专利名称：藻蓝多糖绿啤及酒类和饮料及其制备方法
技术领域：
本发明涉及食品饮料加工技术行业。尤其是涉及添加藻蓝多糖提取液的啤酒、其他酒类和饮料及其制备方法。
背景技术：
啤酒原料是大麦，在糖化过程中，多数转化为葡萄糖及麦芽糖，只有3. 5度低度酒精，啤酒的共性是(I)有一定营养，(2)低度饮料酒，(3)风味口感大同小异。第九届世界营养食品会议推荐啤酒为营养食品，96年我国啤酒年产量已达1500万吨，据世界第二位。我国今后啤酒工业发展方向是提高啤酒产品质量，挤身世界啤酒先进行列，啤酒要在竞争中生存，必须实施啤酒科学技术革新。 啤酒如何向优质啤酒发展，其开发途径是提高其营养性和保健功能，而螺旋藻是一种含有丰富的蛋白质、多糖矿物质、维生素以及多种微量元素等的海洋绿色生物，多年来被应用于药品、保健品和饮料等。它不仅可以添加到啤酒中，还可以添加到白酒中及其它调制饮料酒、果酒及饮料中。但是，螺旋藻产品以螺旋藻干粉制成的片剂和胶囊居多，即，将螺旋藻干粉直接添加到食品中，导致口感不好，也不利用消化和吸收，尤其是在饮料中产生沉淀和悬浮物。而且，由螺旋藻提取的主要成分多为藻蓝蛋白和多糖，而缺乏螺旋藻叶绿素成分。同时，螺旋藻叶绿素为碱性物质，在酸性饮料中会析出而使营养成分受到破坏，难以溶解在饮料中，所以为了保留该成分必须进行特殊处理。目前，饮料用尤其啤酒专用螺旋藻提取液的制备是将螺旋藻叶绿素、螺旋藻藻蓝蛋白和螺旋藻多糖等成分适当组合得到专门用于饮料特别是啤酒生产的螺旋藻提取液产品。该螺旋藻提取液采用的提取方法主要包括提取叶绿素、藻蓝蛋白的提取、组合酶解、热水提取等过程，包括(I)螺旋藻叶绿素的提取及其铁纳盐的制备；(2)藻蓝蛋白的提取；
(3)游离氨基酸、寡肤、寡糖的提取(4)螺旋藻多糖的提取。上述螺旋藻制备方法提取充分，所得营养液包括螺旋藻叶绿素、螺旋藻藻蓝蛋白、螺旋藻多糖等成分，其中螺旋藻叶绿素含量达到8%以上。上述的螺旋藻提取液及其制备方法，提取过程中保留了螺旋藻叶绿素成分，并可用于饮料尤其是啤酒添加，且不污染环境，操作方便，易用于工业化生产。但是，目前提取的螺旋藻多糖多为螺旋藻粗多糖，没有作清除蛋白质处理的流程工艺，使其产品防辐射功能减弱或无防辐射功能。其色素类(藻蓝素、叶绿素)稳定性差。存放时间长后会流失。上述制备的提取液，含有多糖类及蛋白质高营养物质，容易发生变质，在储运过程和冷冻入库中保存时间短，有变质风险。现有螺旋藻提取液的设备工艺还存在以下缺点(I)螺旋藻提取液得率低；(2)有少许藻腥味；(3)易发生沉淀；(4)啤酒中会产生肉眼不易看见的丝状物，其产生原因是螺旋藻中的蛋白质或藻蓝蛋白与啤酒中乙酸乙脂发生反应的产物；(5)降解酒精与麦芽度，使啤酒返生。
专利号为00108822. X《螺旋藻液保绿的方法》，其主要技术特征是在螺旋藻养殖池，特别是大面积露天开放螺旋藻养殖池中提取基本原理，添加镁及铁元素，从而提高叶绿素及藻蓝素含量，并达到短时间使螺旋藻返绿。该工艺是露天开放养殖池，其采光受天气变化“听天由命”，光照时间及强度不可控，影响产品质量，
