一种人基因组dna24个基因座的复合扩增的试剂盒的制作方法
【专利摘要】本发明涉及一种同时分析人基因组DNA24个基因座的五色荧光标记复合扩增系统，同时检测19个常染色体基因座，4个Y染色体基因座及一个性别鉴定基因座；本发明将24个基因座分为4组，共涉及5种颜色的荧光标记；本发明的荧光标记复合扩增系统的灵敏度高，在DNA模板量为0.12ng的条件下，可检出全部24个基因座；适用于血滤纸、FTA卡采集样本的直接扩增。
【专利说明】—种人基因组DNA24个基因座的复合扩增的试剂盒
【技术领域】
[0001] 本发明涉及一种24个基因座的荧光标记复合扩增检验系统，具体是涉及一种同时分析人基因组常染色体及Y染色体基因座的五色荧光标记复合扩增系统,该系统可以应用于个体识别和亲子鉴定。
【背景技术】
[0002]短串联重复序列基因座(STR)是目前普遍应用的遗传标记。90年代初STR基因座多态性的发现，特别是STR基因座具有片段小容易扩增，适宜于检验微量和降解检材，而且各基因座的扩增条件相似而能够复合扩增，因而具有灵敏、准确、快速、信息量大等优点。尤其是在建立DNA数据库方面，STR复合扩增技术具有极大的优越性。因此美国FBI选择了 13 个 STR 基因座用于建立 DNA 数据库一CODIS (Combined DNA Index System):CSFlP0、D3S1358、D5S818、D7S820、D8S1179、D13S317、D16S539、D18S51、D21S11、FGA、THOU TPOX、vWA。这些STR基因座通常被称为13个核心基因座。
[0003]长期的DNA检验实践表明，短串联重复序列基因座的遗传多态性在种族间存在一定的差异，各个基因座间差别也很大。随着DNA数据库的建设，13个基因座数量不够。我国的打拐DNA数据库要求要有18个常染色体基因座。2012年美国核心基因座工作组(TheCODIS Core Loci Working Group)也建议美国FBI把检测基因座增加到25个，并且增加了一个DYS391。在法医检测中，通常用Amelogenin基因指示性别。这个基因在X、Y染色体上，并且Amelogenin-X上比Amelogenin-Y大6bp,根据扩增出峰来判定性别，单峰为女性，双峰为男性。但是存在男性Amelogenin-Y缺失的情况,会造成男性误判成女性。所以增加了 DYS391用于辅助判定性别。
[0004]常染色体遗传标记，例如13个核心STR基因座，在每一子代进行重新组合，这是因为一个个体的遗传信息一半来自他/她的父亲而另一半来自他/她的母亲。Y染色体遗传标记则是父系遗传，适用于快速排查嫌疑人。
[0005]目前，在法医检测中，常染色体分型与Y染色体检测一般都是分开的。最多在常染色体检测中加入了 DYS391。因为DYS391多态性差，主要用于辅助性别判定。如果能同时检测常染色体基因座及多态性更高的Y染色体基因座，既能用Y染色体基因座信息于嫌疑人的快速排查，又能根据常染色体基因座信息确定嫌疑人。
【发明内容】
[0006]发明CN201110229325.3提供了一个同时扩增21个常染色体基因座及一个性别基因座的方案。本发明在201110229325.3方案基础上，删除了 D2S441、D10S1248，增加了4个Y染色体基因座:3个多态性高的基因座DYS635，DYS458，DYS456及一个多态性较差DYS391、一个性别基因座，构成了一个24个基因座的复合扩增体系。同时满足常规法医检测及嫌疑人的快速排查。
[0007]本发明的目的之一在于:提供一种通过复合扩增24个基因座来进行个体识别和亲子鉴定的荧光标记STR复合扩增检验系统，同时检测19个常染色体基因座、4个Y染色体基因座及一个性别基因座。涉及检测人基因组中具有多态性的遗传标记。本发明特别涉及用聚合酶链式反应在一个体系中同时扩增多个短串联重复基因座。
[0008]为了实现本发明的目的，采用如下技术方案:
[0009]一种人基因组DNA24个基因座的复合扩增的试剂盒，包括有如下24个基因座的引物:
