专利名称：利用Runx2和Osterix促进成骨细胞分化的方法及其应用的制作方法
技术领域：
本发明涉及Runx2和Osterix在制备用于预防或治疗与成骨细胞分化相关的疾病的药物组合物中的应用，在所述药物组合物中，Runx2蛋白的含量小于Osterix蛋白的含量，优选地，Runx2蛋白含量与Osterix蛋白含量的比例为I : N，其中N大于I，例如I : 2、I : 3、至I : 4甚至更低比例，更优选的比例为I : 4。具体地，本发明通过以Runx2表达(或活性)水平小于Osterix的表达(或活性)水平的方式共表达Runx2和Osterix来加速诱导非成骨细胞定向成骨细胞分化或增强成骨细胞的功能。而且根据改变Runx2表达(或活性)水平与Osterix的表达(或活性)水平的比例从而引起成骨细胞分化与功能的变化来有目的地筛选骨病预防或治疗的新药物。
背景技术：
骨疾病有多种。其中骨质疏松就是一个全球性医学难题。据世界卫生组织估计，全世界每年大约发生二百五十万起因为骨质疏松引起的严重骨折，而且这一数字将随着包括我国在内的各国社会的老龄化发展而进一步上升。骨质疏松不仅给人带来痛苦，还给各国社会带来沉重财政负担，因此各国都投入大量人力物力针对骨质疏松预防和治疗进行基础和应用研究。骨质疏松通常在难以察觉的情况下发生，是由于成骨细胞(负责骨形成)和破骨细胞(负责骨吸收)之间的功能性平衡被打破，骨吸收远远超过骨形成而引起的。虽然人们已经能够开发出以抑制骨吸收为目的的骨质疏松治疗药物和方法，但是促进骨形成的有效药物和方法至今只有EliLilly公司开发的，于2002年11月末被美国FDA批准的甲状旁腺激素(parathyroid hormone)(以下简称PTH)注射剂Forteo ,用于治疗严重的骨质疏松。人们为了寻找更多和更有效、方便的治疗方法，迫切需要对成骨细胞分化及其功能的分子机制有充分的了解(Goltzman, 2002 ;Harada and Rodan, 2003 ；Lian and Stein,2003)。临床上修复骨损伤、促进骨折愈合的医疗以及骨组织工程研究开发仍然存在许多理论和实践难题。其中主要问题之一就是受限于不能从其它供体细胞，包括各种干细胞，获得大量的、能强力成骨的细胞来源。因此组织器官工程极为关注成骨细胞的定向诱导、细胞表型稳定、大规模体外扩增和组织工程骨规模化体外构建等的研究内容。但是这种问题没有得到根本的解决。在本领域内，骨形成蛋白(简称BMPs)已经在临床上开展了应用并受到广泛的关注。BMP能够促进非成骨细胞的成骨作用。然而，应用BMP不仅需要使用很大的剂量；也可能对非骨组织的细胞产生不利影响。总之，在这一领域要有所突破，还需要对成骨细胞分化及其功能的分子机制有充分的了解(Phillips and Garcia，2008)。目前，在开发破骨细胞所参与的骨吸收抑制的许多研究都取得了显著进展，迄今为止人们开发了和临床上获准使用的破骨细胞所参与的骨吸收抑制剂。尽管BMPs和PTH(1-34)都被认为是骨形成的促进剂，而且有人筛选到statins这类小分子来诱导BMP的表达从而增强骨形成(Mundy et al.，1999)，但迄今为止临床上还没有找到其它的小分子药物。
成骨细胞分化的细胞途径从多潜能的间充质干细胞开始，经由不成熟的或早期成骨细胞阶段，分化到成熟的功能性的成骨细胞，成骨细胞成熟后被自身分泌的骨基质包埋并进一步转化为骨细胞。成骨细胞分化是受到体内外各种作用的结果，其中，控制分化的关键转录因子起到决定或维持作用(刘文广,等,2003 ;Nakashima and de Crombrugghe,2003)，各种表观遗传机制等进一步调控转录因子引发的细胞分化的分子事件(Schroeder，et al.，2005)。研究表明，核心结合因子α I (Core binding factor α I,Cbfal)是一种关键的转录因子，控制间充质干细胞向成骨细胞分化(Komori，et al.，1997)。在老鼠中剔除Cbfal，成骨细胞分化会受到阻抑，骨不能形成。Cbfal调控着许多骨基质蛋白基因表达。许多促进骨发育的因素(包括激素，生长因子，骨形成蛋白等)可能通过Cbfal及其所指导的成骨细胞分化途径发挥作用(Yamaguchi, et al. , 2000)。因此,Cbfal被认为是控制骨形成和发育白勺“主基因 ” (master gene)。2000 年以后,Cbfal 又被重命名为 Runx2 (Runt related gene