发明内容
本发明的目的在于克服上述缺点和不足，提出一种藻蓝多糖提取液及其制备方法，该提取液加入啤酒及其他酒类和饮料中，制成藻蓝多糖绿啤及酒类和饮料，可以起到预防电离辐射及放射性微粒的功效。为了实现本发明的目的，一种藻蓝多糖绿啤及酒类和饮料，所述藻蓝多糖绿啤及酒类和饮料是由首先从螺旋藻中提取的纯多糖、藻蓝素和从竹叶中提取叶绿素，然后按比例添加，和食用酒精及蒸馏水混合搅拌，通过巴氏消毒杀菌制成藻蓝多糖提取液，将此提取 液按比例添加到啤酒、白酒及系列酒品和饮料中，成为功能型的绿啤和功能型的白酒、调制果酒系列酒品和饮料；其中，所述藻蓝多糖提取液的成分按重量比分别为螺旋藻纯多糖占2% -16%,螺旋藻藻蓝素占O. 5% -10%，竹叶叶绿素占1-20%，食用酒精占5-15%，蒸馏水占39-91. 5%，其总量比例为100%。所述藻蓝多糖提取液配制比例为螺旋藻纯多糖占2 % -16 %，螺旋藻藻蓝素占0.5% _5%，竹叶叶绿素占1_20%，食用酒精占10%，蒸馏水占49-86. 5%，获取蓝色液体提取液；1-5%的所述提取液和95-99%黄啤配置成通用型绿啤；3-7%的所述提取液和93-95%的黄啤配置成保健型绿啤；4-10%的所述提取液和90-96%的黄啤配置成功能高保健型绿啤。所述藻蓝多糖提取液配制比例为螺旋藻纯多糖占3-16%，螺旋藻藻蓝素占O. 1_1%，竹叶叶绿素占2-16%，食用酒精占10%，蒸馏水占57-85%，获取绿色液体提取液；1-8 %的所述提取液和92-99 %白酒配置成保健型藻蓝多糖绿色酒，3-16 %的所述提取液和84-97%白酒配置成通用型藻蓝多糖绿色酒。所述藻蓝多糖提取液配制比例为螺旋藻纯多糖占3-12%，螺旋藻藻蓝素占2-4%，竹叶叶绿素占2-4% ;所述提取液为蓝绿色液体，1-5%的所述藻蓝多糖蓝绿提取液和95-99 %的饮料配置成果酒及饮料系列。本发明还提出一种藻蓝多糖绿啤及酒类和饮料的制备方法，所述藻蓝多糖绿啤及酒类和饮料的制备方法首先由将螺旋藻纯多糖、螺旋藻藻蓝素和竹叶叶绿素，按比例添加，和食用酒精及蒸馏水混合搅拌，通过巴氏消毒杀菌制成藻蓝多糖提取液，然后，将此提取液按比例添加到啤酒、白酒及系列酒品和饮料中，成为功能型的绿啤和功能型的白酒、调制果酒系列酒品和饮料；其中，所述螺旋藻纯多糖的提取是先提取螺旋藻粗多糖，并从粗多糖中分离蛋白质，经纯化获得螺旋藻多糖单一纯品；其具体工艺为先将螺旋藻干粉进行破壁处理，用低极性溶剂去亲脂性成分，经热水抽提或碱液冷提取或采用微波辅助提取，取上清液浓缩，乙醇醇析后离心、干燥得螺旋藻粗多糖，螺旋藻中蛋白质约占细胞干重的60-70% ；所述分离蛋白质，包括Sevag法、泡沫分离技术、三氯乙酸(TCA)法、加热浓缩法和酶法，最佳为利用胰蛋白酶和木瓜蛋白酶的双酶法进行多糖提取工艺，测得残留的蛋白质含量为3% ；所述纯化是通过水提液抽提所得到的粗多糖可能含有的多个混合糖组分及小分子杂质，进一步分级纯化得到螺旋藻多糖单一纯品。