同温度处理30min， 40、 50、 60、 70、 75和80。C的酶活分别为原酶活的99.1。/。、 96.2%、 93.7%、 67.2%、 6.5%和0 (图2)。在 60。C时，反应l、 1.5、 3.5和4h的残存酶活分别为69.1%、 68.2%、 47.1%和40.1%;在70°C 时，反应l、 1.5和2h残存酶分别为6.9。/。、 3.4%和1.6% (图3)。
2、 pH值对本发明漆酶稳定性的影响 (l)pH对漆酶活性的影响分别采用pH为3.0、 4.0、 5.0、 6.0、 7.0和8.0的醋酸缓冲液配制底物和稀释酶液，使酶 液处在不同pH的缓冲液中，测定酶活力，以酶活最高者为100%，计算剩余酶活性。结果表 明，该酶的最合适pH值在5左右(图4)。进一步采用pH为4.0、 4.2、 4.4、 4.6、 4.8、 5.0、 5.2、 5.4、 5.6、 5.8、和6.0的醋酸缓冲液配制底物和稀释酶液，使酶液处在不同pH的缓冲液 中，测定酶活力，以酶活最高者为100%，计算剩余酶活性。结果表明，该酶的最合适pH值 为4.6 (图5)。
(2) 漆酶的pH稳定性
将粗酶液中加入pH值分别为3. 0、 4. 0、 5. 0、 6. 0、 7. 0禾tl 8. 0的醋酸缓冲液，常温下 维持lh后，测定酶活力，以没有经过处理的酶液的酶活为100%，计算剩余酶活性。结果表 明，该酶在pH值为3~5.5时表现出较好的稳定性，pH值为6.0时残余酶活为39.4%， pH值 为7.0残余酶活为18.1%。
3、本发明漆酶在染料脱色中的应用
(1) 酶粗提液准备按10%接种量将摇瓶种子接入装有lOOmL本发明优化的发酵培养基 的500mL三角瓶中，在28°C 、 160r/min条件下振荡培养6天后，将发酵酶液在12000rm/min 的条件下离心2min，取上清，测酶活，备用。
(2) 染料的配制准确称取0.5g染料，用0.2mol/LpH5.0的醋酸缓冲液定容至25ml，浓 度为20mg/ml。反应时的终浓度为200mg/L。染料包括分散蓝2BLN 100%、阳离子蓝X-GRRL 250%、直接湖蓝5B、活性黑HGRF、考马斯亮蓝R250、本胺蓝以及溴酚蓝。
(3) 反应体系各处理的反应总体积为3000|il， pH5.0，反应温度为28'C，反应24h后 照相记录(图7)。 CK: 2970^1醋酸缓冲液(0.2mol/LpH5.0) + 30^1染料;死酶体系2960^1 醋酸缓冲液(0.2mol/LpH5.0) + 30^1染料+ lOpl死漆酶(10U/ml);活酶体系2960nl醋酸 缓冲液(0.2mol/LpH5.0) + 30|^1染料+ 10(il活漆酶(10U/ml); ABTS: 2470^1醋酸缓冲液
(0.2mol/L pH5.0) + 30ul染料+ 0.5ml ABTS (0.5腿ol/L);活酶+ABTS: 2460nl ml醋酸 缓冲液(0.2mol/LpH5.0) + 30^1染料+10^1活漆酶(10U/ml)十0.5mlABTS (O.5mmol/L)。 由图7可以看出，用韦伯灵芝TZC1漆酶处理所示染料，可以使分散蓝、直接湖蓝、活 性黑、苯胺蓝以及溴酚蓝脱色，添加ABTS促进这些染料脱色，并使只有漆酶不脱色的阳离 子蓝活性黑HGRF和考马斯亮蓝R250脱色。
9SEQUENCE LISTING
<110>广州大学
<120> —种产漆酶的灵芝菌株
<160> 2
< 170> Patentln version 3.3
<210> 1 <211> 728 <212> DNA
<213> Ganoderma weberianum TZC1 <400> 1
tcataaattt gtccagacaa ggacggttag aagctcgcca aaacgcttca cggtcgcggc 60 gtagacatta tcacaccgag agccgatccg caaggaatca agctaatgca' tttaagagga 120 gccgaccgaa acacggccga caagcctcca agtccaagcc tacaaaaccc gcaaaggtct 180' gtaagttgaa gatttcatga cactcaaaca ggcatgctcc tcggaatacc aaggagcgca 240 aggtgcgttc aaagattcga tgattcactg aattctgcaa ttcacattac ttatcgcatt 300 tcgctgcgtt cttcatcgat gcgagagcca agagatccgt tgctgaaagt tgtatataga 360 tgcgttscst cgcai3t3C3C 3ttctgst3c tttatsgagt ttgtgst333 cgc3ggc3C3 420 gacgccgctc tacaagctcg gtgaagagac ccgctttacg acgtttgaaa cccacagtaa 480gtgcacaggt gtagagtgga tgagcagggc gtgcacatgc ctcggaaggc cagctacaac 540