2)。前面提到的PTH和BMPs促进或诱导骨形成最终作用点被认为就是Runx2 (Krishnan, etal. , 2003 ；Ito and Miyazono, 2003)。Runx2能够在一定的环境下诱导皮肤成纤维细胞定 向成骨分化和强力的骨化作用(Phillips and Garcia, 2008),而且Runx2能明显促进BMPs的诱导成骨作用(Ito and Miyazono, 2003)。Osterix是于2002年I月发现的，在Runx2下游，控制成骨细胞分化和骨形成的又一关键转录因子(Nakashima, et al. ,2002)。在老鼠中剔除Osterix,成骨细胞分化就会受到阻抑，骨也不能形成。但Osterix的表达离不开Runx2，并在其下游的分化途径中发挥关键作用。Runx2和Osterix的活性都与其它因子相互作用而受到影响(Koga,et al. ,2005;Schroeder, et al. ,2005)。最新研究进展表明，关键转录因子组合对干细胞领域的细胞编程和重编程起着极为重要的作用。在最近的干细胞研究领域，从体细胞诱导出多潜能的干细胞特性，即体细胞的重编程，的研究获得了许多令人瞩目的突破性的成果。诱导性多能干细胞(iPS)的遗传信息重编程的过程可以通过表达四种转录因子如0CT3/4，S0X2, Klf4，和c_Myc即可达到。iPS同胚胎干细胞非常相似，以至于能通过germline transmission和胚胎发育过程成为个体(Okita’et al. , 2007 ；Takahashi, et al. ,2007)。这一系列的 iPS 的研究工作充分突出了转录因子或其组合在建立和维持或重塑细胞表型上(细胞的编程和重编程)能够发挥多么巨大的威力。我们同时也注意到，诱导干细胞产生所需的四种基因是通过逆病毒载体按I : I : I : I比例侵染体细胞的情况。其实，在近几年干细胞研究领域，利用转录因子的组合已经可以成功地使干细胞定向分化。例如有研究者将三种Sox基因按I : I : I比例转入软骨细胞的前体细胞，成功诱导出了软骨组织并维持其永久软骨的特性(Ikeda，etal. ,2004)。针对上述关于转录因子的组合的研究进展，我们进一步猜测转录因子之间的不同比率也可能在干细胞定向分化的过程中发挥重要作用，我们随后发现，Runx2和Osterix这两个控制成骨细胞分化的关键转录因子之间的表达水平的比例也深刻影响间充质干细胞定向成骨细胞分化的程度。我们进一步推测，在骨发育过程中，不同类型或不同发育阶段的成骨细胞的形成很可能也是通过在成骨细胞内建立不同的Runx2和Osterix基因间的表达或活性比例来实现的。
申请人在日本的小守寿文博士指导下于2001年10月发表论文(Liu, etal.,J. Cell Biol. 155 :157-166, 2001)。我们通过转基因鼠研究发现，Runx2在成骨细胞中过度表达会严重抑制该细胞成熟(Liu，et al.，2001)。其主要表现为比较成熟的成骨细胞和由成骨细胞进一步转化而来的骨细胞在转基因骨中急剧减少，而比较不成熟的成骨细胞明显增加，以致骨发育不良。我们因此认为，Runx2在分化途径中主要是促进早期成骨细胞分化，抑制向骨细胞的转化，并且在功能性的、比较成熟的成骨细胞中，其表达量或其转录活性必须维持在相对较低的水平。Runx2转基因鼠，虽未能促进骨形成，却促进早期成骨细胞分化和数量，因此，我们在提出利用Runx2促进骨形成的假说(Liu，et al.，2001)。这个假说就是建议在成骨细胞分化早期提高Runx2的表达或活性，在成熟的成骨细胞分化阶段降低Runx2的表达或活性。而许多体外的研究表明，Runx2能够在一定的环境下诱导成骨细胞分化和骨形成作用。这种体内和体外的矛盾表明，人们还不能有效利用Runx2来促进成骨细胞分化和骨形成。本发明人通过实验证明不同Runx2和Osterix相对表达/活性比例对于成骨细胞分化有不同影响，发现了一种特殊Runx2和Osterix的蛋白表达比例能加速促进成骨细胞的分化，从而促进骨形成，从而完成了本发明。