所述的制备方法采用的胰蛋白酶、木瓜蛋白酶双酶法进行多糖提取工艺如下选用螺旋藻粉一配成12%的藻粉溶液一胰蛋白酶水解一木瓜蛋白酶水解一真空浓缩一酒精沉淀一丙酮洗涤一冷冻干燥一多糖粗制品一离子交换层析一透析一凝胶层析一冷冻干燥真空浓缩在70-80°C真空浓缩至含固形物20% ;酒精沉淀分离，在浓缩液中加入5倍体积的95%乙醇，使螺旋藻多糖呈絮状沉淀析出，大部分蛋白质和其它成分保留在溶液中，4000r/min离心15min得沉淀,得到2个多糖组分,其中，组分I的单糖组成为D-葡萄糖、D-木糖、D-半乳糖和葡萄糖醛酸；组分2的单糖组成为D-葡萄糖、D-甘露糖、L-鼠李糖、D-半乳糖、葡萄糖醛酸。 ，所述胰蛋白酶水解的胰蛋白酶作用温度为55°C，胰蛋白酶作用PH值在6.2-7. 2胰蛋白酶保温时间为2. 5h，酶用量为3. 0% ;所述木瓜蛋白酶进行二次水解的加酶量3%，PH值6. 5，作用温度为40°C，保温20h。所述离子交换层析分离多糖采用20Xlcm的DEAE-Sep harose柱进行多糖分离用O. 01mol/L、PH8. O的吡啶-盐酸缓冲液平衡离子交换柱，粗多糖的上样量为8ml，流速为25ml/h，用O. 01mol/L、PH8. O的吡啶-盐酸缓冲液及0-2mol/L的NaCl进行梯度洗脱，分别收集，冷冻干燥得组分I和组分2。所述纯化为分级纯化，其方法包括离子交换纤维素层析离子交换和纤维素层析结合起来制成一系列离子交换纤维素层析，溶出各种多糖，用于分离糖类；分离过程中采用NaCl溶液或磷酸缓冲溶液梯度洗脱，得到不同级分的单一组分；所述凝胶过滤法是将多糖制品经DEAE纤维素分离后，进一步用凝胶过滤法纯化得到均一多糖纯品，经凝胶层析分离多糖，将多糖样品经酸解、纸层析得单糖组分I和组分2。所述藻蓝多糖绿啤在配置时，将藻蓝多糖提取液混合使用前先将它用巴氏消毒杀菌再和啤酒混和后发酵，以免产生沉淀，加入的程序可在啤酒发酵时，将煮沸后的麦芽汁冷却前加入或在煮麦芽汁时一并加入，其流程为麦芽一粉碎一糖化一过滤一麦芽汁煮沸一酒花分离一麦芽汁沉淀及冷却。所述藻蓝多糖绿酒的配制时，藻蓝多糖提取液添加到白酒中的流程为原料的蒸煮，使淀粉糊化一拌曲封闭发酵，经糖化、发酵产酒精一甑桶或蒸馏斧蒸馏一基酒的贮存一勾兑一贮存。本发明的藻蓝多糖提取液是从竹叶中提炼叶绿素，所获得的藻蓝多糖提取液配入啤酒中，经大量试验检测及中试，具有如下特点(I)啤酒呈淡绿色，清微透明悦目；(2)原啤酒风味口感不变；(3)长时间内不发生沉淀；(4)不改变原啤酒酒精度.不返生；(5)比原啤酒具有较高营养性，长时间饮用具有保健作用；(6)能使饮用者提高饮量及非食不可之感，无任何不良反应和副作用。优于目前用现有技术制得螺旋藻提取液；本发明采用的是消除蛋白质的螺旋藻纯多糖，藻蓝素不含蛋白质，应用到藻蓝多糖提取液绿啤及酒类和饮料中，用此具有防辐射功能。抗辐射及防辐射螺旋藻多糖必须是消除蛋白质后螺旋藻纯多糖，它是一种白色的粉末或晶体，它由葡萄糖、鼠李糖、木糖、半乳糖、甘露糖等组成。
图1显示藻蓝素的结构；图2显示藻蓝素的UV-VIS谱；图3显示藻蓝素IR谱。
