酯交换油脂的制造方法

酯交换油脂的制造方法
【专利摘要】本发明的目的是提供通过使用了脂肪酶的酯交换反应来制造油脂的方法。具体而言，本发明涉及一种酯交换油脂的制造方法，其特征在于，其包括以下工序：(1)使油脂与白土在30～80℃下接触而得到反应底物的低温白土处理工序；及(2)使前述反应底物在含有脂肪酶的组合物的存在下进行酯交换反应的工序。
【专利说明】醒交换油脂的制造方法

【技术领域】
[0001] 本发明通过将白±利用于油脂的低温白±处理，从而抑制其后的醋交换反应中的 酶的活性降低，谋求该酶的稳定化。具体而言，涉及一种醋交换油脂的制造方法，其特征在 于，其包括使油脂与白±在30?8(TC下接触而得到反应底物的低温白±处理工序；及使前 述反应底物在含有脂肪酶的组合物的存在下进行醋交换反应的工序。

【背景技术】
[0002] 脂肪酶被广泛用于脂肪酸等各种駿酸与一元醇或多元醇等醇类的醋合成反应、醇 类与駿酸醋、或駿酸与駿酸醋、或多种駿酸醋间的醋交换反应等。其中，醋交换反应作为W 动植物油脂类的改性为代表的各种脂肪酸的醋、糖醋、类固醇醋的制造法，是重要的技术。 作为该些反应的催化剂，若使用油脂水解酶即脂肪酶，则能够在室温?约13CTC左右的温和 的条件下进行醋交换反应，与W往的化学反应相比，不仅可抑制副反应、降低能量成本，而 且由于作为催化剂的脂肪酶为天然物质，所W安全性也高。此外，通过其底物特异性、位置 特异性能够高效地生产目标产物。
[0003] 由于该样的脂肪酶为高价，所W正在进行将脂肪酶的酶活性活化及抑制活性降 低，并使该脂肪酶的酶活性稳定化的尝试。例如，通过在进行使用脂肪酶的原料油脂的醋交 换之前，将该原料油脂用阴离子交换树脂那样的具有氨基的物质进行处理，从而抑制酶活 性的降低（专利文献1)。此外，该专利文献1中，作为脱色工序使原料油脂与白±在IlOC 下接触。但是，该工序到底还是进行油脂的脱色的工序，并非抑制酶活性的降低。此外，即 使在1IOC下使油脂与白±接触，也无法将酶活化。该样，在醋交换反应之前，使原料油脂与 白±接触来谋求酶活性的稳定的研究并未进行。
[0004] 现有技术文献
[0005] 专利文献
[0006] 专利文献1 ;日本特开平8-140689号公报


【发明内容】

[0007]发明要解决的巧颖
[0008] 本发明的目的是提供通过使用脂肪酶的醋交换反应来制造油脂的方法，且极力抑 制该脂肪酶的活性的降低而能够反复使用含有脂肪酶的组合物的醋交换油脂的制造方法。
[0009] 巧于解决巧颖的方案
[0010] 本发明人等为了达成上述课题，发现在通过使用脂肪酶的醋交换反应来制造油脂 的方法中，通过在与脱色工序不同的条件下，将油脂用白±进行处理，从而在接下来的油脂 的醋交换反应中，能够在不使醋交换反应中使用的脂肪酶的活性大幅降低的情况下制造所 期望的醋交换油脂，从而完成本发明。
[0011] 目P，本发明可采取的方式如下：
[0012] 1.涉及一种醋交换油脂的制造方法，其特征在于，其包括；（1)使油脂与白±在 30?8(TC下接触而得到反应底物的低温白±处理工序；W及
[0013] (2)使前述反应底物在含有脂肪酶的组合物的存在下进行醋交换反应的工序。
[0014] 2.涉及根据上述1所述的方法，其特征在于，前述低温白±处理工序中使用的油 脂为经过了在90?15(TC下与白±接触而进行脱色的脱色处理工序的油脂。
[0015] 3.涉及根据上述1或2所述的方法，其中，在前述低温白±处理工序中，前述反应 底物在与前述白±的接触后从前述白±中被分离。
[0016] 4.涉及根据上述1?3中任一项所述的方法，其特征在于，前述经过了脱色处理工 序的油脂为在前述脱色处理工序之后经过了除莫工序的油脂。
[0017] 5.涉及根据上述1?4中任一项所述的方法，其中，前述含有脂肪酶的组合物处于 粉末状物的形态。
[0018] 6.涉及根据上述1?5中任一项所述的方法，其中，前述低温白±处理工序进一步 在脂肪酸醋的存在下进行。
[0019] 发明的效果
[0020] 根据本发明，在利用醋交换反应的油脂的制造方法中，通过在与脱色工序不同的 条件下，将油脂用白±进行处理，从而即使反复使用该含有脂肪酶的组合物，脂肪酶的活性 也不会大幅降低。
