专利名称：评判α-干扰素治疗慢性乙肝疗效的基因位点及应用的制作方法
技术领域：
本发明属于评估治疗慢性乙肝药物的有效性的基因位点及应用技术领域，具体涉及一种评判α-干扰素治疗慢性乙肝疗效的基因位点及应用。
背景技术：
乙肝病毒检测为阳性，病程超过半年或发病日期不明确而临床有慢性肝炎表现者均可诊断为慢性乙肝。临床表现为乏力、畏食、恶心、腹胀、肝区疼痛等症状。肝大，质地呈 中度硬度，有轻压痛。病情较重者可伴有慢性肝病面容、蜘蛛痣、肝掌、脾大，肝功能可时有异常或持续异常。慢性化因素有(1)免疫功能低下者。如肾移植、肿瘤、白血病、艾滋病、血液透析患者感染乙肝病毒后常易演变为慢性肝炎。乙型肝炎发病的急性期使用肾上腺糖皮质激素等免疫抑制剂治疗者，常能破坏患者体内的免疫平衡，也容易使急性肝炎转变为慢性肝炎。(2)既往有其它肝炎或肝病史者，或有并发病症者，再感染乙型肝炎病毒时不仅容易急转慢，而且预后较差。如原有酒精中毒性肝硬变或并发血吸虫病、华支星吸虫病、疟疾、结核病、溃疡病、糖尿病等。(3)急性或隐匿起病的无黄疸型肝炎患者比急性黄疸型肝炎患者容易发展为慢性。这与不能得到及时休息和治疗有一定关系。(4)最初感染乙肝病毒时的患者年龄。资料表明新生儿感染乙肝病毒，约90% 95%要成为慢性携带者；儿童期感染乙肝病毒后约20%;成人约10%发展为带毒状态。(5)其它因素。如急性期的肝炎患者过度劳累、酗酒、性生活过度、吸毒、应用损害肝脏的药物、营养不良、有其它病原微生物的严重感染或滥用药品等均可由急性转为慢性。目前国内外公认有效的抗HBV药物主要包括干扰素类和核苷(酸)类似物，并各有其优缺点。前者的优点是疗程相对固定，HBeAg血清学转换率较高，疗效相对持久，耐药变异较少，其缺点是需要注射给药，不良反应较明显，不适于肝功能失代偿者。后者的优点是口服给药，抑制病毒作用强，不良反应少而轻微，可用于肝功能失代偿者，其缺点是疗程相对不固定，HBeAg血清学转换率低，疗效不够持久，长期应用可产生耐药变异，停药后可出现病情恶化等。临床医生应根据自己的专业知识和临床经验，在综合考虑患者具体病情及其个人意愿的基础上，在本《指南》的原则框架下确定个体化的治疗方案。治疗慢性乙肝的方法主要有口服核苷类药物抗病毒和注射干扰素抗病毒，其中注射干扰素治疗地位很重要，但是目前没有相关手段预先评判注射干扰素的疗效。
发明内容
解决的技术问题本发明提供一种评判α -干扰素治疗慢性乙肝疗效的基因位点及应用。通过测定目标基因位点的存在，预先评判注射干扰素治疗慢乙肝的应答效果。技术方案评判α-干扰素治疗慢性乙肝疗效的基因位点，该基因由以下方法制得基因组DNA提取样本处理抽取静脉全血5mL，由实验室提取纯化DNA ;引物设计与合成以NCBI上序列为模板,运用Primer premier5. O引物设计软件；设计PCR引物正义引物如SEQ ID NO. I所示，反义引物如SEQ ID NO. I所示；PCR反应条件50 μ L反应体积中，含10倍反应缓冲液5 μ L，氯化镁溶液(25mmol/L) 4. 5 μ L，4种三磷酸脱氧核糖核酸(dNTP) (200mmol/L)4y L，两种引物各 10pmol，Taq DNA 多聚酶(5 U/mL)0. 5 μ L，加入纯化好的DNA模板IOyL,加水至50yL，混匀上机，94°C预变性3 min，94°C变性30 sec，54°C退火30sec，72°C延伸30 sec ;35个循环，最后72°C延伸10 min ；扩增产物的分析PCR产物经I. 5%琼脂糖电泳，观察结果，扩增产物长246 bp。所述基因位点在制备评判α -干扰素治疗慢性乙肝疗效药物中的应用。有益效果本方案已经找到相关的基因位点用来预先评判干扰素治疗乙肝的疗效，这样只要预先对想要采用干扰素治疗慢性乙肝的患者进行采血检测，就可以判断治疗方案的可行性，减少因盲目进行干扰素治疗中出现的经济和时间损失，未来我们将会制作出相关的试剂盒，这样就可以快速、有效的给出检测结果，费用上也可大大减少，市场前景可观。