具体实施例方式为使本发明的目的、技术方案和优点更加清楚明白，以下结合具体实施例，对本发明进一步详细说明。本发明的藻蓝多糖绿啤及酒类和饮料是由从螺旋藻中提取的纯多糖、藻蓝素和从竹叶中提取叶绿素，然后按比例添加和食用酒精及蒸馏水混合搅拌均匀，通过巴氏消毒杀菌成藻蓝多糖提取液。并将此提取液按比例添加到啤酒、白酒及系列酒品和饮料中，成为功能型的绿啤和功能型的白酒、调制果酒等系列酒品和饮料。一、藻蓝多糖提取液的组成本发明的藻蓝多糖提取液由螺旋藻纯多糖、螺旋藻藻蓝素和从竹叶中提取叶绿素配制而成，其中，其成分为螺旋藻纯多糖占2% -16%，螺旋藻藻蓝素占0.5% -5%，竹叶叶绿素占1_20%，食用酒精占10%，蒸馏水占49-86. 5%，其总量比例为100%。二、藻蓝多糖提取液中各个成分的制备工艺1、螺旋藻纯多糖的提取方法I)第一种制备螺旋藻纯多糖的方法先提取螺旋藻粗多糖，并从粗多糖中分离蛋白质，经纯化获得螺旋藻多糖单一纯品。A、粗提提取螺旋藻多糖(polysaccharide of Spirulina. PS)时,先将螺旋藻干粉进行破壁处理，用低极性溶剂去亲脂性成分，经热水抽提或碱液冷提取(可采用微波辅助提取)，取上清液浓缩，乙醇醇析后离心、干燥得螺旋藻粗多糖。螺旋藻中蛋白质约占细胞干重的60 70%，因此提取螺旋藻多糖的关键是有效地去除蛋白质。B、分离蛋白质，目前，去蛋白的方法主要有以下几种Sevag法、泡沫分离技术、三氯乙酸(TCA)法、加热浓缩法、酶法。Sevag法是去蛋白质的经典方法，通常只适用于除少量蛋白，而且必须重复多次。TCA法去蛋白能缩短流程，多糖损失率降低，有利于后继纯化。用酶法降解蛋白质能提高多糖粗产品的得率，但所得成分中仍有30%以上的蛋白质。采用双酶法(胰蛋白酶、木瓜蛋白酶)进行多糖提取工艺，测得残留的蛋白质含量为3%。C、纯化通过水提液抽提所得到的粗多糖可能含有多个混合糖组分及小分子杂质，须进一步分级纯化才能得到螺旋藻多糖单一纯品。一般以层析后观察到单一狭窄的峰作为纯度鉴定的标准。常用的纯化方法有(I)离子交换纤维素层析离子交换和纤维素层析结合起来制成一系列离子交换纤维素层析是基于树脂对不同的离子的亲和力不同，溶出各种多糖，用于分离糖类。分离过程中常采用NaCl溶液或磷酸缓冲溶液梯度洗脱，可以得到不同级分的单一组分。常见的有DEAE 纤维素、以及 DEAE-Sepharose。(2)凝胶过滤法多糖制品经DEAE纤维素分离后，需进一步用凝胶过滤法纯化才能得到均一多糖纯品。凝胶过滤法是一种用具有一定孔径大小的凝胶颗粒为支持物的层析方法，可分离大小和形状不同的分子，用于分离不同聚合度的糖类特别有效。葡聚糖凝胶(Sephadex G)，琼脂糖凝胶(Sepharose)，聚丙烯酰胺凝胶(Bio-gel P)均为亲水性凝胶，都广泛用于多糖的纯化。螺旋藻多糖的纯化过程一般采用Sephadex GlOO或SephadexG200、Sepharyl SlOO0但Sephadex G本身是糖类,难免在洗脱液中沾上凝胶上洗脱下来的糖分，可能会造成精制多糖的不纯。