[0021] 尤其，仅通过使油脂与白±在90?15CTC的高温下接触的脱色工序无法谋求脂肪 酶的活性的稳定化，而本发明通过施加在与脱色工序不同的条件下使油脂与白±在30? 8(TC的比较低的温度下接触的低温白±处理工序，能够飞跃地提高脂肪酶的活性的活化及 稳定化。

【具体实施方式】
[0022] <醋交换油脂的制造方法〉
[0023] 本发明为一种醋交换油脂的制造方法，其特征在于，其包括：
[0024](1)使油脂与白±在30?8(TC下接触而得到反应底物的低温白±处理工序；W及
[0025] (2)使前述反应底物在含有脂肪酶的组合物的存在下进行醋交换反应的工序。W 下对该方法进行详细说明。
[0026] <油脂〉
[0027] 本发明中使用的油脂使用成为其后的醋交换反应的底物的油脂，作为油脂，除了 甘油H醋W外，还可W任意地存在水、后述的脂肪酸醋、及脂肪酸等。
[0028] 作为油脂，例如优选构成脂肪酸的碳原子数为8?24的甘油H醋，特别优选植物 油、例如选自由菜巧油、大豆油、葵花巧油、红花油、玉米油、橄揽油、芝麻油、踪搁油、踪搁 仁油、棉巧油、挪子油、婆罗树脂（salfat)、乳木果脂（Sheabutter)、雾冰草脂（illipe butter)、烛果油脂化Okumbutter)、可可脂、中链脂肪酸甘油H醋组成的组中的植物油及 其分提油、氨化油。
[0029] 此外，含有油脂的组合物中也可W含有水。含有油脂的组合物中所含的水的量相 对于含有油脂的组合物整体的质量例如为10?5000ppm、优选为150?5000ppm、更优选为 150?80化pm、最优选为200?40化pm是适当的。
[0030] 本发明中使用的油脂可W使用经过了一般的油脂的精制工序、加工工序的油脂。 作为精制工序，有；脱胶工序、碱脱酸工序、水洗工序、脱水干燥工序、脱色工序、除莫工序、 冷藏工序等，作为加工工序，有；醋交换反应工序、氨化工序、共混工序、分提工序等，可W使 用经过了它们中的任1工序W上的油脂。特别是更优选使用经过了脱色处理工序的油脂。 脱色处理工序使油脂与选自白±、活性炭等中的吸附剂接触，但通常在没有脂肪酶的存在 下与白±接触来进行。作为所使用的白±，可W使用活性白±、中性白±、酸性白±、碱性 白±，特别优选活性白±、或酸性白±。具体而言，例如通过将油脂和白± (相对于油脂为 0. 5?2质量％ )加入至脱色处理槽中，在减压下在90?15(TC(优选为105?12(TC) 下接触5?40分钟左右来进行。若为该范围内，则能够利用白±充分进行油脂的脱色。此 夕F，为了去除白±中所含的水分而提高吸附能力，优选在减压下进行脱色。作为脱色处理 槽，例如可W使用罐、柱、过滤器等。在使用罐的情况下，优选为带揽拌机的罐，优选在使油 脂与白±接触后，能够利用过滤或离也分离机等将白±分离。为了容易进行过滤，该些脱色 处理工序也可W在过滤助剂等助剂的存在下进行。作为过滤助剂，例如可列举出娃藻±等 无机过滤助剂及纤维素等的纤维或其粉碎物等有机过滤助剂。此外，也可W将白±填充并 保持在柱、过滤器中，并使油脂通过该柱、过滤器中。通过通液油脂，在通液的同时还能够 分离白±，装置也比罐更紧凑，所W优选。作为过滤器，例如优选使用单板过滤器、压滤机、 Amafilter过滤器等。罐、柱、过滤器可W使用玻璃制、塑料制或铁、不镑钢等金属制，但从耐 久性的方面出发优选为金属制。本脱色处理工序W油脂的脱色为目的。
[0031]经过了上述脱色处理工序的油脂在脱色处理工序的前后还可W进行脱胶工序、碱 脱酸工序、水洗工序、脱水干燥工序、除莫工序、冷藏（wintering)工序等油脂的一般的其 他精制工序，此外，除了除莫工序、冷藏工序等精制工序W外，还可W进行醋交换反应工序、 氨化工序、共混工序、分提工序等加工工序。例如作为本发明的经过了脱色处理工序的油 月旨，也可W使用进行脱色处理工序并进行了醋交换、进而分提而得到的油脂。另外，它们的 精制条件、加工条件为W油脂进行的一般的方法。
[003引 < 油脂的低温白±处理工序〉