发明内容
本发明涉及Runx2和Osterix在制备用于预防或治疗与成骨细胞分化相关的疾病的药物组合物中的应用，在所述药物组合物中，Runx2蛋白的含量小于Osterix蛋白的含量，优选地，Runx2蛋白含量与Osterix蛋白含量的比例为I : N，其中N大于1，例如从I : 2、1 : 3、至I : 4甚至更低比例，更优选的比例为I : 4。具体地，本发明通过以一种Runx2表达(或活性)水平小于Osterix的表达(或活性)水平的方式共表达Runx2和Osterix来加速诱导非成骨细胞定向成骨细胞分化或增强成骨细胞的功能。而且根据改变Runx2表达(或活性)水平与Osterix的表达(或活性)水平的比例从而引起成骨细胞分化与功能的变化来有目的地筛选骨病预防或治疗的新药物。技术问题本发明一个目的是通过按照特定比例的Runx2和Osterix共表达于间充质干细胞或其它非成骨细胞来加速促进成骨细胞分化。该方法可以促进骨形成并有助于治疗多种骨病，例如骨质疏松，骨折，成骨不全等。本发明的另一个目的是提供一种用于预防或治疗与成骨细胞分化相关的疾病的药物组合物，其包含Runx2蛋白和Osterix蛋白，并且其中Runx2蛋白的含量小于Osterix蛋白的含量，优选地Runx2蛋白含量与Osterix蛋白含量的比例可以是在以下比例范围内的任何一种比例即I N，其中N大于1，例如，I 2、1 : 3、至I : 4甚至更低比例。优选地，所述药物组合物还包含药用载体。本发明的另一个目的是提供Runx2蛋白和Osterix蛋白在制备用于预防或治疗与成骨细胞分化相关的疾病的药物组合物中的应用，在所述药物组合物中，Runx2蛋白的含量小于Osterix蛋白的含量。优选地，在所述药物组合物中，Runx2蛋白含量与Osterix蛋白含量的比例可以是在以下比例范围内的任何一种比例即I N，其中N大于1，例如，I 2、I : 3、至I : 4甚至更低比例。
其中所述与成骨细胞分化相关的疾病选自骨质疏松、骨折、成骨不全、或牙周病
坐寸O本发明的另一个目的是提供Runx2基因和Osterix基因在制备用于促进成骨细胞分化的试剂盒中的应用，所述试剂盒包含Runx2基因的重组构建体和Osterix基因的重组构建体。在使用所述试剂盒时，用所述Runx2基因的重组构建体和Osterix基因的重组构建体分别转染适宜的逆转录病毒生产细胞，分别收集逆病毒上清液，将含有Runx2基因的逆病毒上清液和含有Osterix基因的逆病毒上清液以I : M的比例(其中M大于1，例如，I : 2、1 : 3、至I : 4甚至更低比例)混合，共同侵染间充质干细胞或其它非成骨细胞，从而使Runx2蛋白含量与Osterix蛋白含量的比例达到以下比例范围内的任何一种比例即I N，其中N大于1，例如，I 2、1 3、至I : 4甚至更低比例。其中，M和N为大于I的任何数，本领域技术人员可以确定适宜的数值。所述试剂盒可以用于组织工程骨的生产和与成骨细胞分化相关疾病的基因治疗。 本发明还有一个目的是提供一种筛选促进骨形成的药物的方法，其包括下述步骤(I)分别构建Runx2基因的重组构建体和Osterix基因的重组构建体；(2)利用适宜的逆转录病毒，用步骤(I)中的Runx2基因的重组构建体和Osterix基因的重组构建体侵染细胞，筛选下述三种单克隆重组细胞(i)其中Runx2蛋白表达水平小于Osterix蛋白表达水平，(ii)其中Runx2蛋白表达水平等于Osterix蛋白表达水平，和(iii)其中Runx2蛋白表达水平大于Osterix蛋白表达水平；和(3)将步骤(2)筛选得到的每种细胞单独接受或不接受待选化合物的作用，观察Runx2蛋白表达水平和Osterix蛋白表达水平比例的变化,并结合所述比例的变化观察分析成骨细胞分化或功能的增强或减弱，从而完成促进骨形成的药物的筛选；其中步骤(2)中所用的细胞选自间充质干细胞或其他非成骨细胞，例如，骨髓干细胞，皮肤细胞、脂肪细胞等。