水稻品种9194抗黑条矮缩病位点qRBSDV11及其分子标记方法
【专利摘要】本发明涉及水稻品种9194抗黑条矮缩病位点qRBSDV11及其分子标记方法。对抗黑条矮缩病水稻品种9194(♀)与感病品种苏御糯(♂)杂交获得的F2单株的基因型和相应F2:3家系的黑条矮缩病抗性级别进行遗传连锁分析，获得抗黑条矮缩病品种9194抗黑条矮缩病基因位点四个，其中qRBSDV11位于标记RM26062-RM536之间。通过抗黑条矮缩病基因的分子标记来检测抗性品种9194及其衍生品种(系)中是否含有黑条矮缩病抗性基因位点，可预测其黑条矮缩病抗性水平，大大提高抗黑条矮缩病水稻的选择效率。
【专利说明】水稻品种9194抗黑条矮缩病位点qRBSDV11及其分子标记 方法
[0001] 分案说明
[0002] 本申请是2013-03-29日申请的申请号为2013101097989,发明名称为"水稻品种 9194抗黑条矮缩病位点及其分子标记方法"的中国发明专利申请的分案申请。
【技术领域】
[0003] 本发明属于分子遗传学领域，涉及水稻品种9194抗黑条矮缩病位点qRBSDVll及 其分子标记方法。 技术背景
[0004] 水稻是我国的重要粮食作物。水稻黑条矮缩病是一种由水稻黑条矮缩病毒（Rice black-streaked dwarf virus, RBSDV)引起的病毒病，主要由灰飞風以持久性不经卵方式进 行传播。近年来，随着耕作制度和栽培方式的变化、冬季气候变暖和感病品种的大面积推 广，传毒介体灰飞虱发生量日益上升，水稻黑条矮缩病在江苏、浙江、江西和福建大规模发 生，并迅速上升为生产上最主要的病毒病害，给水稻的安全生产带来很大威胁。水稻黑条矮 缩病的典型症状是病株矮缩，叶色浓绿僵硬，叶背、叶鞘和茎杆有早期蜡白色，后期为黑褐 色的短条纹不规则突起，严重发病株不抽穗。目前生产上针对此类病害尚无特效农药，主要 是早期通过对灰飞虱的防治，减轻其危害，但防治效果并不理想，且污染环境，破坏生态平 衡。防治病毒病最理想的方法是选育和利用抗病品种，筛选、发掘和创新抗病种质是开展抗 黑条矮缩病育种的前提和基础。
【发明内容】
[0005] 本发明的目的是针对现有技术的上述不足，提供水稻品种9194抗黑条矮缩病位 点及其分子标记方法。
[0006] 本发明的目的可通过如下技术方案实现：
[0007] 水稻品种9194抗黑条矮缩病位点，包括位于分子标记RM282-RM14898之间的 qRBSDV3,位于分子标记RM20069-RM30之间的qRBSDV6、位于分子标记RM3912-RM257之间 的qRBSDV9和位于分子标记RM26062-RM536之间的qRBSDVll ;所述的分子标记RM282引物 为SEQ ID NO. 1/SEQ ID N0. 2,存在qRBSDV3时的扩增条带为146bp条带；所述的分子标记 RM14898引物为SEQ ID NO. 3/SEQ ID N0. 4,存在qRBSDV3时的扩增条带为176bp条带；所述 的分子标记RM20069引物为SEQ ID NO. 5/SEQ ID N0. 6,存在qRBSDV6时的扩增条带为162bp 条带；所述的分子标记RM30弓丨物为SEQ ID NO. 7/SEQ ID NO. 8,存在qRBSDV6时的扩增条带 为136bp条带；所述的分子标记RM3912引物为SEQ ID NO. 9/SEQ ID NO. 10,存在qRBSDV9时 的扩增条带为191bp条带；所述的分子标记RM257引物为SEQ IDN0. 11/SEQ IDN0. 12,存在 qRBSDV9时的扩增条带为155bp条带；所述的分子标记RM26062引物为SEQ ID NO. 13/SEQ ID NO. 14,存在qRBSDVll时的扩增条带为149bp条带；所述的分子标记RM536引物为SEQ ID NO. 15/SEQ ID NO. 16,存在qRBSDVll时的扩增条带为242bp条带。