具体实施例方式以下通过实施例形式，对本发明的上述内容再作进一步的详细说明，但不应将此理解为本发明上述主题的范围仅限于以下的实例，凡基于本发明上述内容所实现的技术均属于本发明的范围。实施例I :
1.基因组DNA提取样本处理抽取静脉全血5mL，由实验室提取纯化DNA；
2.引物设计与合成以NCBI上序列为模板,运用Primerpremier5. O引物设计软件；
3.设计PCR 引物正义引物(P1) 5’ -CACGTTTCTTGGAGTACTCTAC-3’，反义引物(P2)5’ -CACCAACCCCGTAGTTGTGTC-3’ ；
4.PCR反应条件50 μ L反应体积中，含10倍反应缓冲液5 μ L，氯化镁溶液(25mmol/L) 4. 5 μ L，4种三磷酸脱氧核糖核酸(dNTP) (200mmol/L) 4 μ L，两种引物各lOpmol，TaqDNA多聚酶(5 U/mL) O. 5 μ L,加入纯化好的DNA模板10 μ L，加水至50 μ L，混匀上机，94°C预变性3 min，94°C变性30 sec，54°C退火30sec，72°C延伸30 sec ;35个循环，最后72°C延伸10 min ；
5.扩增产物的分析PCR产物经I.5%琼脂糖电泳，观察结果，扩增产物长246 bp。本方案已经找到相关的基因位点用来预先评判干扰素治疗乙肝的疗效，这样只要预先对想要采用干扰素治疗慢性乙肝的患者进行采血检测，就可以判断治疗方案的可行性，减少因盲目进行干扰素治疗中出现的经济和时间损失，未来我们将会制作出相关的试剂盒，这样就可以快速、有效的给出检测结果，费用上也可大大减少，市场前景可观。
权利要求
1.评判α-干扰素治疗慢性乙肝疗效的基因位点，其特征在于该基因由以下方法制得基因组DNA提取样本处理抽取静脉全血5mL，由实验室提取纯化DNA ;引物设计与合成以NCBI上序列为模板,运用Primer premier5. O引物设计软件；设计PCR引物正义引物如SEQ ID NO. I所示，反义引物如SEQ ID NO. I所示；PCR反应条件50 μ L反应体积中，含10倍反应缓冲液5 μ L，氯化镁溶液(25mmol/L) 4. 5 μ L，4种三磷酸脱氧核糖核酸(dNTP) (200mmol/L)4y L，两种引物各 10pmol，Taq DNA 多聚酶(5 U/mL)0. 5 μ L，加入纯化好的DNA模板IOyL,加水至50yL，混匀上机，94°C预变性3 min，94°C变性30 sec，54°C退火30sec，72°C延伸30 sec ；35个循环，最后72°C延伸10 min ；扩增产物的分析PCR产物经I. 5%琼脂糖电泳，观察结果，扩增产物长246 bp。
2.权利要求I所述基因位点在制备评判α-干扰素治疗慢性乙肝疗效药物中的应用。
全文摘要
评判α-干扰素治疗慢性乙肝疗效的基因位点及其应用，该基因由以下方法制得基因组DNA提取样本处理；引物设计与合成；设计PCR引物正义引物如SEQIDNO.1所示，反义引物如SEQIDNO.1所示；PCR反应； 扩增产物的分析PCR产物经1.5％琼脂糖电泳，观察结果，扩增产物长246bp。本方案已经找到相关的基因位点用来预先评判干扰素治疗乙肝的疗效，这样只要预先对想要采用干扰素治疗慢性乙肝的患者进行采血检测，就可以判断治疗方案的可行性，减少因盲目进行干扰素治疗中出现的经济和时间损失，未来我们将会制作出相关的试剂盒，这样就可以快速、有效的给出检测结果，费用上也可减少，市场前景可观。
文档编号C12N15/12GK102851298SQ20121031023
公开日2013年1月2日 申请日期2012年8月29日 优先权日2012年8月29日
发明者常家宝 申请人:南京市第二医院