本发明所述的Runx2基因和Osterix基因可以来源于任何哺乳动物物种，优选来源于小鼠和人，更优选来源于人。本发明还提供用于筛选促进骨形成的药物的筛选系统，所述系统包括下述三种单克隆重组细胞(i)其中Runx2蛋白表达水平小于Osterix蛋白表达水平(R < O)的单克隆重组细胞，(ii)其中Runx2蛋白表达水平等于Osterix蛋白表达水平(R = O)的单克隆重组细胞，和(iii)其中Runx2蛋白表达水平大于Osterix蛋白表达水平(R > O)的单克隆重组细胞。在所述筛选系统中所用的细胞可以选自间充质干细胞或其他非成骨细胞，例如，骨髓干细胞，皮肤细胞、脂肪细胞等。技术解决方案本发明提供了通过Runx2表达(或活性)水平小于Osterix的表达(或活性)水平的方式共表达Runx2和Osterix于间充质干细胞或其它非成骨细胞中，从而加速诱导成骨细胞分化的方法。Runx2和Osterix都是决定成骨细胞分化的关键转录因子，在骨的形成和发育的过程中，离开任何其中的一种因子都会导致骨形成不能发生。二者均调控骨特异的基因的表达，而且许多研究表明，在体外的培养的细胞中，诱导表达二者之一，即可使这些细胞均表达出多种骨特异的基因，从而引发成骨细胞的分化特征。然而，本发明人发现，以相同的蛋白质水平分别单独表达Runx2或Osterix于C3H10T1/2间充质多功能干细胞中并没有导致相似的成骨分化水平，Osterix无论是在碱性磷酸酶活性水平，钙化水平以及诱导多种骨特异的基因的表达的能力都显著弱于Runx2。但是当将二者以不同比例的蛋白质表达水平共同表达于同一种的多功能干细胞时，本发明人发现，当Runx2比Osterix的蛋白质表达水平低时，共同表达Runx2和Osterix能够极其显著地诱导成骨细胞分化的重要标志-钙化。当Runx2与Osterix的蛋白质表达水平相近时，与Runx2比Osterix的蛋白质水平低时相比较，钙化效果显著降低，但是与Runx2比Osterix的蛋白质表达水平高时相比仍然有明显的提高。Runx2比Osterix的蛋白质水平高时与只表达Runx2时相比,I丐化效果 没有变化，尽管这两种情况下Runx2的蛋白质水平没有明显差异。无论以何种比例蛋白水平共同表达Runx2和Osterix均未进一步在单独表达Runx2的基础上诱导早期成骨细胞分化的重要标志-碱性磷酸酶的活性。通过RT-PCR分析表明，在诱导多种骨特异的基因的表达的能力上，例如I型胶原蛋白，骨I丐蛋白(Osteocalcin),骨涎蛋白(Bonesialoprotein)这些成熟成骨细胞的标志基因，与Runx2比Osterix的蛋白质水平高时相比，以Runx2比Osterix的蛋白质水平低的方式共同表达Runx2和Osterix能够极其显著地诱导这些基因的表达。不仅如此，本发明人还发现，Runx2比Osterix的蛋白质水平低时,共同表达Runx2和Osterix还能够更早地诱导I丐化，而在同一时刻，当Runx2与Osterix的蛋白质水平相近时、Runx2比Osterix的蛋白质水平高时、或只表达Runx2时,I丐化效果都没有出现。为了获得Runx2比Osterix的蛋白质水平低的、共表达二者于同一细胞的效果，可以通过将含有Runx2基因的逆病毒上清液和含有Osterix基因的逆病毒颗粒上清液以I 4的比例混合共同侵染C3H10T1/2细胞。许多小分子化合物可能促进诱导成骨细胞的分化或骨的形成，例如TSA( S卩，曲古霉素)。然而本发明人发现，TSA处理没有进一步促进以不同比例的蛋白质表达水平共同表达Runx2和Osterix或者只表达Runx2的C3H10T1/2间充质多功能干细胞的钙化水平，相反却降低了这些种细胞的钙化水平。考虑到成骨细胞必然同时含有Runx2和Osterix，也许由于不同的细胞内外的环境，不同的成骨细胞的Runx2和Osterix的mRNA、蛋白或者活性水平也不同，本发明人认为，TSA处理对于成骨细胞的影响有负面的作用。