[0008] 水稻品种9194抗黑条矮缩病位点qRBSDV3的分子标记方法：用分子标记RM282引 物：SEQ ID NO. 1/SEQ ID NO. 2 或者用分子标记RM14898 引物：SEQ ID NO. 3/SEQ ID NO. 4,扩增 水稻抗黑条矮缩病品种或育种材料DNA，如果用分子标记RM282引物能够扩增出146bp的扩 增片段，或用分子标记RM14898引物能够扩增出176bp的扩增片段，则标志着水稻品种抗黑 条矮缩病位点qRBSDV3的存在。
[0009] 水稻品种9194抗黑条矮缩病位点qRBSDV6的分子标记方法：用分子标记RM20069 弓丨物：SEQ ID NO. 5/SEQ ID N0. 6,或者用分子标记 RM30 引物：SEQ ID NO. 7/SEQ ID N0. 8 扩增 水稻抗黑条矮缩病品种或育种材料DNA，如果用分子标记RM20069引物能够扩增出162bp的 扩增片段，或用分子标记RM30引物能够扩增出136bp的扩增片段，则标志着水稻品种抗黑 条矮缩病位点qRBSDV6的存在。
[0010] 水稻品种9194抗黑条矮缩病位点qRBSDV9的分子标记方法：用分子标记RM3912 引物：SEQ ID NO. 9/SEQ ID N0. 10,或者用分子标记 RM257 引物：SEQ ID NO. 11/SEQ ID N0. 12 扩增水稻抗黑条矮缩病品种或育种材料DNA，如果用分子标记RM3912引物能够扩增出 191bp的扩增片段，或用分子标记RM257引物能够扩增出155bp的扩增片段均标志着水稻品 种抗黑条矮缩病位点qRBSDV9的存在。
[0011] 水稻品种9194抗黑条矮缩病位点qRBSDVl 1的分子标记方法：用分子标记 RM26062 引物：SEQ ID NO. 13/SEQ ID N0. 14,或者用分子标记 RM536 引物：SEQ ID NO. 15/SEQ ID NO. 16扩增水稻抗黑条矮缩病品种或育种材料DNA，如果用分子标记RM26062引物能够扩 增出149bp的扩增片段，或用分子标记RM536引物能够扩增出242bp的扩增片段，则标志着 水稻品种抗黑条矮缩病位点qRBSDVll的存在。
[0012] 筛选所述的水稻品种9194抗黑条矮缩病位点的分子标记的方法，包含如下步骤：
[0013] (1)以抗黑条矮缩病品种9194为母本，感黑条矮缩病粳稻品种苏御糯为父本，配 制杂种匕，构建了包含200个单株的F 2分离群体，每个F2单株通过自交获得相应的F2:3家 系，进行抗黑条矮缩病鉴定；
[0014] ⑵用SDS法提取亲本、Fi及F2群体各株系的DNA，采用简单重复序列标记SSR对 两亲本进行多态性筛选，PCR在PTC-200扩增仪上进行，扩增产物在8%聚丙烯酰胺凝胶上 进行电泳分析，亲本间有多态的引物在F 2群体中进行分析，获取群体基因型资料；
[0015] (3)根据连锁交换规律，利用群体基因型资料构建水稻的遗传图谱，所用软件为 MAPMARKER/EXP3. 0,用Kosambi函数将重组值转换为遗传距离；
[0016] (4)采用田间诱发结合室内接种鉴定进行黑条矮缩病的抗性鉴定；