[0033] 本发明包括在低温白±处理工序中，使成为反应底物的油脂与白±在30?8(TC 下接触而得到反应底物的低温白±处理工序。该处理工序由于并非利用脂肪酶的反应工 序，所W在处理工序中脂肪酶并非必须，优选不存在。
[0034] 另外，作为反应底物，除了油脂W外，有时还使用脂肪酸醋、脂肪酸。它们在低温白 ±处理工序中不是必须的。但是，该些脂肪酸醋、脂肪酸优选与油脂共混来进行低温白±处 理工序、或与油脂分开进行低温白±处理工序。
[0035] 作为脂肪酸醋，优选例如碳原子数为4?30、优选为8?22的直链或支链的、饱 和或不饱和的脂肪酸醋。该里，脂肪酸中例如可列举出；辛酸、癸酸、月桂酸、肉豆證酸、踪搁 酸、硬脂酸、油酸、亚油酸、亚麻酸、及山箭酸等。作为醋的醇，优选直链或支链的饱和醇。该 里醇中可列举出：甲醇、己醇、丙醇、高级醇等。作为特别优选的脂肪酸醋，可列举出；踪搁 酸己醋、踪搁酸甲醋、硬脂酸己醋、硬脂酸甲醋、山箭酸己醋、山箭酸甲醋、油酸己醋、油酸甲 醋。
[0036] 作为脂肪酸，优选例如碳原子数为4?30、优选为8?22的直链或支链的饱和或 不饱和的脂肪酸。该里，脂肪酸中例如可列举出；辛酸、癸酸、月桂酸、肉豆證酸、踪搁酸、硬 脂酸、油酸、亚油酸、亚麻酸、及山箭酸等。
[0037] 低温白±处理工序具体而言例如；通过使前述油脂与白±在30?8(TC下接触来 进行。作为接触的容器，例如可W与上述的脱色处理同样地使用罐、柱、过滤器等。使用罐 的情况下，优选为带揽拌机的罐，优选在使油脂与白±接触后，能够通过过滤或离也分离机 等将白±分离。此外，也可W将白±填充并保持在柱、过滤器中，并使油脂在该柱、过滤器中 通液。通过通液油脂，在通液的同时还能够分离白±，装置也比罐更紧凑，所W优选。作为 过滤器，例如优选使用单板过滤器、压滤机、Amafilter过滤器等。罐、柱、过滤器可W使用玻 璃制、塑料制或铁、不镑钢等金属制，但从耐久性的方面出发优选为金属制。本低温白±处 理工序W油脂的醋交换反应的前处理为目的。
[003引油脂与白±的接触在30?8(TC、优选在50?8(TC下进行。若为该范围内，则能 够利用白±对油脂充分进行处理。
[0039] 油脂与白±的接触按照尽量不与氧气接触的方式来进行是适当的。在W罐进行接 触的情况下，理想的是例如在减压下或非活性气体存在下进行。在利用柱、过滤机进行通液 的情况下，由于被油脂充满所W基本不会与氧气接触，因此优选。特别优选W氮气、氮气等 非活性气体对低温白±处理槽进行加压。作为加压时的压力，例如为0.OOl?lOMPa、优选 为0. 05?IMPa是适当的。减压可W使用真空粟等来实现。
[0040] 油脂与白±优选接触5砂W上，更优选接触30砂?30分钟。进一步优选为1? 15分钟，最优选为2?10分钟。使用罐时等，油脂与白±的长时间接触不会造成不良影响， 而操作上优选48小时W内的接触。例如，在用柱进行的情况下，相对于白±Ag,使W质量 比计为1?2000倍的油脂通液。优选为200?1000倍。此外，通液速度优选相对于白± Ikg使0. 5?IOOkg油脂用1小时进行通液。特别优选使5?30kg油脂用1小时进行通液 是适当的。进而，油脂（与硬脂酸醋等其他物质的混合物的情况下为混合物）的通液速度 相对于白±Ig为0.Ol?IOml/分钟，优选为0. 05?Iml/分钟，更优选为0. 1?Iml/分 钟。
[0041] 该样操作使油脂与白±接触，能够得到在下面的醋交换反应工序中使用的反应底 物。
[004引在低温白±处理工序中使用的白±例如选自由活性白±、中性白±、酸性白±、碱 性白±及它们的混合物组成的组中。可W与上述的脱色处理工序中使用的白±相同，也可 W不同。
[0043] 进而，上述低温白±处理工序也可W在过滤助剂等助剂的存在下进行。作为过滤 助剂，例如可列举出娃藻±等无机过滤助剂及纤维素等纤维或其粉碎物等有机过滤助剂。 作为过滤助剂，优选有机过滤助剂、特别是有机高分子过滤助剂，其中优选纤维素粉末等。 过滤助剂优选为粉状。但是，若送液时的压力、过滤渗漏等没有问题则最优选不使用过滤助 齐U。低温白±处理工序中的白± ;过滤助剂的质量比例如为1 ;1〇?10 ;1，优选为1 ;5? 5 ;1，更优选为1 ;1?3 ;1，特别优选为2 ;1。
