专利名称：甘蔗组培一次成苗快速繁殖方法
技术领域：
本发明属于植物组织培养技术领域，更具体涉及一种甘蔗组培一次成苗的快速繁殖的 方法。
技术背景甘蔗是无性繁殖作物，生产上一直采用茎芽繁殖，公顷用种量达7-10吨，在生长大 田采半茎种苗时年繁殖倍数仅5-8倍，采用一年二繁的方法，繁殖倍数一般也在30倍以 下。种苗繁殖系数低、单位面积种苗用量大导致优良新品种推广速度慢、品种更新困难。 经连续种植多年后，甘蔗常遭受病害侵害，使品质变劣，产量下降，同时也加速了品种退 化。甘蔗组织培养是一种高效的繁殖技术，采用甘蔗幼嫩心叶或茎尖分生组织培养，也是 获得无病种苗的有效途径。传统的甘蔗组培快繁方法，愈伤组织诱导及分化的继代次数多， 变异率较高，操作繁琐，污染机率大；甘蔗腋芽培养和茎尖生长锥培养可有效地降低变异 率，但需经历小苗与丛生苗诱导、增殖培养和生根培养等多次继代。上述两条途径通常要 对材料进行至少4个月的培养，才可分化出苗，耗时长，效率低。因此，迫切需要技术方 法上的改进革新，以节约资源消耗，提高甘蔗组培效率。 发明内容本发明的目的是提供一种甘蔗组培一次成苗的快繁方法，使甘蔗实现从幼嫩心叶和茎 尖诱导愈伤组织到分化成完整或半完整的小蔗苗一次完成，不更换、或只更换一次培养基， 达到快速高效，操作简化，降低变异率，节约成本的目的，为大量生产甘蔗脱毒组培苗奠 定良好的基础。本发明的目的可通过下述技术方案来实现一种甘蔗组培一次成苗的快速繁殖方法，包括外植体的取材及灭菌、接种进行一次成 苗培养、生根培养、炼苗移栽等步骤，其特征在于外植体的取材及灭菌步骤取经灭菌处理15-20min，用无菌水冲洗3-4次的甘蔗茎 尖顶部l-3cm部分或生长点以上不大于8cm的幼嫩心叶，作为脱毒组培用外植体；一次成苗培养步骤:在无菌条件下，将消毒好的外植体切成厚约0.5-2.5mm的圆盘片， 接种于一次成苗培养基上，置于25-32'C的黑暗条件下培养7-10天，然后转入光照条件培养，光照强度2000-2500 Lux，每天光照时间10-16小时，温度25-32。C;光照条件培养 10-30天后，外植体上出现己分化的幼苗及芽点。生根培养步骤将一次成苗培养40-50天后带有少量根系的株高约3-5cm的幼苗转入 生根培养基培养；炼苗移栽步骤将生根培养10-20天且根系达2-3cm的完整小苗，进行炼苗移栽。 在上述方案在，也可以省去生根培养步骤，炼苗移栽步骤改为将一次成苗培养50-70天后将获得的带根的甘蔗完整小苗直接进 行炼苗移栽。以上所述的一次成苗培养基为MS +蔗糖30000mg/L + KT (0.5-1.5)mg/L + NAA (0.5-1.5)mg/L + IAA(l-2)mg/L+琼脂或卡拉胶(6000-8000) mg/L。以上所述的生根培养基为1/2 MS +蔗糖50000mg/L + NAA (0.5-1.5)mg/L + IBA (l-2.5)mg/L。本发明的实质性特点和显著进步在于:利用甘蔗幼嫩心叶和茎尖产生少量的胚性愈伤 组织直接分化成再生植株，不更换、或只更换一次培养基，免去了传统组培方法愈伤组织 需要不断继代诱导，才可分化出苗的步骤。有效地避免了愈伤加繁过程中，变异的出现。更好地保持了原有材料的种性，40-50天左右即可得到带有少量根系的株高约3-5cm的瓶 苗，50-70天左右，获得带根的甘蔗完整小苗。 一段甘蔗梢部经50-70天时间可繁殖出 100-200株种苗，为大量工厂化育苗，提供了有力的保障。利用本发明简化了甘蔗组培苗 生产的程序，节约成本，成苗率高，显著缩短了甘蔗组培苗的生产周期，适用于甘蔗种苗 工厂化快速繁殖。
具体实施方式