这提示本发明人考虑可以利用本发明所提供的建立不同细胞的方法来评价各种小分子化合物的促进和影响骨形成的能力和效果，也可以直接用作骨病治疗的药物筛选的方法。由于Runx2和Osterix的高度保守性,本发明所用的Runx2和Osterix可以来源于任何哺乳动物物种，优选地来源于小鼠或人，最优选来源于人。在本发明的一个实施方案中，Runx2和Osterix来源于小鼠。小鼠Runx2同人Runx2相比,在氨基酸序列的同源性为92%;在核酸序列的同源性为92% -96%。小鼠Osterix同人Osterix相比，在氨基酸序列的同源性为95% ;在核酸序列的同源性为89%。在一个方面中，可以直接给患有与成骨细胞分化相关的骨病的受试者服用本发明所述的包含Runx2蛋白和Osterix蛋白的药物,在所述药物中Runx2蛋白含量低于Osterix蛋白含量。例如，可以通过口服、肌肉注射或静脉内注射和在治疗处局部注射施用等等。本领域技术人员应该理解，可以有很多种常规方法达到施用的目的。
除了蛋白质水平，以一定的比例存在Runx2和Osterix基因及其表达载体也可以作为一种药物活性成分，与其相应的蛋白质类似。本领域技术人员已知存在多种载体可以转运这两种基因，或存在多种表达其的表达载体。同样地，也可以通过注射或局部施用，按照Runx2蛋白表达水平小于Osterix蛋白表达水平的比例，将Runx2基因重组构建体和Osterix基因重组构建体施用到体内或相关的病灶内。也可以制备表达Runx2蛋白水平比Osterix蛋白水平低的间充质干细胞(如,骨髓干细胞)或其它非成骨细胞(如，自体皮肤或脂肪细胞等)，这样的重组细胞可以通过下述步骤制备分别构建Runx2基因的重组构建体和Osterix基因的重组构建体，分别用这两种重组构建体转染适宜的逆转录病毒生产细胞，分别收集逆病毒上清液，将含有Runx2基因的逆病毒上清液和含有Osterix基因的逆病毒上清液以I : M的比例混合,共同侵染间充质干细胞或其它非成骨细胞，其中M大于1，例如，I : 2、1 : 3、至I : 4甚至更低比例，从而使Runx2蛋白含量与Osterix蛋白含量的比例达到以下比例范围内的任何一种比例即I : N，其中N大于1，例如，I 2、1 3、至I : 4甚至更低比例。本领域技术人员应该理解，在本领域中获得这样的重组细胞的方法有很多，例如，通过腺病毒或逆转录病毒 的方式，也可以通过非病毒的方式，例如，利用各种适合治疗的转染试剂进行转染。可以通过注射或局部施用的方式将上述制备的表达Runx2蛋白水平比Osterix蛋白水平低的间充质干细胞或其它非成骨细胞施用到受试者体内或病灶内来治疗骨病。优选地，所述受试者是哺乳动物，并且所述Runx2基因和Osterix基因来源于所述待治疗的受试者。优选地，所述受试者是小鼠或人，更优选地是人。因此，当用于人受试者时，所述Runx2基因和Osterix基因优选地来源于人。本发明所获得的表达Runx2蛋白水平比Osterix蛋白水平低的间充质干细胞或其它非成骨细胞的方法也可以适用于组织工程骨的生产。利用本发明的方法可以加速促进组织工程骨生产。
从下面结合附图的详细描述中，本发明的上述特征和优点将更明显，其中图I是照片，显示以相同的蛋白质水平单独表达Runx2或Osterix于C3H10T1/2细胞中对碱性磷酸酶活性水平和钙化水平的作用。图IA显示蛋白表达情况，图IB显示碱性磷酸酶活性的情况，图IC显示钙化水平的情况。图2是照片，显示将Runx2和Osterix以不同比例的蛋白质表达水平共同表达于C3H10T1/2细胞中对碱性磷酸酶活性水平和钙化水平的作用。图2A显示蛋白表达情况，图2B显示碱性磷酸酶活性的情况，图2C显示钙化水平的情况。图3是照片，显示含有Runx2基因的逆病毒上清液和含有Osteix基因的逆病毒上情液以I : 4的比例混合共同侵染C3H10T1/2细胞后，Runx2比Osterix的蛋白质水平的比例。图4是照片，显示TSA处理对表达不同比例蛋白质水平的Runx2和Osterix的C3H10T1/2细胞的钙化水平的影响。序列表说明