[0044] <反应底物〉
[0045] 本发明经过低温白±处理工序后，经过醋交换反应的工序，作为反应底物，使用经 过了低温白±处理工序而得到的油脂，可W使用在低温白±处理工序中单独处理而得到的 油脂，也可W将多种油脂混合使用。此外，也可W将经过了低温白±处理工序而得到的油脂 与脂肪酸醋、脂肪酸等其他反应底物混合使用。混合可W在低温白±处理工序前，也可W在 低温白±处理工序后，但脂肪酸醋、脂肪酸优选为经蒸觸的物质。此外，优选经过了低温白 ±处理工序而得到的物质。
[004引另外，作为反应底物，脂肪酸醋、脂肪酸与油脂的质量比例如为9 ;1?1 ;9、优选为 8 ;2?2 ;8、更优选为7 ;3?5 ;5是适当的。
[0047] <醋交换反应的工序〉
[0048] 本发明还包括（2)使所述反应底物在含有脂肪酶的组合物的存在下进行醋交换 反应的工序。
[0049] 关于本发明的醋交换反应的条件，没有特别限定，可W通过常规方法来进行。
[0050] 通常，边避免成为水解的原因的水分的混入，边在常压或减压下进行。作为反应温 度，根据所使用的反应底物的凝固点、所使用的酶的最佳温度、稳定性而异，但优选在20? 13(TC左右下进行，只要不受凝固点的限定，则更优选在40?6(TC下进行。
[0051] 具体而言，例如通过将反应底物加入至反应槽中，使其与含有脂肪酶的组合物中 的脂肪酶接触来进行。作为反应槽，例如可W使用罐、柱、过滤器等。在使用罐的情况下，优 选为带揽拌机的罐，优选在使原料与脂肪酶接触后，能够通过过滤或离也分离机将脂肪酶 去除。此外，也可W通过将固定化脂肪酶或粉末脂肪酶填充并保持在柱、过滤器中，并使反 应底物在该柱、过滤器中通液来进行反应。作为此时的过滤器，例如优选使用单板过滤器、 压滤机、Amafilter过滤器等。罐、柱、过滤器可W使用玻璃制、塑料制或铁、不镑钢等金属制， 从耐久性的方面出发优选为金属制。
[0052] 在利用使用罐的间歇处理的醋交换反应中，虽然根据脂肪酶的种类及活性的程度 而异，但在使用通常的粉末脂肪酶、固定化脂肪酶等含有脂肪酶的组合物的情况下，按照含 有脂肪酶的组合物相对于反应底物的总计质量的添加量例如达到0. 05?10质量％、优选 达到0. 1?5质量％的方式接触是适当的。另外，在间歇处理中，脂肪酶量越少，在成本上越 优选，但基于脂肪酶的状态（活性、最佳温度、稳定性等）适当调整脂肪酶量。通过该样接 触，能够W1?100小时的反应时间结束醋交换反应，是适当的。此外，在使用柱等连续地 进行醋交换反应的情况下，相对于含有脂肪酶的组合物化g，使W质量比计为100?100000 倍的反应底物通液是适当的。另外，通液速度优选相对于含有脂肪酶的组合物Ikg使0. 5? 200kg的反应底物用1小时进行通液。特别优选使5?IOOkg的反应底物用1小时进行通 液是适当的。另外，在使用柱的情况下，通液的底物越多越优选，从生产能力的方面出发，通 液速度也优选在能够维持目标反应油的品质的范围内较快者。柱的通液量及通液速度基于 所使用的脂肪酶的状态（活性、最佳温度、稳定性等）适当调整。通液中的柱内温度优选为 20?9(TC，更优选为30?7(TC。最优选为40?6(TC。最佳的含有脂肪酶的组合物的添 加及反应底物的通液量根据反应温度、设定的反应时间、含有脂肪酶的组合物中的脂肪酶 的活性等来决定。该样操作使脂肪酶与反应底物接触，利用醋交换反应对反应底物中的油 脂进行改性，从而能够制造醋交换油脂。
[0053] 本发明的含有脂肪酶的组合物可W仅由脂肪酶构成，此外，除了脂肪酶W外，还可 W任意包含脂肪酶的培养基中使用的成分、助剂及固定化载体。
[0054] 作为本发明中可W使用的脂肪酶，可列举出脂蛋白脂肪酶、单醜基甘油脂肪酶、二 醜基甘油脂肪酶、H醜基甘油脂肪酶、半乳糖脂肪酶、磯脂酶等。它们当中，优选H醜基甘油 脂肪酶。
