一种血清miRNA生物标志物组合物与应用的制作方法
【专利摘要】一种血清miRNA生物标志物组合物与应用，涉及生物标志物。所述血清miRNA生物标志物组合物包括miRNA中的至少一种以及各miRNA的反转录引物、正向引物和反向引物的序列。所述血清miRNA生物标志物组合物可在制备少精症和无精症检测试剂中应用。所述用于少精症和无精症检测的试剂盒包括所述血清miRNA生物标志物组合物以及Taq酶、dNTP、MgCl2和PCR缓冲液。具有灵敏度高、样品消耗量少、检测范围广、定量线性范围宽等优点。
【专利说明】-种血清miRNA生物标志物组合物与应用
【技术领域】
[0001] 本发明涉及生物标志物,尤其是涉及一种血清miRNA生物标志物组合物与应用。
【背景技术】
[0002] miRNA又称microRNA，是一类由大约22个核苷酸组成的单链非编码RNA，主要利用 信使RNA的直接剪切或间接抑制翻译在转录后水平调控靶基因的表达。miRNA在个体发育 的不同时期如细胞分化、增殖、凋亡等及不同组织中有不同的表达模式，表明其在发育和分 化中起着重要的调控作用。通过对组织miRNA表达谱的研究已经发现，miRNA具有很强的细 胞、组织或疾病特异性，这些特异表达的miNRA既是其功能研究的基础，又是很好的疾病标 记物。近年的研究显示，miRNA不但与疾病的发生和发展有关，还能够游离于细胞之外，稳 定存在于血浆或血清中，具备疾病分子生物标记物的某些特点，目前已经在多种肿瘤和非 肿瘤疾病的诊断和预后中显示了独特的价值（Chen X，Ba Y，Ma L，et al. Characterization of microRNAs in serum:a novel class of biomarkers for diagnosis of cancer and other diseases[J]. Cell research, 2008, 18 (10):997-1006. )〇
[0003] 传统的miRNA检测技术如northern杂交，microarray杂交，对低丰度的miRNA的 扩增敏感性差。荧光定量PCR(qRT-PCR)是检测基因表达量最灵敏、可靠的方法，但常规的 qRT-PCR技术难以检测约22bp的miRNAs，为克服这个问题，Life Sciences公司等开发了 Taqman检测法，但是该方法成本较高，也无法通过溶剂曲线分析PCR发应的特异性。
【发明内容】
[0004] 本发明的目的在于提供一种血清miRNA生物标志物组合物。
[0005] 本发明的第二目的是提供血清miRNA生物标志物组合物在制备少精症和无精症 检测试剂中应用。
[0006] 本发明的第三目的是提供一种用于少精症和无精症检测的试剂盒。
[0007] 所述血清miRNA生物标志物组合物包括miRNA中的至少一种以及各miRNA的反转 录引物、正向引物和反向引物的序列；
[0008] 所述miRNA包括：
【权利要求】
1.一种血清miRNA生物标志物组合物，其特征在于其包括miRNA中的至少一种以及各 miRNA的反转录引物、正向引物和反向引物的序列； 所述miRNA包括： miR-34c ：aggcaguguaguuagcugauugc；miR-1275 ：gugggggagaggcuguc； miR-375 ：uuuguucguucggcucgcguga； miR-410 ：agguugucugugaugaguucg； miR-758 ：gaugguugaccagagagcacac； 各miRNA的反转录引物、正向引物和反向引物的序列如下表所示：
2. 如权利要求1所述血清miRNA生物标志物组合物在制备少精症和无精症检测试剂中 应用。
3. 用于少精症和无精症检测的试剂盒，其特征在于包括如权利要求1所述血清miRNA 生物标志物组合物，以及Taq酶、dNTP、MgCl2和PCR缓冲液。
4. 如权利要求2所述应用，其特征在于所述少精症和无精症检测试剂的使用方法如 下： 1) 建立统一标准的标本库和数据库：从医院采集血样样本，同时系统收集患者的病理 学资料和临床资料； 2) 血清miRNA差异表达谱分析：选择健康个体和少精症、无精症患者的血清，提取总 RNA，并采用AgilientmiRNA芯片筛选技术，对样本的总RNA特异的检测SangermicroRNA 数据库（miRBase，19. 0版本）的1888个人类相关miRNA，并且能特异性地检测出成熟的 miRNA并能很好地区分高度同源的miRNA分子； 3) 用实时荧光定量PCR方法，即茎环法，筛选出可用作检测分子标志物的血清miRNA: 对已筛选的血清差异表达的miRNAs在大样本人群中进行定量分析验证，确定能够用于区 分正常人和少精症或无精症的miRNA:miR-34c(SEQIDNO.l)，miR-1275(SEQIDNO. 2)， miR-375(SEQIDN0.3)，miR-410(SEQIDN0.4)和miR-758(SEQIDN0.5)。
【文档编号】C12N15/11GK104450702SQ201410819430
【公开日】2015年3月25日 申请日期:2014年12月25日 优先权日:2014年12月25日
【发明者】曾骥孟, 李志明, 顾龙, 庄炫 申请人:厦门大学