权利要求
1.Runx2蛋白和Osterix蛋白在制备用于预防或治疗与成骨细胞分化相关的疾病的药物组合物中的应用，在所述药物组合物中，Runx2蛋白的含量小于Osterix蛋白的含量。
2.权利要求I所述的应用， 其中Runx2蛋白含量与Osterix蛋白含量的比例可以是在以下比例范围内的任何一种比例即I N，其中N大于1，例如，I 2、1 3、至I : 4甚至更低比例。
3.权利要求I所述的应用，其中所述Runx2蛋白和Osterix蛋白来源于哺乳动物,优选地来源于小鼠或人。
4.权利要求I所述的应用，其中所述与成骨细胞分化相关的疾病选自骨质疏松、骨折、成骨不全、或牙周病。
5.一种用于预防或治疗与成骨细胞分化相关的疾病的药物组合物，其包含Runx2蛋白和Osterix蛋白，并且其中Runx2蛋白的含量小于Osterix蛋白的含量,优选地Runx2蛋白含量与Osterix蛋白含量的比例可以是在以下比例范围内的任何一种比例S卩I N，其中N大于1，例如，I 2、1 3、至I : 4甚至更低比例。
6.Runx2基因和Osterix基因在制备用于促进成骨细胞分化的试剂盒中的应用，所述试剂盒包含Runx2基因的重组构建体和Osterix基因的重组构建体。
7.权利要求6所述的应用，其中在使用时，用所述Runx2基因的重组构建体和Osterix基因的重组构建体分别转染适宜的逆转录病毒生产细胞，分别收集逆病毒上清液，将含有Runx2基因的逆病毒上清液和含有Osterix基因的逆病毒上清液以I : M的比例混合，共同侵染间充质干细胞或其它非成骨细胞，其中M大于1，例如，I : 2、1 : 3、至I : 4甚至更低比例，从而使Runx2蛋白含量与Osterix蛋白含量的比例达到以下比例范围内的任何一种比例即I N，其中N大于1，例如，I 2、1 3、至I : 4甚至更低比例。
8.权利要求6所述的应用，其用于组织工程骨的生产和与成骨细胞分化相关疾病的基因治疗。
9.一种筛选促进骨形成的药物的方法，其包括下述步骤 (1)分别构建Runx2基因的重组构建体和Osterix基因的重组构建体； (2)利用适宜的逆转录病毒，用步骤(I)中的Runx2基因的重组构建体和Osterix基因的重组构建体侵染细胞，筛选下述三种单克隆重组细胞(i)其中Runx2蛋白表达水平小于Osterix蛋白表达水平，(ii)其中Runx2蛋白表达水平等于Osterix蛋白表达水平,和(iii)其中Runx2蛋白表达水平大于Osterix蛋白表达水平；和 (3)将步骤(2)筛选得到的每种细胞单独接受或不接受待选化合物的作用，观察Runx2蛋白表达水平和Osterix蛋白表达水平比例的变化，并结合所述比例的变化观察分析成骨细胞分化或功能的增强或减弱，从而完成促进骨形成的药物的筛选； 其中步骤(2)中所用的细胞选自间充质干细胞或其他非成骨细胞。
10.权利要求9所述的方法，其中所述Runx2基因和Osterix基因来源于哺乳动物，优选来源于小鼠和人，更优选来源于人。
全文摘要
本发明涉及通过以Runx2表达水平小于Osterix的表达水平的特殊方式共表达Runx2和Osterix于间充质干细胞或其它非成骨细胞中，从而加速诱导成骨细胞的分化。本发明提供一种用于预防或治疗与成骨细胞分化相关的疾病的药物组合物，其包含Runx2蛋白和Osterix蛋白，并且其中Runx2蛋白的含量小于Osterix蛋白的含量。本发明还提供Runx2蛋白和Osterix蛋白在制备用于预防或治疗与成骨细胞分化相关的疾病的药物组合物中的应用，在所述药物组合物中，Runx2蛋白的含量小于Osterix蛋白的含量。本发明的药物组合物以及共表达Runx2和Osterix的特殊方式可用于治疗骨质疏松、成骨不全、牙周病、骨折等骨病，也可用于组织工程骨的研发和生产。本发明还提供筛选用于骨病预防和治疗的药物的方法。
文档编号C12Q1/02GK102895652SQ20111021120
公开日2013年1月30日 申请日期2011年7月27日 优先权日2011年7月27日
发明者刘文广, 孟令仪, 张忠丽, 曾宪录 申请人:东北师范大学