[0010]D3S1358、D13S317、D7S820、D16S539、Penta E、TP0X、TH01、D2S1338、CSFlP0、PentaD、D19S433、vWA、D21Sll、D18S51、D6S1043、D8S1179、D5S818、D12S391、FGA、DYS635、DYS458、DYS456、DYS391 及 Amelogenin。
[0011]上述24个基因座的引物及引物浓度优选如下:
[0012]表1各个基因座的引物及浓度
[0013]
【权利要求】
1.一种人基因组DNA24个基因座的复合扩增的试剂盒，包括有如下24个基因座的引物:D3S1358、D13S317、D7S820、D16S539、Penta E、TPOX、THOl、D2S1338、CSF1P0、Penta D、D19S433、vffA, D21S11、D18S51、D6S1043、D8S1179、D5S818、D12S391、FGA、DYS635、DYS458、DYS456、DYS391及 Amelogenin。
2.根据权利要求1所述的人基因组DNA24个基因座的复合扩增的试剂盒，其特征在于:所述的各个基因座的引物是:
D3S1358, SEQ N0.1 ~2 ；D13S317, SEQ N0.3 ~4 ；D7S820, SEQ N0.5 ~6 ；D16S539,SEQ N0.7 ~8 ；Penta E, SEQ N0.9 ~10 ；DYS635, SEQ N0.11 ~12 ；DYS391, SEQ N0.13 ~14 ；TP0X,SEQ N0.15 ~16 ；TH01,SEQ N0.17 ~18 ；D2S1338,SEQ N0.19 ~20 ；CSF1P0,SEQN0.21 ~22 ；Penta D, SEQ N0.23 ~24 ；DYS456, SEQ N0.25~26 ；DYS458, SEQ N0.27 ~28 ;D19S433，SEQ N0.29 ~30 ;vWA，SEQ N0.31 ~32 ;D21S11，SEQ N0.33 ~34 ;D18S51，SEQN0.35 ~36 ；D6S1043,SEQ N0.37~38 ；Amelogenin, SEQ N0.39 ~40 ；D8S1179, SEQN0.41 ~42 ；D5S818, SEQ N0.43 ~44 ；D12S391, SEQ N0.45 ~46 ；FGA, SEQ N0.47 ~48。
3.根据权利要求1所述的人基因组DNA24个基因座的复合扩增的试剂盒，其特征在于:所述的各个基因座的引物浓度是:_
4.根据权利要求1所述的人基因组DNA24个基因座的复合扩增的试剂盒，其特征在于:所述的每个基因座对应的引物中，至少有一个引物的5’端是经过荧光标记的。
5.根据权利要求4所述的人基因组DNA24个基因座的复合扩增的试剂盒，其特征在于:，24 个基因座进行分组标记，D3S1358、D13S317、D7S820、D16S539、Penta E 和 DYS635 为第一组；DYS456、TP0X、TH01、D2S1338、CSF1P0、Penta D 和 DYS458 为第二组；DYS391、D19S433、vffA, D21S11、D18S51、D6S1043 为第三组；D8S1179、D5S818、D12S391、FGA 以及性别基因座Amelogenin为第四组。
6.根据权利要求5所述的人基因组DNA24个基因座的复合扩增的试剂盒，其特征在于:每组使用6-FAM、HEX、TEMRA或ROX中的任一种进行标记，而且各组之间的标记色都不相同。
7.一种根据权利要求1~6任一项所述的人基因组DNA24个基因座的复合扩增的试剂盒，其特征在于:还包括有反应混合物、热启动Taq酶、SdH2O ;所述的反应混合物中包括有:MgCl27.5mM, Tris-HCl buffer 125mM，KC1125mM, dNTPs7.5mM, BSA2mg/ml。
8.根据权利要求1~6任一项所述的人基因组DNA24个基因座的复合扩增的试剂盒在个体识别或亲子鉴定中的应用 。
【文档编号】C12Q1/68GK103614361SQ201310364183
【公开日】2014年3月5日 申请日期:2013年8月20日 优先权日:2013年8月20日
【发明者】郑卫国, 李发院, 葛斌文, 卢青, 刘超, 刘宏, 李越 申请人:无锡中德美联生物技术有限公司, 广州市刑事科学技术研究所