[0017] (5)利用MAPMARKER/EXP3. 0软件对各个分子标记的群体基因型和相应家系的黑 条矮缩病抗性级别进行连锁分析，并将Kosambi函数转换为遗传距离。利用Windows QTL Cartographer V2. 0软件复合区间作图法，以2cM为步长在全基因组范围内进行扫描。QTL 的检测采用5%总体显著水平，相应L0D统计量的显著阈值用排列测验方法进行估计，共重 复抽样1000次。同时估计了各位点的加性效应和贡献率；
[0018] (6)获得抗黑条矮缩病品种9194抗黑条矮缩病基因位点四个，分别为qRBSDV3， 位于标记RM282-RM14898之间；qRBSDV6,位于标记RM20069-RM30之间；qRBSDV9,位于标记 RM3912-RM257之间；qRBSDVll，位于标记RM26062-RM536之间。通过抗黑条矮缩病主基因 的分子标记来检测抗性品种9194及其衍生品种（系）中是否含有该主基因位点，可预测其 黑条矮缩病抗性水平，大大提高抗黑条矮缩病水稻的选择效率。
[0019] 本发明所述的水稻品种9194抗黑条矮缩病位点在水稻育种中的应用。
[0020] 本发明所述的水稻品种9194抗黑条矮缩病位点优选在快速筛选抗黑条矮缩病品 种或品系中的应用。
[0021] 本发明所述的水稻品种9194抗黑条矮缩病位点的分子标记引物在水稻育种中的 应用。
[0022] 本发明所述的水稻品种9194抗黑条矮缩病位点的分子标记引物在快速筛选抗黑 条矮缩病品种或品系中的应用。
[0023] 有益效果
[0024] 前期， 申请人:对来源于20个国家共960份水稻品种进行了抗黑条矮缩病田间诱 发和人工接种鉴定，筛选到4个黑条矮缩病发病率较低的水稻品种，其中水稻品种9194， 连续三年每年三个地点田间鉴定均对黑条矮缩病表现高抗，进一步室内鉴定结果也表明， 该品种具有较高的黑条矮缩病抗性。该抗源的发掘为抗水稻黑条矮缩病基因的定位、克隆 和育种利用提供了基础材料。本发明利用9194与感病品种苏御糯杂交获得的F 2群体进 行遗传连锁分析，获得四个抗黑条矮缩病基因位点，分别为qRBSDV3, qRBSDV6, qRBSDV9和 qRBSDVll。通过与上述四个基因位点连锁的分子标记来检测抗性品种9194及其衍生品种 (系）中是否含有抗黑条矮缩病基因位点，可预测其黑条矮缩病抗性水平，大大提高抗黑条 矮缩病水稻的选择效率。本发明所提供的水稻品种9194抗黑条矮缩病主效基因位点的分 子标记方法，具有以下优点：
[0025] (1)通过本发明在国际上首次用SSR标记定位了水稻品种9194中的抗黑条矮缩病 的基因位点。
[0026] (2)通过本发明分子标记定位的抗性基因位点位置明确，鉴定方便。通过检测这些 与抗黑条矮缩病基因位点连锁的分子标记，即可以预测水稻植株的黑条矮缩病抗性，用于 水稻品种或品系的基因型检测，以判断该品种或品系是否具有黑条矮缩病抗性，进而快速 筛选抗病品种或品系用于水稻育种。抗性基因位点的检测方便快速，不受环境影响；
[0027] (3)辅助育种选择目标明确，节约成本。在传统育种方法中，首先要收集具有抗源 的亲本与栽培品种进行一系列杂交，而且要对黑条矮缩病的抗性进行单株选择。对水稻黑 条矮缩病进行表型鉴定复杂，同时受环境影响，由于黑条矮缩病不能经卵传毒，要经饲养灰 飞虱、带毒和接种传毒等复杂的鉴定过程，非常困难，表型鉴定的结果可靠性低。因此，抗黑 条矮缩病育种不仅费时，而且难度大，成本高。通过检测抗黑条矮缩病基因位点，可以在苗 期就鉴定出抗黑条矮缩病的单株，淘汰其它植株，不仅节约生产成本而且大大提高抗黑条 矮缩病水稻的选择效率。
【专利附图】
【附图说明】
[0028] 图1 9194和苏御糯接种后的抗性表现。
[0029] 图2 9194和苏御糯F2群体抗黑条矮缩病次数分布图。