纯化后多糖含量的测定用硫酸蒽酮法跟踪检测。2)第二种更高效的螺旋藻多糖提取新工艺。即采用双酶法(胰蛋白酶、木瓜蛋白酶)进行多糖提取工艺，脱蛋白效果接近100%，粗多糖采用离子交换层析及凝胶层析进一步纯化，并通过纸层析测其组成。通过DEAE-Sepharose和Sep hadex_G50纯化粗多糖,得到2个多糖组分。经测定组分I的单糖组成为D-葡萄糖、D-木糖、D-半乳糖、葡萄糖醛酸；组分2的单糖组成为D-葡萄糖、D-甘露糖、L-鼠李糖、D-半乳糖、葡萄糖醛酸。 具体工艺如下螺旋藻粉一配成12%的藻粉溶液一胰蛋白酶水解一木瓜蛋白酶水解一真空浓缩—酒精沉淀一丙酮洗涤一冷冻干燥一多糖粗制品一离子交换层析一透析一凝胶层析一冷冻干燥真空浓缩在70 80°C真空浓缩至含固形物20%。酒精沉淀分离在浓缩液中加入5倍体积的95%乙醇，使螺旋藻多糖呈絮状沉淀析出，大部分蛋白质和其它成分保留在溶液中，4000r/min离心15min得沉淀。胰蛋白酶水解胰蛋白酶最适作用温度的确定，胰蛋白酶的最适作用温度为55°C，此时酶解脱蛋白效果最好。胰蛋白酶最适作用PH值的确定，胰蛋白酶在6. 2 7. 2的范围内具有较高的酶活力。胰蛋白酶酶解时间的确定，胰蛋白酶作用2. 5h后多糖粗产品中蛋白质含量不再明显下降，因此蛋白酶作用2. 5h后可终止反应。胰蛋白酶最适作用量的确定，酶用量达到
3.O %以后脱蛋白效果不再明显增加，所以酶用量确定为3. 0%。利用木瓜蛋白酶进行二次水解加酶量3%，在PH6. 5的缓冲液中，40°C，保温20h，经常振摇。酶解液经真空浓缩、酒精沉淀后，测得残留蛋白质含量为3%。离子交换层析分离多糖米用DEAE-Sep harose 柱(20Xlcm)进行多糖分离用 O. 01mol/L、PH8. O 的批啶-盐酸缓冲液平衡离子交换柱，粗多糖的上样量为8ml，流速为25ml/h，用O. Olmol/L、PH8. O的吡啶-盐酸缓冲液及O 2mol/L的NaCl进行梯度洗脱，得图1所示曲线。将该曲线的两个峰分别收集，冷冻干燥得粗分组I和粗分组2。凝胶层析分离多糖多糖样品经酸解、纸层析得单糖组成为组分I为D-葡萄糖、D-木糖、D-半乳糖、葡萄糖醛酸；组分2的单糖组成为D-葡萄糖、D-甘露糖、L-鼠李糖、D-半乳糖、葡萄糖醛酸。原料对比2 《一种螺旋藻提取液及其制备工艺》螺旋藻多糖的提取是从酶解后的藻渣中离心留下上清液，再将残渣两次提取，两次离心，合并加中性蛋白酶，经透析后得到螺旋藻活性多糖溶液。由于采用藻渣提取，所获得的螺旋藻多糖得率很少，不具有抗辐射功倉泛。本发明的螺旋藻多糖(PSP)是以新鲜藻泥和藻粉为基础原料，用改良的三氯乙酸法进行提取，所得产品多糖质量含量达92%以上，优于传统的SEVDG法。优于上述残渣两次离心提取法。2、螺旋藻中藻蓝素的提取方法藻蓝素是从蓝藻中提取的色素，它是自然界为数很少的鲜艳的天然蓝色素。它是开链的四吡咯化合物(见图1)，多与蛋白质通过硫醚键结合在一起。藻蓝素溶液不发荧光，但与锌离子结合形成荧光盐络合物。一般不作为蓝色色素单独使用，多与其他天然色素混合使用在果汁、饮料中等。同时，藻蓝素是吸收光能和传递激发能的重要光合素，在光合作用原初过程的研究中有重要的意义。