通过以下实施例对本发明作进一步的详细说明。实施例一一种甘蔗组培一次成苗的快速繁殖方法，按如下步骤进行1. 外植体的取材及灭菌于5-10月份，晴好天气，取健康甘蔗梢部剥去外层叶鞘后，经0.1%升汞溶液灭菌15-20min，用无菌水冲洗3-4次，取甘蔗茎尖顶部l-3cm部分，及 生长点以上小于6cm的幼嫩心叶，作为脱毒组培用外植体。2. —次成苗培养在无菌条件下，将外植体切成厚约0.5-2.5mm的圆盘片，接种于一次成苗培养基MS +蔗糖30000mg/L + KT (0.5-1.5)mg/L + NAA (0.5-1.5)mg/L + IAA (l-2)mg/L +琼脂7000mg/L，置于26-28'C的黑暗条件下培养7-10天，外植体切口出 现少量色泽洁白，质地结实致密的胚性愈伤组织，然后转入光照条件培养，光照强度 2000-2500 Lux，每天光照时间10-16小时，温度26-28。C。约30-40天后，每块外植体 上可见数十个欲分化的小芽点和3-8个已分化的株高约为3-5cm的甘蔗幼苗。3. 生根培养将一次成苗培养40天后带有少量根系的株高约3-5cm的甘蔗幼苗转入生 根培养基培养，生根培养基为1/2 MS +蔗糖50000111§/1^ +NAA (0.5-1.5)mg/L + IBA (l-2.5)mg/L。4. 炼苗移栽将生根培养约10-20天根系达2-3cm的甘蔗幼苗进行炼苗移栽。 实施例二一种甘蔗组培一次成苗的快速繁殖方法，将实施例一中的步骤3的生根培养省去，步 骤1的外植体的取材及灭菌和步骤2的一次成苗培养与实施例一相同，炼苗移栽步骤是将 一次成苗培养50-70天左右，获得的带根的甘蔗完整小苗直接进行炼苗移栽。
权利要求
1.一种甘蔗组培一次成苗的快速繁殖方法，包括外植体的取材及灭菌、接种进行一次成苗培养、生根培养、炼苗移栽步骤，其特征在于外植体的取材及灭菌步骤取经灭菌处理15-20min，用无菌水冲洗3-4次的甘蔗茎尖顶部1-3cm部分或生长点以上不大于8cm的幼嫩心叶，作为脱毒组培用外植体；一次成苗培养步骤在无菌条件下，将消毒好的外植体切成厚约0.5-2.5mm的圆盘片，接种于一次成苗培养基上，置于25-32℃的黑暗条件下培养7-10天，然后转入光照条件培养，光照强度2000-2500Lux，每天光照时间10-16小时，温度25-32℃；光照条件培养10-30天后，外植体上出现欲分化的芽点和已分化的幼苗；生根培养步骤将一次成苗培养40-50天后带有少量根系的株高约3-5cm的幼苗转入生根培养基培养；炼苗移栽步骤将生根培养10-20天且根系达2-3cm的完整小苗，进行炼苗移栽。
2. 如权利要求1所述的甘蔗组培一次成苗的快速繁殖方法，其特征在于 省去生根培养步骤，炼苗移栽步骤改为将一次成苗培养50-70天后将获得的带根的甘蔗完整小苗直接进 行炼苗移栽。
3. 如权利要求1或2所述的甘蔗组培一次成苗的快速繁殖方法，其特征在于所述的 一次成苗培养基是MS +蔗糖30000mg/L + KT (0.5-1.5)mg/L + NAA(0.5-1.5)mg/L + IAA (l-2)mg/L+琼脂或卡拉胶(6000-8000) mg/L。
4. 如权利要求1所述的甘蔗组培一次成苗的快速繁殖方法，其特征在于所述的生根 培养基是1/2 MS +蔗糖50000mg/L + NAA(0.5-1.5)mg/L + IBA(l-2.5)mg/L。
全文摘要
本发明涉及一种甘蔗组培一次成苗的方法。以健壮甘蔗的幼嫩心叶或茎尖生长锥作为外植体，一次成苗培养40-50天左右获得带少量蔗根的小苗后，将其转入生根培养基中经10-20天的促根处理后，然后进入炼苗和假植阶段。或在一次性成苗培养基中培养50-70天左右，获得根系长势较好的甘蔗完整小苗后直接进入炼苗和假植阶段。本发明不更换、或只更换一次培养基，有效减少了常规甘蔗侧芽或嫩叶诱导愈伤组织及分化过程中多次转接造成的污染，简化了甘蔗组培苗生产的程序，节约成本，成苗率高，显著缩短了甘蔗组培苗的生产周期，适用于甘蔗种苗工厂化快速繁殖。
文档编号C12N5/04GK101401549SQ20081021888
公开日2009年4月8日 申请日期2008年11月4日 优先权日2008年11月4日
发明者何慧怡, 樊丽娜, 邓海华, 陈健文, 齐永文 申请人:广州甘蔗糖业研究所