[00巧]作为产生该些脂肪酶的微生物，并不特别限定于细菌、酵母、丝状真菌、放线 菌等，可列举出：产碱杆菌属（Alcaligenessp.)、假单胞菌属（Pseudomonassp.)、 节杆菌属（Art虹obactersp.)、葡萄球菌属（Staphylococ州Ssp.)、球拟酵母菌属 (Torulopsissp.)、大肠埃希菌属巧scherichiasp.)、菌丝圆酵母属（Mycotorula sp.)、丙酸杆菌属（Propionibacterumsp.)、色素杆菌属（Qiromobacterumsp.)、黄 单抱杆菌属狂anthomonassp.)、乳酸杆菌属（Lactobacillussp.)、梭状芽抱杆菌属 (Clostridiumsp.)、念珠菌属（Candidasp.)、地霉属（Geotrichumsp.)、复膜抱酵母 属(Sacchromycopsissp.)、诺卡氏菌属(Nocardiasp.)、镶刀菌属（Fuzariumsp.)、 曲霉属（Aspergillussp.)、根毛霉属（Miizomucorsp.)、毛霉属（Mucorsp.)、嗜热真 菌属（Thermomycessp.)、根霉属（Miizopussp.)、青霉菌属（Penicilliumsp.)、须霉 属（Phycomycessp.)、柄镑菌属（Pucciniasp.)、杆菌属炬aciIlussp.)、链霉菌属 (Streptmycessp.)等。
[0056] 本发明中，优选来源于它们当中的产碱杆菌属、假单胞菌属、根毛霉属、毛霉属、 嗜热真菌属、根霉属或青霉菌属的脂肪酶。其中，更优选来源于产碱杆菌属Alcaligenes sp.的脂肪酶、来源于根毛霉属的米赫根毛霉烟lizomucormiehei)的脂肪酶、来源于嗜热 真菌属的疏棉状嗜热丝抱菌（ThermomycesIanuginosus)的脂肪酶、来源于根霉属的德氏 根霉她izopusdelemar)的脂肪酶、及来源于根霉属的稻根霉菌她izopusoryzae)的脂 肪酶。特别优选来源于稻根霉菌烟lizopuscxryzae)的脂肪酶。
[0057] 作为本发明的含有脂肪酶的组合物中使用的脂肪酶，也可W是培养后将含有脂肪 酶的培养基成分等的含有脂肪酶的水性液体干燥而得到的脂肪酶，但优选不含有脂肪酶的 培养基成分等的脂肪酶、即实质上由脂肪酶自身构成的脂肪酶。作为本发明的含有脂肪酶 的组合物，更优选在培养脂肪酶之后去除菌体并固定化的脂肪酶、或进一步粉末化而成的 脂肪酶。
[0058] 本发明中使用的脂肪酶可W具有位置特异性，也可W不具有。具有位置特异性时， 优选为1，3-特异性。
[0059] ?含有脂肪酶的组合物的形态
[0060] 本发明的含有脂肪酶的组合物可W是固定化物（固定化脂肪酶）或粉末状物（粉 末脂肪酶）的形态。
[0061] 固定化脂肪酶优选为将上述脂肪酶固定化于二氧化娃、娃藻±、娃藻±、珠光体、 聚己帰醇、阴离子交换树脂、酷酵吸附树脂、疏水性载体、阳离子交换树脂、馨合树脂等固 定化载体上而得到的物质。该样的固定化脂肪酶例如可W从NovozymesA/S公司作为 Lipozyme化-IM获得。固定化脂肪酶可W直接使用、或使用将该固定化脂肪酶粉碎而得到 的物质。
[0062] 粉末脂肪酶也可WW脂肪酶粉末制剂的形态使用。脂肪酶粉末制剂例如可W通过 将使脂肪酶与谷物粉末和/或糖类粉末溶解和/或分散到水性液体中而得到的含有脂肪酶 的水性液体进一步干燥并进行粉末化而得到。
[0063] 作为脂肪酶，在上述所列举的脂肪酶中，特别适宜使用DSMJapan株式会社的 商品；P;LkantazeR8000、AmanoEnzymeInc.的商品；LipaseF-AP15 等。作为最适合的 粉末脂肪酶，可列举出来源于Miizopusoryzae的AmanoEnzymeInc.的商品；Lipase DF"Amano"15-K(也称为脂肪酶D)、LipaseD"Amano"Conch。
[0064] 作为谷物粉末和/或糖类粉末，例如可列举出；全脂大豆粉末、脱脂大豆粉末等大 豆粉末、小麦粉、米粉、糊精。谷物粉末和/或糖类粉末相对于脂肪酶例如为250?1000质 量％、优选为500?1000质量％、更优选为500?750质量％是适当的。
[0065] 此外，含有脂肪酶的组合物中还可W存在纤维素粉末、娃藻±等过滤助剂。脂肪 酶；过滤助剂的质量比例如为1 ;1〇?10 ;1，优选为1 ;5?5 ;1，更优选为1 ;2?2山特别 优选为1 ;1。
[006引 < 分离工序〉