从螺旋藻中提取藻胆蛋白，用甲醇解离其硫醚键的藻蓝素。其最佳解离条件是温度为40°C，解离时间为24h，V(甲醇)m(藻胆蛋白)= 200 1.提取率可达1.5%，产物的UV、IR和文献相符。藻蓝素发色团在酸性溶液中呈比较扩展型，而在中性溶液中呈比较闭合的结构。所使用材料与仪器UV用日立U-3400紫外可见光谱仪测定；IR用Pekin_Elmer983型红外光谱仪测定；层析用硅胶为青岛海洋化工厂产品；藻粉购自广西北海市绿海生物保健食品有限责任公司；所用其它试剂为分析纯。制备方法I)藻胆蛋白的提取按现有方法提取藻胆蛋白后，在0. lmol/L,pH = 7. 0磷酸缓冲溶液透析48h，低温浓缩，95%乙醇沉淀，离心，依次用石油醚、丙酮、甲醇洗至无色。真空干燥得变性藻胆蛋白。2)藻胆蛋白甲醇解得藻蓝素称取5g变性藻胆蛋白，加入IOOOmli阿春，恒温40°C，搅拌24h，抽滤，滤液浓缩至干、残留物溶解在8 IOml含2. 5%甲醇的氯仿溶液中，离心，上清液在25°C旋转蒸发至干，残留物溶解在2ml含2. 5%甲醇的氯仿溶液中，7倍体积的石油醚沉淀藻蓝素，石油醚洗涤。以氯仿/甲醇(4/1)为展开体系，用硅胶薄层层析进行分离，将Rf值为0.96和0.88的两条蓝色色带刮下来后，用甲醇溶解萃取，真空低温旋转蒸发至干，然后再用同样薄层层析方法提纯一次。分别得到藻蓝素的两个构型异构体。产品分析产品为蓝色粉末状固体，难溶于水，易溶于氯仿、苯、甲醇等有机溶剂。对光、热都不稳定，特别是Rf值为0. 88的异构体更不稳定，易转变为紫红色物质(Rf = 0. 92)。Rf值为0. 96的异构体紫外如图2，￡>=643_ gnm (pH = 3，酸性氯仿)；IR (溴化钾压片法)如图 3 :3308.601^(7^),2923.401-1(7.),2857. Ocm-1 (V_CH2_), 1706. OcmQcm-1 ( V—), 1597. Ocm-1 (V_CH_CH_)。解离温度对提取率的影响
解离藻胆蛋白得藻蓝素的关键是解离温度。因藻蓝素对光热不稳定，随着解离温度的升高，藻蓝素的共轭链和构型被转化，逐渐变为紫红色物质，因而藻蓝素的提取率显著降低。解离温度与藻蓝素提取率关系如表1.表I温度与藻蓝素提取率的关系
权利要求
1.一种藻蓝多糖绿啤及酒类和饮料，其特征在于，所述藻蓝多糖绿啤及酒类和饮料是由首先从螺旋藻中提取的纯多糖、藻蓝素和从竹叶中提取叶绿素，然后按比例添加，和食用酒精及蒸馏水混合搅拌，通过巴氏消毒杀菌制成藻蓝多糖提取液，将此提取液按比例添加到啤酒、白酒及系列酒品和饮料中，成为功能型的绿啤和功能型的白酒、调制果酒系列酒品和饮料； 其中，所述藻蓝多糖提取液的成分按重量比分别为螺旋藻纯多糖占2% -16%，螺旋藻藻蓝素占O. 5% _10%，竹叶叶绿素占1_20%，食用酒精占5-15%，蒸馏水占39-91. 5%,其总量比例为100%。