[0030] 图3水稻品种9194抗黑条矮缩病基因在染色体上的分布。
[0031] 图4抗黑条矮缩病基因紧密连锁分子标记的电泳图谱。M:Mark ;1:9194 ;2:苏御 糯；3 A ;4-13:极抗单株；14-23 :极感单株。
【具体实施方式】 [0032] 材料与方法：
[0033] ( -）9194/苏御糯F2群体构建及表型鉴定
[0034] (1)以抗黑条矮缩病品种9194为母本，感黑条矮缩病粳稻品种苏御糯为父本，配 制杂种，构建了 9194/苏御糯F2分离群体，每个F2单株通过自交获得相应的9194/苏御糯 F2:3豕系。
[0035] (2)表型鉴定
[0036] (2.1)田间诱发鉴定
[0037] 材料分别种植于东海县黄川镇、赣榆县土城镇和灌云县东辛农场试验田，选用四 周为麦田的地块种植待鉴定材料，以保证获得足量虫源。2010和2011年材料均在5月10 日（麦收前3周）分两个重复进行播种，每个重复单个品种播80粒，均匀撒播1行，行长 50cm，行距10cm。6月27日移栽，单苗栽插，行株距15cmX 20cm，每个品种栽插60穴。常 规肥水管理，不施用任何农药。2012年鉴定材料分别于5月5日、5月10日和5月15日分 3个播期进行播种，每个品种播150粒，移栽时间分别为6月20日、6月25日和6月30日， 每个品种栽插120穴，其他种植方式与2010和2011年相同。黑条矮缩病诱发如下：首先通 过盘拍法调查灰飞虱虫口密度，将33cmX45cmX 5cm的搪瓷盆对准秧苗基部轻拍植株，使 灰飞虱拍落于盘中，然后迅速将落入盘中的灰飞虱导入高约为60cm，直径约为35cm的塑料 桶内。于6月上旬在试验田进行调查，种植材料田块对角线定5点取样，每点拍0. 30m2,记 载灰飞虱数量。随机对从实验田块采集来的100头灰飞虱进行水稻黑条矮缩病毒的RT-PCR 检测，确定携毒率。
[0038] 于7月下旬水稻分蘖盛期统计发病率。此时发病植株表现出明显的病状：极明显 的矮缩、心叶突破下叶叶鞘而出、部分植株表现为从下叶枕口呈螺旋状伸出、部分叶片的顶 端出现旋状卷曲。而健康稻株表现分蘖旺盛，生命力强，但尚未拔节，发病植株和健康植株 反差非常明显。另外，此时的发病植株很少有中间型病状，以每个试验点2个重复的发病百 分率平均值作为品种抗黑条矮缩病表型值进行统计。
[0039] (2. 2)人工接种黑条矮缩病毒
[0040] 将亲本、抗病和感病对照品种浸种催芽，播种200粒露白发芽种子于 70. 5cmX 50. 5cmX41. 5cm的塑料箱内，底部接塑料管通水，保持水层约3cm。当秧苗长至 2. 5-3. 0叶时间苗，淘汰病弱苗，保留约150株整齐一致的健苗，每个塑料箱顶端用纱布封 口。于2012年6月10日接入从东海黄川（试验点中灰飞虱带毒率最高）采集的灰飞虱进 行接种，每天驱赶灰飞虱数次。7d后拿掉纱布，移走苗上的灰飞虱，把接种后的苗移栽到大 田，长至分蘖盛期时调查病情。人工接种同期每个品种做三个重复，按每苗20头灰飞虱计 算接虫。
[0041] (二）9194/苏御糯F2群体的分子标记分析
[0042] (1)用SDS法提取亲本、Fi及F2群体各株系的DNA。