[0067] 上述低温白±处理工序（1)、醋交换反应的工序（2)及其他的任意工序也可W进 一步包括从油脂、反应底物等中分离白±、含有脂肪酶的组合物等的工序。进行分离的工序 中，例如使用过滤、离也分离等。优选的是，若为收纳白±的柱，则优选在该柱上安装过滤器 并仅将白±残留在柱内，对油脂、反应底物进行过滤?分离。
[0068] 作为上述过滤器，优选滤布、滤纸、玻璃过滤器（孔径；1?10Um、优选为5Um)。 [006引 实施例
[0070] 接着，通过制造例及实施例对本发明进行详细说明。
[0071] [含有脂肪酶的组合物A的制备]
[0072] 准备AmanoEnzymeInc.的商品；LipaseDF"Amano" 15-K(也称为脂肪酶D;来 源于稻根霉菌）的酶溶液（150000U/ml)。该酶溶液中的水的量相对于脂肪酶D的质量为 15倍的量。此外，作为谷物粉末，准备除莫全脂大豆粉末（商品名；Alphaplus服-600、The NisshinOilliOGroup，Ltd.制）10质量％水溶液。上述除莫全脂大豆粉末的质量相对于 上述脂肪酶D的质量为500质量％。边揽拌该溶液边将上述除莫全脂大豆粉末加入到上述 脂肪酶D的酶溶液中。在所得到的混合溶液中加入Iml的0. 5N化OH溶液而将混合溶液整 体调整为抑7. 8后，进行喷嘴并流型的喷雾干燥（喷雾干燥、上述混合溶液的温度为3(TC、 送风的入口温度为l〇(TC、出口温度为5(TC、东京理科器械株式会社、SD-IOOO型），得到脂 肪酶粉末制剂A(来源于稻根霉菌的粉末脂肪酶）。在该脂肪酶粉末制剂A中加入纤维素粉 末作为过滤助剂，制成含有脂肪酶的组合物A。所得到的含有脂肪酶的组合物A中所含的粉 末脂肪酶；过滤助剂的质量比为1 ;1。
[0073] [含有脂肪酶的组合物B的制备]
[0074] 将NovozymesA/S公司制的商品；Lipozyme化-IM(来源于疏棉状嗜热丝抱菌的 固定化脂肪酶）5g使用特殊机化工业（株）制L型Micolloider进行粉碎，得到含有脂肪 酶的组合物B。另外，使用株式会社堀场制作所的粒度分布测定装置（LA-500)，测定含有脂 肪酶的组合物B的平均粒径，结果为66. 7ym。
[00巧][低温白±处理槽（柱）1]
[0076] 将活性白± (商品名；Galleon EarthV2、水泽化学工业（株）社制）Ig与纤维素 粉末0. 5g混合，填充到玻璃柱（东京理科器械（株）社、内径为8mm、长度为100mm)中，制 作低温白±处理槽（柱）1(参照图2)。此外，该柱具有玻璃过滤器（孔径；5ym)那样的过 滤器。
[0077] [低温白±处理槽（柱）2]
[007引 除了使用中性白±(商品名；口3611口1、胖4饥'01'11(50仇8皿公司制、口册.6)来代替 活性白±^外，与低温白±处理槽（柱）1同样地制作低温白±处理槽（柱）2。
[0079] [低温白±处理槽（柱）3]
[0080] 除了使用碱性白± (商品名；NB14000、化UiralBleachSDN.B皿公司制、pH9. 5) 来代替活性白±^外，与低温白±处理槽（柱）1同样地制作低温白±处理槽（柱）3。
[0081] [低温白±处理槽（柱）4]
[0082] 除了使用碱性白± (商品名；KRISTAL、化化OClayMarketingSDN.B皿公司 巧IJ、P服.5)来代替活性白±^外，与低温白±处理槽（柱）1同样地制作低温白±处理槽 (柱）4。
[008引[低温白±处理槽（床）5]
[0084] 将中性白±(商品名；？36]\〇碰、胖4饥'01'11(80仇8皿公司制、口册.6)5肖与纤维素粉 末2. 5g混合，加入高油酸葵花巧油IOOg,使用揽拌器揽拌1小时。其后将所得到的混合物供 于铺有滤纸巧C110mm，AdvantecToyoKaisha，Ltd.债J)的单板过滤器化ST-90，Advantec ToyoKaisha,Ltd.制），W氮气施加0.IMPa的压力，由此制作低温白±处理槽（床）5。
[0085] [反应槽A的制作]