2.根据权利要求1所述的藻蓝多糖绿啤及酒类和饮料，其特征在于，所述藻蓝多糖提取液配制比例为螺旋藻纯多糖占2% -16%，螺旋藻藻蓝素占O. 5% _5%，竹叶叶绿素占1-20%，食用酒精占10 %，蒸馏水占49-86. 5 %，获取蓝色液体提取液；1-5 %的所述提取液和95-99%黄啤配置成通用型绿啤；3-7%的所述提取液和93-95%的黄啤配置成保健型绿啤；4-10%的所述提取液和90-96%的黄啤配置成功能高保健型绿啤。
3.根据权利要求1所述的藻蓝多糖绿啤及酒类和饮料，其特征在于，所述藻蓝多糖提取液配制比例为螺旋藻纯多糖占3-16%，螺旋藻藻蓝素占O. 1_1%，竹叶叶绿素占2-16%，食用酒精占10%，蒸馏水占57-85%，获取绿色液体提取液；1-8%的所述提取液和92-99%白酒配置成保健型藻蓝多糖绿色酒，3-16%的所述提取液和84-97%白酒配置成通用型藻蓝多糖绿色酒。
4.根据权利要求1所述的藻蓝多糖绿啤及酒类和饮料，其特征在于，所述藻蓝多糖提取液配制比例为螺旋藻纯多糖占3-12%，螺旋藻藻蓝素占2-4%，竹叶叶绿素占2-4%;所述提取液为蓝绿色液体，1-5%的所述藻蓝多糖蓝绿提取液和95-99%的饮料配置成果酒及饮料系列。
5.一种藻蓝多糖绿啤及酒类和饮料的制备方法，其特征在于，所述藻蓝多糖绿啤及酒类和饮料的制备方法首先由将螺旋藻纯多糖、螺旋藻藻蓝素和竹叶叶绿素，按比例添加，和食用酒精及蒸馏水混合搅拌，通过巴氏消毒杀菌制成藻蓝多糖提取液，然后，将此提取液按比例添加到啤酒、白酒及系列酒品和饮料中，成为功能型的绿啤和功能型的白酒、调制果酒系列酒品和饮料； 其中，所述螺旋藻纯多糖的提取是先提取螺旋藻粗多糖，并从粗多糖中分离蛋白质，经纯化获得螺旋藻多糖单一纯品；其具体工艺为先将螺旋藻干粉进行破壁处理，用低极性溶剂去亲脂性成分，经热水抽提或碱液冷提取或采用微波辅助提取，取上清液浓缩，乙醇醇析后离心、干燥得螺旋藻粗多糖，螺旋藻中蛋白质约占细胞干重的60-70% ； 所述分离蛋白质，包括Sevag法、泡沫分离技术、三氯乙酸(TCA)法、加热浓缩法和酶法，最佳为利用胰蛋白酶和木瓜蛋白酶的双酶法进行多糖提取工艺，测得残留的蛋白质含量为3% ； 所述纯化是通过水提液抽提所得到的粗多糖可能含有的多个混合糖组分及小分子杂质，进一步分级纯化得到螺旋藻多糖单一纯品。
6.根据权利要求5所述的藻蓝多糖绿啤及酒类和饮料的制备方法，其特征在于，所述的制备方法采用的胰蛋白酶、木瓜蛋白酶双酶法进行多糖提取工艺如下选用螺旋藻粉一配成12%的藻粉溶液一胰蛋白酶水解一木瓜蛋白酶水解一真空浓缩一酒精沉淀一丙酮洗涤一冷冻干燥一多糖粗制品一离子交换层析一透析一凝胶层析一冷冻干燥真空浓缩在70-80°C真空浓缩至含固形物20% ;酒精沉淀分离，在浓缩液中加入5倍体积的95%乙醇，使螺旋藻多糖呈絮状沉淀析出，大部分蛋白质和其它成分保留在溶液中，4000r/min离心15min得沉淀，得到2个多糖组分，其中，组分I的单糖组成为D-葡萄糖、D-木糖、D-半乳糖和葡萄糖醛酸；组分2的单糖组成为D-葡萄糖、D-甘露糖、L-鼠李糖、D-半乳糖、葡萄糖醛酸。