[0043] (2) SSR分析参照 Chen et al. (1997)的程序。10 μ 1 反应体系包括：10mM Tris-HCl ρΗ8· 3, 50mM KC1, 1. 5mM MgC12, 50 μ M dNTPs, 0· 2 μ Μ引物，0· 5U Taq polymerase (TaKaRa,大 连）和 20ng of DNA模板。扩增反应在PTC-200(MJ Research Inc. )PCR仪上进行：94°C 4min ; 94°C lmin, 55°C lmin，72°C 1. 5min，35 个循环；72°C 7min。扩增产物用 8% 的非变性 PAGE 胶分离，通过银染显色，银染程序根据Sanguinetti etal. (1994)的方法制定而成。扩增的 DNA条带利用装有荧光灯的灯箱进行观察。记录结果，亲本间有多态的引物在F2群体中进 行分析，获取群体基因型资料；
[0044] (3)根据连锁交换规律，利用群体基因型资料构建水稻的遗传图谱，所用软件为 MAPMAKER/EXP3. 0,最小L0D值设为2,获得连锁图谱；
[0045] (4)利用 Windows QTL Cartographer V2· 0 软件（Wang et al.，2〇〇3)复合区间作图 法（Composite interval mapping, CIM)，以2cM为步长在全基因组范围内进行扫描。QTL的 检测采用5%总体显著水平，相应L0D统计量的显著阈值用排列测验（Permutation test) (Churchill and Doerge，1994)方法进行估计，共重复抽样1000次。同时估计了各位点的 加性效应和贡献率。利用MAPMAKER/3. 0分析软件进行黑条矮缩病抗性与SSR标记的分离 分析。并将Kosambi函数转换为遗传距离（cM)。
[0046] (三）结果与分析：
[0047] 9194和苏御糯经黑条矮缩病的田间和室内鉴定其平均发病率分别8. 9%和78%， 表明9194具有较高的黑条矮缩病抗性，而苏御糯对黑条矮缩病高度敏感（图1)。200个F2:3 家系对黑条矮缩病的抗性频率分布呈连续分布，表明该群体中可能存在多个抗黑条矮缩病 位点（图2)。从&群体中挑选三个地点及室内鉴定均表现高抗或高感的单株各10株，进行 12条染色体的连锁分析，在水稻第3,6,9和11染色体发现与目标性状有连锁迹象。进一步 构建了第3,6,9和11全染色体的连锁图谱，结合表型数据，利用Windows QTL Cartographer V2. 0软件进行抗黑条矮缩病的QTL检测。结果在水稻第3染色体标记RM282-RM14898之 间检测到一个抗黑条矮缩病QTL qRBSDV3, L0D值为2. 34,贡献率为5. 4% ;在水稻第6染色 体标记RM20069-RM30之间检测到一个抗黑条矮缩病QTL qRBSDV6, L0D值为4. 42,贡献率为 10. 3%;在水稻第9染色体标记RM3912-RM257之间检测到一个抗黑条矮缩病QTL qRBSDV9， L0D值为6. 63,贡献率为35. 5% ;在水稻第11染色体标记RM26062-RM536之间检测到一个 抗黑条矮缩病QTL qRBSDVl 1，L0D值为3. 55，贡献率为31. 1 %。上述四个QTLs可解释表型 变异82. 3% (图3)。
[0048] 分子标记RM282引物：
[0049] 上游引物：CTGTGTCGAAAGGCTGCAC (SEQ ID NO. 1)
[0050] 下游引物：CAGTCCTGTGTTGCAGCAAG(SEQ ID Ν0· 2)
[0051] 分子标记RM14898引物：
[0052] 上游引物：ATGTTCAACCTTGTCCCGACTAACC (SEQ ID N0. 3)
[0053] 下游引物：TAAAGACGGCAGCTATCACTTTGC (SEQ ID Ν0· 4)