[0086] 在如上所述制备的含有脂肪酶的组合物AO. 3g中加入高油酸葵花巧油lOg，使用 揽拌器揽拌1小时。其后，供于玻璃柱（东京理科器械（株）社、内径为8mm、长度为IOOmm)， 对柱的单侧用真空粟抽吸进行填充而制作反应槽（柱）A(参照图2)。该柱具有玻璃过滤器 (孔径；5ym)那样的过滤器。
[0087] [反应槽B的制作]
[0088] 在如上所述制备的含有脂肪酶的组合物BO. 5g中加入高油酸葵花巧油lOg，使用 揽拌器揽拌1小时。其后，供于玻璃柱（东京理科器械（株）社、内径为8mm、长度为IOOmm)， 对柱的单侧用真空粟抽吸进行填充而制作反应槽（柱）B。
[008引[评价方法]
[0090] 基于反应底物及脂肪酶的1，3-选择性的不同而选择W下的方法，进行评价。
[0091] ?醋交换反应的活性狂0X% )
[0092] W油脂和硬脂酸己醋作为反应底物，来检测1，3-选择性高的脂肪酶的活性时，通 过比较甘油H醋中的POS与SOS的总计质量来评价脂肪酶活性的程度（稳定性）。具体而 言，利用气相色谱法对通过使用含有脂肪酶的组合物的醋交换反应得到的油脂进行分析， 设该甘油H醋中的POS(1-硬脂醜基-2-油醜基-3-踪搁醜基甘油或1-踪搁醜基-2-油醜 基-3-硬脂醜基甘油）及SOS(1，3-二硬脂醜基-2-油醜基甘油）相对于全部甘油H醋的 质量的总计质量％为X0X%，比较各实施例及比较例的X0X。
[0093] 狂0X% )=(甘油H醋中的POS质量％ ) + (甘油H醋中的SOS的质量％ )
[0094] X0X%的值越高则脂肪酶活性越高，即可W判断脂肪酶能够稳定地使用。
[0095] ?醋交换反应的活性（S00% )
[0096] W油脂和硬脂酸己醋作为反应底物，来检测1，3-选择性低的脂肪酶的活性时，通 过比较甘油H醋中的SOO的质量来评价脂肪酶活性的程度（稳定性）。具体而言，利用气相 色谱法对通过使用含有脂肪酶的组合物的醋交换反应得到的油脂进行分析，设该甘油H醋 中的SOOd-硬脂醜基-2, 3-二油醜基甘油、或1，2-二油醜基-3-硬脂醜基甘油）相对于 全部甘油H醋的质量的总计质量％为S00%，比较各实施例及比较例的S00。S00%的值越 高则脂肪酶活性越高，即可W判断脂肪酶能够稳定地使用。
[0097] ?醋交换反应的活性（C44% )
[0098] W油脂和中链脂肪酸甘油H醋作为反应底物时，通过比较甘油H醋上键合的脂肪 酸的总碳原子数为44的甘油H醋的总计质量来评价脂肪酶活性的程度（稳定性）。具体而 言，利用气相色谱法对通过使用含有脂肪酶的组合物的醋交换反应得到的油脂进行分析， 设该甘油H醋中的（辛醜基-二油醜基甘油、辛醜基-二硬脂醜基甘油等）相对于全部甘 油H醋的质量的总计质量％为C44%，比较各实施例及比较例的C44。C44%的值越高则脂 肪酶活性越高，即可W判断脂肪酶能够稳定地使用。
[0099] [分析方法]
[0100] 甘油S醋中的POS质量％、SOS质量％、SOO质量％通过依据美国油脂化学家 协会志JAOCS(Journal of The American Oil Chemists'Society).vol. 70，no.11， pi 111-1114 (1993)的方法进行测定。甘油H醋中的C44质量％通过依据JAOCS CJournal of The American Oil Qiemists'Society), vol. 80, no. 4, p353_356 (2003)的方法进行测定。
[0101] [比较例1]
[0102] 将高油酸向日葵原油在Iioc下使用1质量％的活性白± (商品名；Galleon EarthV2、水泽化学工业（株）社制）进行20分钟脱色，接着在26(TC下维持在400化下进 行90分钟除莫，得到精制高油酸葵花巧油。将硬脂酸己醋（商品名；ETHYLSTEARATE、（株） 井上香料制造所制）及精制高油酸葵花巧油W质量比计6 ;4的比率混合后，将油中的水分 的质量分率调节至2(K)ppm，作为反应底物1。将如上所述制备的反应槽A及反应底物1调 节至5(TC，对该反应槽A(柱）将反应底物1W0. 2ml/分钟的速度进行64小时送液，得到 醋交换油脂1。分析反应开始64小时后从反应槽出口得到的醋交换油的X0X(% )。
[0103] [比较例2]