ccagtcaass ctcg3taatg atccttccgc aggttceicct acggaaacct tgttacgact 600
tttacttcct ctaaatgacc aagtttgatc aagttctcag cgacagggtg ccgttgccgg 660
ctccccgaag ccaatcccaa gacctcacta agccattcaa tcggtagtag cgacgggcgg 720
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728
<210> 2 <211> 703 <212> DNA
<213> Ganoderma weberianum TZC1 <400> 2
aaggcgtgct cccagatatc gacgccgatg atggggacat gcgagaggag cgggtcctga 60 ttggcggtcg tcgttatctc gagacgcttc gtcgccgggt taagtccctg agtccaaacc 120 3tcc3ctt3g tseiaigcatcc gscgcgsggs sgcscacggc sgggcgsgst gaaaggttcc 180 ggsgctctst cgc3g3gcga tgstttgcgg csgatcgcas tcgcstcttc tctggcgtcs 240 ctgccgcgaa gcacgcatgc atcgcgatcg cggccccgaa gtccctcccg atcgcacacg 300 acagacagaa ggaatgggac ttacgagcca gccccagcca gagccctgga tggcagcagt 360 ggtggcgttg aactccttga tgaagttgtc gacggagccc cagttctgct cgatcgcgga 420
11cttgaggggg ccgtccgcga gggcgccgcc gttgcccttg ccctccgact tggcgggggc 480
gaggttcttc cagaagagcg agtggttgat gtgacctgcg cccgtgcgca gcagattcgt 540
C3tcgcgcgc g3t3g3tc3g tttccgcgag stttactcsc csccgccgtt gsscttgagg 600
gccgactgga gggcgatgcg ctccttgggg gtggaggcct tggcgtaggc ttgctcggcg 660 gcgttgagcg agttgacgta ggtctggtgg tgcttcttgt ggt 703
1权利要求
1、韦伯灵芝TZC1，它在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心的保藏号为CGMCC No.2648。
2、 一种漆酶，该漆酶由权利要求1所述的韦伯灵芝TZC1发酵获得。
3、 一种韦伯灵芝TZC1发酵漆酶的专用培养基，该培养基为水溶液，所述的水溶液的溶 质由以下浓度的组分组成麸皮15~35g/L，葡萄糖5~25g/L，酵母粉l 10g/L， KH2P04 l~5g/L， MgSO40.5 5 g/L， VB' l~5mg/L， Cu2+ 0.卜5 u mol/L， Zn2+ 0.1~5 y mol/L， Mn2+ 5~100 P mol/L。
4、 一种生产漆酶的方法，该方法是将韦伯灵芝TZC1菌丝按10°/。的接种量接种于权利要 求3所述的专用培养基中，在20 32X:、 120~250 r/min条件下振荡或搅拌培养6天，然后将 发酵液离心后取上清即可。
全文摘要
本发明提供了一种产漆酶的灵芝菌株，该灵芝菌是韦伯灵芝TZC1(Ganoderma weberianum TZC1)，它在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心的保藏号为CGMCCNo.2648。本发明韦伯灵芝TZC1在发酵过程中能产生漆酶，所得漆酶的活性可高达8620,830U/L，是现有技术中可达到最高酶活的253倍。本发明韦伯灵芝TZC1发酵所分泌的漆酶在较广的温度和pH值范围内保持较好的活性，能促进木质素的分解，对印染染料脱色具有显著的促进作用。
文档编号C12N1/14GK101638621SQ200810198678
公开日2010年2月3日 申请日期2008年9月23日 优先权日2008年9月23日
发明者周玉萍, 田长恩, 陈琼华 申请人:广州大学