[0054] 用分子标记RM282引物：SEQ ID NO. 1/SEQ ID NO. 2或者用分子标记RM14898引 物：SEQ ID NO. 3/SEQ ID NO. 4,扩增水稻抗黑条矮缩病品种或育种材料DNA，如果用分子标记 RM282引物能够扩增出146bp的扩增片段，或用分子标记RM14898引物能够扩增出176bp的 扩增片段，则标志着水稻品种抗黑条矮缩病位点qRBSDV3的存在（图4)。
[0055] 分子标记RM20069引物：
[0056] 上游引物：GCGAGCGAGAGGAGAGATAGACG (SEQ ID N0. 5)
[0057] 下游引物：CGAATTCGGCACGAGTAATAGGG (SEQ ID NO. 6)
[0058] 分子标记RM30引物：
[0059] 上游引物：ACACTGTAGCGGCCACTG (SEQ ID NO. 7)
[0060] 下游引物：CCTCCACTGCTCCACATCTT (SEQ ID NO. 8)
[0061] 用分子标记RM20069引物：SEQ ID NO. 5/SEQ ID NO. 6,或者用分子标记RM30引 物：SEQ ID NO. 7/SEQ ID NO. 8扩增水稻抗黑条矮缩病品种或育种材料DNA，如果用分子标记 RM20069引物能够扩增出162bp的扩增片段，或用分子标记RM30引物能够扩增出136bp的 扩增片段，则标志着水稻品种抗黑条矮缩病位点qRBSDV6的存在（图4)。
[0062] 分子标记RM3912引物：
[0063] 上游引物：GCGAGCGAGAGGAGAGATAGACG (SEQ ID N0. 9)
[0064] 下游引物：CGAATTCGGCACGAGTAATAGGG (SEQ ID Ν0· 10)
[0065] 分子标记RM257引物：
[0066] 上游引物：ACACTGTAGCGGCCACTG (SEQ ID Ν0· 11)
[0067] 下游引物：CCTCCACTGCTCCACATCTT (SEQ ID Ν0· 12)
[0068] 用分子标记RM3912引物：SEQ ID NO. 9/SEQ ID NO. 10,或者用分子标记RM257引物： SEQ ID NO. 11/SEQ ID NO. 12扩增水稻抗黑条矮缩病品种或育种材料DNA，如果用分子标记 RM3912引物能够扩增出191bp的扩增片段，或用分子标记RM257引物能够扩增出155bp的 扩增片段均标志着水稻品种抗黑条矮缩病位点qRBSDV9的存在（图4)。
[0069] 分子标记RM26062引物：
[0070] 上游引物：TTTGCGTTTGCGTTTGCGTAGG(SEQ ID N0. 13)
[0071] 下游引物：ACCCGTACACCTCCACACAGTGC(SEQ ID Ν0· 14)
[0072] 分子标记RM536引物：
[0073] 上游引物：TCTCTCCTCTTGTTTGGCTC(SEQ ID Ν0· 15)
[0074] 下游引物：ACACACCAACACGACCACAC(SEQ ID Ν0· 16)
[0075] 用分子标记RM26062引物：SEQ ID NO. 13/SEQ ID NO. 14,或者用分子标记RM536引 物：SEQ ID NO. 15/SEQ ID NO. 16扩增水稻抗黑条矮缩病品种或育种材料DNA，如果用分子标 记RM26062引物能够扩增出149bp的扩增片段，或用分子标记RM536引物能够扩增出242bp 的扩增片段，则标志着水稻品种抗黑条矮缩病位点qRBSDVll的存在（图4)。
[0076] 通过与上述四个基因位点连锁的分子标记来检测抗性品种9194及其衍生品种 (系）中是否含有抗黑条矮缩病基因位点，可预测其黑条矮缩病抗性水平，大大提高抗黑条 矮缩病水稻的选择效率。