7.根据权利要求5所述的藻蓝多糖绿啤及酒类和饮料的制备方法，其特征在于，所述胰蛋白酶水解的胰蛋白酶作用温度为55°C，胰蛋白酶作用PH值在6. 2-7. 2胰蛋白酶保温时间为2. 5h，酶用量为3. 0% ;所述木瓜蛋白酶进行二次水解的加酶量3%，PH值6. 5，作用温度为40°C，保温20h。
8.根据权利要求6所述的藻蓝多糖绿啤及酒类和饮料的制备方法，其特征在于，所述离子交换层析分离多糖采用20Xlcm的DEAE-Sep harose柱进行多糖分离用O. Olmol/L、PH8. O的吡啶-盐酸缓冲液平衡离子交换柱，粗多糖的上样量为8ml，流速为25ml/h，用O.01mol/L、PH8. O的吡啶-盐酸缓冲液及0-2mol/L的NaCl进行梯度洗脱，分别收集，冷冻干燥得组分I和组分2。
9.根据权利要求6任一项所述的藻蓝多糖绿啤及酒类和饮料的制备方法，其特征在于，所述纯化为分级纯化，其方法包括 离子交换纤维素层析离子交换和纤维素层析结合起来制成一系列离子交换纤维素层析，溶出各种多糖，用于分离糖类；分离过程中采用NaCl溶液或磷酸缓冲溶液梯度洗脱，得到不同级分的单一组分； 所述凝胶过滤法是将多糖制品经DEAE纤维素分离后，进一步用凝胶过滤法纯化得到均一多糖纯品，经凝胶层析分离多糖，将多糖样品经酸解、纸层析得单糖组分I和组分2。
10.根据权利要求9所述的藻蓝多糖绿啤及酒类和饮料的制备方法，其特征在于，所述藻蓝多糖绿啤在配置时，将藻蓝多糖提取液混合使用前先将它用巴氏消毒杀菌再和啤酒混和后发酵，以免产生沉淀，加入的程序可在啤酒发酵时，将煮沸后的麦芽汁冷却前加入或在煮麦芽汁时一并加入，其流程为麦芽一粉碎一糖化一过滤一麦芽汁煮沸一酒花分离一麦芽汁沉淀及冷却； 所述藻蓝多糖绿酒的配制时，藻蓝多糖提取液添加到白酒中的流程为原料的蒸煮，使淀粉糊化一拌曲封闭发酵，经糖化、发酵产酒精一甑桶或蒸馏斧蒸馏一基酒的贮存一勾兑—贮存。
全文摘要
本发明是一种藻蓝多糖绿啤及酒类和饮料及其制备方法，藻蓝多糖绿啤及酒类和饮料是由首先从螺旋藻中提取的纯多糖、藻蓝素和从竹叶中提取叶绿素，然后按比例添加，和食用酒精及蒸馏水混合搅拌，通过巴氏消毒杀菌制成藻蓝多糖提取液，将此提取液按比例添加到啤酒、白酒及系列酒品和饮料中，成为功能型的绿啤和功能型的白酒、调制果酒系列酒品和饮料；其中，所述藻蓝多糖提取液的成分按重量比分别为螺旋藻纯多糖占2％-16％，螺旋藻藻蓝素占0.5％-10％，竹叶叶绿素占1-20％，食用酒精占5-15％，蒸馏水占39-91.5％，其总量比例为100％。本发明采用的是消除蛋白质的螺旋藻纯多糖，藻蓝素不含蛋白质，应用到藻蓝多糖提取液绿啤及酒类和饮料中，具有防辐射功能。
文档编号C12G3/04GK103013726SQ20121053181
公开日2013年4月3日 申请日期2012年12月12日 优先权日2012年12月12日
发明者赵波 申请人:赵波