[0104] 在比较例1中使用的硬脂酸己醋、精制高油酸葵花巧油中分别相对于硬脂酸己醋 或精制高油酸葵花巧油添加2质量％的中性白± (商品名；PREMIUM、WANT0TIK SDN.B皿公 司制），在减压下IlOC下加热20分钟。其后通过过滤去除白±，得到脱色硬脂酸己醋及再 脱色高油酸葵花巧油1。将所得到的脱色硬脂酸己醋与再脱色高油酸葵花巧油1W6 ;4的 质量比共混，将油中的水分的质量分率调节至2(K)ppm，作为反应底物2。
[010引除了使用碱性白± (商品名：NB14000、化化ral Bleach SDN. B皿公司制）、或碱 性白± (商品名；KRISTAUTaiko Clay Marketing SDN. B皿公司制）来代替上述中性白±(商品名；PREMIUM、WANT0TIK SDN. B皿公司制）W外，与上述再脱色高油酸葵花巧油1同 样地操作，分别得到再脱色高油酸葵花巧油2及3。除了使用再脱色高油酸葵花巧油2及3 来代替上述再脱色高油酸葵花巧油1W外，与上述反应底物2同样地操作，得到反应底物3 及4。将如上所述制备的反应槽A(柱）及反应底物2?4调节至5(TC，对该反应槽A(柱） 将各反应底物2?4 W 0. 2ml/分钟的速度进行64小时送液，分别得到醋交换油脂2?4。 分析反应开始64小时后从反应槽出口得到的醋交换油2?4的X0X(%)。
[0106] [比较例3]
[0107] 将比较例2中得到的再脱色高油酸葵花巧油1?3在500化的减压下边吹入水蒸 汽边在25CTC下加热90分钟而进行除莫，得到再脱色除莫高油酸葵花巧油1?3。将所得 到的再脱色除莫高油酸葵花巧油1?3与比较例2中得到的脱色硬脂酸己醋W4 ;6的比率 (质量比）混合后，将油中的水分的质量分率调节至2(K)ppm，分别得到反应底物5?7。将 如上所述制备的反应槽A(柱）及反应底物5?7分别调节至5(TC，对该反应槽A(柱）将 反应底物5?7W0. 2ml/分钟的速度进行64小时送液，分别得到醋交换油脂5?7。分析 反应开始64小时后从反应槽出口得到的醋交换油5?7的XOX(% )。
[0108][实施例1]将上述[低温白±处理槽1?4]分别调节至5(TC，将W4 ;6的比 率（质量比）混合比较例1中使用的精制高油酸葵花巧油与硬脂酸己醋而成的混合油W 0. 2ml/分钟的速度送液至各低温白±处理槽1?4(5(TC)后，将油中的水分的质量分率 调节至2(K)ppm，分别得到反应底物8?11。混合油与白±的接触时间为10分钟。将如上 所述制备的反应槽A及反应底物8?11调节至5(TC，对该反应槽A将反应底物8?11W 0. 2ml/分钟的速度进行64小时送液，分别得到醋交换油脂8?11。分析反应开始64小时 后从反应槽出口得到的醋交换油8?11的XOX(%)。

【权利要求】
1. 一种酯交换油脂的制造方法，其特征在于，其包括以下工序： (1) 使油脂与白土在30?80°C下接触而得到反应底物的低温白土处理工序；以及 (2) 使所述反应底物在含有脂肪酶的组合物的存在下进行酯交换反应的工序。
2. 根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述低温白土处理工序中使用的油脂为 经过了在90?150°C下与白土接触而进行脱色的脱色处理工序的油脂。
3. 根据权利要求1或2所述的方法，其中，在所述低温白土处理工序中，所述反应底物 在与所述白土的接触后从所述白土中被分离。
4. 根据权利要求1?3中任一项所述的方法，其特征在于，所述经过了脱色处理工序的 油脂为在所述脱色处理工序之后经过了除臭工序的油脂。
5. 根据权利要求1?4中任一项所述的方法，其中，所述含有脂肪酶的组合物处于粉末 状物的形态。
6. 根据权利要求1?5中任一项所述的方法，其中，所述低温白土处理工序进一步在脂 肪酸酯的存在下进行。
【文档编号】C12P7/64GK104379756SQ201380029399
【公开日】2015年2月25日 申请日期:2013年3月7日 优先权日:2012年4月4日
【发明者】中村洋介, 中泽祐人, 外山裕子, 山内良枝, 上原秀隆 申请人:日清奥利友集团株式会社