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【权利要求】
1. 水稻品种9194抗黑条矮缩病位点qRBSDVll的分子标记方法，其特征在于：用分子 标记RM26062 引物：SEQ IDNO. 13/SEQ IDNO. 14,或者用分子标记RM536 引物：SEQ IDNO. 15/ SEQ ID NO. 16扩增水稻抗黑条矮缩病品种或育种材料DNA，如果用分子标记RM26062引物能 够扩增出149bp的扩增片段，或用分子标记RM536引物能够扩增出242bp的扩增片段，则标 志着水稻品种抗黑条矮缩病位点qRBSDVll的存在。
2. 筛选权利要求1所述的水稻品种9194抗黑条矮缩病位点qRBSDVll的分子标记的方 法，其特征在于包含如下步骤： (1) 以抗黑条矮缩病品种9194为母本，感黑条矮缩病粳稻品种苏御糯为父本，配制杂 种Fi，构建了包含200个单株的F2分离群体，每个F 2单株通过自交获得相应的F2:3家系， 进行抗黑条矮缩病鉴定； (2) 用SDS法提取亲本、Fi及F2群体各株系的DNA，采用简单重复序列标记SSR对两亲 本进行多态性筛选，PCR在PTC-200扩增仪上进行，扩增产物在8%聚丙烯酰胺凝胶上进行 电泳分析，亲本间有多态的引物在F 2群体中进行分析，获取群体基因型资料； (3) 根据连锁交换规律，利用群体基因型资料构建水稻的遗传图谱，所用软件为 MAPMARKER/EXP3. 0,用Kosambi函数将重组值转换为遗传距离； (4) 采用田间诱发结合室内接种鉴定进行黑条矮缩病的抗性鉴定； (5) 利用MAPMARKER/EXP3. 0软件对各个分子标记的群体基因型和相应家系的黑条 矮缩病抗性级别进行连锁分析，并将Kosambi函数转换为遗传距离，利用Windows QTL Cartographer V2. 0软件复合区间作图法，以2cM为步长在全基因组范围内进行扫描，QTL的 检测采用5%总体显著水平，相应L0D统计量的显著阈值用排列测验方法进行估计，共重复 抽样1000次，同时估计了各位点的加性效应和贡献率； (6) 获得抗黑条矮缩病品种9194抗黑条矮缩病基因位点四个，分别为qRBSDV3,位 于标记RM282-RM14898之间；qRBSDV6,位于标记RM20069-RM30之间；qRBSDV9,位于标记 RM3912-RM257之间；qRBSDVll，位于标记RM26062-RM536之间；通过抗黑条矮缩病主基因的 分子标记来检测抗性品种9194及其衍生品种（系）中是否含有该主基因位点，预测其黑条 矮缩病抗性水平，大大提高抗黑条矮缩病水稻的选择效率。
3. 权利要求1所述的水稻品种9194抗黑条矮缩病位点的分子标记引物，其特征在于 选自分子标记RM26062引物：SEQ IDNO. 13/SEQ IDNO. 14,或者分子标记RM536引物：SEQ ID NO. 15/SEQ ID NO. 16 〇
4. 权利要求3所述的水稻品种9194抗黑条矮缩病位点的分子标记引物在水稻育种中 的应用。
5. 根据权利要求4所述的应用，其特征在于所述的分子标记引物在快速筛选抗黑条矮 缩病品种或品系中的应用。
【文档编号】C12N15/11GK104046692SQ201410289146
【公开日】2014年9月17日 申请日期:2014年6月25日 优先权日:2014年6月25日
【发明者】万建民, 刘裕强, 江玲, 孙志广, 胡金龙, 王宝祥, 王 琦, 赵志刚, 王益华, 陈亮明, 刘世家, 刘喜, 陈赛华, 张文伟, 田云录, 王春明, 徐大勇 申请人:南京农业大学